全 文 ： 第 vy卷 第 w期u s s s年 z 月
林 业 科 学
≥≤Œ∞‘׌„ ≥Œ∂ „∞ ≥Œ‘Œ≤ „∞
∂ ²¯1vy o ‘²1w
∏¯¼ ou s s s
中国松树枯梢病菌遗传多态性的 • „°⁄分析
吴小芹 黄敏仁 尹佟明
k南京林业大学 南京 utssvzl
摘 要 }运用随机扩增多态 ⁄‘„k• „°⁄l技术对发生于我国 tv省区 ty种松树和其它 u种针叶树上的松枯
梢病菌k Σπηαεροπσισσαπινεα)的 xx个菌株进行基因组 ⁄‘„多态性分析 ∀用 tz个随机引物经 °≤ • 扩增共得
到 uss个 • „°⁄标记 o其中 |{1x h具有多态性 ∀ ˜°Š  „聚类分析确定了供试菌株间的亲缘关系 o将 xx个
菌株分为 v个类群 ∀各菌株间的差异与其寄主种类无明显关系 o与其地理来源在某些类群间有一定联系 o但
在大多数菌株间相关趋势不明显 ∀
关键词 }松树枯梢病 o Σπηαεροπσισσαπινεα , • „°⁄标记 o遗传多样性
收稿日期 }t|||2tt2sw ∀
基金项目 }国家/九五0攻关项目k|x2sw2stl的部分内容 ∀
ΤΗΕ ΥΣΕ ΟΦ ΡΑΠ∆ ΤΟ ∆ΕΤΕΧΤ ΤΗΕ ΓΕΝΕΤΙΧ ς ΑΡΙΑΤΙΟΝ
ΟΦ ΣΠΗΑΕΡ ΟΠΣΙΣ ΣΑΠΙΝΕΑ ΙΝ ΧΗΙΝΑ
• ∏÷¬¤²´ ¬± ‹∏¤±ª ¬±µ¨± ≠¬± ײ±ª°¬±
( Νανϕινγ Φορεστρψ Υνιϖερσιτψ Νανϕινγ utssvz)
Αβστραχτ : Š ±¨²°¬¦⁄‘„ ©µ²° xx ¬¶²¯¤·¨¶²© Σπηαεροπσισσαπινεᦲ¯¯¨ ¦·¨§²± ty ³¬±¨ ¶¤±§²·«¨µu ¦²±¬©¨µ¶©µ²°
tv ³µ²√¬±¦¨¶¬± ≤«¬±¤º¤¶¶·∏§¬¨§∏¶¬±ªµ¤±§²° ¤°³¯¬©¬¨§³²¯¼°²µ³«¬¦⁄‘„ °¤µ®¨ µ¶k• „°⁄¶l q׫¨ ¶¨√ ±¨·¨ ±¨µ¤±2
§²° ³µ¬° µ¨¶³µ²§∏¦¨§uss ¶¦²µ¤¥¯¨⁄‘„ ©µ¤ª° ±¨·¶q’±¨ «∏±§µ¨§±¬±¨ ·¼2¶¨√ ±¨ ©µ¤ª° ±¨·¶º µ¨¨ ³²¯¼°²µ³«¬¦q ׫¨
§¨ ±§µ²ªµ¤° ª¨ ±¨ µ¤·¨§¥¼ ˜°Š „ §¬√¬§¨§¤¯¯¬¶²¯¤·¨¶¬±·²·«µ¨¨ªµ²∏³¶q≤ ∏¯¶·¨µ¤±¤¯¼¶¬¶¶«²º §¨·«¤·§¬©©¨ µ¨±¦¨¶¥¨2
·º¨¨ ±¬¶²¯¤·¨¶º µ¨¨ ±²·¦¯²¶¨ ¼¯ µ¨ ¤¯·¨§·²·«¨ «²¶·¶³¨¦¬¨¶¤±§·«¤··«¨ µ¨ º µ¨¨ ¦²°³¯ ¬¨µ¨ ¤¯·¬²±¶¥¨·º¨¨ ±·«¨ ¬¶²¯¤·¨
§¬©©¨ µ¨±¦¨¶¤±§ª¨ ²ªµ¤³«¬¦¶²∏µ¦¨¶q
Κεψ ωορδσ: Σπηαεροπσισσαπινεα , • „°⁄ °¤µ®¶oŠ ±¨¨ ·¬¦§¬√ µ¨¶¬·¼
松树枯梢病≈ Σπηαεροπσισσαπινεαkƒµq}ƒµql⁄¼®² i ≥∏··²± 是世界范围内针叶树上的重要病害之一kŠ¬¥2
¶²±ot|z| ~°¤¯ ° µ¨ετ αλ. ,t|{x ~• ¨¨¶ετ αλ. ,t|{{ ~≥º¤µ·ετ αλ. ,t|{xl ∀该病在我国分布地域广 o受害寄主多 o
发生危害严重k吴小芹 ot|||l ∀根据对该病菌营养体亲和性等方面的研究 o发现其种群存在一定的分化现象
k吴小芹 ousssl ∀从遗传学观点来看 o遗传多样性也就意味着基因多样性 o它决定了物种进化的潜势 ∀一个
物种的遗传变异越丰富 o对环境变化的适应性也就越大 ∀掌握病原真菌遗传变异的细微结构是进行群体遗
传学和流行学研究的一个重要方面 ∀因此 o为了从根本上弄清 Σ .σαπινεα的种内变异情况 o了解该菌对寄主
与环境变化适应的潜能 o本研究运用 • „°⁄技术对从我国 tv个省k区l收集的该菌菌株进行种一级水平基因
多态性的检测 o以期从分子水平上揭示该病菌的遗传变异本质及其亲缘关系 o为进一步弄明该菌的流行特
点和实施综合治理提供参考依据 ∀
t 材料和方法
1 q1 供试菌株来源
供试 xx个菌株来源于我国 tv个省区 o寄主包括 ty种松树和其它 u种针叶树 o详见表 t ∀
1 q2 菌体制备
将保存于 °⁄„斜面的各供试菌株分别移植于 5|s °°的 °⁄„平板 o在 ux ε 无光照恒温箱内生长
w §∀用 5x °°的灭菌接种环切取边缘生长旺盛的带菌培养基块 o接种至铺有灭菌隔离膜的 °⁄„平板
上 o于上述同一条件下生长 w §o尔后获取菌丝体并将其迅速放入 p vs ε 低温冰箱中冷冻保存备用 ∀
表 1 Σπηαεροπσισσαπινεα的供试菌株及其来源
Ταβ .1 Ισολατεσ οφ Σπηαεροπσισσαπινεα υσεδ ιν τηισστυδψ
菌株
Œ¶²¯¤·¨
采集地点
²¦¤·¬²±
纬度
¤·¬·∏§¨
经度
²±ª¬·∏§¨
寄主
‹²¶·
采集时间
⁄¤·¨ ²©¦²¯¯¨ ¦·¬²±
⁄t 黑龙江哈尔滨 ‹¤µ¥¬± ‹ ¬¨¯²±ª­¬¤±ª ‘wx1zβ ∞tuy1yβ 樟子松 Πινυσσψλϖεστρισ √¤µq µονγολιχα ¬·√¬±q t||z qt
⁄u 黑龙江哈尔滨 ‹¤µ¥¬± ‹ ¬¨¯²±ª­¬¤±ª ‘wx1z ∞tuy1yβ 长白赤松 Π.σψλϖεστρισ √¤µqσψλϖεστριφορµισ ≤«¨ ±ª ετ αλ. t||z qtu
≥w 江苏连云港 ¬¤±¼∏±ª¤±ª¬¤±ª¶∏ ‘vw1yβ ∞tt|1uβ 日本赤松 Π. δενσιφλορα ≥¬¨¥q¨·∏¦¦q t||y q|
u 江苏连云港 ¬¤±¼∏±ª¤±ª¬¤±ª¶∏ ‘vw1yβ ∞tt|1uβ 海岸松 Π. πιναστερ „¬· t||y q|
v 江苏连云港 ¬¤±¼∏±ª¤±ª¬¤±ª¶∏ ‘vw1yβ ∞tt|1uβ 湿地松 Π. ελλιοττιι ∞±ª¨¯° q t||y q|
w 江苏东海 ⁄²±ª«¤¬¬¤±ª¶∏ ‘vw1xβ ∞tt{1{β 黑松 Π. τηυνβεργιι °¤µ¯q t||y q|
x 江苏东海 ⁄²±ª«¤¬¬¤±ª¶∏ ‘vw1xβ ∞tt{1{β 火炬松 Π. ταεδα q t||y q|
| 江苏盱眙 ÷∏¼∏¬¤±ª¶∏ ‘vv1sβ ∞tt{1xβ 湿地松 Π. ελλιοττιι ∞±ª¨¯° q t||z qw
ts 江苏盱眙 ÷∏¼∏¬¤±ª¶∏ ‘vv1sβ ∞tt{1xβ 火炬松 Π. ταεδα q t||z qw
‹‘t 河南确山 ± ∏¨¶«¤± ‹ ±¨¤± ‘vu1{β ∞ttw1sβ 火炬松 Π. ταεδα q t||z q{
≥÷t 陕西安康 „±®¤±ª≥«¤±ª¬¬ ‘vu1yβ ∞ts|1sβ 火炬松 Π. ταεδα q t||z qz
≥÷u 陕西安康 „±®¤±ª≥«¤±ª¬¬ ‘vu1yβ ∞ts|1sβ 湿地松 Π. ελλιοττιι ∞±ª¨¯° q t||z qz
„t 安徽滁县 ≤«∏¬¬¤± „±«∏¬ ‘vu1wβ ∞tt{1vβ 火炬松 Π. ταεδα q t||y qtu
{ 江苏南京 ‘¤±­¬±ª¬¤±ª¶∏ ‘vu1tβ ∞tt{1{β 火炬松 Π. ταεδα q t||z qv
tu 江苏南京 ‘¤±­¬±ª¬¤±ª¶∏ ‘vu1tβ ∞tt{1{β 马尾松k江西种源l Π. µ ασσονιανα ¤°¥q t||z qx
tv 江苏南京 ‘¤±­¬±ª¬¤±ª¶∏ ‘vu1tβ ∞tt{1{β 马尾松k湖南种源l Π. µ ασσονιανα ¤°¥q t||z qx
tw 江苏南京 ‘¤±­¬±ª¬¤±ª¶∏ ‘vu1tβ ∞tt{1{β 湿地松 Π. ελλιοττιι ∞±ª¨¯° q t||z qx
us 江苏南京 ‘¤±­¬±ª¬¤±ª¶∏ ‘vu1tβ ∞tt{1{β 红松 Π. κοραιενσισ ≥¬¨¥q¨·∏¦¦q t||z q|
ut 江苏南京 ‘¤±­¬±ª¬¤±ª¶∏ ‘vu1tβ ∞tt{1{β 雪松 Χεδρυσ δεοδαραk• ²¬¥ql²∏§ t||z q|
uv 江苏南京 ‘¤±­¬±ª¬¤±ª¶∏ ‘vu1tβ ∞tt{1{β 日本冷杉 Αβιεσ φιρµ α ≥¬¨¥q¨·∏¦¦q t||z q|
uw 江苏南京 ‘¤±­¬±ª¬¤±ª¶∏ ‘vu1tβ ∞tt{1{β 黑松 Π. τηυνβεργιι °¤µ¯q t||z qtt
y 江苏句容 ∏µ²±ª¬¤±ª¶∏ ‘vu1sβ ∞tt|1uβ 火炬松 Π. ταεδα q t||y qtt
z 江苏句容 ∏µ²±ª¬¤±ª¶∏ ‘vu1sβ ∞tt|1uβ 湿地松 Π. ελλιοττιι ∞±ª¨¯° q t||y qtt
tx 江苏江宁 ¬¤±ª±¬±ª¬¤±ª¶∏ ‘vt1|β ∞tt{1zβ 刚松 Π. ριγιδα ¬¯¯ t||z qy
ty 江苏江宁 ¬¤±ª±¬±ª¬¤±ª¶∏ ‘vt1|β ∞tt{1zβ 马尾松 Π. µ ασσονιανα ¤°¥q t||z qy
tz 江苏江宁 ¬¤±ª±¬±ª¬¤±ª¶∏ ‘vt1|β ∞tt{1zβ 火炬松 Π. ταεδα q t||z qy
t{ 江苏江宁 ¬¤±ª±¬±ª¬¤±ª¶∏ ‘vt1|β ∞tt{1zβ 湿地松 Π. ελλιοττιι ∞±ª¨¯° q t||z qy
t| 江苏江宁 ¬¤±ª±¬±ª¬¤±ª¶∏ ‘vt1|β ∞tt{1zβ 晚松 Π. ριγιδα √¤µq σεροτινα ²∏§q ετ αλ. t||z qy
‹t 湖北京山 ¬±ª¶«¤±ª ‹∏¥¨¬ ‘vt1sβ ∞ttv1sβ 湿地松 Π. ελλιοττιι ∞±ª¨¯° q t||y qtt
‹u 湖北荆州 ¬±ª½«²∏ ‹∏¥¨¬ ‘vs1wβ ∞ttu1uβ 湿地松 Π. ελλιοττιι ∞±ª¨¯° q t||y qtt
t 浙江杭州 ‹¤±ª½«²∏«¨­¬¤±ª ‘vs1vβ ∞tus1uβ 晚松 Π. ριγιδα √¤µq σεροτινα ²∏§q ετ αλ. t||z q|
u 浙江杭州 ‹¤±ª½«²∏«¨­¬¤±ª ‘vs1vβ ∞tus1uβ 乔松 Π. γριφφιτηιι ¦≤¯¨ ¯¯¤±§ t||z q|
v 浙江杭州 ‹¤±ª½«²∏«¨­¬¤±ª ‘vs1vβ ∞tus1uβ 日本五针松 Π. παρϖιφλορα ≥¬¨¥q¨·∏¦¦ t||z q|
w 浙江杭州 ‹¤±ª½«²∏«¨­¬¤±ª ‘vs1vβ ∞tus1uβ 马尾松 Π. µ ασσονιανα ¤°¥q t||z q|
≥y 四川名山 ¬±ª¶«¤± ≥¬¦«∏¤± ‘vs1sβ ∞tus1uβ 湿地松 Π. ελλιοττιι ∞±ª¨¯° q t||z qw
‹∏y 湖南岳阳 ≠ ∏¨ ¼¤±ª ‹∏±¤± ‘u|1wβ ∞ttv1tβ 湿地松 Π. ελλιοττιι ∞±ª¨¯° q t||{ qu
÷v 江西景德镇 ¬±§¨½«¨ ±ª¬¤±ª¬¬ ‘u|1vβ ∞ttz1uβ 湿地松 Π. ελλιοττιι ∞±ª¨¯° q t||{ qt
÷t 江西新余 ÷¬±ª¼∏¬¤±ª¬¬ ‘uz1{β ∞ttx1|β 湿地松 Π. ελλιοττιι ∞±ª¨¯° q t||z qx
÷u 江西分宜 ƒ ±¨ª¼¬¬¤±ª¬¬ ‘uz1{β ∞ttw1zβ 晚松 Π. ριγιδα √¤µq σεροτινα ²∏§q ετ αλ. t||v
÷w 江西安福 „∏©∏¬¤±ª¬¬ ‘uz1wβ ∞ttw1yβ 湿地松 Π. ελλιοττιι ∞±ª¨¯° q t||y qtu
ƒt 福建闽侯 ¬±ª«²∏ƒ∏­¬¤± ‘uy1uβ ∞tt|1tβ 湿地松 Π. ελλιοττιι ∞±ª¨¯° q t||y qtu
ƒ| 福建闽侯 ¬±ª«²∏ƒ∏­¬¤± ‘uy1uβ ∞tt|1tβ 马尾松 Π. µ ασσονιανα ¤°¥q t||z q{
ƒz 福建清流 ±¬±ª¯¬∏ƒ∏­¬¤± ‘uy1uβ ∞tty1{β 火炬松 Π. ταεδα q t||y qtu
ƒu 福建长乐 ≤«¤±ª¯¨ ƒ∏­¬¤± ‘uy1sβ ∞tt|1xβ 湿地松 Π. ελλιοττιι ∞±ª¨¯° q t||y qtu
ƒ{ 福建长乐 ≤«¤±ª¯¨ ƒ∏­¬¤± ‘uy1sβ ∞tt|1xβ 马尾松 Π. µ ασσονιανα ¤°¥q t||y qtu
ƒx 福建连城 ¬¤±¦«¨ ± ƒ∏­¬¤± ‘ux1zβ ∞tty1zβ 火炬松 Π. ταεδα q t||y qtu
ƒy 福建永定 ≠²±ª§¬± ƒ∏­¬¤± ‘uw1zβ ∞tty1yβ 火炬松 Π. ταεδα q t||y qtu
≠ ‘t 云南昆明 Ž∏±°¬±ª ≠∏±¤± ‘uw1xβ ∞tsu1zβ 辐射松 Π. ραδιατα ⁄q⁄²± q t||z qu
≠ ‘w 云南昆明 Ž∏±°¬±ª ≠∏±¤± ‘uw1xβ ∞tsu1zβ 加勒比松 Π. χαριβαεα  ²µ¨¯¨·q t||z q{
≠ ‘x 云南昆明 Ž∏±°¬±ª ≠∏±¤± ‘uw1xβ ∞tsu1zβ 海岸松 Π. πιναστερ „¬· t||z q{
≠ ‘y 云南昆明 Ž∏±°¬±ª ≠∏±¤± ‘uw1xβ ∞tsu1zβ 墨西哥变种白松 Π. στροβυσ √¤µ. χηιαπενσισ q t||z q{
Š⁄t 广东广州 Š∏¤±ª½«²∏ Š∏¤±ª§²±ª ‘uv1tβ ∞ttv1tβ 马尾松 Π. µ ασσονιανα ¤°¥q t||z qu
Š⁄u 广东广州 Š∏¤±ª½«²∏ Š∏¤±ª§²±ª ‘uv1tβ ∞ttv1tβ 马尾松 Π. µ ασσονιανα ¤°¥q t||{ qu
t 广东雷州 ¨¬½«²∏ Š∏¤±ª§²±ª ‘ut1sβ ∞tts1uβ 加勒比松 Π. χαριβαεα  ²µ¨¯¨·q t||z qtu
u 广东雷州 ¨¬½«²∏ Š∏¤±ª§²±ª ‘ut1sβ ∞tts1uβ 加勒比松 Π. χαριβαεα  ²µ¨¯¨·q t||z qtu
vv w期 吴小芹等 }中国松树枯梢病菌遗传多态性的 • „°⁄分析
1 q3 菌体基因组 ⁄‘„的提取
取新鲜冷冻的菌丝体k约 wss ∗ yss °ªl加液氮将其迅速研成粉末 ∀随即将粉状样品倒入盛有 yss
ˏ≤× „…裂解缓冲液≈kt h ≤ × „…ox h °∂ ° ots °°²¯r×µ¬¶2‹≤ k¯³‹{1sl ous °°²¯ ∞⁄× „k³‹{1sl o
t1w °²¯r‘¤≤¯ozx °°²¯r疏基乙醇 的 t1x °∞³³¨ ±§²µ©管中 o并将该管置入 yx ε 水浴中加热 vs ∗
ws °¬±∀取出后将其放入 p us ε 冷冻室内迅速冷却约 tx °¬±o使样品充分裂解 ∀随后加入等体积氯
仿 }异戊醇kuwΒt o√r√l o倒转此管充分摇匀使之成为乳状液 ∀用 …¨ ¦®°¤± Š≥2tx• 台式冷冻离心机在 us
ε 下将样品离心 ts °¬±ktsss µr°¬±l o取其上清液转管 o去沉淀 ∀重复上述氯仿 }异戊醇抽提 !离心 u
次 ∀将含样品 ⁄‘„的水相移入新管 o加入 urv至等体积预冷的异丙醇 o轻缓倒转该管并置 p us ε 冰箱
冷冻室中 ws ∗ ys °¬±以沉淀 ⁄‘„ ∀取出该离心管在低温下kw ε l高速离心 tx °¬±ktvsssµr°¬±l o倒去
水相 ∀将所得沉淀用预冷的 wss ˏzs h乙醇及 wss ˏ无水乙醇各洗 t次 o气干 ws °¬±∀用 uss ˏ重
蒸水重新溶解沉淀 o再加入 u1x倍体积的无水乙醇冷冻 ws °¬±后再低温kw ε l高速离心 ts °¬±ktvss
µr°¬±l ∀弃水相后加入预冷的 zs h乙醇和无水乙醇再各洗沉淀 t次 ∀将沉淀气干 u «∀最后将此
⁄‘„沉淀溶于 tss ˏ×∞缓冲液≈ts °°²¯ ×µ¬¶2‹≤ k¯³‹ {1sl ot °°²¯ ∞⁄× „ 中于 p us ε 下保存 ∀为
使各样品 ⁄‘„浓度趋于一致 o取 u ˏ各 ⁄‘„ 模板样品 o用溴化乙锭染色 o在 t1u h琼脂糖凝胶上电
泳 ∀根据电泳结果 o以在紫外光下见到痕迹量的 ⁄‘„为准用 ×∞分别稀释其它较浓的样品 o再统一检
测所有 ⁄‘„模板样品并稀释调节至均一浓度 ∀
1 .4 ΠΧΡ 扩增体系和反应条件
⁄‘„扩增反应在美国 ° µ¨®¬±2∞¯ ° µ¨公司生产的 °∞2|yss型 °≤ • 基因扩增仪上进行 ∀ °≤ • 反应
采用 us ˏ扩增体系 o其组成如下 }x ±ª左右模板 ⁄‘„ ots ³°²¯ 引物 o§„×° o§≤ ×° o§Š×°和 §× ×°各
为 uss Λ°²¯rk上海生工生物工程有限公司l ou ˏts ¬扩增反应缓冲液≈tss Λ°²¯ ×µ¬¶2‹≤ k¯³‹{1vl o
xss °°²¯rŽ≤¯ous °°²¯r ª≤ u¯ os1st h明胶 ox1s ªr…≥„  ot1x ˜ פ´ ⁄‘„聚合酶k上海生工生
物工程有限公司l ox Λ×¤´ 酶稀释液≈ts °°²¯ ×µ¬¶2‹≤ k¯³‹{1vl oux °°²¯ …≥„  o无菌超纯水补至 us
ˏ∀上面覆盖 us ˏ石蜡油 o以防高温反应时反应液的蒸发 ∀扩增反应条件为 }第 t步 o预变性 o|w ε o
u °¬±~第 u步 o|w ε 变性 ovs ¶¨¦~ws ε 退火 ovs ¶¨¦~zs ε 延伸 ot1x °¬±~循环 v{次 ~第 v步 o最后 t次延
伸 ozu ε oz °¬±∀反应中同时设立不加模板 ⁄‘„ 的对照 ∀反应结束后 o以 t ≅ ׅ∞k×µ¬¶2…²µ¬¦¤¦¬§o
∞⁄× „l为电极缓冲液 o将扩增产物在含有溴化乙锭kt Λªr°l的 t1u h琼脂糖凝胶上≈胶的一侧同时点
上标准 ⁄‘„ktss ¥³ ⁄‘„ ¤§§¨µo上海生工生物工程有限公司l 于 x √r¦°电场强度下电泳 v «∀将电
泳检测结果在透过式紫外灯下观察并用快速成像系统kƒ²×²r≥³¨ ¦·µ∏°× °l拍照 ∀
1 q5 引物筛选
随机选取美国 ’³¨µ²±公司生产的 ’°„ !’°… !’°≤ !’°⁄!’°∞ !’°Ž和 ’°÷ 组中 |y个寡核苷酸
引物 o先用 t个 ⁄‘„模板样品进行 °≤ • 反应 o根据扩增结果 o即条带的有无 o从上述引物初筛出有扩
增产物的引物 ~再用 tu个 ⁄‘„模板样品进行 °≤ • 反应 o根据扩增条带的数量 !特异性和可重复性对
有产物的引物进行复筛 ∀最后 o选出具稳定多态性引物用于全部 xx个 ⁄‘„模板样品的 °≤ • 扩增 ∀
1 q6 数据分析
把电泳图谱中每个位点上扩增条带的有无分别记为 t和 s ∀ • „°⁄标记名称用引物名 n扩增片段
的碱基长度k分子量大小l来表示 ∀遗传变异的水平度量用总多态位点百分率统计 }Π€ Λ/ ν ∀式中 , Λ
€ • °„⁄测定的多态位点数 oν € • „°⁄测定的所有位点总数 ∀任意 u个个体间的遗传差异采用 ‘¨¬2
¬kt|z{l方法计算遗传相似度k Σ)和遗传距离( ∆l ∀
遗传相似度 Σξψ€ u Νξψ/ ( Νξ n Νψ)
遗传距离 ∆ξψ€ t p u Νξψ/ ( Νξ n Νψ)
式中 , Νξψ为 ξ 和 ψ两菌株共有的 • „°⁄标记数 oΝξ 和 Νψ分别为 ξ 和 ψ菌株拥有的 • „°⁄标记
数 ∀
全部数据通过 ƒµ¤±¦¬¶≤ q¼ «¨等编制的用于群体遗传分析的 °’°∞Š‘∞软件包k°’°Š∞‘∞ ∂ ¬¨¶¬²±
t1utl进行运算和统计分析 ∀并运用 ƒ¨¯¶¨±·¨¬±编制的 °‹ ≠Œ°kv1x版本l的 ‘∞ŒŠ‹…’ • 程序 o根据
‘¨¬kt|z{l的遗传距离应用算术平均数的非加权成组配对法k˜°Š  „ }˜±º ¬¨ª«·¨§ °¤¬µ2Šµ²∏³  ·¨«²§
˜¶¬±ª¤± „µ¬·«° ·¨¬¦„√ µ¨¤ª¨ l构建树状图 ∀
wv 林 业 科 学 vy卷
u 结果与分析
2 q1 引物筛选
用菌体 ≠ ‘w 作为模板 ⁄‘„ 从
|y个随机引物中初筛出有扩增 ⁄‘„
片段的 yy个引物k约有 vt h 的引物
无扩增产物l ∀由于供试样本来源的
地理区域较广 o为了减少 xx个菌株试
验时出现缺带 !不清晰或无效k单态l
的扩增 o从 yy个引物中再选取 w{个
引物 o用 tu 种模板 ⁄‘„k菌株 „t o
⁄u oƒu oƒ| oŠ⁄t o‹t ow out o÷w o
u o≥y 和 ≠ ‘wl再进行复筛 ∀结果
在选用的 w{个引物中筛选出 tz个能
有效扩增出 • „°⁄图带k具稳定多态
且带型清晰l的引物k见表 ul ∀
2 q2 菌株间的遗传多态性
用筛选出的 tz个随机引物对 xx
个 ⁄‘„样品进行 °≤ • 扩增后共得到
uss个 • „°⁄标记k其 ⁄‘„片段分子
量在 s1uz ∗ v1us ®¥之间l o其中多态
表 2 Σπηαεροπσισσαπινεα各菌株 Ρ ΑΠ∆分析所用随机引物
及其扩增的 Ρ ΑΠ∆图带数
Ταβ .2 Ριβονυχλεοτιδεσεθυενχε οφ τηερανδοµ πριµερσ υσεδ φορ ΡΑΠ∆ αναλψσισ
οφ Σπηαεροπσισσαπινεα ισολατεσανδ αµ πλιφιεδ ΡΑΠ∆ βανδσ
引物
≤²§¨ ²©³µ¬° µ¨
x. 2v.核苷酸序列
x. 2v. •¬¥²±∏¦¯ ²¨·¬§¨
¶¨ ∏´¨ ±¦¨
检测图带数
„ °³¯¬©¬¨§¥¤±§¶
多态性图带数r h
°²¯¼°²µ³«¬¦¥¤±§¶rk h l
xx ¬¶²¯¤·¨¶ xv ¬¶²¯·¤·¨¶≠
’°„2su × Š≤ ≤ Š„Š≤ × Š tu tu ktssl { kyy qzl
’°„2sv „Š× ≤ „Š≤ ≤ „≤ tu tt k|t qzl | kzx qsl
’°„2sz Š„„„≤ ŠŠŠ× Š z z ktssl w kxz qtl
’°„2us Š× × Š≤ Š„× ≤ ≤ tu tu ktssl | kzx qsl
’°…2sz ŠŠ× Š„≤ Š≤ „Š tu tt k|t qzl z kx{ qvl
’°…2s{ Š× ≤≤ „≤ „≤ ŠŠ tt tt ktssl { kzu qzl
’°…2s| × ŠŠŠŠŠ„≤ × ≤ y y ktssl w kyy qzl
’°…2tz „ŠŠŠ„„≤ Š„Š tt ts k|s q|l | k{t q{l
’°≤2sw ≤ ≤ Š≤ „× ≤ × „≤ ts ts ktssl { k{s qsl
’°≤2sx Š„× Š„≤ ≤ Š≤ ≤ tt tt ktssl y kxw qxl
’°≤2s{ × ŠŠ„≤ ≤ ŠŠ× Š tw tw ktssl tt kz{ qyl
’°≤2tt „„„Š≤ × Š≤ ŠŠ tv tv ktssl ts kzy q|l
’°≤2tw × Š≤ Š× Š≤ × × Š tt tt ktssl z kyv qyl
’°⁄2t{ Š„Š„Š≤≤ „„≤ ts ts ktssl | k|s qsl
’°⁄2us „≤≤ ≤ ŠŠ× ≤ „≤ ut ut ktssl tz k{t qsl
’°Ž2sw ≤ ≤ Š≤ ≤≤ „„„≤ ty ty ktssl tt ky{ q{l
’°÷2su × × ≤≤ Š≤≤ „≤ ≤ tt tt ktssl { kzu q{l
总计 ײ·¤¯ uss t|z k|{ qxl twx kzu qxl
≠ xv个菌株指群体中不包括 Š⁄u和 t两个菌株 ∀ ‘²·¬±¦¯∏§¬±ª¬¶²¯¤·¨¶²©
Š⁄u ¤±§t ∀
性标记 t|z 个 o占 |{1x h k表 ul ∀这表
明 o在 Σ . σαπινεα 菌株间存在较丰富的
⁄‘„序列多态性k图 tl ∀
在 tz个供试引物中 o各引物检测到的
且判别清晰的 • „°⁄位点数介于 y ∗ ut
之间 o平均每个引物提供 tu 个 • „°⁄标
记的信息量k表 ul ∀在一定的扩增条件
下 o扩增的条带数在理论上取决于基因组
的复杂性 ∀ Σ . σαπινεα 的扩增条带数较
多 o也从一个方面反映了该菌的基因组可
能较大 ∀
2 q3 菌株间的遗传变异分析
遗传相似度kŠ ±¨¨ ·¬¦¶¬°¬¯¤µ¬·¼l或遗
传距离 k Š ±¨¨ ·¬¦ §¬¶·¤±¦¨ l是衡量群体
• „°⁄变异水平的重要指标 ∀采用前述的
计算方法 o根据 Σ . σαπινεα各菌株两两之
间共有的及特有的 • „°⁄标记数 o得出不
同菌株间的遗传相似度k Σξψl和遗传距
离 ∀结果显示 oxx个菌株间的遗传相似度
变化较大 o其相似性最小值为 s1wy o最大
值为 t1ss o其中绝大多数菌株间k约 {s h
以上l的相似值变动范围在 s1{y ∗ s1|z之
间 ∀菌株 „tk安徽火炬松l !⁄tk黑龙江樟
子松l !ƒy和 ƒzk福建火炬松l之间的遗传
相似性最大k Σξψ€ tl ~菌株 ⁄uk黑龙江 图 t 随机引物 „v !…tz扩增 Σ . σαπινεα xx个菌株 ⁄‘„的电泳结果ƒ¬ªqt „°³¯¬©¬¦¤·¬²± ³µ²¯¬¯¨ ¶ª¨ ±¨ µ¤·¨§¥¼ ³µ¬° µ¨„v !…tz ²© Σ . σαπινεα xx ισολατεσ.
xv w期 吴小芹等 }中国松树枯梢病菌遗传多态性的 • „°⁄分析
图 u Σ . σαπινε xx个菌株的 ˜°Š  „聚类树状图
ƒ¬ªqu ⁄¨ ±§µ²ªµ¤° ²© Σ . σαπινεα xx ¬¶²¯¤·¨¶ª¨ ±¨ µ¤·¨§¥¼·«¨ ˜°Š  „
长白赤松l与它们的遗传相似性极为接近k Σξψ
€ s1||xl ~这 x个菌株与其它大多数菌株的遗
传相似值在 s1{y ∗ s1|t之间 ∀菌株 ƒuk福建
湿地松l !uk江苏海岸松l和 wk江苏黑松l相
互间的遗传相似性也较大 k Σξψ值分别为
s1|vs和 s1|uxl ~然而 o它们与其余 xu个菌株
的遗传相似值却较小k Σξψ为 s1xsx ∗ s1yssl ∀
菌株 Š⁄uk广东马尾松l和 tk广东加勒比
松l与其它 xv个菌株的遗传相似性最小k前者
Σξψ为 s1w|s ∗ s1xwx o后者 Σξψ为 s1wyx ∗
s1xwsl o它们二者间的相似性也不大k Σξψ €
s1ywsl ∀从总体水平上看 oΣ . σαπινεα中国群
体内的遗传变异较为丰富 ∀
2 q4 菌株间的亲缘关系分析
根据系统聚类结果 o若确定遗传相似度的
一定值ks1ys  Σξψ s1ywl作为划分类群的标
准 o则可将 xx个菌株分为 v个类群 }ktl !菌株
Š⁄u和 t o它们与其它菌株的亲缘关系最
远 ~kul !菌株 ƒu !u和 w o它们与其它菌株的
亲缘关系较远 ~vl !除ktl !kul外的所有菌株 o
彼此间亲缘关系较近k Σξψ s1{ysl ∀在此 v
类群中 o第 u类群与第 v类群的亲缘关系略近
于第 t类群与第 u类群之间 ∀在包括了 xs个
菌株的第 v 类群中又可分为两大组 }≠ !„t !
⁄t !⁄u !ƒy !ƒz和 ≠ ‘t !≠ ‘w !≠ ‘x !≠ ‘yk前者
与后者又分为 u小组l ∀它们间的亲缘关系很
近 o而两小组内的亲缘关系则更近 ∀前一小组
内的菌株地理上相距很远 k纬度跨越从
‘uy1uβ ψ ‘vu1wβ ψ ‘wx1zβl o后一小组内的菌
株则处在同一地理区域k‘uw1xβl ∀ 其余 wt个菌株 ∀在此大组中 o菌株间仍存在着一定程度的差异 o
其内部还可分为若干小组 o但毕竟它们间的亲缘关系要近于它们与其它组或类群之间k见图 ul ∀
2 q5 特征基因位点与性状表达的联系
在本试验 tz个引物的扩增图谱中 o有些引物的某个扩增片段仅为某些菌株所特有 o这些片段成为
分析菌株间相互联系的重要依据 ∀如 ’°⁄2t{的 tvss ¥³仅 ≠ ‘w和 ≠ ‘y所共有 o’°⁄2us的 tvxs ¥³
仅 tv和 ≥y所共有 o’°„2sv的 uzss¥³和 ’°≤2tw的 tvxs¥³仅为 „t !⁄t !⁄u !ƒy和 ƒz所共有 o而这 v
组菌株正好分别同属 v个 ∂ ≤ Š¶o即其组内菌株营养体呈亲和反应k吴小芹 ousssl ∀ ’°⁄2us的 uxss ¥³
仅为 ƒ| !Š⁄t和 Š⁄u所共有 o尽管 Š⁄u在大多数位点上与 ƒ|和 Š⁄t差别较大 o但在供试的 xx个菌
株中只有这 v个菌株分离自马尾松流脂的树干 ∀另外 o还有 ’°„2su的 xss ¥³!’°≤2s{的 ttvs ¥³和
’°÷2su的 t{ss ¥³均为 „t !⁄t !⁄u !ƒy !ƒz !≠ ‘t !≠ ‘w !≠ ‘x和 ≠ ‘y所共有 o这些菌株在 °⁄„ 上生长
时所分泌的色素均比其它菌株早而多 ∀可见 o上述特征位点可能与控制菌株的 ∂ ≤ Š表达 !浸染部位和
发病症状以及色素分泌等特性有关 ∀
2 q6 菌株间差异与寄主和地理来源的关系
供试的 Σ . σαπινεα xx个菌株的聚类分析表明菌株之间的差异与寄主种类似乎没有明显关系 ∀这
种缺少寄主特异性的特点为解释该病菌具有如此广泛的针叶树寄主范围提供了分子遗传上的论据 ∀
但各菌株之间的差异或类群划分与地理来源或生境变化似有一定关系 ∀如第 t类群的 Š⁄u和 t仅
发生在广东地区 o第 u类群的 ƒu !u和w均来自东南沿海地区k福建长乐 !江苏连云港和东海l ∀然而 o
yv 林 业 科 学 vy卷
在地理来源涉及全国 tv个省区k包括广东和东南沿海地区l的第 v类群的 xs个菌株间 o却又没有明显
表明与地理来源有必然的联系 ∀尽管此类群下的个别小组划分与地理来源仍有相关 o但大多数菌株缺
少区域相关性的特点 ∀这可能与 Σ . σαπινεα群体间基因交流较频繁有关 ∀
v 讨论
在现代分子生物学研究中 o应用 °≤ • 扩增 ⁄‘„ 已成为一种非常有用的实验手段 ∀而在此实验
中 o⁄‘„的质量是影响扩增效果的重要因素之一 ∀已报道的从林木病原真菌中提取 ⁄‘„ 的材料主要
有 u种 o一是从繁殖体孢子中提取 ⁄‘„ o这主要用于一些无法用人工培养的专性寄主菌k‹¤°¨¯¬±o
t||yl ∀专性寄主菌由于只能在寄主活体上生存 o其菌丝体生于树体内部而不易收集 o故只有实地获取
其成熟外露孢子器中的孢子体 ∀但此易受到不同个体气传孢子的交叉污染且提取量受限 ∀二是从营
养体菌丝中提取 ⁄‘„ o这主要用于一些兼性寄生菌k秦国夫等 ot||y ~‹¤±¶¶²± ετ αλ. ,t||y ~‹²¨ ªª¨µετ
αλ. ,t||y ~‹∏¤±ª ετ αλqot||x ~≥°¬·«ot||x ~≥·¤±²¶½ ετ αλ. ,t||xl ∀菌丝体能在实验室规模培养多少满
足了提取大量 ⁄‘„的需求 ∀但以往所需的菌丝体多由液体培养所获得 o其菌丝团含液态培养基 o掺合
了其它生物材料 o须经过滤 !冲洗 !压干水分或离心等步骤 o花时费力且因菌丝体仍含一定水分加液氮
后易形成冰块而难以研磨 ∀本试验采用改进的固体k°⁄„l培养法培养 Σ . σαπινεα各菌株 o结果在短期
内获得了不含培养基成分 !不需任何处理即可用于提取 ⁄‘„ 的菌体材料 ∀同时真菌细胞壁因含几丁
质而破壁不易 o所获得的供试菌体含水量少也使加液氮后极易研成粉状而充分破壁 ∀因此 o改良固体
培养法对其后提取高得率 !高纯度的 ⁄‘„ 提供了材料保证 ∀另外 oΣ . σαπινεα的培养时间以 w §
kux ε l为宜 o因为超过 w §该病菌就会分泌墨绿色素易使 ⁄‘„和其它物质铰在一起而不易纯化 ∀
目前 o用于 °≤ • 扩增的林木病原真菌 ⁄‘„ 的提取 o主要采用 }ktl≥⁄≥ 法k≥²§¬∏° §²§¨¦¼t ¶∏¯2
©¤·¨l o如 Γρε µ µενιελλα αβιετιναk‹¤±¶¶²± ετ αλqot||yl !榆枯萎病菌k Οπηιοστοµ α υλµι) k ‹²¨ ªª¨µ ετ
αλ. ,t||yl !蜜环菌k Αρµιλλαρια µελλεα)k秦国夫等 ot||yl和松枯梢病菌k Σ . σαπινεαlk≥°¬·« ετ αλqo
t||x ~≥·¤±²¶½ ετ αλ. , t||yl等 ~kul ≤ × „… 法k≤ ·¨¼¯2·µ¬° ·¨«¼¯2¤°°²±¬∏°2¥µ²°¬§¨ l o如茶 生柱锈菌
kΧροναρτιυ µ ριβιχολα)k‹¤°¨¯¬±ot||yl和松针褐斑病菌k Μψχοσπηαερελλα δεαρνεσσιι)k ‹∏±¤±ª ετ αλ. ,
t||xl等 ∀本研究在预备试验中曾选取 Σ . σαπινεα的 ty个菌株采用上述两种方法进行 ⁄‘„ 的提取 ∀
电泳检测表明 o经 ≥⁄≥法提取的 ⁄‘„杂质较多≈泳道上红带k• ‘„l明显  o⁄‘„量不稳定 ~≤ × „…法提
取的 ⁄‘„杂质较少 o⁄‘„量较均匀 ∀用 ’°„2sv !’°„2us !’°Ž2sw !’°÷2su和 ’°÷2s{等 x个引物分
别扩增由 ≥⁄≥法和 ≤ × „…法提取的 {个菌株的 ⁄‘„ o结果由 ≤ × „…法提取的 ⁄‘„其扩增后的产物条
带数多于 ≥⁄≥法提取的 ⁄‘„ ∀因此 o与 ≥⁄≥法相比 o≤ × „…法较适于 Σ . σαπινεα菌体 ⁄‘„的提取 ∀
Σ .σαπινεα供试菌株的分子聚类结果证实各菌株间差异与其针叶树寄主种类无明显相关 o与其地
理来源在某些类群间有一定联系 o但在大多数菌株间相关趋势不明显 ∀这些特点 o可能就使得 Σ . σαπ2
ινεα种下大多数菌株在侵染和传播过程中既无寄主上的限制又无地理上的隔离 o而易于发生和流行 o
增加了防治的难度 ∀另外 o本研究在黑松和湿地松上分别发现两种差异较大属不同类型的菌株 o从林
间调查来看 o其中一类型菌株所在的林分林地条件差 !发病程度重 ∀因此 o环境条件对 Σ . σαπινεα种下
菌株发生变异究竟有何影响 !程度如何有待深入研究 ∀
≥°¬·«等kt||xl和 ≥·¤±²¶½等kt||yl曾对美国中北部和中西部针叶树上根据培养性状等分出的松
枯梢病菌 „型和 …型菌株进行了 • „°⁄分析 o结果证实它们分归 u类 o其型间菌株的遗传相似性明显
低于型内菌株间 ∀本研究中国菌株的 • „°⁄分析结果与其培养性状所作的类群划分k吴小芹 ousssl基
本上是一致的 ∀至于中国菌株在类型上与美国菌株的关系 o尚有待对中美菌株在同一试验条件下k特
别是 • „°⁄分析l加以比较后才能作出准确的判断 ∀
采用 • °„⁄技术快速有效地检测出了 Σ . σαπινεα基因组 ⁄‘„ 的变化 o并避免了培养观察和接种
分析中一些无法克服的缺陷 o如培养条件 !接种环境和调查方法等而产生的差异 ∀因此 o• „°⁄技术为
快速监测 Σ . σαπινεα的种群遗传变异提供了方便有效的手段 o并对分析各性状的基因控制 !彼此间的
亲缘关系以及病害发生与流行等都具有重要的实践指导意义 ∀
参 考 文 献
秦国夫 o贺 伟 o沈瑞祥 q中国蜜环菌生物种的 • „°⁄分析 ∀真菌学报 ot||y otxktl }uy ∗ vv
zv w期 吴小芹等 }中国松树枯梢病菌遗传多态性的 • „°⁄分析
吴小芹 q全球松树枯梢病发生状况与防治策略 o世界林业研究 ot||| otuktl }ty ∗ ut
吴小芹 q中国松树枯梢病菌营养体亲和性研究 o林业科学 ousss ovyktl }wz ∗ xu
吴小芹 q松枯梢病菌的培养性状和致病力变异及其相互关系 o南京林业大学学报 ousss ouwkul
Š¬¥¶²± Œ „ ≥ q⁄¬¶¨¤¶¨ ²©©²µ¨¶··µ¨ ¶¨º¬§¨ ¼¯ ³¯¤±·¨§¤¶ ¬¨²·¬¦¶¬±·«¨ ·µ²³¬¦¶¤±§¶²∏·«¨µ± «¨ °¬¶³«¨ µ¨ o°¤µ·ŒŒo׫¨ ª¨ ±∏¶ Πινυσ. ≤²°°²±º q
 ¼¦²¯ qŒ±¶·qo Ž¨ º o≥∏µµ¨¼ ∞±ª¯¤±§ot|z| otvx
‹¤°¨¯¬± • ≤ q Š ±¨¨ ·¬¦§¬√ µ¨¶¬·¼ ¥¨·º¨¨ ± ¤±§ º¬·«¬± ¦¤±®¨ µ¶²©·«¨ º«¬·¨ ³¬±¨ ¥¯¬¶·¨µµ∏¶·q°«¼·²³¤·«²¯²ª¼ ot||y o{y }{zx ∗ {z|
‹¤±¶¶²± ° o • ¤±ª ÷2• o≥½°¬§·„ ∞ ετ αλq• „°⁄√¤µ¬¤·¬²±¬± Γρε µ µενιελλα αβιετινα¤··¤¦®¬±ª Πινυσσψλϖεστρι󤱧 Πινυσχοντορτᬱ ±²µ·«¨µ±
≥º §¨¨ ± o∞∏µqqƒ²µq°¤·«qot||y ouy }wx ∗ xx
‹²¨ ªª¨µ° o…¬±½ × ¤±§ ‹ ¬¨±¬ª¨µ˜ q ⁄¨ ·¨¦·¬²± ²© ª¨ ±¨ ·¬¦√¤µ¬¤·¬²± ¥¨·º¨¨ ± Οπηιοστοµ α υλµι ¤±§ ‘„‘¤±§ ∞„‘µ¤¦¨¶²© Ο . νοϖουλµι ¬±
≥º¬·½¨ µ¯¤±§∏¶¬±ª • „°⁄ °¤µ®¨ µ¶q∞∏µqqƒ²µq°¤·«qot||y uy }xz ∗ y{
‹∏¤±ª2≠ o ≥°¤¯¯¨ ¼ ∞ … ¤±§ Š∏µ¬±ª • ° q ⁄¬©©¨ µ¨±·¬¤·¬²± ²© Μψχοσπηαερελλα δεαρνεσσιι ¥¼ ¦∏¯·∏µ¤¯ ¦«¤µ¤¦·¨µ¤±§ • „°⁄ ¤±¤¯¼¶¬¶q °«¼2
·²³¤·«²¯²ª¼ ot||x o{x }xuu ∗ xuz
‘¨¬  q∞¶·¬°¤·¬²± ²©¤√ µ¨¤ª¨ «¨ ·¨µ²½¼ª²¶¬·¼ ¤±§ª¨ ±¨ ·¬¦§¬¶·¤±¦¨ ©µ²° ¤¶°¤¯¯ ±∏°¥¨µ²©¬±§¬√¬§∏¤¯¶q Š ±¨¨ ·¬¦¶ot|z{ o{| }x{v ∗ x|s
°¤¯ ° µ¨  „ i ‘¬¦«²¯ ¶¯× ‹ q≥«²²·¥¯¬ª«·¤±§¦²¯ ¤¯µµ²·²© Πινυσ ρεσινοσᦤ∏¶¨§¥¼ Σπηαεροπσισσαπινεᬱ ©²µ¨¶··µ¨¨±∏µ¶¨µ¬¨¶o °¯ ¤±·⁄¬¶2
¤¨¶¨ ot|{x oy| }zv| ∗ zws
• ¨¨¶„ „ o • ¥¨¥¨µƒ q°¤·«²ª¨ ±¬¦¬·¼ ²© Σπηαεροπσισσαπινεα·²¶¨ §¨o¶¨ §¨¬±ª¶¤±§¶¤³¯¬±ª¶²©¶²°¨ ≤ ±¨·µ¤¯ „ ° µ¨¬¦¤± ³¬±¨ ¶o ×µ¤±¶¤¦·¬²±¶²©
·«¨ …µ¬·¬¶«  ¼¦²¯²ª¬¦¤¯ ≥²¦¬¨·¼ ot|{{ o|t }uzv ∗ uzz
≥°¬·« ⁄ • ¤±§≥·¤±²¶½ Š • q ≤²±©¬µ°¤·¬²± ²©·º² §¬¶·¬±¦·³²³∏¯¤·¬²± ²© Σπηαεροπσισσαπινεᬱ·«¨ ±²µ·«¦¨±·µ¤¯ ˜±¬·¨§≥·¤·¨¶∏¶¬±ª • „°⁄¶o
°«¼·²³¤·«²¯²ª¼ ot||x o{x }y|| ∗ zsw
≥·¤±²¶½ Š • o≥°¬·«⁄ • ¤±§Š∏·«°¬¯¯ µ¨ „ q≤«¤µ¤¦·¨µ¬½¤·¬²± ²± Σπηαεροπσισσαπινεα©µ²°·«¨ º ¶¨·¦¨±·µ¤¯ ˜±¬·¨§≥·¤·¨¶¥¼ ° ¤¨±¶²©µ¤±§²°
¤°³¯¬©¬¨§³²¯¼°²µ³«¬¦⁄‘„ °¤µ®¨ µ¶¤±¤¯¼¶¬¶q °¯ ¤±·⁄¬¶qot||y o{s }ttzx ∗ ttz{
≥º¤µ·• oŽ±²¬2⁄¤√¬¨¶° ≥ o • ¬±ª©¬¨ §¯  q Σπηαεροπσισσαπινεα , º¬·«¶³¨¦¬¤¯ µ¨©¨ µ¨±¦¨ ·²¬·¶²¦¦∏µµ¨±¦¨ ²± Πινυ󶳳q¬± ≥²∏·« „©µ¬¦¤o≥ q
„©µqƒ²µqqt|{x ovx }t ∗ {
5中国森林立地6专著征订
5中国森林立地6由张万儒研究员主编 o是一部全面系统地论述森林生存环境的专著 o由科学出版
社 t||z年出版 ∀全书 {w ≅ tsw字 o共分 {章 o第 t !u章 o森林立地研究进展动态 !森林立地研究的理论
基础 ~第 v !w章 o中国森林的自然地理环境 !中国森林立地分类系统 ~第 x !y章 o森林立地区域分类与基
层分类详述 ~第 z章 o森林立地质量评价 ~第 {章 o森林立地应用技术 ∀本书提供了一整套我国用材林
基地大面积科学选地的高水平的实用技术资料 ∀
本书研究范围广 o资料丰富 o观点明确 o对我国林业建设的宏观决策 !速生丰产林基地大面积选地 !
提高科学育林技术水平与我国林业的可持续发展具有重大的现实意义和长远意义 ∀本书的研究工作
曾获 t||x年国家级科学技术进步奖二等奖 ∀
本书是从事农林牧业生产 !科研部门的专业人员以及有关高等院校师生的实用读物 o也是林学 !土
壤 !地貌 !气候 !植物 !生态 !环境 !资源等有关专业人员的重要参考书 ∀
本书定价每册 |s元 o如需该书者 o可汇款至中国林学会5林业科学6编辑部k每本加邮寄费 x元l ∀
地址 }北京万寿山后中国林学会5林业科学6编辑部 o邮编 }tsss|t ∀
{v 林 业 科 学 vy卷