全 文 ：园艺学报，2015，42 (10)：1993–2001.
Acta Horticulturae Sinica
doi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0084；http：//www. ahs. ac. cn 1993
春兰炭疽病致病菌Colletotrichum boninense的
鉴定及生物学特性分析
周平兰 1,4，唐新科 4，龙岳林 2,*，周小毛 2,3,*
（1湖南农业大学园艺园林学院，长沙 410128；2湖南农业大学植物保护学院，长沙 410128；3 湖南省农业科学院农
业生物技术研究中心，长沙 410125；4湖南科技大学生命科学学院，湖南湘潭 411201）
摘 要：以湖南野生春兰（Cymbidium goeringii）引种驯化过程中发生的炭疽病病株为试验材料，分
离、鉴定病原菌，分析营养因子和非营养因子对病原菌生长的影响。结果表明：春兰炭疽病病原菌为博
宁炭疽菌（Colletotrichum boninense Moriwaki，Sato & Tsukiboshi）；适合生长的培养基有 PDA、PSA 和
CSA；能有效利用多种碳源，最适合的为葡萄糖，有利生长的有机氮为酵母膏和蛋白胨，无机氮为硝酸钾；
光照与黑暗对菌丝生长的影响无显著性差异；适宜pH 5.0 ~ 8.0；在10 ~ 35 ℃均能生长，最适温度为25 ℃；
处理 20 min，菌丝和孢子的致死温度分别为 48 和 50 ℃。
关键词：春兰；炭疽病；Colletotrichum boninense；生物学特性
中图分类号：S 682.31 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2015）10-1993-09

Identification of Pathogen Colletotrichum boninense from Cymbidium
goeringii and Its Biological Characteristics
ZHOU Ping-lan1,4，TANG Xin-ke4，LONG Yue-lin2,*，and ZHOU Xiao-mao2,3,*
（1College of Horticulture and Landscape，Hunan Agricultural University，Changsha 410128，China；2College of Plant
Protection，Hunan Agricultural University，Changsha 410128，China；3Center of Biotechnology Research，Hunan Academy
of Agricultural Sciences，Changsha 410125，China；4School of Life Science，Hunan University of Science and Technology，
Xiangtan，Hunan 411201，China）
Abstract：Pathogen causing anthracnose on Cymbidium goeringii in Hunan was isolated and
identified，and the impact of nutritional and non-nutritional factors on its growth was analyzed. The results
showed that the pathogen of anthracnose on Cymbidium goeringii was Colletotrichum boninense
Moriwaki，Sato & Tsukiboshi. This strain grew well on media of PDA，PSA and CSA. For carbon sources，
it grew better in glucose than in sucrose，maltose or fructose. Yeast extract，peptone and KNO3 were the
better organic and inorganic nitrogen sources，respectively. The optimal acidity of culture medium was pH
5.0–8.0，light or darkness. Its hyphae could extend at 15–35 ℃，and the optimum temperature was 25
℃. The lethal temperatures of hyphae and spores were 48 ℃ and 50 ℃ in 20 min，respectively.
Key words：Cymbidium goeringii；anthracnose；Colletotrichum boninense；biological characteristic


收稿日期：2015–05–15；修回日期：2015–08–04
基金项目：湖南省科技厅重点项目（2010NK2007）
* 通信作者 Author for correspondence（E-mail：27991288@qq.com；zhouxm1972@126.com）
Zhou Ping-lan，Tang Xin-ke，Long Yue-lin，Zhou Xiao-mao.
Identification of pathogen Colletotrichum boninense from Cymbidium goeringii and its biological characteristics.
1994 Acta Horticulturae Sinica，2015，42 (10)：1993–2001.
春兰（Cymbidium goeringii）又称草兰、山兰、朵朵香等，古代称兰，系兰科（Orchidaceae）
兰属（Cymbidium）多年生草本植物（卢思聪，1994）。春兰在栽培过程中叶很容易发生炭疽病害，
观赏价值降低，并直接影响其经济价值。
炭疽菌是一类全球广布性的植物病原菌，对很多园艺植物均危害较大（Cannon et al.，2012；
Dean et al.，2012）。Yang 等（2011）对竹叶兰、银带虾脊兰、卡特兰、虎头兰、足茎毛兰、文心兰、
万代兰、独蒜兰等兰科植物的炭疽病进行了较为系统研究，发现了炭疽菌属 8 种致病真菌，即
Colletotrichum boninense Moriwaki，Sato & Tsukiboshi；Colletotrichum cliviae Y. L. Yang，Zuo Y. Liu，
K. D. Hyde & L. Cai；Colletotrichum crassipes（Speg.）Arx，Verh. K. Akad. Wet.；Colletotrichum
gloeosporioides（Penz.）Penz. & Sacc.；Colletotrichum karstii Y. L. Yang，Zuo Y. Liu，K. D. Hyde & L.
Cai，sp. nov.；Colletotrichum liriopes Damm，P. F. Cannon & Crous；Colletotrichum orchidearum Allesch；
Colletotrichum siamense Prihastuti，L. Cai & K. D. Hyde。姚锦爱等（2012）报道了福州地区建兰炭疽
病病原菌为 C. gloeosporioides；施祖荣等（2013）发现广东地区墨兰炭疽病由 C. boninese 和 C.
gloeosporioides 侵染，大花蕙兰炭疽病仅由 C. gloeosporioides 侵染；而唐祥宁和邓建玲（2008）发
现上海地区大花蕙兰炭疽病由 C. cymbidium Allesch 侵染。姜凤丽和邵桂英（1989）及姚圣梅和姜晓
明（1997）通过对春兰炭疽病的研究都报道了 C. orchidearum Allesch 为其致病菌。
湖南省地处长江中游南部，野生春兰资源丰富，全省广布（贺军辉，1993；李筑荪 等，1996）。
本研究中以湖南野生春兰引种驯化过程中发生的炭疽病病株为试验材料，分离、培养病原菌，观察
病原菌形态特征和培养性状，结合病原菌的 ITS 及 28S rDNA D1/D2 区基因序列进行系统学分析，对
病原菌进行鉴定，以明确致病菌的种类，并对该致病菌的生物学特性进行了研究。
1 材料与方法
1.1 供试菌株
本试验于 2012—2013 年在湖南农业大学花卉研究基地进行。
栽培中观察到来自湖南吉首的野生春兰发生炭疽病症状。根据柯赫氏法则，取新发炭疽病害叶
片，选择典型单一病斑，按常规组织分离，经单胞纯化和培养，获得单胞菌株；将分离菌株回接至
刺伤健康春兰叶片使其感病，再从人工接种的病斑上按常规方法分离病原菌，并与接种菌株进行形
态学比较，拟确定致病菌（许文耀，2009）。
采取离体和活体接种（分刺伤和未刺伤两种方式）对纯化后的菌株进行致病性测定（吕锐玲 等，
2011），接种材料为春兰 1（来自湖南吉首）、春兰 2（来自湖南张家界）、春剑（来自四川）、建
兰（来自福建）、虎头兰（来自云南）、多花兰（来自湖南汝城），离体接种 10 d、活体接种 20 d
后统计发病率，发病率（%）= 病斑数/接种数 × 100。
1.2 病原菌的鉴定
1.2.1 形态学鉴定
病原菌形态学鉴定参照 Damm 等（2012）的方法，将分离菌株活化后，接种菌丝块（直径 5 mm，
下同）到马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）平板（培养皿直径 90 mm，下同）上，25 ℃黑暗培养，
观察菌落，显微镜观察菌丝、附着胞、分生孢子等，测量分生孢子大小。接种单胞病原菌于 PDA
培养基，25 ℃黑暗培养，当菌落生长 7 d 时采用十字交叉法测量菌落直径。菌丝生长速率 = 菌落
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春兰炭疽病致病菌 Colletotrichum boninense 的鉴定及生物学特性分析.
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直径/培养时间。
1.2.2 分子学鉴定
病原菌的分子鉴定基于 ITS及28S rDNA的D1/D2基因序列进行分析。PCR扩增：ITS和28S rDNA
的 D1/D2 扩增均采用宝生物工程（大连）有限公司推荐的真菌变性直接 PCR 法进行。①变性：在培
养基中挑取菌体于 50 μL TaKaRa Lysis Buffer for Microorganism to Direct PCR（Code No. 9164）中
80 ℃变性处理 15 min，离心取上清液作为模板。②PCR 扩增：使用 TaKaRa Fungi Identification PCR
Kit（Code No. RR178）扩增目的片段。反应体系：变性反应液 1 μL，PCR Premix 23 μL，引物对（20
pmol · μL-1）各 0.5 μL，ddH2O 23 μL，总体积 50 μL。反应条件：94 ℃预变性 5 min；94 ℃变性 0.5
min，55 ℃ 退火 0.5 min，72 ℃延伸 1 min，30 个循环；最后 72 ℃延伸 5 min。③PCR 产物检测：
取 5 μL 扩增产物于 3%琼脂糖凝胶中进行电泳，使用 TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction
Kit Ver.3.0（Code No. 9762）切胶回收目的片段送宝生物工程（大连）有限公司测序。ITS PCR 扩增
引物对序列为 ITS1（5′-CTTGGTCATTTAGAGGAAGTA A-3′）和 ITS4（5′-TCCTCCGCTTATTGATATG
C-3′）；28S rDNA D1/D2 PCR 扩增引物对序列为 NL1（5′-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3′）
和 NL4（5′-GGTCCGTGTTTCAAGACG G-3′）（Weir et al.，2012）。
序列分析和系统发育树的构建：将目标菌株的 PCR 产物核苷酸序列通过 GenBank 中 BanKit 界
面提交至 GenBank 数据库。系统发育树构建参考 Tamura 等（2013）的方法，运用 BLAST 程序在
GenBank 数据库中分别进行同源序列搜索；根据同源序列搜索结果，下载相关菌种的 ITS 序列和
28S rDNA D1/D2 区域序列，与目标菌株序列分别共同构建 fasta 格式文件，将数据导入 MEGA6.0 软
件后用其 Clustal X 模块进行匹配排列，采用邻接法（Neighbor-Joining）构建系统发育树并用 Bootstrap
模块对系统发育树进行 1 000 次可信度分析。
1.3 病原菌的生物学特性分析
1.3.1 营养因子对病原菌的影响试验
从培养基类型、碳源和氮源 3 方面探究营养因子对该病原菌生长的影响，主要参照姚锦爱等
（2012）的方法。培养基 6 种：马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）、马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）、
燕麦琼脂培养基（OMA）、瓦克斯曼琼脂培养基（WAK）、察氏琼脂培养基（CZA）和胡萝卜蔗
糖琼脂培养基（CSA）。以碳源 15.0 g、NaNO31.0 g、KH2PO4 0.5 g、MgSO4 · 7H2O 0.5 g、琼脂 15.0g、
蒸馏水 1 000.0 mL 为基础培养基，设 5 种碳源：葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、D–果糖、α–乳糖，以不
加碳源为对照。以氮源 1.0 g、KH2PO4 0.5 g、MgSO4 · 7H2O 0.5 g、蔗糖 10.0 g、琼脂 20.0 g、蒸馏
水 1 000.0 mL 为基础培养基，设 5 种氮源：KNO3、NH4NO3、酵母膏、蛋白胨和牛肉浸膏，以不加
氮源为对照。培养 3、5、7 d 后测量菌落直径，计算菌丝生长速率。
1.3.2 非营养因子对病原菌的影响试验
从光照、pH 和温度方面探究非营养因子对病原菌生长的影响（姚锦爱 等，2012）。光照设置
完全光照（3 000 lx 荧光灯）和完全黑暗。设 pH 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、
11.0、12.0、13.0 和 14.0。温度设置 5、15、20、25、28、30、35 和 40 ℃；另外设置 44、46、48、
50、52、54、56 和 58 ℃检测病原菌菌丝及其孢子的致死温度（刘志恒 等，2013）。
1.4 数据处理与统计分析
试验处理均设置 3 个以上生物学重复。处理间的差异显著性分析采用 SPSS（Statistical Program
for Social Sciences）17.0 软件包的 Duncan’s Multiple Range Test 法，相关数据图采用 Origin 8.5 制作。

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2 结果与分析
2.1 病原菌分离和致病性测定
从春兰炭疽病病斑上分离纯化得到一株致病菌株，编号为 CCB。经人工回接到健康春兰叶片后
出现的症状与自然病发症状一致（图 1，A），发病初期病斑为淡褐色小点，逐渐发展为半圆形或不
规则形状；后期病斑中间灰褐色，并散生黑色小点，边缘褐色隆起，病斑外围有明显淡黄色圈，数
个病斑可相互扩展成为大斑块。另外，从回接致病病斑和自然病斑上分离获得的病原菌在 PDA 培养
基上的菌落形态特征一致，由此推断该分离菌就是春兰炭疽病的致病菌。
致病性测定结果表明：在刺伤情况下，6 个材料的离体叶片的发病率分布在 3 个水平，其中来
自湖南吉首的春兰为 82%，最容易被感染；其次为来自张家界的春兰和四川的春剑，发病率分别为
74%和 72%，容易被感染；而来自福建的建兰、云南的虎头兰以及湖南汝城的多花兰的发病率为 15%
左右，较难被感染。而刺伤的 6 组活体处理兰花叶片的发病率均低于相应离体组兰花叶片，表明活
体植株抵抗力更强。在未刺伤情况下，6 个离体材料中春兰、春剑受到少量病原菌的侵染，但发病
率远小于对应的刺伤处理材料，且病害程度轻微，而建兰、虎头兰、多花兰的发病率几乎为 0；另
外，未刺伤的 6 个活体处理材料均未被感染。由此可见，在刺伤的情况下，病原菌更易于在春兰和
春剑上形成病斑，在建兰、虎头兰、多花兰上也可形成病斑，但明显较少。因此，该病原菌很可能
通过伤口侵染兰科兰属多种植物。
2.2 病原菌的形态特征
病原菌在 PDA 固体培养基 25 ℃黑暗培养 7 d，正面观察菌落圆形，从初期到后期均为白色，
绒状平铺（图 1，B）；背面观察菌落呈淡黄色，后期中央黑色产孢结构逐渐增多（图 1，C）。在光
学显微镜下，病原菌菌丝有隔，发育后期菌丝顶端膨大产生附着胞，球形或近球形（图 1，D）；分













图 1 春兰叶片炭疽病症状及菌株 CCB 形态特征
A：病斑；B：菌落正面（PDA）；C：菌落背面（PDA）；D：菌丝及附着胞；E：分生孢子。
Fig. 1 Anthracnose symptoms on leaf of Cymbidium goeringii and the morphological characteristics of the strain CCB
colonies formed on PDA plates at 25 ℃ in the dark
A：Brown disease spot；B：The colony surface of the strain CCB on PDA；C：The reverse colony of the strain CCB on PDA；
D：Hyphae and appressoria；E：Conidia.
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生孢子为无色、单胞、表面光滑、长圆柱形、一端钝圆，一端基部稍平截，呈脐状，大小为（9.1 ~
18.2）µm ×（4.6 ~ 6.5）µm，长宽比约为 2.5（2.0 ~ 3.0）（图 1，E）。接种单胞病原菌于 PDA 培养
基，25 ℃黑暗培养，生长 7 d 时计算菌丝生长速率为（5.78 ± 0.54）mm · d-1。比较分析 C. boninense
Moriwaki，Sato & Tsukiboshi 模式菌株的菌落及分生孢子典型特征（Moriwaki et al.，2003），结果表
明分离得到的病原菌特征与其基本一致，由此可以推断该病原菌极有可能属于 C. boninense。
2.3 病原菌的分子鉴定
图 2 中 A 和 B 分别为 ITS 和 28S rDNA D1/D2 引物扩增结果，其大小均为 550 bp 左右，可判断
为目标产物。








图 2 CCB 菌株 PCR 产物电泳图
A：ITS；B：28S rDNA D1/D2. M：DL 2000 DNA marker；T：PCR 目标产物；+：阳性对照；–：阴性对照。
Fig. 2 PCR amplification patterns of the strain CCB
A：ITS；B：28S rDNA D1/D2. M：DL 2000 DNA marker；T：PCR product；+：Positive control；–：Negative control.

将目标菌株的 PCR 产物核苷酸序列通过 GenBank，得到序列登录号 KR814286（ITS）和
KR814287（28S rDNA D1/D2）。ITS 序列是鉴定真菌的官方条形码基因，是真菌分子进化的 DNA 通
用条形码标记（Cano et al.，2004）。基于此，从 ITS 角度探讨分离得到的菌株 CCB 与基因库中相关
菌种（株）的系统发育关系，以确认该菌株的分类地位。用菌株 CCB 的 ITS 序列（553 bp）经 NCBI
的 Blast 同源序列搜索比对后进行聚类分析，结果表明 CCB 与 C. boninense 复合种中多个模式菌株
聚在相同的组内（Ⅰ），分值达 100%，表明该菌株与它们具有极高的亲缘关系（图 3）。由此推断，
CCB 菌株为 C. boninense 复合群中的 C. boninense，或 C. karstii，或 C. cymbidiicola。
图 3 基于 ITS 序列以 Neighbor-joining 法构建的炭疽菌属系统发育树
Fig. 3 Phylogenetic tree of Colletotrichum derived from Neighbor-joining analysis based on alignment of ITS sequences

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部分真菌只通过 ITS 序列分析无法有效区分其种类，想要获得更明确的种系发育关系则必须进
行多基因的分析，即所谓的多基因进化分析。核糖体大亚基编码基因（28S 或 LSU）作为比较流行
的系统发育分析标记在某些物种分类方面具有一定的优势，为此从另一分子水平探讨 CCB 菌株与基
因库中菌种（株）的系统发育关系。从图 4 可以看出，CCB 菌株的 28S rDNA D1/D2（548 bp）与
C. boninense 以及 C. karstii 聚在一个进化分枝内，分值为 93%，这个结果支持了基于 ITS 序列分析
所得出的结论。在此基础上比较发现，CCB 菌株与 C. boninense 具有更高的亲缘关系。最后，综合
形态学特征以及 ITS 序列和 28S rDNA D1/D2 序列的系统学分析，推断 CCB 菌株应该为 C. boninense。

图 4 基于 28S rDNA D1/D2 序列以 Neighbor-joining 法构建的炭疽菌属系统发育树
Fig. 4 Phylogenetic tree of Colletotrichum derived from Neighbor-joining analysis based on alignment of 28S rDNA D1/D2 sequences
2.4 病原菌的生物学特性
2.4.1 营养因子对病原菌的影响
CCB 菌株在 6 种培养基上均能生长（表 1）。25 ℃培养 3 d 后，菌株在 PDA、PSA、OMA 和
CSA 培养基上菌丝生长最快，其次是 CZA，而在 WAK 上生长最慢。培养 5 d 后，病原菌菌落在 PDA、
PSA、CSA 培养基上生长较快，而在 OMA 和 CZA 培养基上生长速率呈下降趋势，生长最慢的还是
WAK 培养基上的菌落。由此可知，适合 CCB 菌株生长的培养基有 PDA、PSA 和 CSA。同时还发
现由于接种的病原菌为直径 5 mm 的菌丝块而不是单胞，其生长速率增快。
碳源对该病原菌生长影响结果见表 1。该病原菌在 5 种碳源处理和对照中均能生长。25 ℃培养
7 d 后，CCB 菌株在添有葡萄糖的培养基上菌丝生长速率为 8.6 mm · d-1，在添加麦芽糖和果糖的培
养基上为 8.4 mm · d-1，在添加蔗糖的培养基上为 7.7 mm · d-1；而添加乳糖的培养基上仅为 5.8 mm · d-1，
生长较慢；对照培养基上也长有少量菌丝，这也许是接种的菌丝块内培养基为病原菌提供了微量碳
素的缘故。由此可见，该病原菌生长的适合碳源有多种，利用效果最好的为葡萄糖。
该病原菌在 5 种氮源处理和对照固体培养基上培养 5 d 的结果（表 1）表明，该病原菌在添加
酵母膏的培养基上生长最快，其次是硝酸钾和蛋白胨培养基；生长较慢的是牛肉浸膏培养基；在对
照中也能生长，菌丝生长较快，但菌丝量很少，菌丝非常纤细，几乎看不清。综合分析，该病原菌
能有效利用多种氮源，可高效利用有机氮源有酵母膏和蛋白胨，无机氮源为硝酸钾。
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表 1 营养因子对病原菌 CCB 生长的影响
Table 1 Effect of nutritional factors on the strain CCB growth mm · d-1
营养因子 Nutritional factor 3 d 5 d 7 d
培养基 PDA 13.04 ± 0.22 a 14.13 ± 0.17 A n.d
Media PSA 13.33 ± 0.31 a 14.08 ± 0.23 A n.d
OMA 12.67 ± 0.48 a 12.58 ± 0.18 B n.d
WAK 7.25 ± 0.28 c 7.90 ± 0.26 D n.d
CZA 8.96 ± 0.51 b 10.80 ± 0.21 C n.d
CSA 12.96 ± 0.15 a 13.77 ± 0.06 A n.d
碳源 葡萄糖 Glucose n.d n.d 8.64 ± 0.42 a
Carbon sources 蔗糖 Sucrose n.d n.d 7.88 ± 0.79 b
麦芽糖 Maltose n.d n.d 8.31 ± 0.37 ab
果糖 Fructose n.d n.d 8.29 ± 0.20 ab
乳糖 Lactose n.d n.d 5.83 ± 0.57 c
对照 Control n.d n.d 1.33 ± 0.10 d
氮源 KNO3 n.d 10.83 ± 0.29 b n.d
Nitrogen sources NH4NO3 n.d 3.87 ± 0.48 d n.d
酵母膏 Yeast extract n.d 11.53 ± 0.49 a n.d
蛋白胨 Peptone n.d 10.30 ± 0.45 b n.d
牛肉浸膏 Beef extract n.d 7.03 ± 0.50 c n.d
对照 Control n.d 1.97 ± 0.16 e n.d
注：n.d：表示未检测；同一组营养因子对病原菌生长速率的影响其显著性差异用不同字母表示（P < 0.05，P < 0.01）。
Note：n.d：No detect；The different letters indicate the significant difference of the strain CCB growth rate in the same group of nutritional factor
（P < 0.05，P < 0.01）.
2.4.2 非营养因子对病原菌的影响
病原菌在全光照和全黑暗两种条件下培养 5 d，菌丝的生长速率没有显著差异。基于能效考虑，
可选择黑暗条件下培养。
如图 5 所示：当 PDA 培养基 pH 为 1.0 和 14.0 时病原菌完全不能生长；pH 为 2.0 和 13.0 时生
长极慢；pH 为 5.0 ~ 8.0 时生长较快。故在培养该病原菌时，宜选择自然 pH 值。
病原菌在 PDA 培养基上培养 5 d 后发现，温度为 5 ℃和 40 ℃条件下几乎停止生长，15 ~ 35 ℃
均能生长，25 ℃时菌丝生长速率最快，为最适生长温度（图 6）。另外，44 和 46 ℃处理 20 min
后 CCB 菌丝块在 PDA 培养基长有菌丝，而 48 ℃处理 20 min，在 PDA 培养基上没有长出菌丝；由
此确定该病原菌菌丝致死温度为 48 ℃，20 min；44、46 和 48 ℃处理 20 min 的 CCB 病原菌孢子液
在 PDA 培养基上长有菌丝，而 50 ℃以上处理 20 min 未见菌丝长出，由此确定该病原菌孢子致死
温度为 50 ℃，20 min。

图 6 温度对病原菌 CCB 生长的影响
Fig. 6 Effect of temperature on the growth of the strain CCB
图 5 pH 对病原菌 CCB 生长的影响
Fig. 5 Effect of pH on the growth of the strain CCB

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3 讨论
炭疽病菌（Colletotrichum）的准确鉴定对于炭疽病的防控尤为重要。在一致的纯培养条件（培
养基、温度、湿度）下，炭疽菌的特征存在较大种间差异，而种内相对稳定（吴文平和张志铭，1995）。
随着分子生物学手段的广泛运用，基于分子标记的系统学方法被引入该属真菌分类并得以广泛应用
（Schoch et al.，2012；Silva et al. 2012）。为提高鉴定的准确性，目前多采用纯培养条件形态学特征
与分子学特征相结合的方法，如 C. boninense 最初被鉴定为 C. gloeosporioides 复合种群中的一种，
Moriwaki 等（2003）发现 C. boninense 在 PDA 上的纯培养形态特征与 C. gloeosporioides 在菌落颜色、
分生孢子长宽比、菌丝生长速率存在较大差异，且 ITS 序列系统发育分析结果表明它们并不在同一
进化分支上，从而把它从 C. gloeosporioides 复合种群中分离出来，独立为新的分类单元。本研究中
通过对湖南野生春兰叶炭疽病病原菌的分离纯化得到了致病菌株，将其在 PDA 培养基上培养，通过
观察菌落性状、测定菌丝生长速度、分生孢子特征比较，再结合 ITS 和 28S 核糖体大亚基编码基因
进行系统学分析，发现该炭疽病致病菌株应为 C. boninense。
本研究中探讨了营养因子（培养基、碳源、氮源）和非营养因子（光照、pH、温度）对致病菌
株菌丝生长的影响，后期需要进一步探讨各培养条件因子对病原菌产孢量和孢子萌发的影响，为采
取有效措施控制病害发生和蔓延提供理论依据。

References
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