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收稿日期："##6 ’ #& ’ "7；修回日期："##6 ’ $# ’ "6
基金项目：国家苹果产业技术体系建设专项项目（8)94）；国家高技术研究与发展计划（‘7(%’）项目（"##7))$#:$;&）
! 通信作者 )1+<./ =./ *.//3>?.5@35*3（ABC,02：D?E30F >05,G *.C）
苹果矮化砧木 !"系的 !!#标记鉴定
金万梅$，毛海亮$，张! 强$，王小伟$，杨廷桢"，魏钦平$，!
（ $北京市农林科学院林业果树研究所，北京 $###6%；" 山西省农业科学院果树研究所，山西太谷 #%#7##）
摘! 要：对山西省果树研究所、北京市林业果树研究所和北京市昌平果树研究所保存的 "7 份 4-系苹
果砧木进行鉴定，结果表明：山西果树所的 4-6 与北京林果所的 4-6，相似性高达 $##H，属于同名同物；
山西果树所的 4-$&、4-$7、4-I# 与北京昌平的 4-$&、4-$7、4-I# 的相似性分别为 (7G 6H、;;G $H和
(;G (H，属于同名异物；山西果树所、北京林果所及北京昌平的 4-%7，三者间最高相似性为 ($G "H，均为
不同材料；山西的 4-$7 与 4-J（$##H），北京昌平的 4-$& 与山西的 4-@，山西的 4-,与山西的 4-3，山
西的 4-$7（"7）与山西的 4-I#，相似性均在 66H以上，属于同一种材料，而相似性比较高的还有昌平的
4-$7 与昌平的 4-%7（67G IH），并且山西的 4-$" 与山西的 4-$& 及 4-"6 三者相似性在 6&G "H K 67G 6H之
间；不同保存地的 4-$、4-%、4-(、4-7B$$、4-6B<=、4-$6、4-"7、4-"6、4-*、4-@ 和 4-= 为异名异物
材料。
关键词：苹果砧木；4-系；44L标记
中图分类号：4 (($! ! 文献标识码：)! ! 文章编号：#;$%B%;%M（"#$#）#"B#%#%B#I
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园! ! 艺! ! 学! ! 报 "# 卷
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苹果矮砧（矮化自根砧或中间砧）高效集约栽培技术是世界苹果产业发展的趋势。+A 世纪 BA—
,A 年代，我国先后从国外引进了英国的 C系和 CC系、波兰的 D系、原苏联的 E系、美国的 FG系、
加拿大的 H系等，并在全国开展苹果矮化砧木研究和推广应用工作（韩明玉 等，+AAI）。由于我国
土壤类型、栽培管理和砧木的抗逆性、根系固地性等生态适应原因，现存的矮化中间砧苹果园不足
IJ。选择适宜我国气候条件、土壤类型和栽植方式的苹果矮化砧木具有重要的意义。$%系苹果矮化
砧木是山西省农业科学院果树研究所以‘国光’和‘河南武乡海棠’为亲本，采用杂交育种方法培
育成的一系列矮化、半矮化砧木。$%系苹果砧木经多年在北京昌平、河北石家庄和山西等地应用证
明，具有抗冻力强，适应范围广，栽植后成花易，结果早，树体管理方便，果实品质优等特点。从目
前 $%系对抗冻性和果实品质影响的应用情况分析，北京昌平以怀来海棠为基砧、$%B 为中间砧、嫁
接宫藤富士品种，山西果树所以怀来海棠为基砧、$%* 为中间砧、嫁接‘长富 + 富士’品种的表现
比较好；河北农业大学以怀来海棠为基砧、$%KA 为中间砧、嫁接短枝富士品种，在北京昌平，以昌
平的 $%*, 或 $%B 为中间砧、嫁接宫藤富士品种，$%B 和 $%KA 在抗冻性、开花结果性、产量品质等
方面的表现均比较好，而 $%*, 则表现出树体高大、结果晚与乔砧相似等现象。以上结果说明了 $%
系不同系号间存在差异，各地在应用中应该慎重；其它系号的应用有待进一步观察证明。由于 $% 系
为同一亲本的后代，仅从田间的形态学方面难以全部区分 $%系砧木，同时在我国不同的保存地出现
同物异名或同名异物现象，限制了其推广利用。$$?（$4@9:1 71L=10-1 5191/2）分子标记技术能够反
映生物个体间的遗传差异，数量丰富，广泛分布于整个基因组，具有高度个体特异性和稳定可靠性，
可以满足对苹果砧木 $% 系进行遗传鉴定分析（F(/04 12 /:3，+AAA；M41N(/5. 12 /:3，+AA+；王爱德
等，+AAI；$4:)815N15<’O4:;652( 12 /:3，+AAB；高源 等，+AA#）。本研究中以山西省果树研究所、北京
市林业果树研究所和北京市昌平果树研究所分别保存的 +, 份 $% 系苹果砧木为材料，应用 $$? 分子
标记的方法，探讨不同的保存地 $%系苹果砧木的同物异名或同名异物问题，防止 $% 系砧木系号混
乱，盲目引进给生产带来损失，为 $%系苹果矮化砧木的区域评价和进一步开发利用提供理论依据。
*! 材料与方法
)* )+ 材料
+AA, 年 B—& 月分别从北京市林业果树研究所、北京市昌平果树研究所和山西省农业科学院果树
研究所保存地取回 +, 份 $%系苹果砧木的新鲜叶片，保湿并立即带回实验室提取基因组 OPQ。样品
编号以保存地的标记号为准，如果标记号相同，则同时标记保存地（见表 *）。
)* ,+ -./提取和 012扩增
取 +IA @<新鲜叶片，加入适量的液氮，快速研磨。用 FRQE法提取植物总 OPQ（R(6@/7 12 /:3，
*&&"）。引物序列参考 M41N(/5.等（+AA+）和 $4:)815N15<’O4:;652( 等（+AAB），由上海生工生物技术服
务有限公司合成，共 **+ 对引物。扩增体系为模板 OPQ " !M（*IA 0<）、N=))15 + !M、C<+ S + !M、
.PRD * !M、D* * !M、D+ * !M、!"#酶 AT I !M、..%+H &T I !M，总体积为 +A !M。所采用的扩增条件
是 &K U K @40，"I 个循环（&+ U "A 7，II U "A 7，#+ U "A 7），#+ U *A @40。DF?扩增结果采用聚
丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色，甲醛显色，冰醋酸固定，最后用蒸馏水清洗胶板，阴干读带。
)* 3+ 数据统计及分析
根据条带的有无，用 * 和 A 记录每个材料的带型，组成二元数据（王立新 等，+AAB）。采用 PR’
$V$软件进行分析，相似系数按 OWFX公式计算，以非加权类平均法（YDGCQ）进行聚类分析。
KA"
! " 期 金万梅等：苹果矮化砧木 #$系的 ##%标记鉴定!
表 !" 不同保存地的 #$系矮化砧木
%&’() !" *&+) ,- #$ .)/0). 12&/- /,,3.3,45. 06 10--)/)63 7(&4).
保存地
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编号
3456*+
保存地
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编号
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北京市农林科学院林业果树研究所 #$7，#$8，9:，#$7;， 山西省农科院果树研究所 #$<，#$;=<<，#$8，#>，
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北京昌平果树研究所 #$J，#$，#$KL，#>，#$-，
?()./.4.* ’@ 0’5’1’DB ’@ &F-(DM/(D，9*/E/(D 9&，#$<8，#$";，#$7;， #>，#$6，#$2，#$C，#$*，
9&，#$KL，9& #$@
"! 结果与分析
采用 <<" 对引物进行 0&%扩增，其中 ;" 对引物扩增出清晰的条带。在这 ;" 对引物扩增带型中，
每个位点的等位基因变异数目约 " N 带型大致分为简明式和组合式。由于 #$ 系为同一亲本的后代，用简明式引物将 "; 份材料均鉴别出
来是比较困难的。组合式带型由多组带纹组合而成（图 <），多种带纹之间的距离构成了带型的差异，
多态性水平高，有利于鉴别 #$系。本试验有效的 ;" 对 ##%引物中共有简明式带型的引物 78 对，组
合式带型的引物 K7 对。引物 &$L<6L8、&$L多态性；其余 H; 对引物的扩增多态性百分率在 图 !" 89 份 #$系苹果砧木 ##:带型（引物为 ;$<=)<>）
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#$，#$<"，#$8=F@，#$8 #>，#$8 9:，#$;=<<，#$J，#$7 -(C #$根据 ;" 对有效引物的扩增数据计算 #$系各材料之间的相似系数并进行了聚类（图 "）。不同保
存地的 "; 份材料的相似系数在 LP 7O N

#$平的 #$7; 最高相似性仅为 J

生物学方面分析，初步认为以上材料尽管名字相同，但为不同材料，属于同名异物。
山西果树所的 #$6与 #$<;，山西果树所的 #$-与 #$*，#$<;（";）与北京昌平的 #$KL 相似性
分别为 同名字的砧木的相似性均在 88Q以上，可以确定分别为是同一种砧木；另外，北京昌平的 #$<; 与
#$7; 砧木的相似性为 8;P KQ；山西果树所的 #$<"、#$8;P 8Q之间，其相似系数均在 8HQ以上，可看作同类型砧木。山西果树所和北京林果所的 #$8，相
似性高达 #$<8、#$";、#$"8、#$2、#$C和 #$@等，相互之间的相似性在 7OQ N8OQ，均为不同材料。
建议原育种单位（山西省果树研究所）针对 #$系存在同名异物或同物异名现象，进行重新核查编号。
OL7
园! ! 艺! ! 学! ! 报 "# 卷
图 !" ##$标记鉴定分析不同保存地的苹果砧木 #%系的聚类图
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