全 文 ：园 艺 学 报 ， （增刊）： 2011 38 2469 http: // www. ahs. ac. cn
Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com

收稿日期：2011–09–04
基金项目：现代农业产业技术体系建设专项资金项目（nycytx-29-06）
* 通信作者（E-mail：z.xn2009@163.com；Tel：15853297209）
‘
用改良 CTAB 法提取 RNA，利用 RT-PCR、RACE 技术进行基因克隆，采用实时荧光定量 PCR
技术
为 Pp4CL1，
Pp4C
生长发育阶段的
表达
关键词：梨；木质素；基因克隆；基因表达
文章编号：0513-353X（2011）S-2469-01
黄金梨’果实木质素合成途径相关酶基因的克
隆及其在果实发育中的表达分析
张夏南，杨绍兰，王成荣，王 然*
（青岛农业大学园林园艺学院，山东青岛 266109）
木质素是植物细胞壁的主要成分之一，有利于巩固和支持植物体及水分的输导作用。然而，果
实中木质素的过多积累会影响果实的品质和口感。为了深入探讨木质素合成的分子机理，对木质素
合成相关酶包括苯丙氨酸解氨酶（PAL）、4–香豆酸辅酶 A 连接酶（4CL）、肉桂醇脱氢酶（CAD）
和过氧化物酶（POD）进行了基因克隆，分析了其在果实不同发育阶段的表达模式。
黄金梨（Pyrus pyrifolia Nakai.‘Whangkeumbae’）果实采自山东莱阳李家泊村果园。于花后
20 d开始每 15 d采样 1 次，直至果实采收。果实去皮去核后将果肉切成 1 cm3小块后立即用液氮处理。
采
，以梨 actin 基因为内参，分析各基因在果实的不同发育成熟阶段的表达特性。
目前已经从黄金梨果肉中分离出 10 个 cDNA，其中 7 个为全长 cDNA，暂命名
L2，PpCAD，PpPOD1，PpPOD2，PpPOD3，PpPOD4。基因序列分析表明：PpPAL1 与 PpPAL2
之间的氨基酸同源性为 84%，PpPAL1 与西洋梨（ABB70117.2）的氨基酸同源性最高，为 99%；PpPAL2
与枇杷 PAL1（ABV44808.1）的同源性为 99%；Pp4CL1 与 Pp4CL2 之间的氨基酸同源性为 66.5%，
Pp4CL1 基因与欧洲花楸 4CL1 基因在氨基酸水平上的同源性为 99%，Pp4CL2 基因与欧洲花楸 4CL2
基因的同源性为 96%；PpCAD 基因与苹果 CAD（AF053084.1）氨基酸同源性最高，为 97%；而 4
个 POD 基因之间的同源性为 44.5%，PpPOD1 与荔枝 POD5（FJ207518.2）同源性最高，为 73%；
PpPOD4 与大豆 POD（AF145348.1）同源性最高，为 82%；PpPOD2 与 PpPOD3 与近缘植物 POD
基因的氨基酸同源性较低，PpPOD2 与蓖麻 POD（XM_002510541.1）同源性最高，为 46%。PpPOD3
与柑橘 POD1（DQ650639.1）、荔枝 POD2（FJ157350.1）同源性最高，为 67%。
基因表达的实时荧光定量 PCR 分析结果表明：PpPAL1 与 PpPAL2 在整个果实
模式略有差异，花后 20 ~ 36 d，PpPAL1 基因表达量上升，随后逐渐下降，PpPAL2 基因表达量
在花后 20 d 左右最高，随着果实的生长发育，逐渐下降，花后 85 d 之后维持较低的基因表达量。
Pp4CL1 与 Pp4CL2 基因在幼果期表达，而在果实发育后期，基因相对表达量极低。4 个 POD 基因
表现出不同的基因表达模式，PpPOD4 在整个果实发育阶段中的相对表达量显著高于 PpPOD1、
PpPOD2、PpPOD3，花后 20 ~ 53 d 表达量逐渐升高，53 d 时达到最大值，随后逐渐下降，花后 101 d
至采收表达量稳定在低水平。
中图分类号：S 661.2 文献标识码：A