全 文 ：园艺学报，2015，42 (4)：665–671.
Acta Horticulturae Sinica
doi：10.16420/j.issn.0513-353x.2014-0913；http：//www. ahs. ac. cn 665
收稿日期：2014–11–16；修回日期：2015–02–03
基金项目：国家公益性行业（农业）科研专项项目（nyhyzx200903017-08）
* 通信作者 Author for correspondence（E-mail：whni@mail.hzau.edu.cn；Tel：027-87283278）
猕猴桃病毒 A 和 B 的 RT-PCR 检测及分子变异
初步研究
郑亚洲 1,2，王国平 1,2，周菊芳 1，朱晨熹 1，王利平 1，徐文兴 1，洪 霓 1,2,*
（1 华中农业大学植物科技学院，湖北省作物病害监测与安全控制重点实验室，武汉 430070；2 农业微生物学国家重
点实验室，武汉 430070）
摘 要：为明确猕猴桃病毒 A（Actinidia virus A，AcVA）和猕猴桃病毒 B（Actinidia virus B，AcVB）
在中国猕猴桃（Actinidia sp.）上的侵染状况和分子特性，采用 RT-PCR 技术对 151 份猕猴桃样品的 AcVA
和 AcVB 进行检测，检出率分别为 15.2%和 17.9%，所收集的 6 种猕猴桃样品中均检测到一种或两种病毒。
发现 AcVA 的 ORF1、ORF4 和 ORF5 扩增片段序列存在较大分子变异，不同分离物的 269 bp 片段（ORF1）
核苷酸序列相似性为 77.3% ~ 99.3%。在基于各扩增片段核苷酸序列的系统进化树中，AcVA 分离物聚
为 2 ~ 3 组。采用引物 AcVB5F/5R 扩增获得 20 个 AcVB 分离物的 342 bp 或 338 bp 的 ORF5 片段，核苷
酸序列相似性为 81% ~ 100%，与新西兰 AcVB 分离物 TP7-93B 相应片段的核苷酸序列相似性为 83.9% ~
99.7%，在系统进化树中聚为 3 组。
关键词：猕猴桃；猕猴桃病毒 A；猕猴桃病毒 B；RT-PCR；序列分析
中图分类号：S 663.4；S432.4+1 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2015）04-0665-07

The Detection of Actinidia virus A and Actinidia virus B by RT-PCR and
Their Molecular Variation Analysis
ZHENG Ya-zhou1,2，WANG Guo-ping1,2，ZHOU Ju-fang1，ZHU Chen-xi1，WANG Li-ping1，XU Wen-xing1，
and HONG Ni1,2,*
（1College of Plant Science and Technology，Key Lab of Crop Disease Monitoring and Safety Control in Hubei，Huazhong
Agricultural University，Wuhan 430070，China；2National Key Lab of Agromicrobiology，Wuhan 430070，China）
Abstract：To understand the infectious status and molecular characteristics of Actinidia virus A
（AcVA）and Actinidia virus B（AcVB）in kiwifruit（Actinidia sp.）grown in China，151 plants of kiwifruit
were tested for the presence of the two viruses by Reverse transcription PCR（RT-PCR）. Results revealed
that the average infection frequencies of AcVA and AcVB in kiwifruit samples were 15.2% and 17.9%，
respectively. All six Actinidia species tested were positive to one or two viruses. Sequence analyzes of
amplified fragments from ORF，ORF4 and ORF5 of AcVA genome showed that the virus isolates were
molecularly divergent and the 269 bp fragments of ORF1 from different isolates shared nucleotide
similarities of 77.3%–99.3%. In phylogenetic trees based on nucleotide sequences of three fragments，all

Zheng Ya-zhou，Wang Guo-ping，Zhou Ju-fang，Zhu Chen-xi，Wang Li-ping，Xu Wen-xing，Hong Ni.
The detection of Actinidia virus A and Actinidia virus B by RT-PCR and their molecular variation analysis.
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AcVA isolates separated into two or three clades. The ORF5 fragment of 20 AcVB isolates amplified using
primer set AcVB5F/5R had a size of 342 bp or 338 bp. All those isolates shared nucleotide similarities of
81%–100% with each other and 83.9%–99.7% with the corresponding sequence of the New Zealand
isolate TP7-93B，and clustered into three clades in the phylogenetic tree constructed basing on nucleotide
sequences of the fragment.
Key words：Actinidia；Actinidia virus A；Actinidia virus B；RT-PCR；sequence analysis

随着猕猴桃产业的发展，猕猴桃溃疡病（Pseudomonas syringae pv. actinidiae）等病害所造成的
严重损失已引起许多国家的高度关注。此外，在中国田间调查发现猕猴桃植株上有病毒及类似病害
的发生（林尤剑和高日霞，1995），日本也有猕猴桃嫁接传播病害的报道（Nitta & Ogasawara，1997），
但均未对其病原开展研究。新西兰于 2003 年首次报道了苹果茎沟病毒侵染猕猴桃（Clover et al.，
2003），且病株症状与中国早期观察到的症状相似。目前，仅新西兰与意大利合作开展了猕猴桃病毒
的鉴定，已报道的病毒有 13 种（Blouin et al.，2013），其中猕猴桃病毒 A（Actinidia virus A，AcVA）
和猕猴桃病毒 B（Actinidia virus B，AcVB）的发生较为普遍，二者均为 β线性病毒科（Betaflexiviridae）
葡萄病毒属（Vitivirus）暂定成员，基因组分别为 7 566 nt（不包括 5′末端约 100 nt）和 7 488 nt 的正
单链 RNA（+ssRNA），含 5 个开放阅读框（Open reading frame，ORFs），分别编码复制相关蛋白、
运动蛋白、衣壳蛋白和核酸结合相关蛋白，其中 ORF2 产物功能未知（Blouin et al.，2012）。本研究
组自 2013 年起开展了猕猴桃病毒病的调查与病毒鉴定，首次从中国种植猕猴桃上鉴定出 AcVA 和
AcVB（Zheng et al.，2014）。为进一步明确中国猕猴桃的病毒侵染状况，本研究中在田间调查的基
础上，通过收集田间表现病毒病症状的猕猴桃样品，采用 RT-PCR 技术，对侵染猕猴桃的 AcVA 和
AcVB 进行了检测和分子变异分析。研究结果为深入了解两种病毒对猕猴桃生产的影响，制定猕猴
桃病毒病防控措施提供了重要信息，同时为建立病毒分子检测技术奠定基础。
1 材料与方法
1.1 供试材料及其总 RNA 的提取
2013—2014 年，从湖北、安徽、陕西、浙江、江西和云南共采集了 6 个种（或亚种）及未知种
猕猴桃叶片样品 151 份（表 2），多数采样植株的叶片表现褪绿斑驳、褪绿环纹、脉黄和花叶等症状。
取待检材料嫩叶 0.15 g，加液氮研磨成粉状，快速转入 1.5 mL 离心管中，加入 1 mL RNA 提取
缓冲液[100 mmoL · L-1 Tris-HCl（pH 8.0），含 2% SDS、4% PVP-40、500 mmoL · L-1 NaCl 和 25
mmoL · L-1 EDTA]，快速混匀，65 ℃水浴处理后，离心并取上清液，加入等体积 50%异硫氰酸胍溶
液去除多酚及多糖类物质，经硅胶膜吸附柱后，收集洗脱液（50 µL），–20 ℃保存备用。
1.2 引物设计与合成
参照 Blouin 等（2012）报道的序列合成用于 AcVA 检测的两对引物 AcVA1F/AcV1R 和
AcVA5F/AcVA5R，以及用于 AcVB 检测引物 AcVB5F/Viti3′R，同时根据 NCBI 登录的 AcVA（登
录号：JN427014）和 AcVB（登录号：JN427015）基因组序列设计了用于 AcVA 外壳蛋白基因（coat
protein，CP）扩增引物 AcVA4F/AcVA4R 和用于 AcVB 检测的引物 AcVB5F/AcVB5R。上述引物
均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，各引物序列、扩增产物大小及结合位点见表 1。
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表 1 用于猕猴桃样品 AcVA 和 AcVB 的 RT-PCR 检测引物
Table 1 Primer sets used for the detection of AcVA and AcVB in kiwifruit samples
病毒
Virus
引物
Primer
引物序列
Primer sequence（5′–3′）
产物大小/bp
Product size
目标基因
Target gene
参考文献
Reference
AcVA5F CATCATTTCTCACGGGTAGG AcVA
AcVA5R TCACACAGACACTCCACACAG
283 RNA-binding protein Blouin et al.，2012
AcVA1F ATGATGGGGTGTTCTATGGGTGGCT
AcV1R CTCATTCTCCAMCCRCARAAGAG
269 Putative replicase Blouin et al.，2012
AcVA4F ATGGCAAAGAATATCTCAAGRA
AcVA4R CTATATTTCAACAGCCTGYTCG
597 Capsid protein
AcVB5F GTTTGCGAGGAGACGTAGGGC AcVB
AcVB5R AGTTAAGTGCTCTYGGRGGTGTG
342 RNA-binding protein
AcVB5F GTTTGCGAGGAGACGTAGGGC 420 RNA-binding protein Blouin et al.，2012
Viti3’R GTGTTTATTCACGCSTSTYTCYCC

1.3 RT-PCR
以提取的总 RNA 为模板逆转录合成 cDNA。反应体系为 20 μL，含 5×反转录缓冲液 4 μL、dNTPs
（5 μmol · μL-1）1 μL、RNA 酶抑制剂（40 U · μL-1）0.5 μL、M-MLV（200 U · μL-1）0.5 μL、随机
六碱基引物（100 pmol · μL-1）（TaKaRa）1 μL、RNA 模板 3 μL 和 RNase Free dH2O 10 μL。
PCR 反应总体系为 25 μL，含 10× PCR 缓冲液 2.5 μL、 dNTPs（5 μmol · μL-1）0.5 μL、Taq DNA
聚合酶（5 U · μL-1）0.2 μL、正反向引物（10 μmol · μL-1）各 0.5 μL、cDNA 2 μL 和灭菌的去离子水
18.8 μL。扩增条件为：94 ℃ 变性 3 min；然后 94 ℃ 30 s，54 ~ 56 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s，35 个循环；
72 ℃ 10 min。
1.4 扩增产物克隆及测序
RT-PCR 产物经 1.2%琼脂糖凝胶电泳后，按琼脂糖凝胶 DNA 纯化回收试剂盒 V3.0（北京道普
生物科技有限公司）说明书回收目标 DNA，连接至 pMD18-T 载体（TaKaRa），转化大肠杆菌
（Escherichia coli）DH5α菌株感受态细胞后，涂布在含 50 mg · L-1 氨苄青霉素（Ampicillin，Amp）
的 LB 固体培养基上，随机挑取一定数量的白色单菌落，在含 50 mg · L-1 Amp 的 LB 液体培养基中
振荡培养，PCR 鉴定为阳性克隆后，每份产物随机选取 1 ~ 4 个克隆，由南京金斯瑞生物科技有限
公司进行测序。
1.5 序列分析
序列比对采用生物学软件 Clustal X（1.81）和 DNAMAN（5.2.2）完成，系统发育树构建采用
MEGA4.1 软件中的邻接法（neighbor-joining，NJ）进行，Bootstrap 重复次数为 1 000。系统发育树
构建包括本研究组前期报道的 AcVA-HN-1（KJ696776）、AcVA-HN-3（KJ696777）、AcVB-HN-1
（KJ696778）和 AcVB-HN-2（KJ696779），以新西兰报道的 AcVA 分离物 TP7-93A（登录号：JN427014）
和 AcVB 分离物 TP7-93B（登录号：JN427015）作为参照。
2 结果与分析
2.1 RT-PCR 检测的结果
RT-PCR 检测的结果显示，所测定的 151 份样品中，23 份样品的 AcVA 检测结果为阳性，27 份
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样品为 AcVB 阳性，检出率分别为 15.2%和 17.9%（表 2）。在所收集的中华猕猴桃、美味猕猴桃、
软枣猕猴桃、狗枣猕猴桃、葛枣猕猴桃和毛花猕猴桃中，均检测到 AcVA 或 AcVB，其中，中华猕
猴桃和美味猕猴桃为中国主栽种，所采集样品中二者的AcVB检出率分别为 14.0%和 15.6%；而AcVA
在中华猕猴桃的检出率（17.4%）明显高于美味猕猴桃（11.1%）。其它种多作为资源而收集，检测
的样品数较少，但均检测到 1 种或 2 种病毒。在 12 份未知种的样品中，分别有 1 份感染 AcVA，5
份感染 AcVB。151 份样品中有 10 份混合感染 AcVA 和 AcVB。

表 2 不同来源猕猴桃的 AcVA 和 AcVB RT-PCR 检测结果
Table 2 RT-PCR results for the detection of AcVA and AcVB in kiwifruit plants
阳性样品数
Number of positive samples
发生频率/%
Frequency 种
Species
样品数
Number of detected samples
AcVA AcVB

AcVA AcVB
中华猕猴桃 Actinidia chinensis 86 15 12 17.4 14.0
美味猕猴桃 A. delicious 45 5 7 11.1 15.6
软枣猕猴桃 A. arguta 3 0 1 – –
狗枣猕猴桃 A. kolomikta 1 0 1 – –
葛枣猕猴桃 A. polygama 1 1 1 – –
毛花猕猴桃 A. eriantha 3 1 0 – –
未知 Unknown 12 1 5 8.3 41.7
总计 Total 151 23 27 15.2 17.9
注：–检测结果为阴性或因样品数少而未计算发生频率。
Note：–negative for the detected viruses or frequency was not calculated due to a few samples analyzed.

2.2 AcVA 的 ORF1、ORF4 和 ORF5 扩增产物序列分析
引物 AcVA1F/AcV1R 扩增产物大小为 269 bp，为部分复制酶基因（ORF1）序列。共从 5 个样
品获得目标扩增产物，来自单个植株的同一病毒命名为 1 个分离物（下同），共测定了 5 个分离物的
6 个克隆序列，分离物间的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为 77.3% ~ 99.3%和 87.6% ~ 100%，来自
分离物 Ac HN-1 的两个克隆（Ac HN-1-3 和 Ac HN-1-4）也存在较大的序列差异，其核苷酸和氨基
酸序列相似性分别为 90.3%和 98.9%。所测定分离物与新西兰报道的分离物 TP7-93A（JN427014）
相应片段的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为 75.5% ~ 86.2%和 88.8% ~ 97.8%。
引物 AcVA4F/AcVA4R 扩增目标基因为 AcVA 的外壳蛋白基因，产物大小为 597 bp，共获得 11
个分离物扩增产物的 12 个克隆序列。分离物间的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为 88.1% ~ 99.8%
和 93.5% ~ 100.0%，分离物 Ac JX-28 的该片段两个克隆（Ac JX-28-2 和 Ac JX-28-3）的核苷酸和氨
基酸序列相似性分别为 89.4%和 94.2%。所测定分离物与新西兰分离物 TP7-93A 相应片段的核苷酸
和氨基酸序列相似性分别为 88.4% ~ 90.6%和 94.2% ~ 100.0%。
引物 AcVA5F/AcVA5R 扩增产物 283 bp，为 AcVA 基因组近 3′端核酸结合蛋白编码基因（ORF5）
的片段，共测定来自 12 个 AcVA 分离物扩增产物的 14 个克隆序列。序列分析结果显示，各分离物
的 AcVA5F/AcVA5R 扩增片段之间的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为 89.0% ~ 100.0%和 92.5% ~
100.0%，其中分离物 Ac HN-9 和 Z-7 各测定了两个克隆序列，两分离物内的克隆间核苷酸序列相似
性分别为 90.1%和 91.2%。所测定分离物与新西兰报道的 AcVA 分离物 TP7-93A 的相应片段的核苷
酸和氨基酸序列相似性分别为和 90.1% ~ 94.0%和 94.6% ~ 96.8%。
以上结果表明，AcVA1F/AcV1R 扩增的部分复制酶基因（ORF1）序列变异相对较大，而引物
AcVA5F/AcVA5R 扩增 ORF5 片段变异相对较小。系统进化分析的结果显示，在基于 3 对引物扩增
片段核苷酸序列的 AcVA 系统进化树中（图 1），除引物 AcVA4F/AcVA4R 扩增获得的 Ac JX-28-2
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外，其它各分离物序列均与新西兰报道的分离物 TP7-93A 存在一定的遗传距离，分别聚为两个组或
3 个组。此外，在基于 ORF1 序列的系统进化树中（图 1，A），TP7-93A 独立形成一个分支；在基
于 ORF4 序列的系统进化树中（图 1，B），Ac SX-10 独立形成一个分支。在基于 ORF5 序列的系统
进化树中（图 1，C），Ac Z-5 和 TP7-93A 各自独立形成一个分支，而在组 I 中 Ac HN-6 与其它序列
存在较大的遗传距离。这些结果进一步表明来自中国猕猴桃的 AcVA 分离物具有较大的遗传变异。
图 1 引物 AcVA1F/AcV1R、AcVA4F/AcVA4R 和 AcVA5F/AcVA5R 扩增获得 AcVA 的
ORF1（A）、ORF4（B）和 ORF5（C）核苷酸序列系统进化分析
▲NCBI 登录序列；仅显示大于 60% Bootstrap 值；分支的长度代表遗传距离；各序列代号前为种名缩写：Ac：中华猕猴桃；
Ad：美味猕猴桃；Aa：软枣猕猴桃；Ak：狗枣猕猴桃；Ap：葛枣猕猴桃；Ae：毛花猕猴桃。
Fig. 1 Phylogenetic analysis of Actinidia virus A（AcVA）based on nucleotide sequences of fragments of ORF1（A），ORF4（B）and
ORF5（C）amplified using primer sets AcVA1F/AcV1R，AcVA4F/AcVA4R and AcVA5F/AcVA5R
▲Isolates referred from GenBank；Only Bootstrap ≥ 60% is shown；Branch length represents the genetic distance；
Host species are indicated by two letters of their Latin names：Ac：Actinidia chinensis；Ad：A. delicious；
Aa：A. arguta；Ak：A. kolomikta；Ap：A. polygama；Ae：A. eriantha.

2.3 AcVB 的 ORF5 扩增产物序列分析
采用引物 AcVB5F/Viti3′R 仅获得 3 个 AcVB 分离物序列，采用引物 AcVB5F/AcVB5R 从 20 个
猕猴桃样品获得目标扩增产物。因引物 AcVB5F/Viti3′R 和 AcVB5F/AcVB5R 扩增片段均来自该病毒
基因组近 3′端核酸结合蛋白编码基因（ORF5），所以仅对 AcVB5F/AcVB5R 扩增片段序列进行分析。
对 20 个 AcVB 分离物的 AcVB5F/AcVB5R 扩增产物进行了克隆和测序，共得到 27 个克隆序列。扩
增产物大小为 342 bp 或 338 bp，含 AcVB 282 bp 的 ORF5 序列和 56 ~ 60 bp 非翻译区。序列分析结
果显示，来自各样品的 ORF5 扩增片段之间的核苷酸序列相似性为 81% ~ 100%，编码氨基酸序列相
似性为 75.5% ~ 100.0%；不同分离物内变异大小存在差异，其中分离物 Ad HG-23 内变异较大，3
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个克隆间核苷酸序列相似性仅为 81.5% ~ 82.4%，而分离物 Ac JX-28、Ad JX-29 和 Ac HN-1 内克隆
间核苷酸序列相似为 92% ~ 99%。所测定分离物与新西兰报道的 AcVB 分离物 TP7-93B（登录号：
JN427015）相应片段的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为 83.9% ~ 99.7%和 79.8% ~ 100.0%。
在基于该扩增片段的核苷酸序列系统进化树中（图 2），这些分离物聚为 3 组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），
其中Ⅰ组包含两个亚组（Ⅰ-a 和Ⅰ-b），仅 5 个克隆序列与新西兰 AcVB 分离物 TP7-93B 聚在同一
亚组Ⅰ-b，其它克隆序列与分离物 TP7-93B 有较大的遗传距离。组Ⅲ中 10 个克隆序列与其它序列有
较大的差异，在该片段非翻译区存在连续 4 个碱基缺失，且在存在多个特异性核苷酸位点。来自分
离物 Ad HG-23 的 3 个克隆间序列变异较大，其中克隆 Ad HG-23-6 和 Ad HG-23-11 序列聚在组Ⅲ，
而克隆 Ad HG-23-9 聚在组Ⅰ-a。
图 2 AcVB 引物 AcVB5F/AcVB5R 扩增片段的核苷酸序列系统进化分析
▲NCBI 登录序列。仅显示大于 60% Bootstrap 值。分支的长度代表遗传距离。各序列代号前为种名缩写：Ac：中华猕猴桃；
Ad：美味猕猴桃；Aa：软枣猕猴桃；Ak：狗枣猕猴桃；Ap：葛枣猕猴桃；Ae：毛花猕猴桃。
Fig. 2 Phylogenetic analysis of Actinidia virus B（AcVB）based on nucleotide sequences of the fragment amplified
using the primer set AcVB5F/AcVB5R
▲Isolates referred from GenBank. Only Bootstrap ≥ 60% is shown. Branch length represents the genetic distance.
Host species are indicated by two letters of their latin names：Ac：Actinidia chinensis；Ad：A. delicious；
Aa：A. arguta；Ak：A. kolomikta；Ap：A. polygama；Ae：A. eriantha.
3 讨论
本研究初步明确了猕猴桃病毒 A（AcVA）和猕猴桃病毒 B（AcVB）在中国种植猕猴桃上的侵
染状况，两种病毒侵染率达 15% ~ 17%，发现这两种病毒均存在较大的分子变异。目前，仅新西兰
从中国引进的中华猕猴桃种植资源上检测到 AcVA 和 AcVB（Blouin et al.，2012）。除中华猕猴桃外，
本研究中首次从美味猕猴桃、软枣猕猴桃、狗枣猕猴桃、葛枣猕猴桃和毛花猕猴桃检测到 AcVA 和
郑亚洲，王国平，周菊芳，朱晨熹，王利平，徐文兴，洪 霓.
猕猴桃病毒 A 和 B 的 RT-PCR 检测及分子变异初步研究.
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（或）AcVB。虽然发现两种病毒在这些猕猴桃种类上的侵染率存在差异，但尚不能推测这些病毒
是否存在寄主偏好性，这些病毒均可经繁殖材料传播，因此繁殖材料来源对病毒侵染率有很大影响。
部分带病毒植株无明显症状，而表现明显症状的植株常存在多种病毒的复合感染。此外，多个样品
表现明显的褪绿斑或褐色坏死斑点症状，但未检测到这两种病毒，可能存在其它病毒感染。目前已
报道的侵染猕猴桃的病毒有 13 种（Blouin et al.，2013），因此，侵染中国猕猴桃的病毒种类及这些
病毒对猕猴桃生长的影响还有待进一步明确。
对 AcVA 基因组 3 个阅读框的部分序列进行分析发现该病毒存在较大的变异，其中 269 bp 的
ORF1 片段变异较大，最大序列差异近 24%，而 ORF4 和 ORF5 扩增片段的变异相对较小，最大序
列差异近 10%，与新西兰报道的该病毒基因组 ORF5 序列变异（Blouin et al.，2012）基本一致。本
研究初期调查中，同时采用引物 AcVA1F/AcV1R 和 AcVA5F/AcVA5R 进行 AcVA 检测，发现 AcVA5F/
AcVA5R 检测效率相对较高，这可能与该引物扩增区变异较小有关。引物 AcVB5F/AcVB5R 是基于
新西兰 AcVB 分离物 TP7-93B 基因组序列设计的，而本研究中发现来自中国猕猴桃的 AcVB 分离物
具高度的分子变异，各分离物 ORF5 扩增区域最大序列差异近 20%，这可能是导致该引物检测效率
较低的原因。这些研究结果为进一步提高这两种病毒的分子检测效果提供了重要依据。在基于各扩
增片段核苷酸序列的系统进化树中，两病毒的各分离物均明显聚为 2 ~ 3 个组，但未发现各分离物
的系统进化关系与其寄主来源的相关性。目前已发现同为葡萄病毒属的葡萄病毒 A（Grapevine virus
A，GVA）可通过粉蚧（Pseudococcus longispinus）传播（La Notte et al.，1997），而其它多种病毒的
介体传播需要辅助病毒存在（Nakaune et al.，2008）。目前，尚不清楚是否存在 AcVA 和 AcVB 自然
传播介体，两种病毒的分子变异是否与其寄主选择作用有关还需深入研究。

References
Blouin A G，Chavan R R，Pearson M N，MacDiarmid R M，Cohen D. 2012. Detection and characterisation of two novel vitiviruses infecting
Actinidia. Archives of Virology，157：713–722.
Blouin A G，Pearson M N，Chavan R R，Woo E N Y，Lebas B S M，Veerakone S，Ratti C，Biccheri R，MacDiarmid R M，Cohen D. 2013. Viruses
of kiwifruit（Actinidia species）. Journal of Plant Pathology，95：221–235.
Clover G R G，Pearson M N，Elliott D R，Tang Z，Smales T E，Alexander B J R. 2003. Characterization of a strain of Apple stem grooving virus in
Actinidia chinensis from China. Plant Pathology，52：371–378.
La Notte P，Buzkan N，Choueiri E，Minafra A，Martelli G P. 1997. Acquisition and transmission of Grapevine virus A by the mealybug Pseudococcus
longispinus. Journal of Plant Pathology，78：79–85.
Lin You-jian，Gao Ri-xia. 1995. Survey and identification of Actinidia spp. diseases in Fujian，China. Journal of Fujian Agricultural University：
Natural Science Edtion，24 (1)：49–53. (in Chinese)
林尤剑，高日霞. 1995. 福建猕猴桃病害调查与鉴定. 福建农林大学学报：自然科学版，24 (1)：49–53.
Nakaune R，Toda S，Mochizuki M，Nakano M. 2008. Identification and characterization of a new vitivirus from grapevine. Archives of Virology，
153：1827–1832.
Nitta H，Ogasawara S. 1997. A new graft-transmitted disease of kiwifruit. Acta Horticulturae，444：739–743.
Zheng Y Z，Zhou J F，Yang Z K，Wang G P，Hong N. 2014. First report of Actinidia virus A and Actinidia virus B on kiwifruit in China. Plant
Disease，98：1590.