全 文 ：园 艺 学 报 2013，40（10）：1990–1998 http: // www. ahs. ac. cn
Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com
收稿日期：2013–06–21；修回日期：2013–09–16
基金项目：教育部高等学校博士点基金项目（20090182120003）；中央高校基本科研业务费专项（XDJK2009C126）；重庆市自然科学基
金重点项目（2011BA1002）
* 通信作者 Author for correspondence（E-mail：niuy2001134@163.com；swausongm@163.com）
结球甘蓝花粉蛋白延伸因子基因的克隆及其序
列分析
王志敏，牛 义*，许俊强，孙梓健，丁泽琴，杨修勤，汤青林，宋 明*
（西南大学园艺园林学院，南方山地园艺学教育部重点实验室，重庆市蔬菜学重点实验室，重庆 400715）
摘 要：以结球甘蓝（Brassica oleracea L. var. capitata L.）E1 花粉为试材，对萌发前后的花粉总蛋
白进行双向电泳及差异蛋白质谱分析，发现延伸因子 BoEF-Tu 蛋白在花粉萌发后较萌发前表达上调。利
用同源克隆得到甘蓝 BoEF-Tu 基因的全长 cDNA 序列，其长度为 1 728 bp，具有一个完整开放阅读框
（ORF），位于 112 ~ 1 473 bp 处，编码 453 个氨基酸残基，预测分子量为 49.17 kD，等电点为 6.52。生物
信息学分析表明：BoEF-Tu 蛋白含有 9 个 α–螺旋结构，18 个 β–折叠结构，不含信号肽和跨膜区，在
106 ~ 121 位氨基酸残基处有 1 个 GTP 结合区域（DKAPEEKKRGITIATA）。氨基酸同源性分析表明，
BoEF-Tu 与拟南芥 EF-TuM 同源性较高，达到 93%；系统进化分析表明，BoEF-Tu 与拟南芥 EF-Tu 的亲
缘关系最近。
关键词：结球甘蓝；花粉；延伸因子
中图分类号：S 635.1 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2013）10-1990-09

Cloning and Sequence Analysis of Elongation Factor EF-Tu Gene from
Cabbage
WANG Zhi-min，NIU Yi*，XU Jun-qiang，SUN Zi-jian，DING Ze-qin，YANG Xiu-qin，TANG Qing-lin，
and SONG Ming*
（College of Horticulture and Landscape Architecture, Southwest University；Key Laboratory of Horticulture Science for
Southern Mountainous Regions，Ministry of Education；Chongqing Key Laboratory of Olericulture，Chongqing 400715，
China）
Abstract：The elongation factor BoEF-Tu was isolated and characterized from cabbage（Brassica
oleracea L. var. capitata L.）line E1 using RT-PCR and RACE-PCR after two-dimensional electrophoresis
of cabbage pollen total proteins，which found that BoEF-Tu protein was upregulated when pollens were
germinated. The cabbage BoEF-Tu cDNA clone contained 1 728 bp with an open reading frame（ORF）
located from 112 to 1 473 bp，encoding a protein of 453 amino acids. The predicted molecular mass of
BoEF-Tu was 49.17 kD with acidic pI of 6.52. Bioinformatic analysis results showed that BoEF-Tu protein
might contain 9 α-helixes and 18 β-folds，and a GTP-binding signature（DKAPEEKKRGITIATA）was
located from 106 to 121 amino acid residues，but had no signal peptide sequences and transmembrane

10 期 王志敏等：结球甘蓝花粉蛋白延伸因子基因的克隆及其序列分析 1991

region. Homology analysis of the deduced amino acids indicated that the sequences had 93% similarity
with Arabidopsis thaliana EF-TuM. The phylogenetic tree showed that the BoEF-Tu had the closest
genetic relationship with Arabidopsis thaliana EF-Tu.
Key words：cabbage；pollen；elongation factor

花粉萌发和花粉管生长包含许多复杂的过程。花粉管中的微丝束与花粉管长轴平行排列，微丝
骨架组织的变化、肌动蛋白结合蛋白活性的调节都会影响花粉萌发及花粉管顶端生长（孙颖 等，
2001）。经研究发现延伸因子中的 eEF1α（eukaryotic elongation factor 1 alpha）可通过结合微管（Durao
& Cyr，1994；Durso et al.，1996）和切割微管（Shiina et al.，1994）调节细胞骨架结构，细胞骨架
的重排影响上游信号因子的活性，从而参与信号的传导。
延伸因子（elongation factor）是参与蛋白翻译延伸的重要蛋白质，它们通过在核糖体上催化氨
基酸链的延伸而推动、控制蛋白质的合成。原核生物的延伸因子为 EF-T（包括 EF-Tu 和 EF-Ts）和
EF-G；真核生物的延伸因子为 eEF-l[包括 eEF1A（α）、eEF1Bα、eEF1Bβ 和 eEF1Bγ 4 个亚基]和
eEF-2（覃迎姿 等，2009）。研究发现真核生物细胞器延伸因子与细菌延伸因子 EF-Tu 的同源性高
于胞质延伸因子 eEF1A（Gray，1992），因此在真核生物细胞器中与 eEF1A 相对应的仍被称为
EF-Tu。自 20 世纪 60 年代从大肠杆菌（E. coli）细胞中首先分离获得延伸因子以来，在过去 50 多
年对延伸因子的研究中，发现 EF-Tu 是细胞内与翻译机制有关的蛋白质中含量最高的蛋白，在原核
生物以及植物线粒体和质体等细胞的蛋白质合成延伸阶段发挥着重要的作用，除此之外在生长信号
传导、抗热、抗旱、抗病等方面也表现出非常重要的作用（Fu et al.，2012）。
自交不亲和（self-incompatibility，SI）过程中花粉萌发和花粉管生长发育过程涉及到多种信号
分子（孙梓健 等，2012a）。虞美人 SI 反应信号可诱导花粉管肌动蛋白骨架重排，V 型肌动蛋白网
结构丧失，花粉管后段的肌动蛋白束逐渐解散形成斑点，花粉管停止生长，与单纯花粉管生长抑制
时微丝骨架的变化方式不同（Geitmann et al.，2000），可见影响微丝骨架重排可能与 SI 信号引起
的胞质游离钙浓度的特异性变化有关。对 eEF1α 的研究发现除了参与翻译控制有关的信号传导外，
在体内和体外 eEF1α 均能同肌动蛋白纤维及微管蛋白结合，抑制肌动蛋白的聚合速度，稳定肌动
蛋白纤维，参与细胞生长、应激反应及运动性有关的信号传导。目前关于延伸因子是否参与自交不
亲和花粉萌发及花粉管生长的信号调节，还不清楚。因此探索翻译延伸因子在其花粉萌发和花粉管
生长信号传导中的作用具有重要意义。在研究结球甘蓝花粉萌发前后蛋白表达谱中发现了很多差异
蛋白，并对相关蛋白进行了研究，如钙调素相关蛋白（孙梓健 等，2012a）、膜联蛋白（孙梓健 等，
2012b）等。本试验中在以往研究基础之上，发现翻译延伸因子 BoEF-Tu 蛋白表达上调，通过同源
扩增克隆得到 BoEF-Tu 基因及其全长序列，并对其序列结构进行分析，为进一步研究翻译延伸因子
EF-Tu 的功能及其调控方式奠定分子基础，也为丰富自交不亲和信号传导网络研究提供可行的参考。
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验于 2011 年 4 月至 2012 年 5 月在西南大学重庆市蔬菜学重点实验室完成。以结球甘蓝高度
自交不亲和系 E1 的成熟花粉为材料（由西南大学十字花科蔬菜研究所提供）。
蛋白抽提试剂盒和 IPG 胶条购自 Bio-Rad，胶回收试剂盒、质粒抽提试剂盒购自 OMEGA 公司，
DNA 连接酶购自东洋纺，限制性内切酶购自大连宝生物工程有限公司，DNA Marker、pEASY-Blunt
1992 园 艺 学 报 40 卷
simple vector 载体试剂盒、反转录试剂盒及 Taq DNA 聚合酶均购自 Transgen 公司，Trizol 购自
Invitrogen，引物合成及测序由北京六合华大基因公司完成，其他常规试剂均为国产分析纯。
1.2 花粉萌发及蛋白双向电泳分析
在相对湿度 100%条件下，将收集的自交不亲和系花粉静置培养 2 h 后置于花粉液体萌发培养基
中（Roberts et al.，1983），25 ℃培养 1 h。将成熟未萌发以及萌发 1 h 后的花粉分别进行离心收集，
采用 Protein Extraction Kit（Bio-Rad，163-2086）抽提总蛋白，2-D Cleanup Kit（Bio-Rad，163-2130）
纯化总蛋白，除去酚类等杂质，最后使用 Bradford 法定量（Fermentas，#R1271），置于–80 ℃保存。
经过纯化的花粉总蛋白第一向等电聚焦使用 Bio-rad 17 cm IPG 4 ~ 7 非线性胶条，在 PROTEAN
II（Bio-Rad）上进行，蛋白上样量为 60 μg · gel-1，等电聚焦条件为：250 V 1 h；3 000 V 2 h；8 000
V 2 h；10 000 V 恒压至 100 000 Vh。第二向 SDS-PAGE 电泳条件：10 mA · gel-1，25 min；15 mA · gel-1
至电泳结束，银染法染色。
1.3 花粉 BoEF-Tu的 cDNA克隆及 RACE扩增
使用 Trizol 法提取未萌发和萌发花粉混合样品总 RNA 用于基因克隆和实时荧光定量分析，
DNase I 去除总 RNA 样品中的 gDNA，用 PrimeScript RT-PCR Kit 合成第一链 cDNA。
根据双向电泳质谱鉴定结果以及参照拟南芥 EF-Tu 的核苷酸序列设计引物对 BoEF-Tu-F（5′-AA
ACTGCAAAGCGTCACTA-3′）和 BoEF-Tu-R（5′-TGTCACCAGGCATAACCAT-3′）用于 cDNA 序
列片段的扩增。RT-PCR 扩增体系为 ddH2O 32 L，10× PCR 缓冲液 5 L，2 mmol · L-1 dNTPs 5L，
25 mmol · L-1 MgSO4 3 L，BoCML-F/BoCML-R 各 1.5 L，KOD DNA 聚合酶 1 L，模板 DNA 1 L。
PCR 扩增参数为 94 2 min℃ ，98 10 s℃ ，46 30 s℃ ，68 1 min℃ ；35 个循环。回收目的片段分别
连接到 pEASY-Blunt simple 克隆载体，并转化至大肠杆菌感受态细胞 JM109，取阳性克隆进行酶切
鉴定并送测序。
使用 SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit User Manual 试剂盒，根据测序得到的序列信息
设 计 RACE 引 物 BoEF-Tu-F-3 （ 5′-CAGGCTGGTGACAATGTTGGACTTC-3′ ） /BoEF-Tu-R-5
（5′-GGAACACCAACCTGACGGGCAAGT-3′）。RACE 试验 PCR 扩增体系为 ddH2O 12.75 L，10×
LA Taq PCR 缓冲液 2.5 L，2.5 mmol · L-1 dNTP 4 L，UPM 引物（5′-CTAATACGACTCACTATAGGG
CAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT-3′）2.5 L，BoEF-Tu-F-3/ BoEF-Tu-R-5（10 mmol · L-1）各 1
L，LA Taq DNA 聚合酶 0.25 L，模板 DNA 1 L。PCR 扩增参数为 94 3 min℃ ；94 30 s℃ ，72 ℃
3 min，5 个循环；94 30 s℃ ，70 30 s℃ ，72 3 min℃ ，5 个循环；94 30 s℃ ，68 30 s℃ ，72 3 min℃ ，
21 个循环。
1.4 花粉 BoEF-Tu的分子结构与进化分析
根据克隆得到的 BoEF-Tu 的 cDNA 读框序列，使用 Vector NTI 软件进行预测得到氨基酸残基序
列，然后根据其他植物 EF-Tu 蛋白的分析（Fu et al.，2012）对 BoEF-Tu 的功能结构域进行注释。
将预测得到的 BoEF-Tu 序列与从 GenBank 数据库检索到的拟南芥等部分蛋白延长因子家族氨基酸
序列经 Clustal X2 比对后通过 MEGA 软件构件系统发生树。
1.5 花粉 BoEF-Tu的表达分析
分别收集成熟萌发和未萌发的花粉样本。实时荧光定量 RT-PCR 试验方法采用 Livak Method
（2-ΔΔCt）在 C1000 Thermal Cycler（Bio-Rad）上进行。试验以 β-Actin 为内参基因（BoActin-F：
TATCAACTACCAGCCACC/ BoActin-R：GAACACCTCAGCTACACTC），BoEF-Tu 基因表达分析引
10 期 王志敏等：结球甘蓝花粉蛋白延伸因子基因的克隆及其序列分析 1993

物为 BoEF-Tu-F-q（ACTTCAGGGCACAAACGAT）/BoEF-Tu-R-q（TCAAGCACACGAACAGGG
TC），参照 SsoFastTM EvaGreen Supermix（Bio-Rad）试剂盒配制反应体系，扩增条件为：95 30 s℃ ；
95 10 s℃ ，53.9 30 s℃ ，72 15 s℃ ，40 个循环。每个取样点设 3 个技术重复，3 个生物学重复。
2 结果与分析
2.1 花粉萌发总蛋白双向电泳
对分别提取的甘蓝成熟花粉与萌发花粉总蛋白进行双向电泳，结果经 PDquest 软件分析蛋白差
异点。在成熟花粉中未出现的蛋白点（图 1，A，箭头），在萌发后的花粉中出现（图 1，B，箭头）。
对该上调蛋白点进行质谱（MALDI-TOF-MS）分析，结果显示该蛋白点（Protein ID：gi |332656852|）
分子量 49.6 kD，等电点 6.68，序列覆盖率（Sequence Coverage）22.03%，蛋白质得分（Prot.Score/ion
score）226⁄65，与拟南芥 Elongation factor Tu 蛋白具有较高的同源性，命名为 BoEF-Tu。

图 1 结球甘蓝成熟花粉（A）和萌发花粉（B）双向电泳图
Fig. 1 2-D images of mature pollen（A）and germinating pollen（B）of cabbage

2.2 BoEF-Tu的 cDNA克隆及其 RACE扩增
根据蛋白双向电泳质谱鉴定结果，以结球甘蓝花粉总 RNA 反转录 cDNA 为模板，使用引物
BoEF-Tu-F 和 BoEF-Tu-R 在甘蓝花粉中扩增得到 867 bp 的片段（图 2，A）。

图 2 BoEF-Tu的同源扩增（A）和 RACE扩增（B，C）电泳图
M：D2K plus DNA marker；CK：阴性对照；EF：BoEF-Tu 片段；EF5：BoEF-Tu 5′ RACE 片段；EF3：BoEF-Tu 3′RACE 片段。
Fig. 2 RT-PCR amplification of BoEF-Tu in pollen of cabbage（A）and RACE of BoEF-Tu（B，C）
M：D2K plus DNA marker；CK：No template control；EF：BoEF-Tu fragment；EF5：5′RACE fragment of BoEF-Tu；
EF3：3′RACE fragment of BoEF-Tu.
1994 园 艺 学 报 40 卷
在此基础上设计 5′ RACE 和 3′ RACE 引物，扩增得到 662 bp（图 2，B，包含 UPM 引物片段）
的 5端片段和 633 bp（图 2，C，包含 UPM 引物片段）的 3′端片段。
2.3 BoEF-Tu分子结构
通过同源克隆及 RACE 等拼接扩增产物，得到结球甘蓝 BoEF-Tu 的基因序列，全长 1 728 bp，
GenBank 登录号 JQ639089.1，GC 含量 44.85%，含有完整开放阅读框（ORF），位于 112 ~1 473 bp，
3非翻译区 255 bp，5非翻译区 111 bp，加尾信号（AATAAA）位于第 301 bp 处（图 3）。根据其 cDNA
序列推导得到 BoEF-Tu 蛋白由 453 个氨基酸残基组成，其中酸性氨基酸 80 个，碱性氨基酸 63 个，
分子量为 49.17 kD，等电点为 6.52。


图 3 结球甘蓝 BoEF-Tu基因序列及其推导氨基酸序列
ATG 为起始密码子；TGA 为终止密码子；下划线为 GTP 绑定区域。
Fig. 3 BoEF-Tu cDNA sequence and deduced amino acid sequence of cabbage
ATG stands for the start codon；TGA stands for the stop codon；underline indicates GTP-binding signature.

通过 SignalP 分析（http：//genome.cbs.dtu.dk/）该蛋白不含信号肽，说明其不是一种膜蛋白或分
泌蛋白；跨膜域分析表明（http：//www.ch.embnet.org/）该蛋白不含跨膜区。TargetP 亚细胞定位（http：//
10 期 王志敏等：结球甘蓝花粉蛋白延伸因子基因的克隆及其序列分析 1995

linux1.softberry.com/）预测表明此蛋白在线粒体中存在的可能性较高，定位于其他细胞器的可能性
较小。BoEF-Tu蛋白具有翻译延伸因子所特有的 3个结构域：GTP结合区域的结构域 I以及结合 tRNA
的结构域Ⅱ和Ⅲ。在线预测分析（http：//prosite.expasy.org/）表明，在 106 ~ 121 位氨基酸残基处为
BoEF-Tu 蛋白的 GTP 绑定位点（图 3）。
对 BoEF-Tu 蛋白进行在线模型分析（http：//swissmodel.expasy.org/），氨基酸同源建模（图 4，
图 5），结果表明，此蛋白含有 9 个 α–螺旋结构，分别位于 21 ~ 22、53 ~ 61、80 ~ 93、103 ~ 105、
142 ~ 151、170 ~ 180、199 ~ 215、229 ~ 234、240 ~ 254 位氨基酸残基处；含有 18 个 β–折叠结构，
分别位于氨基酸序列的 117 ~ 119、122 ~ 126、157 ~ 162、185 ~ 191、225 ~ 227、275 ~ 278、283 ~ 295、
299 ~ 304、312 ~ 320、334 ~ 338、350 ~ 353、363 ~ 371、389 ~ 394、397 ~ 402、409 ~ 411、416 ~ 422、
433 ~ 437、441 ~ 451 位氨基酸残基处。















图 4 BoEF-Tu蛋白二级结构分析
：α–螺旋； ：β–折叠。
Fig. 4 Analysis of BoEF-Tu protein secondary structure
：α-helix； ：β-sheet.













图 5 BoEF-Tu 蛋白预测三维结构
Fig. 5 Analysis of BoEF-Tu protein predicted three-dimensional structure

2.4 BoEF-Tu分子进化分析
从 GenBank 数据库检索已登录的 BoEF-Tu 蛋白的氨基酸序列进行同源性比对，发现 BoEF-Tu
与拟南芥 EF-TuM（CAA61511.1）、水稻 EF-Tu（AAM74563.1）、蓖麻 EF-Tu（XP_002524809.1）、
1996 园 艺 学 报 40 卷
图 7 结球甘蓝花粉 BoEF-Tu表达分析
Fig. 7 Expression analysis of BoEF-Tu in pollens
of Brassica oleracea

玉米 EF-TuM（AAG32661.1）、秋藻 EF-TuM（XP_001418116.1）的同源性分别为 93%、88%、86%、
78%和 76%。
为进一步研究 EF-Tu 蛋白的进化关系，从 NCBI 数据库中搜索 EF-Tu 的氨基酸序列，经 ClustalX2
比对，通过 MEGA4 构件系统进化树（图 6）。从图 6 中可以看出，结球甘蓝 BoEF-Tu 蛋白与拟南芥
（X89227.1、NP_192202.1）最先聚为一类，亲缘关系最近。


图 6 延长因子推导的氨基酸序列系统进化树
Fig. 6 The phylogenetic tree inferred from the amino acid sequences of translational elongation factors
2.5 花粉 BoEF-Tu的表达分析
采用实时荧光定量 PCR 技术分析表达量
（图 7）。结果表明，BoEF-Tu 基因在花粉萌发
后 45 min 时的表达量为花粉萌发前的 2.6 倍，
表明 BoEF-Tu 在花粉萌发中后期表达上调，这
与双向电泳结果相同。
3 讨论
EF-Tu 作为在细菌和植物器官细胞如质体
和线粒体中蛋白质合成延长阶段发挥重要作用的一种蛋白，具有高度的保守型，其表达受发育时期、
激素和环境胁迫（包括高温、低温、光照、高盐、干旱及污染物）等因素的诱导（Ristic et al.，1991，
10 期 王志敏等：结球甘蓝花粉蛋白延伸因子基因的克隆及其序列分析 1997

1999；Singh et al.，2004；Momcilovic & Ristic，2007）。线粒体、质体和胞质翻译延伸因子 EF-Tu
都有各自确定的表达模式，其中线粒体 EF-Tu 基因的表达在花发育过程中却不尽统一。Lee 等（2002）
发现水稻线粒体 EF-Tu 的表达高峰出现在花发育的早期阶段，在花的成熟阶段表达量降低。本研究
对甘蓝萌发的花粉提取总蛋白，通过双向电泳差异点质谱分析发现萌发花粉中 EF-Tu 蛋白的表达明
显上调，表明在花粉萌发和花粉管生长过程 EF-Tu 蛋白被大量诱导积累，通过 RT-PCR 和 RACE 方
法从甘蓝萌发花粉中扩增得到了翻译延伸因子 EF-Tu 的完整 cDNA 序列，全长 1 728 bp，编码 453
个氨基酸，具有翻译延伸因子所特有的 3 个结构域（GTP 结合区域的结构域 I 以及结合 tRNA 的结
构域Ⅱ和Ⅲ），不含信号肽和跨膜区，并且在线粒体中存在的可能性较高，这也与水稻线粒体 tufM
基因全长 1 726 bp，编码 453 个氨基酸的研究结果相似（Lee et al.，2002），因此推测 BoEF-Tu 属
于线粒体 EF-Tu 基因家族。Fu 等（2012）研究发现 E.coli 细胞中的 EF-Tu 与水稻和拟南芥的质体
EF-Tu 分别具有 67%和 80%的相似性。本研究中氨基酸序列同源性比对也发现 BoEF-Tu 与拟南芥
EF-TuM（CAA61511.1）、水稻 EF-Tu（AAM74563.1）、秋藻 EF-TuM（XP_001418116.1）的同源性
分别达到了 93%、88%和 76%，这些结果也进一步证实了线粒体和叶绿体的起源来自于真核生物与
蓝细菌之间古老的胞内共生关系（Gray et al.，1999，2001）。
自交不亲和性机理的研究中发现，许多花粉管萌发和伸长所需要的蛋白质，都是钙相关蛋白
（Luan et al.，2002；Dai et al.，2007），这些钙相关蛋白在植物适应环境和实现生殖发育的信号传
导中起着极其重要的作用。花粉萌发过程中，未萌发时肌动蛋白近乎成纺锤形或球形，萌发时逐渐
转化成纤维状（Romagnolis et al.，2003），eEF1α 以二聚体的形式可使肌动蛋白成束（Bunai et al.，
2006）。当钙调蛋白将钙信号传递给钙调蛋白依赖的激酶，会导致一些蛋白包括 EF1α 的磷酸化，
磷酸化的 EF1α 降低了其使肌动蛋白成束的活性（Numata & Gonda，2001），并且发现 EFlα 和钙调
蛋白在分裂沟处共定位，认为 EFlα 和钙调蛋白参与并调节胞质分裂收缩环的组成（Numata et al.，
2000）。实时荧光定量研究表明，BoEF-Tu 表达量在花粉萌发后期上调，与花粉总蛋白双向电泳结
果一致，推断 BoEF-Tu 对结球甘蓝花粉的萌发具有重要作用。那么在自交不亲和甘蓝花粉萌发、花
粉管生长和柱头识别过程中BoEF-Tu是否与钙相关蛋白作用参与了自交不亲和的调控是下一步研究
的目标。

References
Bunai F，Ando K，Ueno H，Numata O. 2006. Tetrahymena eukaryotic translation elongation factor 1A（eEF1A）bundles filamentous actin through
dimer formation. J Biochem（Tokyo），140 (3)：393–399.
Dai S，Chen T，Chong T，Xue Y，Liu S，Wang T. 2007. Proteomics identification of differentially expressed proteins associated with pollen
germination and tube growth reveals characteristics of germinated Oryza sativa pollen. Mol Cell Proteomics，(6)：207–230.
Durao N A，Cyr R J. 1994. A calmodulin-sensitive interaction between microtubules and a higher plant homolog of elongation factor lα. Plant Cell，
6：893–905.
Durso N A，Leslie J D，Cyr R J. 1996. In situ immunocyto chemical evidence that a homolog of protein translation elongation factor EF-1α is
associated with microtubules in carrot cells. Protoplasma，190：141–150.
Fu Jianming，Momčilović Ivana，Prasad P V Vara. 2012. Roles of protein synthesis elongation factor EF-Tu in heat tolerance in plants. Journal of
Botany，DOI：10.1155/2012/835836.
Geitmann A，Snowman B N，Emons A M，Franklin-Tong V E. 2000. Alteratlons in the actin cytoskeleton of pollen tubes are induced by the
self-incompatibility reaction in Papaver rhoeas. Plant Cell，12：1239–1251.
Gray M W. 1992. The endosymbiont hypothesis revisited. International Review of Cytology，141：233–357.
Gray M W，Burger G，Lang B F. 1999. Mitochondrial evolution. Science，283：1476–1481.
Gray M W，Burger G，Lang B F. 2001. The origin and early evolution of mitochondria. Genome Biology，2 (6)：10181–10185.
1998 园 艺 学 报 40 卷
Lee J H，Yoon H S，Yun Ch H，Sim W S，Kim J K. 2002. Molecular characterization of the mitochondrial elongation factor EF-Tu gene in rice
（Oryza sativa L.）. Plant Cell Rep，21：157–165.
Luan S，Kudala J，Yalovsky S，Gruissem W. 2002. Calcium sensors for specific signal response coupling in plants. Plant Cell，14 (Suppl)：389–400.
Momcilovic I，Ristic Z. 2007. Expression of chloroplast protein synthesis elongation factor，EF-Tu，in two lines of maize with contrasting tolerance
to heat stress during early stages of plant development. Journal of Plant Physiology，164 (1)：90–99.
Numata O，Gonda K. 2001. Determination of division plane and organization of contractile ring in Tetrahymena. Cell Struct Funct，26 (6)：593.
Numata O，Kurasawa Y，Gonda K，Watanabe Y. 2000. Tetrahymena elongation factor-1 alpha is localized with calmodulin in the division furrow.
Journal of Biochemistry，127 (1)：51–56.
Qin Ying-zi，Huang Xian-yi，Ye Xing-zhi，Wang Ai-qin，Li Yang-rui. 2009. Advance in eukaryotic elongation factor eEF1A in plant. Guangxi
Agricultural Sciences，40 (5)：472–477. (in Chinese)
覃迎姿，黄先益，叶兴枝，王爱勤，李杨瑞. 2009. 植物延伸因子 eEF1A 研究进展. 广西农业科学，40 (5)：472–477.
Ristic Z，Gifford D J，Cass D D. 1991. Heat shock proteins in two lines of Zea mays L. that differ in drought and heat resistance. Plant Physiology，
97 (4)：1430–1434.
Ristic Z，Yang G，Bhadula S K. 1999. Two-dimensional gelanalysis of 45 ku heat shock proteins from a drought and heat resistant maize line. Journal
of Plant Physiology，154 (2)：264–268.
Roberts I N，Gaude T C，Harrod G，Dickinson H G. 1983. Pollen-stigma interactions in Brassica oleracea，a new pollen germination medium and
its use in elucidating the mechanism of self-incompatibility. Theor Appl Genet，65：231–238.
Romagnolis S，Cai G，Cresti M. 2003. In vitro assays demonstrate that pollen tube organelles use kinesin-related motor proteins to move along
microtubules. Plant Cell，(15)：251–269.
Shiina N，Gotoh Y，Kubomura N，Iwamatsu A，Nishida E. 1994. Microtubule severing by elongation factor 1 alpha. Science，266（5183）：282–
285.
Singh B N，Mishra R N，Agarwal P K，Agarwal，Goswami M，Nair S，Sopory S K，Reddy M K. 2004. A pea chloroplast translation elongation
factor that is regulated by abiotic factors. Biochemical and Biophysical Research Communications，320 (2)：523–530.
Sun Ying，Sun Da-ye. 2001. Signal transduction in pollen germination and tube growth. Acta Botanica Sinica，43 (12)：1211–1217. (in Chinese)
孙 颖，孙大业. 2001. 花粉萌发和花粉管生长发育的信号转导. 植物学报，43 (12)：1211–1217.
Sun Zi-jian，Wei Jing-yi，Wang Xiao-jia，Song Ming，Tang Qing-lin，Wang Zhi-min，Ren Xue-song. 2012a. Cloning and expression analysis of
calmodulin gene in Brassica oleracea L. var. capitata L. Acta Horticulturae Sinica，39 (4)：677–686. (in Chinese)
孙梓健，韦静宜，王小佳，宋 明，汤青林，王志敏，任雪松. 2012a. 结球甘蓝花粉钙调素基因的克隆与表达分析. 园艺学报，39 (4)：
677–686.
Sun Zi-jian，Xu Jun-qiang，Song Ming，Wei Jing-yi，Tang Qing-lin，Wang Zhi-min，Wang Xiao-jia. 2012b. Molecular cloning and expression
analysis of annexin gene from cabbage. Acta Horticulturae Sinica，39 (8)：1567–1574. (in Chinese)
孙梓健，许俊强，宋 明，韦静宜，汤青林，王志敏，王小佳. 2012b. 结球甘蓝花粉膜联蛋白基因的克隆及其表达分析. 园艺学报，39
(8)：1567–1574.