全 文 ：园 艺 学 报 2014，41（6）：1167–1174 http: // www. ahs. ac. cn
Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com
收稿日期：2013–12–09；修回日期：2014–04–21
基金项目：国家自然科学基金项目（30871733）；北京市教委 2013 年民办教育发展促进项目（民办 892-34）
* 通信作者 Author for correspondence（E-mail：zhaolj5073@sina.com）
狗蔷薇类根体和类原球茎发生发育的组织学研究
张建甫 1,2，田传卫 1，毕 玲 1，赵梁军 1,*
（1 中国农业大学观赏园艺与园林系，北京 100193；2 北京城市学院城市建设学部，北京 100083）
摘 要：以狗蔷薇叶片为对象观察其类根体和类原球茎发生发育的过程。发现叶片外植体叶柄维管
束的原形成层细胞在 2,4-D 的诱导下分裂并扩大形成狭长的微管组织细胞，进一步衍生形成根源基细胞，
根源基细胞分裂形成根尖分生组织，并最终形成类根体。类根体具有根冠、生长点、伸长区和根毛区，
类根体只有初生结构，不具备次生结构。携带有愈伤组织的类根体在含 TDZ 的 1/2MS 培养基和光照协调
作用下，根尖分生组织消失并分化成成熟的薄壁细胞，中柱鞘上部的细胞形成胚性愈伤组织，其分化为
胚性细胞并形成新的分生中心，突破皮层和表皮，进而形成类原球茎。
关键词：狗蔷薇；叶片外植体；类根体；类原球茎；发生与发育；组织学研究；超微结构
中图分类号：S 685.12 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2014）06-1167-08

Studies on the Histology and Ultrastructure of the Initiation of Rhizoids
and Protocorm-like Bodies（PLBs）Induced from the Leaf Explants of Rosa
canina
ZHANG Jian-fu1,2，TIAN Chuan-wei1，BI Ling1，and ZHAO Liang-jun1,*
（1Department of Ornamental Horticulture and Landscape Architecture，China Agricultural University，Beijing 100193，
China；2Department of Urban Construction，Beijing City University，Beijing 100083，China）
Abstract：Leaf explants of Rosa canina were used to investigate the origins of the rhizoids and
protocorm-like bodies formation. Histological studies revealed that remained procambium cells in the
vascular bundles were induced by 2,4-D，then divided and enlarged to form long but narrow vascular tissue
cells that functioned as pluripotent stem cells with a tendency to form root primordia which further
developed to form root meristems. The rhizoids have the same anatomical structure with the roots growing
in vitro，including root cap，root meristematic zone，elongation zone and maturation zone，and the rhizoids
only has the primary structure not secondary structure. Incubating the rhizoids carrying calli under
light/dark conditions on 1/2MS medium containing TDZ，the tips of rhizoids could develop into
protocorm-like bodies（PLBs）. Histological and ultrastructure observation revealed that the cells in the tip
of rhizoids firstly differentiated into large parenchyma cells，these cells adjacent to the epidermis
dedifferentiated to form a great many proembryo calli under the conditions of light and TDZ. And then the
embryogenic cells divided and enlarged to form PLBs.
Key words：Rosa canina；leaf explant；rhizoid；protocorm-like bodies；initiation and development；
histology；ultrastructure

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目前对蔷薇属（Rosa spp.）研究主要集中在种质资源特点、染色体倍性、植株再生、新品种选
育以及遗传转化体系建立等方面，植株再生是是其重点。植株再生可以通过器官再生（Ibrahim &
Debergh，2001；Pati et al.，2004；任桂芳 等，2004；高丽萍和包满珠，2005a，2005b）、体细胞胚
再生（Dohm et al.，2001；Sarasan et al.，2001；Li et al.，2002；Kim et al.，2003b，2004；Kamo et al.，
2005；Kaur et al.，2006；Estabrooks et al.，2007）和原生质体再生（Schum et al.，2001；Kim et al.，
2003a）3 种途径获得。Tian 等（2008）在对狗蔷薇、粉团蔷薇等多种蔷薇属植物体细胞胚的再生过
程中发现了一种新的再生途径——叶片外植体、类根体和类原球茎的途径。将叶片外植体近轴面向
下接种含 2,4-D 的 MS 培养基上进行暗培养，几天后叶柄基部产生大量的白色愈伤组织，4 周以后就
会从愈伤组织内部长出大量的类根体；把携带有愈伤组织的类根体转接到含 TDZ 的 1/2MS 培养基
上进行光/暗培养，类根体的上端变绿膨大，4 周以后最终形成类原球茎；类原球茎单独在含有适宜
浓度植物生长调节剂的 MS 培养基上可以再生成正常的植株。目前对这个途径发生的机理还不清楚。
本研究中以类根体和类原球茎发生过程中的各个阶段的组织为材料，通过半薄切片观察该过程的组
织学特点和细胞特点，为揭示类根体和类原球茎发生机理奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
试验于 2009 年 10 月—2010 年 12 月完成。狗蔷薇（Rosa canina）组培苗来自于中国农业大学
园林植物与观赏园艺系园林植物生理生态实验室。叶片外植体取自组培苗上部生长健壮的 3 小叶。
将叶片近轴面朝下接种于含 1.5 mg · L-1 2,4-D 的 MS 培养基上，暗培养诱导愈伤组织和类根体，观
察类根体形成与发育。4 周后将携带类根体的愈伤组织分别转入①含有 20 mg · L-1 TDZ 的 1/2MS（大
量盐减半）基本培养基上 16 h/8 h（光/暗）光周期培养；②不含 TDZ 的 1/2MS（大量盐减半）基本
培养基上 16 h/8 h（光/暗）光周期培养；③含有 20 mg · L-1 TDZ 的 1/2MS（大量盐减半）基本培养
基上暗培养诱导类原球茎。光照强度 25 µmol · m-2 · s-1，诱导温度（23 ± 2）℃，观察类原球茎形成
和发育。
1.2 半薄和超薄切片的制作和观察
取植物组织，用解剖刀切成固定大小放入固定液[0. l mg · L-1 磷酸缓冲液（pH 7.2）配制的 2.5%
的戊二醛]中，4 ℃固定 24 ~ 48 h，然后用 0. l mg · L-1 磷酸缓冲液换洗 2 h，0. l mg · L-1 磷酸缓冲液
配制 1%的锇酸固定 2 h，0. l mg · L-1 磷酸缓冲液再换洗 2 h。30%、50%、70%、80%、90%和 100%
丙酮梯度脱水。环氧树脂 SPURR 包埋，60 ℃烘箱中聚合 6 h 以上。包埋块用自动切片机切成 2 ~ 3
µm 厚的半薄切片，在载玻片上粘片，干燥。再切成 80 nm 厚的超薄切片。
在光学显微镜下和在透射电子显微镜下观察照相。
1.3 类原球茎双染色观察
用双染色技术对类原球茎进行染色观察（Jain et al.，2005）：将类原球茎放到载玻片上，加入
2%醋酸洋红淹没植物材料，用小火在载玻片下加热几秒钟，不要让溶液沸腾，用清水清洗愈伤组织
2 ~ 3 遍，然后吸干水分，在醋酸洋红染过的组织上滴入 2 ~ 3 滴 0.5%伊文思蓝，染色 30 s，再用清
水清洗 2 ~ 3 遍，用吸水纸去除水分，最后在染色过的组织上滴入 1 ~ 2 滴甘油防止组织干燥，观察
组织的颜色并拍照。
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2 结果与分析
2.1 狗蔷薇类根体的形成及其结构观察
2.1.1 根原基
经 2,4-D 诱导，狗蔷薇叶片外植体培养 6 d 后，叶柄基部或有叶脉切断的部位形成一团白色的
愈伤组织。从图 1，a 中可以看出，白色的愈伤组织主要有 4 类细胞组成：表层扁平的表皮组织细胞、
内部为大型薄壁组织细胞，狭长的微管组织细胞和微管组织细胞衍生的根原基细胞。微管组织细胞
的特点是细胞排列紧密、狭长，是由叶脉的原形成层细胞分化而来的，具有全能干细胞特征（图 1，
b）；根原基细胞是由微管组织细胞衍生而来的，具有典型的分生组织细胞特性：细胞个体小，排列
紧密，细胞质较浓，细胞核较大，细胞截面为正方形。 从图 1，a 和 c 中还可以看出在一块愈伤组
织中会产生好几个微管组织束。











图 1 狗蔷薇叶片外植体诱导 6 d 的愈伤组织结构和细胞类型
a. 愈伤组织纵切图；b. a 图的局部放大图；c. 愈伤组织的横切图。EC：表皮细胞；PC：薄壁细胞；
V：微管组织细胞；P：根原基细胞。
Fig. 1 The structure and cell types of callus of leaf explants of R. canina L. induced for 6 days
a. Longitudinal section from the callus of leaf explants induced；b. The section enlarged from a；c. Transverse section from the callus of
leaf explants induced. EC：Epidermal cells；PC：Parenchyma cells；V：Vascular tissue cell；P：Root primordium.

2.1.2 根分生组织
随着培养时间延长，愈伤组织愈来愈大，从培养 12 d 的愈伤组织的纵切图片（图 2）中可以看









图 2 狗蔷薇愈伤组织内出现根尖分生组织
a. 培养 12 d 的愈伤组织纵切面；b. a 的局部放大图；c. 根尖分生组织继续发育。
EC：表皮细胞；PC：薄壁细胞；V：微管组织细胞；LV：叶柄维管束；RM：根尖分生组织。
Fig. 2 Root meristem in the callus of leaf explants of R. canina
a. Longitudinal section from the callus 12 days induced；b. The section enlarged from a；c. The further development of the root meristem.
EC：Epidermal cells；PC：Parenchyma cells；V：Vascular tissue cell；LV：Leaf vascular；RM：Root meristem.
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出，愈伤组织内部微管组织所衍生的根原基细胞不断进行细胞分裂，形成了根尖分生组织（一个微
管组织细胞束中会产生几个根尖分生组织），根尖分生组织不断分裂形成根冠、伸长区和成熟区，形
成幼根。伸长区细胞依靠自身细胞的伸长生长将根尖推出愈伤组织，逐渐发展形成成熟的类根体。
2.1.3 类根体
叶片外植体在含有 2,4-D 的培养上培养 2 周左右，在愈伤组织表面看到幼根，这是伸长区细胞
将根尖推出愈伤组织的结果，大约 4 周以后，类根体发育成熟。从培养 28 d 类根体的纵切图（图 3，
a、b）中可以看到类根体根尖部分明显具有根冠、分生区、伸长区和根毛区 4 个区域。其中根冠部
分细胞个头较大，排列不整齐，颜色较深。分生区细胞排列紧密，呈正方形，细胞核较大位于细胞
中央；伸长区细胞明显伸长；成熟区表皮细胞向外突起形成根毛，具备根的初生结构的典型特征，
所有这些都是根尖的典型特征，因此可以断定狗蔷薇叶片外植体在 2,4-D 存在的条件下暗培养形成
的类根体实质上就是根。但该根系缺乏重力反应，可能是由于空气湿度比较大也可能是根冠细胞中
缺乏重力反应的淀粉粒，还需进一步证实。
通过对类根体的前端、中部和末端进行横切（图 3，c ~ e）可以看出，狗蔷薇类根体只有初生
结构，没有次生结构；初生结构的横切面有表皮、皮层、内皮层和中柱 4 个明显的部分，其中表皮
细胞排列紧密，为长方形，对类根体起到保护作用，类根体后部横切面的表皮细胞向外突起形成根
毛；皮层细胞个体较大，排列疏松，细胞间隙较大，其中前部横截面细胞较为密集，细胞分化程度
较浅，中部和后部横截面皮层细胞逐渐间隙加大，排列更加没有规律，分化程度较深；内皮层细胞
排列紧密，具有明显的凯氏带，能被番红染成红色；中柱为四原型辐射维管束，木质部呈星芒状，
韧皮部在木质部的辐射角之间。凯氏带和中柱结构是根的初生结构的典型特征，所以类根体的解剖
构造与根相同。
2.2 类根体发育成类原球茎的过程以及胚性细胞的出现
2.2.1 光照和 TDZ 在类根体发育成类原球茎过程中协同作用
将类根体转入不含 TDZ 的培养基上进行正常的光暗培养 7 d，结果（图 4，a）表明根尖分生组
织依然可以看到，但是根尖的结构明显被破坏，说明光照的作用是破坏了类根体根尖典型的结构。
将类根体转入含 TDZ 的培养基上进行正常的暗培养 7 d，结果（图 4，b）表明在 TDZ 存在的条件
下暗培养 1 周根尖的结构依然很健康，TDZ 在这个过程中没有起到任何作用，由此可以肯定 TDZ
的功能需要光照来启动或是诱导。类根体转入含 TDZ 的培养基上进行正常的光暗培养 3 d，结果（图
4，c）表明根尖的分生组织已经完全看不到，分生组织细胞分化成了成熟细胞——薄壁细胞。类根
体转入含 TDZ 的培养基上进行正常的光暗培养 7 d，从纵切的图片（图 4，d）中可以看到类根体的
先端开始变大，内部的薄壁细胞分化得越来越成熟，细胞也变得更大；从横切图（图 4，e）中可以
看到在中柱鞘顶部有些细胞已经开始进行脱分化，恢复持续进行细胞分裂能力，形成胚性愈伤组织；
持续往下进行切片，可以看到越往下部的中柱鞘结构完整，没有脱分化的痕迹（图 4，f）。这说明
脱分化只发生在中柱鞘的顶端，TDZ 只是作用于中柱鞘顶端的细胞，并导致脱分化，并且这个过程
受光照调控。光照有可能影响了组织对 TDZ 的吸收和运输，需要进一步通过试验进行证实。
从图 5 可以看出，变绿阶段的类根体（图 5，d ~ f）与诱导前的类根体（图 5，a ~ c）相比较，
液泡的体积明显变大，并且大小不一；细胞质电子密度变大，细胞器更加丰富，并出现叶绿体、粗
质内质网、核糖体、多聚核糖体、高尔基体、淀粉粒和脂粒，这些说明变绿阶段的类根体的新陈代
谢更加活跃。类根体变绿是因为有大量叶绿体形成。
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图 3 狗蔷薇类根体的纵切结构（a、b）和横切结构（c 尖端、d 中部、e 后部）
RC：根冠；RM：分生区；ELZ：伸长区；MAZ：成熟区。E：表皮；CX：皮层；
EN：内皮层；PE：中柱鞘；VC：维管束；XY：木质部；PH：韧皮部。
Fig. 3 Longitudinal structure（a，b）and transverse sections（c. The tip；d. The middle；e. The rear）
RC：Root cap；RM：Root meristematic zone；ELZ：Elongation zone；MAZ：Maturation zone. E：Epidermis；CX：Cortex；
EN：Endodermis；PE：Pericycle；VC：Vascular cylinder；XY：Xylem；PH：Phloem.
图 4 培养 7 d 的类根体先端的形态学特征
a. 无 TDZ，有光照；b. 有 TDZ，无光照；c ~ f. 有 TDZ，有光照（c：3 d，d：7 d，e：7 d 顶部，f：7 d 非顶部）。
EC：表皮细胞；PC：皮层细胞；MC：分生细胞；VC：维管束。
Fig. 4 Histology characteristics of the rhizoid apex induced 7 days
a. Light without TDZ；b. TDZ without light；c–f. Both TDZ and light（c：3 days；d：7 days；e：The tip part of the rhizoid induced 7 days；
f：The center part of the rhizoid induced 7 days）. EC：Epidermis cell；PC：Parenchyma cells；
MC：Meristematic cell；VC：Vascular cylinder.
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图 5 顶端变绿阶段的类根体（d ~ f）与诱导前的类根体（a ~ c）的细胞学特征比较
Nl：核仁；N：细胞核；V：小液泡；M：线粒体；Ch：叶绿体；DOD：黑色嗜锇油滴；G：高尔基体；St：淀粉粒；
Pm：胞间连丝；Pp：前质体；Er：粗质内质网。
Fig. 5 Ultrastructure comparison of the cells of the young rhizoid（a–c）and rhizoid apex（d–f）turned green of R. canina
Nl：Nucleolus；N：Cell nucleus；V：Little vacuole；M：Mitochondria；Ch：Chloroplast；DOD：Dark osmiophilic drop；G：Golgi apparatus；
G：Golgi apparatus；St：Starch grain；Pm：Plasmodesma；Pp：Proplastid；Er：Endoplasmic reticulum.

2.2.2 胚性愈伤组织形成和类原球茎中胚性结构的出现
在类根体内部，中柱鞘细胞在 TDZ 的启动下，脱分化恢复持续分裂能力，这些细胞快速分裂
形成原胚组织，逐渐分化形成许多分生细胞群（图 6，a、b）。有些分生细胞群分化形成胚性细胞，

图 6 类根体分化出胚性愈伤组织和类原球茎
a、b. 类根体内的原胚细胞；c. 裸露的胚性分生中心；d、e. 发育中类原球茎形成；f. 醋酸洋红和伊文思蓝双染色的类原球茎。
PC：原胚细胞；MC：分生中心；PLB：类原球茎；EC：胚性细胞群；NEC：非胚性细胞群。
Fig. 6 The rhizoid differentiating proembryo callus and PLB
a，b. Proembryo callus inside the rhizoid；c. Showing meristem centres bare；d，e. The developing protocorm-like body；
f. Protocorm-like body after double stained with acetocarmine and Evans blue. PC：Proembryo cells；MC：Meristem centres；
PLB：Protocorm-like body；EC：Embryogenic cells；NEC：Non-embryogenic cells.
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胚性细胞继续分裂形成新的分生中心，并越来越大，逐渐破坏外层的皮层和表皮细胞，导致皮层细
胞和表皮细胞的脱落，分生中心直接暴露于外表（图 6，c），分生中心继续分裂形成类原球茎（图 6，
d、e），用双染色技术对类原球茎进行双染色，发现类原球茎为亮红色，说明类原球茎为胚性组织聚
合成体（图 6，f）。胚性组织具有大的细胞核和浓的细胞质，细胞核可以被醋酸洋红染成亮红色，
在非胚性细胞中细胞核小，被醋酸洋红染红的材料很难占据整个细胞而被伊文思蓝染成蓝色，类原
球茎全部是由胚性细胞组成，经过双染色技术可以被染为红色，而其他非胚性组织为蓝色。
3 讨论
Jacobs（1952）的开创性研究表明，幼叶中产生的生长素是伤口周围再生维管束的限制和控制
因素，植物施用外源生长素可引发施用部位的反应细胞进行连续分化反应，进而使得分化之后的相
邻细胞直线排列，并形成紧密相接的互连细胞群。生长素所诱导的维管分化只发生在一个狭长的细
胞排列区域（Sachs，1981），这个狭长的细胞列起到“渠化”生长素的作用，通过这些细胞中连续
极性运输，这些生长素梯度给沿形态建成区分化中的细胞提供了方向和位置信息。本研究中叶片外
植体在含有 2,4-D 的 MS 培养基暗培养后形成的愈伤组织中形成的多个狭长而连续的细胞列，这正
是生长素诱导的微管分化，这个现象与前人的研究相吻合。2,4-D 通过这些细胞的极性运输，其浓
度梯度诱导了微管愈伤组织中根原基的分化，确定了形态建成的方向，这个结果与 Rose 等（2006）
在苜蓿叶片外植体上诱导到类根体相吻合。从愈伤组织纵切图中可以看到微管愈伤组织中存在大量
方形的、细胞质浓厚细胞核明显的分生细胞，这些分生组织慢慢分化成根尖分生组织，进而发育成
类根体。解剖学观察类根体具有根尖 4 个特有的分区，横切面具有初生根的结构，所以可以证明类
根体从解剖学和形态学上就是根，唯一不同的是类根体缺乏向地性，其机理需要进一步研究。
携带愈伤组织的成熟的类根体被转接到含 TDZ 的 1/2MS 培养基上，1 周就可以看到顶端变绿膨
大，4 周以后形成类原球茎。从解剖结构可以看到根尖的分生组织消失分化成大型的薄壁细胞。与
此同时中柱鞘细胞在 TDZ 的诱导下脱分化，形成胚性愈伤组织，加之胚性愈伤组织和原根尖分生组
织的分化，导致了类根体顶端的膨大。在类根体阶段，根内细胞中存在前质体，光照作用导致了叶
绿素和叶绿体的分化，类根体顶端变绿。在此阶段细胞出现了淀粉粒和油滴，尤其是很多叶绿体被
淀粉粒填充。有研究表明淀粉粒是非胚性细胞向胚性细胞转化的指示物质（Schwendiman et al.，
1988）。淀粉粒的聚集和蛋白质合成的激活暗示了细胞对碳水化合物的额外需要（Dussert et al.，
1995），Rennie（1980）认为典型的叶绿体结构消失并伴随有淀粉积累，叶绿体转化为造粉体是向胚
性细胞发育的一个重要标志。因此可以看出本研究中的类根体的此阶段是胚性细胞发生的启动阶段。
在类根体尖端分化成原胚愈伤组织阶段的细胞内出现高尔基体，并且细胞壁加厚，这种现象在
玉米的体细胞胚发生中也有出现（Faniz & Schel，1991）。细胞壁多糖成分——纤维素、果胶是高尔
基体合成的分泌产物，因此高尔基体的出现与胚性细胞的细胞壁加厚有关。胚性细胞壁加厚使胚性
细胞处在一个生理隔离环境中，它使胚性细胞进一步分裂、发育形成类球茎束，类球茎束萌发形成
正常的植株。

References
Dohm A，Ludwig C，Nehring K，Debener T. 2001. Somatic embryogenesis in roses. Acta Hortic，547：341–348.
Dussert S，Verdeil J L，Buffard-Morel J. 1995. Specific nutrient uptake during initiation of somatic embryogenesis in coconut calluses. Plant Science，
111：229–236.
Estabrooks T，Browne R，Dong Z M . 2007. 2,4,5-trichlorophenoxyacetic acid promotes somatic embryogenesis in the rose cultivar‘Livin Easy’
1174 园 艺 学 报 41 卷
（Rosa sp.）. Plant Cell Rep，26：153–160.
Faniz P F，Schel J H N. 1991. An ultrastructural study on the early development of Zea mays somatic embryos. Can J Bot，69：858–865.
Gao Li-ping，Bao Man-zhu. 2005a. Direct adventitious bud induction and plant regeneration of Rosa hybrida cv. Samantha. Scientia Agricultura
Sinica，38 (4)：784–788. (in Chinese)
高莉萍，包满珠. 2005a. 月季‘萨蔓莎’不定芽的直接诱导和植株再生的研究. 中国农业科学，38 (4)：784–788.
Gao Li-ping，Bao Man-zhu. 2005b. Callus induction and plant regeneration of Rosa hybrida‘Samantha’. Acta Horticulturae Sinica，32 (3)：
534–536. (in Chinese)
高莉萍，包满珠. 2005b. 月季‘萨蔓莎’愈伤组织的诱导及植株再生. 园艺学报，32 (3)：534–536.
Ibrahim R，Debergh P C. 2001. Factors controlling high efficiency adventitious bud formation and plant regeneration from in vitro leaf explants of
roses（Rosa hybrida L.）. Sci Hortic，88：41–57.
Jacobs W P. 1952. The role of auxin in differentiation of xylem around a wound. Am J Bot，39：301–309.
Jain S M，Pramod K Gupta. 2005. Protocol for somatic embrygenesis in woody plants. Netherlands：Springer：573–575.
Kamo K，Jones B，Bolar J，Smith F. 2005. Regeneration from long-term embryogenic callus of the Rosa hybrida cultivar Kardinal. In Vitro Cellular
and Development Biology Plant，41：32–36.
Kaur N，Pati P K，Sharma M，Ahuja P S. 2006. Somatic embryogenesis from immature zygotic embryos of Rosa bourboniana Desp. In Vitro Cellular
and Development Biology-Plant，42：124–127.
Kim C K，Oh J Y，Chung J D，Burrell A M，Byrne D H. 2004. Somatic embryogenesis and plant regeneration from in-vitro-grown leaf explants of
rose. HortScience，39 (6)：1378–1380.
Kim S W，Oh S C，In D S，Liu J R. 2003a. Plant regeneration of rose（Rosa hybrida）from embryogenic cell-derived protoplasts. Plant Cell Tissue
Org Cult，73 (1)：15–19.
Kim S W，Oh S C，Liu J R. 2003b. Control of direct and indirect somatic embryogenesis by exogenous growth regulators in immature zygotic
embryo cultures of rose. Plant Cell Tissue Org Cult，74 (1)：61–66.
Li X Q，Krasnyanski S F，Korban S S. 2002. Somatic embryogenesis，secondary somatic embryogenesis，and shoot organogenesis in Rosa. J Plant
Physiol，159：313–319.
Pati P K，Sharma M，Sood A，Ahuja P S. 2004. Direct shoot regeneration from leaf explants of Rosa damascene Mill. In Vitro Cell Dev Biol，40 (2)：
192–195.
Ren Gui-fang，Wang Jian-hong，Feng Hui，Li Yi，Li Yan，Shi Xue-bo. 2004. Establishment of plant regeneration from leaves explants of Rosa hybrida.
Acta Horticulturae Sinica，31 (4)：533–536. (in Chinese)
任桂芳，王建红，冯 慧，李 毅，李 燕，施雪波. 2004. 现代月季（Rosa hybrida）叶片植株再生体系的建立. 园艺学报，31 (4)：
533–536.
Rennie P J. 1980. Dedilferentiation of chloroplasts in interspacific and homespecific protoplasts fussion products. Prolopiasma，103：253–262.
Rose R J，Wang X D，Nolan K E，Rolfe B G. 2006. Root meristems in Medicago truncatula tissue culture arise from vascular-derived procambial-like
cells in a process regulated by ethylene. Journal of Experimental Botany，57 (10)：2227–2235.
Sachs T. 1981. The control of the patterned differentiation of vascular tissues. Adv Bot Res，9：152–262.
Sarasan V，Roberts A V，Rout G R. 2001. Methyl laurate and 6-benzyladenine promote the germination of somatic embryos of a hybrid rose. Plant
Cell Rep，20：183–186.
Schum A，Hofmann K，Ghalib N，Tawfik A. 2001. Factors affecting protoplast isolation and plant regeneration in Rosa spp. Gartenbauwiss，66：
115–122.
Schwendiman J，Pannetier C，Michaux-Ferriere N. 1988. Histology of somaic embryogenesis from leaf explants of the oil palm Elaeis guineensis.
Ann Bot，62：43–52.
Tian C W，Chen Y，Zhao X L，Zhao L J. 2008. Plant regeneration through protocorm-like bodies induced from rhizoids using leaf explants of Rosa
spp. Plant Cell Rep，27：82.