全 文 ：园 　艺 　学 　报 　2006, 33 (4) : 714～720
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期 : 2005 - 10 - 18; 修回日期 : 2006 - 01 - 04
基金项目 : 国家自然科学基金资助项目 (30270918, 30471192) ; 国家高技术研究发展计划项目 (2003AA241170) ; 中粮集团华
夏葡萄酒酿造有限公司资助项目3 通讯作者 Author for correspondence ( E2mail: huanggwd@2631net)
致谢 : 本文得到北京市农林科学院畜牧所冯国洲老师的鼎力支持 , 在此表示衷心感谢 !
葡萄果实中黄烷 - 3 -醇及其聚合体的 HPLC检测
温鹏飞 1, 2 　陈建业 1 　李景明 1 　万嗣宝 1 　孔维府 1 　黄卫东 13
(1 中国农业大学食品科学与营养工程学院 , 北京 100083; 2 山西农业大学园艺学院 , 山西太谷 030801)
摘 　要 : 以 ‘赤霞珠 ’葡萄果实 (V itis vin ifera L.‘Cabernet Sauvignon’) 为试材 , 采用 L iChrospher 100
RP218e色谱柱 (250 mm ×410 mm I1D1, 5μm) , 冰乙酸 ∶水溶液为流动相 , 梯度洗脱流速为 110 mL /m in,
柱温 30℃, 检测波长 280 nm, 成功地分离了 ( + ) -儿茶素 〔 ( + ) 2catechin, CAT〕、 ( - ) -表 　儿茶
素 〔 ( - ) 2ep igallocatechin, EGC〕、 ( - ) - 表 　儿茶素没食子酸酯 〔 ( - ) 2ep igallocatechin gallate,
EGCG〕、 ( - ) -表儿茶素 〔( - ) 2ep icatechin, EC〕和 ( - ) -表儿茶素没食子酸酯 〔( - ) 2ep icatechin
gallate, ECG〕等 5种葡萄果实中最为重要的黄烷 - 3 - 醇及其衍生物 , 建立了一种快速、准确并可以同时
测定葡萄果实中 5种黄烷 - 3 -醇及其衍生物的高效液相色谱法 ; 此外 , 经 TSK HW 250 ( F) 柱分离纯化 ,
间苯三酚存在下酸解后进行 HPLC分析 , 建立了一种快速、准确测定葡萄果实中多聚黄烷 - 3 - 醇平均聚合
度、平均分子量及其组成的方法。果实样品检测结果表明 : 黄烷 - 3 -醇及其多聚体主要积累于果皮和种子
中。
关键词 : 葡萄 ; 果实 ; 高效液相色谱 ; 黄烷 - 3 -醇 ; 多聚黄烷 - 3 -醇
中图分类号 : S 66311　　文献标识码 : A　　文章编号 : 05132353X (2006) 0420714207
D eterm ina tion of M onom er ic and Polym er ic Flavan232ols in Grape Berry by
H igh Performance L iqu id Chroma tography
W en Pengfei1, 2 , Chen J ianye1 , L i J ingm ing1 , W an Sibao1 , Kong W eifu1 , and Huang W eidong13
( 1 College of Food Science and N utritiona l Eng ineering, China A gricultural U niversity, B eijing 100083, China; 2 College of Horti2
cu lture, Shanxi A gricu ltura l U niversity, Taigu, Shanxi 030801, Ch ina)
Abstract: The grape (V itis vin ifera L. ‘Cabernet Sauvignon’) berry was used as the material. A new
method was developed for simultaneously determ inating five kinds of monomeric flavan232ols and their deriva2
tives, including ( + ) 2catechin ( CAT) , ( - ) 2ep igallocatechin ( EGC) , ( - ) 2ep igallocatechin gallate
( EGCG) , ( - ) 2ep icatechin ( EC) , and ( - ) 2ep icatechin gallate ( ECG) , in the grape berry by high per2
formance liquid chromatography (HPLC). These compounds were efficiently separated directly from the sam2
p les through a chromatographic column of 5μm L iChrospher 100 RP218e (250 mm ×410mm I1D1, Merck)
by the mobile phase gradient elution of glacial acetic acid solution at the flow rate of 110 mL /m in, at the de2
tection wavelength of 280 nm and at 30℃. The polymeric flavan232ols had been fractioned and purified on
TSK HW 250 ( F) , followed by acid2catalyzed degradation in the p resence of phloroglucinol, then the mean
degree and the composition of polymeric flavan232ols in grape berry were determ ined by HPLC. The results
showed that monomeric and polymeric flavan232ols were mainly accumulated in the skins and seeds of grape
berry.
Key words: Grape; Berry; HPLC; Flavan232ols; Polymeric flavan232ols
研究表明 , 葡萄和葡萄酒中含有大量的多酚类化合物〔1, 2〕。葡萄果实中的黄烷 - 3 - 醇类多酚在
　4期 温鹏飞等 : 葡萄果实中黄烷 - 3 -醇及其聚合体的 HPLC检测 　
发酵过程中经浸提进入葡萄酒中〔3〕, 对葡萄酒的色泽、苦味、收敛性、褐变等〔4, 5〕具有重要作用。此
外 , 黄烷 - 3 -醇还具有极强的抗氧化功能〔6〕, 具有抗病毒、抗癌〔7〕、抗血栓〔8〕和对心血管的保护作
用〔9〕。因此 , 快速、准确地测定葡萄果实中黄烷 - 3 - 醇及其衍生物和聚合体对于评价葡萄品质 , 调
控葡萄酒酿制工艺 , 进而调控葡萄酒品质和营养功效具有重要意义。
黄烷 - 3 -醇类多酚具有共同的母核 (即 2 - 苯基氧杂萘 ) , 结构相似、分子量相近、极性相仿 ,
再加上葡萄果实中富含多酚物质、干扰大 , 使得分离及测定非常困难。长期以来 , 形成了许多测定方
法。最初 , 黄烷 - 3 -醇多采用化学比色法测定〔10, 11〕, 但由于所用试剂不仅仅与黄烷 - 3 - 醇类发生
反应 , 因而在没有结合较好的前处理分离技术的前提下 , 所得数据是不可靠的〔12〕。随着分离技术的
发展 , HPLC法成为首选方法。许多学者利用 HPLC对食品中的黄烷 - 3 - 醇类进行了测定〔5, 13, 14〕。同
时 , 为了减少或消除其它酚类物质对测定的干扰 , 多首先利用色谱柱 , 如葡聚糖 G225〔15〕、葡聚糖
LH220〔13〕、TSK HW 240 ( S)〔16〕、TSK HW 240 ( F)〔1〕、TSK HW 250 ( F)〔4〕、聚酰胺柱〔5〕、C18 Sep2Pak
柱〔17〕等对样品进行分离 , 或对提取方法加以改进〔18〕后采用 HPLC法对其进行定量分析。
作者以 ‘赤霞珠 ’ (V itis vin ifera L. ‘Cabernet Sauvignon’) 葡萄果实为试材 , 建立了快速、准确
地测定葡萄中黄烷 - 3 -醇和多聚黄烷 - 3 -醇含量及其组成的 HPLC分析方法 , 为开展相关研究工作
奠定基础。
1　材料与方法
111　材料、仪器与试剂
赤霞珠果实采自北京龙徽酿酒有限公司生产基地 ———河北省怀来县。分别于花后 20 d (幼果
期 )、70 d (转色期 )、100 d (成熟期 ) 取样。选取大小基本一致、外围无伤害和病虫害的果实 100
粒 , 手工分离果皮、果肉和种子 , 液氮速冻后 - 80℃保存备用。
仪器 : 日本 Shimadzu高效液相色谱仪 , LC26A色谱泵 , SPD26AV紫外检测器 , STL26A自动进样
器 , C2R6A色谱数据处理系统 , UV2265FW 紫外分光光度计 ( Shimadzu公司 ) ; BT2100数显恒流泵
(上海沪西分析仪器厂 ) , SBS2100数控计滴自动部分收集器 (上海沪西分析仪器厂 ) ; LGJ210型冻干
机 (北京四环仪器厂 )。
试剂 : ( + ) -儿茶素 〔 ( + ) 2catechin, CAT〕、 ( - ) -表儿茶素 〔 ( - ) 2ep icatechin, EC〕、
(
-
)
-表 　儿茶素 〔 ( - ) 2ep igallocatechin, EGC〕、 ( - ) -表儿茶素没食子酸酯 〔 ( - ) 2ep icate2
chin gallate, ECG〕和 ( - ) -表 　儿茶素没食子酸酯 〔 ( - ) 2ep igallocatechin gallate, EGCG〕均购
自 Sigma公司 , 纯度 98%以上 ; Toyopearl HW 250 ( F) ( Part No1 19810) 购自日本 Tosoh公司 ; 乙腈、
甲醇为色谱纯 (美国 Fisher公司 ) ; 水为超纯水 (电导度 18 M ) ; 其它试剂为分析纯 , 购自国内公
司 ; 多聚黄烷 - 3 -醇参照 Kennedy等〔19〕方法制备。
112　方法
11211　样品制备 　参照 Kennedy等〔20〕的方法 , 稍做修改。准确称取样品 015 g, 液氮保护下研磨成
粉 , 加入 20 mL丙酮 /水 (体积比 7 /3, 含 1 g/L 抗坏血酸 ) 溶液 , 置于 25℃恒温水浴摇床中避光提
取 6 h; 离心 (8 000 r/m in, 15 m in, 4℃) 后 , 将上清液转移。再按上述步骤提取 , 合并两次所得上
清液。旋转蒸发脱去丙酮 , 双蒸水定容至 30 mL, - 20℃保存备用。
11212　黄烷 - 3 - 醇单体色谱条件 　德国 Merck公司 L iChrospher 100 RP218e色谱柱 (250 mm ×410
mm , I1D1, 5μm) , 保护柱为 RP218 (10 mm ×4 mm) , 紫外检测波长为 280 nm, 柱温 30℃, 进样量
10μL, 流速 110 mL /m in, 外标法定量。梯度洗脱 : 流动相 A为水 , 流动相 B为 10%冰乙酸 (体积
比 90 /10)。洗脱程序 : 0～7 m in, 715% B; 7～20 m in, 715% ～65% B; 20～30 m in, 65% ～80% B;
30～48 m in, 80% ～90%B; 48～55 m in, 90%B; 55～63 m in, 715%B。
11213　多聚黄烷 - 3 -醇含量测定 　采用丁醇 —盐酸法 (BuOH - HCl) 测定 , 参照 Spagna等〔21〕的方
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法 , 稍做修改。取 012 mL样品 , 用 96%乙醇和 37%盐酸混合液稀释至 1 mL, 加入 3 mL 013 g/L的
硫酸亚铁的丁醇 —盐酸混合液 (体积比 60 /40) , 沸水浴中煮沸回流 30 m in, 流动水迅速冷却 ; 室温
下放置 10 m in后 , 于 550 nm处测定吸光值。以室温放置未加热样品为参比。多聚黄烷 - 3 - 醇含量
根据标准曲线计算。
11214　多聚黄烷 - 3 -醇的纯化 　参照 Labarbe等〔22〕的方法 , 稍做修改。样品 (10 mL) 上 TSK HW 2
50 ( F) 柱 , 经 90 mL乙醇 /水 /三氟乙酸 (体积比 55 /45 /0105) 和 50 mL丙酮 /水 (体积比 60 /40,
内含 1 g/L抗坏血酸 ) 依次洗脱 , 收集丙酮部分 , LGJ210型冷冻干燥机冻干后 , - 20℃冰箱保存备
用。
11215　多聚黄烷 - 3 -醇的降解 　参照 Kennedy等〔19〕的方法 , 稍做修改。冻干样重溶于 215 mL甲醇
(色谱纯 ) 中 , 取 1 mL, 分别加入 012 mol/L HCl/MeOH液 (含 20 g/L抗坏血酸 ) 和 100 g/L间苯三
酚液各 015 mL, 50℃下反应 20 m in, 加入 5 mL 40 mmol/L乙酸钠液终止反应 , - 20℃冰箱保存备用。
11216　多聚黄烷 - 3 -醇降解物色谱条件 　德国 Merck公司 L iChrospher 100 RP218e色谱柱 (250 mm
×410 mm , I1D1, 5μm ) , 保护柱为 RP218 (10 mm ×4 mm) , 紫外检测波长 280 nm, 柱温 30℃, 流
速 115 mL /m in, 进样量 10μL。梯度洗脱 : 流动相 A为 1%冰乙酸 ; 流动相 B为 80%乙腈 (含 1%冰
乙酸 )。洗脱程序 : 0～8 m in, 318%B; 8～28 m in, 318% ～2215%B; 28～32 m in, 2215% ～50%B;
32～50 m in, 50% ～100%B; 50～52 m in, 100%B; 52～60 m in, 318%B。
2　结果与分析
211　TSK HW 250 ( F) 柱稳定性及回收率检验
准确称取多聚黄烷 - 3 - 醇标准品 5010 mg, 用 20%乙醇定容到 50 mL, 按上述洗脱条件 (见
11214) 进行洗脱 , 收集丙酮部分 , 丁醇 —盐酸法 (见 11213) 测定多聚黄烷 - 3 - 醇含量 , 重复 3
次。结果表明 : 室温下 TSK HW 250 ( F ) 柱工作稳定 ( 3 次重复 ) , 其回收率分别为 90146%、
91175%、90192% , 均高达 90%以上。这表明 , 利用 TSK HW 250 ( F) 对葡萄果实中的多聚黄烷 - 3
-醇进行分离和纯化是可行的。
212　检测波长的选择
将 5种黄烷 - 3 -醇及其衍生物的标准样品溶
液 (溶剂为色谱纯甲醇 ) 在分光光度计上对
200～400 nm波长段进行扫描 , 得其紫外吸收区
域 (表 1)。结果表明 , 5种黄烷 - 3 - 醇及其衍
生物最大吸收峰互不相同 , 但在 280 nm处均有最
大或较大吸收。因此 , 本试验选择 280 nm为检测
波长。
213　黄烷 - 3 -醇及其衍生物的定性与定量 表 1　黄烷 - 3 -醇及其衍生物的吸收范围和最大吸收峰Table 1　Absorbance range and max im um absorbance offlavan232ols and its der iva tives化合物Compounds 吸收范围Absorbance range ( nm) 最大吸收峰Maximum absorbance ( nm)CAT 252～340 280EGC 255～330 271EGCG 250～330 275EC 252～330 280ECG 250～330 273
　　将 CAT、EGC、EGCG、EC和 ECG 5种标准样品分别配成合适浓度的溶液 , 在同一色谱条件
下分别进样 , 确定标准物质的保留时间。结果表明 , 5种黄烷 - 3 - 醇及其衍生物在上述色谱条件
下 , 能够充分分离 , 其出峰顺序为 : CAT 27171 m in, EGC 28125 m in, EGCG 35114 m in, EC
39141 m in, ECG 54107 m in (图 1)。将标准样品配成混合样品 , 用增高法进行定性 , 以外标法定
量。
214　多聚黄烷 - 3 -醇降解物定性与定量
将 CAT、EC、ECG 3种多聚黄烷 - 3 -醇起始单元标准样品分别配成合适浓度的溶液 , 在同一色
谱条件下分别进样 , 确定标准物质的保留时间依次为 : CAT 20125 m in, EC 26101 m in, ECG 31124
m in (图 2) , 而且在样品中也能够完全分离。CAT、EC、ECG采用增高法定性 , 外标法定量。多聚
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黄烷 - 3 -醇延伸单元的降解物则根据其光谱特性 , 参照已发表资料定性〔2〕, 并以 CAT为标准进行定
量。
图 1　5种黄烷 - 3 -醇及其衍生物标样 (左 ) 和葡萄果实样品 (右 ) 色谱图
F ig. 1　Chroma togram s of 5 m onom er ic flavan232ols and its der iva tives standards ( left) and grape berry ( r ight)
1: CAT; 2: EGC; 3: EGCG; 4: EC; 5: ECG
图 2　3种多聚黄烷 - 3 - 醇起始单元 (左 ) 和葡萄果实多聚黄烷 - 3 - 醇降解物 (右 ) 色谱图
Fig. 2　Chromatogram s of flavan232ols ( left) and pholroglucinol adducts of polymeric flavan232ols in grape berry sample ( right)
1: CAT/C; 2: EC; 3: ECG; 4: EGC2P; 5: C2P; 6: EC2P; 7: ECG2P
215　标准工作曲线的建立及色谱稳定性检验
准确配制 510～15010 mg/L的 5个不同浓度的 5种黄烷 - 3 -醇及其衍生物和 3种多聚黄烷 - 3 -
醇末端 (起始 ) 单元的混合标准品 , 分别按照上述液谱条件进样 5μL, 以峰面积 y为纵坐标 , 质量
浓度 x为横坐标 , 计算得到 8条标准曲线 (表 2)。5种黄烷 - 3 - 醇及其衍生物标准品的溶液含量和
检测响应值呈现出良好的线性关系 , 并且最低检测限都较低 , 表明此方法灵敏度较高。同时 , 3种多
聚黄烷 - 3 - 醇末端单元标准品的溶液含量和检测响应值呈现出良好的线性关系 , 且最低检测限都较
表 2　保留时间、回归方程和检出限
Table 2　Reten tion tim e, regression equa tion s and detection lim its of flavan232ols and it der iva tives
化合物
Compounds
保留时间
Retention
time (m in)
线性范围
L inear range
(mg/L)
标准曲线
Standard curves
相关系数
Correlation
coefficient
最低检测限
Detection
lim its(mg/L)
黄烷 - 3 - 醇及其衍生物 CAT 27171 6104 - 9618 y = 28211x + 549103 019995 6114 ×10 - 10
Monomeric flavan232ols EGC 28125 6126 - 100 y = 88159x - 262112 019993 2108 ×10 - 9
and its derivatives EGCG 35114 6126 - 100 y = 399151x - 745519 019997 7144 ×10 - 10
EC 39141 7188 - 126 y = 288154x - 909174 019996 1113 ×10 - 9
ECG 54107 6126 - 100 y = 742194x - 939112 019997 7162 ×10 - 10
多聚黄烷 - 3 - 醇起始单元 CAT 20125 3172 - 119 y = 18118x - 651122 019999 1133 ×10 - 9
Term inal units of polymeric EC 26101 3112 - 100 y = 188112x - 113131 019998 1102 ×10 - 9
flavan232ols ECG 31124 3112 - 100 y = 51712x - 912131 019999 4138 ×10 - 10
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低 , 表明此方法灵敏度较高。此外 , 在线性范围内 , 样品浓度与峰面积显著相关 (表 2)。这表明液
相色谱工作稳定 , 结果可靠。
在上述色谱条件下 , 分别将赤霞珠果实样品及其降解样品连续进样 3次 , 样品含量相对标准偏差
均小于 5% , 且与峰面积显著相关。这表明 , 色谱工作稳定 , 重现性良好。
216　精密度和加标回收
向葡萄果实样品中加入定量标样 , 根据上述液谱条件 (见 11212) , 同时对样品和加标样品进行
检测 , 分析标样回收率。另取多聚黄烷 - 3 -醇 2114 mg, 用甲醇 (HPLC级 ) 定容到 10 mL。取 1 mL
样品液 , 按上述方法 (见 11215) 加入过量间苯三酚进行降解 , 分装后备用。同时向上述样品中加入
定量末端 (起始 ) 单元标样 , 与样品液同步进行降解后 , 按上述液谱条件 (见 11216) 检测。根据
测得样品中含量和加入的标准样量分别计算相应的标准偏差 (RSD ) 和回收率。
表 3　精密度和加标回收试验结果
Table 3　Results of prec ision and recovery test ( n = 5)
化合物
Compounds
样品含量
Samp le
(mg/L)
加入量
Added
(mg/L)
检出量
Detected
(mg/L)
标准偏差
RSD
( % )
回收率
Recovery
efficiency( % )
黄烷 - 3 - 醇及其衍生物 CAT 8125 11124 18192 013 9419
Monomeric flavan232ols and its derivatives EGC 0142 1136 1168 114 9216
EGCG 0125 0166 0185 515 9019
EC 5136 6145 11158 319 9614
ECG 0178 2115 2183 019 9513
多聚黄烷 - 3 - 醇起始单元 CAT 5166 43100 46144 310 9418
Term inal units of polymeric flavan232ols EC 6116 14122 19139 012 9310
从表 3中可以看出 , CAT、EGC、EGCE、EC和 ECG五者回收率均大于 90% , 且其相对标准偏
差均小于等于 515%。多聚黄烷 - 3 -醇起始单元 CAT、EC二者回收率均大于 90% , 且其相对标准偏
差均小于 5%。这表明 : 一方面 , 亲核剂间苯三酚在酸性环境下并未攻击原花色素末端 (起始 ) 单
元 , 其衍生物均来源于延伸单元 ; 另一方面 , 该色谱方法重现性好 , 精密度高 , 切实可行。
217　葡萄果实样品的测定
从表 4中可以看出 , 赤霞珠果皮、果肉、种子中均检测到 CAT、EC和 ECG, 而 EGCG、EGC均
未检出。CAT含量较高 , EC次之 , ECG最低 , 且成熟果实果皮、果肉、种子中表现一致。这一结论
与前人研究结果〔20, 23〕一致。就同一发育时期的果实而言 , 种子中黄烷 - 3 - 醇总含量最高 , 果皮次
之 , 而果肉最低。
多聚黄烷 - 3 -醇在赤霞珠果实发育的幼果期 (20 d)、转色期 (70 d) 和成熟期 (100 d) 均表
现为种子中含量最高 , 果皮次之 , 果肉最低 (表 4)。
表 4　葡萄果实不同部位黄烷 - 3 - 醇含量
Table 4　Concen tra tion of flavan232ols in d ifferen t tissue of grape berry (mg/kg)
花后天数
Day after full
bloom ( d)
CAT
果皮
Skin
果肉
Flesh
种子
Seed
EC
果皮
Skin
果肉
Flesh
种子
Seed
ECG
果皮
Skin
果肉
Flesh
种子
Seed
多聚黄烷 - 3 -醇
Polymeric flavan232ols
果皮 Skin 果肉 Flesh 种子 Seed
20 568 ±39 74 ±8 2616 ±26 20 ±2 22 ±3 　42 ±14 - 4 ±0 326 ±25 17120 ±118 113 ±012 53120 ±213
70 240 ±14 47 ±2 18462 ±208 47 ±2 20 ±3 9799 ±120 - 8 ±1 2443 ±186 21135 ±114 411 ±015 55178 ±213
100 74 ±6 6 ±0 5676 ±179 45 ±4 4 ±0 4941 ±60 36 ±33 3 ±0 　68 ±5 28100 ±111 110 ±011 42150 ±211
如表 5所示 , 赤霞珠果实不同部位多聚黄烷 - 3 -醇平均聚合度、平均分子量及其组成互不相同 ,
果皮中平均聚合度最高 , 平均分子量最大。这与前人研究结果〔1〕相一致。而且 , 不同发育时期的果
实 , 其多聚黄烷 - 3 -醇组成也互不相同。
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　4期 温鹏飞等 : 葡萄果实中黄烷 - 3 -醇及其聚合体的 HPLC检测 　
表 5　葡萄果实不同部位多聚黄烷 - 3 - 醇的平均聚合度、分子量及其组成
Table 5　mD P, aMM and com position of polym er ic flavan232ols in d ifferen t tissue of grape berry ( n = 3)
样品
Samp le
花后天数
Day after full
bloom ( d)
末端 (起始 )单元 Term inal units ( nmol/g)
CAT EC ECG
延伸单元 Extension units ( nmol/g)
CAT EC ECG EGC
mDP aMM
果皮 20 1166 ±0146 1171 ±0114 0151 ±0107 0171 ±0112 15182 ±1145 3189 ±0129 0112 ±0101 5191 249510
Skin 70 0123 ±0116 1118 ±0106 0167 ±0105 0136 ±0102 3194 ±1100 3102 ±1101 0104 ±0 4152 201717
100 1102 ±0104 1128 ±0101 0152 ±0102 1130 ±0101 13106 ±0106 12166 ±0109 0116 ±0101 10164 499719
果肉 20 - 1168 ±0101 0160 ±0103 - 0120 ±0101 - - 1109 37815
Flesh 70 0111 ±0107 1164 ±0105 0164 ±0105 - 0180 ±0106 - - 1133 52010
100 0122 ±0109 1162 ±0102 0154 ±0101 - 0143 ±0109 - - 1120 43818
种子 20 0120 ±0106 1110 ±0103 0148 ±0 0102 ±0 5157 ±0165 1101 ±0134 - 4169 194515
Seed 70 0106 ±0101 1140 ±0104 0146 ±0 0102 ±0 3114 ±0156 0122 ±0102 - 2176 109113
100 0114 ±0 1132 ±0105 0147 ±0 - 1176 ±0120 0122 ±0102 - 2177 107712
　　注 : - : 未检测到 ; mDP: 平均聚合度 ; mDP = (起始单元总摩尔数 +末端单元总摩尔数 ) /起始单元总摩尔数 ; aMM: 平均分子量 , aMM = (起
始单元 ×分子量 +延伸单元 ×分子量 ) /多聚黄烷 - 3 -醇总摩尔数。
Note: - : no detected; mDP: mean degree of polymerization; aMM: average molecular mass.
3　讨论
研究表明 , 葡萄酒中多酚类物质具有重要的生理功能 , 是葡萄酒中重要的生理活性物质。黄烷 -
3 -醇及其多聚体具有极强的抗氧化能力 , 是葡萄和葡萄酒的重要组分之一。但由于其结构非常相似 ,
使得分离更加困难。前人对葡萄酒〔5, 17〕、葡萄果实〔2, 5, 20〕和葡萄种子〔1, 17〕中多酚物质进行研究时 , 仅
仅对 CAT、EC和 ECG 3种黄烷 - 3 - 醇进行了分离和测定 , 未能同时对 EGC、EGCG进行分离和测
定。最近 , Park等〔24〕研究茶叶片内次生代谢时 , 成功地对 EGC、EC、EGCG和 ECG 4种黄烷 - 3 -
醇进行了分离。本试验中同时对 5种黄烷 - 3 - 醇及其衍生物进行了分离 , 建立了一种简单、快速、
准确的 HPLC分析方法。
多聚黄烷 - 3 -醇是由黄烷 - 3 - 醇通过 C42C8或 C42C6聚合而来的多聚体〔5〕, 其种类繁多且结
构复杂 , 分析测定比较困难〔25〕。本试验中以赤霞珠果实为试材 , 利用 TSK HW 250 ( F) , 建立了一种
简单、易行的分离和纯化葡萄果实中多聚黄烷 - 3 - 醇的方法 , 并利用亲核剂间苯三酚在酸性环境下
进行降解 , 对其组成、平均聚合度、平均分子量进行测定 , 建立了一种快速、准确、实用的测定方
法。
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