全 文 ：© 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
学 报 , 一
乞
寄主凤凰袖对柑橘衰退病病毒甜橙分离株构成的影
响
王志刚‘ , 周常勇‘ ,
‘ , 周 彦
西南大学植物保护学院 , 重庆 中国农业科学院柑橘研究所 , 重庆
摘 要 为研究不同柑橘类型对柑橘衰退病病毒构成的影响 , 将 个保存在新会橙上的引起甜橙茎陷
点症状的柑橘衰退病毒强毒分离株嫁接接种到风凰袖后 , 比较 了接种前后 基因的 和
变化情况 。 分离株 份 与 代 接种前后的 组群没有发生变化 组群发生变化的分离株中有
个由混合组群变为单一组群 。 此外 , 除分离株 钩 接种前后的 谱带保持不变外 , 其余 个分离株从
新会橙接种到凤凰袖后 , 谱带数均呈减少趋势 。 试验结果倾向于表明某些能在甜橙上增殖的 株
系在凤凰袖上的增殖受到了抑制 。
关键词 柑橘 柑橘衰退病毒 株系构成 寄主
中图分类号 文献标识码 文章编号 一 一 一
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柑橘衰退病毒 , 引起的柑橘衰退病是世界性的柑橘病害之一 , 严重影
响我国袖类与甜橙生产 一 , , 周常勇 , 。
为线形病毒属 沉 、 成员 , 基因组为正义单链 , 存在复杂的株系分化现象 。 等
发现用 消化 的户 基因的 一 产物经琼脂糖电泳所形成的限制性片段长度多
态性 廖 印 , 尹 图谱可鉴别致病性不 同的 株
收稿 日期 一 一 修回 日期 一 一
基金项 目 国家自然科学基金项 目 重庆市科委攻关专项
通讯作者 一 爵
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期 王志刚等 寄主凤凰袖对柑橘衰退病病毒甜橙分离株构成的影响
系 。 采用这一分子鉴别系统 , 周彦等 发现重庆地区 田间 以多株系混合侵染为主 , 其中
甜橙品种的 户 廿 组群构成较抽类品种的复杂 等 调查发现我国田间甜
橙品种 以多组群混合侵染为主 宋震等 对我国袖类品种 分离株的分子鉴定表明 ,
田间袖类 优势株系为 廿 第 组群 。 这些研究表明我国田间侵染袖类的
组群构成比侵染甜橙的 组群构成单一 。 这种现象是否与 不同
株系对袖类和甜橙类的寄生适合度的差异有关 , 有待进一步的研究 。
国外的试验表明 , 在 强毒株流行地区 , 弱毒株交叉保护 。 。 、 。 ,
是防治茎陷点型衰退病的有效方法 , , 而在应用 防治 时保护株系与强毒
株的同源性决定了保护效果
,
, 。 如果寄主一 的互作导致抽类和甜橙品种中
流行的 ’强毒株以及可以复制增殖的弱毒株系有所差异 , 将增加应用 防治 的难度 , 因
此在进行 防治 时应考虑寄主种类对田间 构成的影响 。 作者利用采自田间甜橙的 个
分离株进行了寄主种类影响 株系构成的初步研究 。
材料与方法
供试材料
采用的 个 分离株采自田间表现严重茎陷点症状的甜橙 , 并通过嫁接保存在新会橙实生苗
上 。 从保存毒源的新会橙取芽和皮嫁接到 年生无毒凤凰袖嫁接苗上 , 每一分离株嫁接 株凤凰袖 ,
每一株凤凰抽嫁接 个芽 块皮 。 嫁接后将凤凰袖苗木保存于国家柑橘苗木脱毒中心温室内 , 温度控
制在 ℃ 。 所嫁接的皮和芽均成活 。 接种 个月后 , 按 等 的方法对所有接种
的凤凰袖苗进行直接组织点免疫 检测 , 表明均接种成功 。
总核酸的提取及 基因的
参照周常勇等 的方法对保存毒源的新会橙和接种 的凤凰抽进行总核酸提取 。 每株
苗从三个方向分别采样提取总核酸 , 然后混合为一个样本 。 根据 等 的方法合成 户
基因特异引物 气 飞 一 ‘ 和 ’一
, 、一 ’ , 以已知
含有 ’核酸的抽提液作正对照
, 分别以未接种 的新会橙实生苗和凤凰袖嫁接苗总核酸抽提液
作负对照 , 并设置清水为对照 , 在 型 仪 上进行 一
, 。 将 产物进行 琼脂糖电泳 , 经嗅乙锭染色后用 凝胶成像系统观察结果 。
分析
参照 等 的方法将尸 基因 一 产物与限制性内切酶 反应
体系混合 , ℃消化 , 随后进行 超纯琼脂糖电泳 , 澳乙锭染色 , 用 凝胶成像系统观察记
录酶切图谱 。
分析
将 林 基因 一 产物与变性缓冲液混合后 , 经 ℃变性 巧 , 立即置于冰水中 , 然
后进行 非变性聚丙烯酞胺凝胶电泳 , 银染后用 凝胶成像系统观察并记录结果 ,
, 。
结果与分析
基因 ·
保存于新会橙的 个分离株及其接种的凤凰袖的总核酸抽提物和正对照经 一 均扩增出一个
大约 的 片段 , 与已知的 基因大小相符 。 负对照和水对照均不能扩增出该产物 。
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园 艺 学 报 卷
分析
根据 , 等 对 尸 划分组群的标准 , 个 分离株中 , 分离株
钩 、 犯 从新会橙接种到凤凰抽后 , 组群无变化 , 分别是第 组群和 、 、
混合组群 。 其余 个分离株从新会橙接种到凤凰袖后 , 组群都发生 了变化 , 其中分
离株 犯 在新会橙上是 组群 , 接种在 株凤凰袖上分别是 组群 ,
、 混合组群和 组群 , 另
外 个分离株均由混合组群变为单一组群 。 如图 , 表 所示 。
图 个 分离株的 石瓦刀 图谱
梯度 保存于新会橙的分离株 长 】,
、
混合组群
一 接种到凤凰抽后的分离株 犯 , 组群 保存于新会橙的分离株 鸦 ,
、
混合组群
一 接种到凤凰袖后的分离株 ”
, 组群 保存于新会橙的分离株 犯 ,
、
混合组群 接种到凤凰袖后的分离株 犯 , 班组群 。
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表 从新会橙接种到凤凰袖后的 组群和 变化
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保存在新会橙上的 脚 分离株
, , 接种到凤凰袖后的 刊 分离株 。
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刊
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期 王志刚等 寄主凤凰袖对柑橘衰退病病毒甜橙分离株构成的影响
分析
个 分离株中 , 分离株 钓 从新会橙接种到凤凰袖后的户 谱带无变化 , 其余 个
分离株接种到凤凰抽后的 特征性谱带数均呈减少趋势 。 如表 , 图 所示 。
图 两个 分离株从新会橙接种到凤凰抽后的 结果
保存在新会橙上的 分离株 犯 一 接种到凤凰抽后的 分离株 犯
保存在新会橙上的 分离株 几 一 接种到
凤凰抽后的 分离株 犯 。
那 蜘盆
咒 罗 一 犯
程
一 犯
讨论
在新会橙上除分离株 叨 是 组群
、
分离株 犯 是 组群外其余分离株均是混合组群 而 比
廿 更加灵敏的 的结果表明这 个分离株均有 条以上的 条带 表 。 这说明本试验所
采用的毒源都是混合株系 。
等 通过血清学方法研究 , 认为甜橙茎 陷点株系
、 宽皮柑橘茎陷点株系和普通苗黄
株系在袖类上不能复制增殖 。 本试验也表明某些存在于甜橙上的株系在凤凰抽上可能受到了抑制 。 当
然 , 本试验中在凤凰袖上 “ 被抑制 ” 的 株系是否在凤凰袖上 已经被清除 , 还需要作进一步的试
验 。
分离株 叨 接种前后均是 组群 , 谱带亦无变化 同时 , 混合组群中含有 组群的分离株
、 代 、 代 在接种到凤凰袖后都是单一的 组群 , 这表明凤凰袖对 组群的 株系的
复制增殖没有抑制 。 这也许是 廿 班组群是 田间袖类 主要流行组群的原因 。
分离株 , 保存在新会橙上是 户 组群 , 接种到凤凰袖上后改变为 组群 ,
、 混合组群和 组群 , 其 谱带变化也较为特别 表 。 该现象可能由于该分离株在新
会橙上原本含有 、 混合组群的株系 , 但是 组群的株系含量低 , 以至表现为单纯的 户
组群 而该分离株当中属于 组群的株系在凤凰袖上 的增殖复制受到了抑制 , 属于 组
群的株系得以较多地增殖 , 所以在 个凤凰抽样本中分别表现为 组群 ,
、 混合组群和 组
群 。 当然 , 也可能由于 在寄主上的分布不均 ’ , , 该分离株在嫁接接种用的
新会橙芽和皮上就存在株系的分离现象 , 进而导致该分离株如此特别的表现 。 这一现象与徐小峰
等 单蚜传毒分离 班组群 分离株获得 组群 ,
、 混合组群和
组群分离株的现象类似 。
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园 艺 学 报 卷
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周常勇 , 周 彦 , 王雪峰 , 唐科志 以拓 柑橘衰退病毒袖类分离株的分子鉴定 病毒学报 , 一
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徐小峰 , 宋 震 , 周 彦 , 邹 敏
, 周常勇 通 过单蚜传毒分离纯化柑橘衰退病毒 分离物 西南 园艺 ,
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周常勇 我国柑桔衰退病的发生概况与展望 见 刘 仪主编 第一次全国植物病毒与病毒病防治研究学讨论会论文集
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北京 中国农业科技出版社 一
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周常勇 , 。汕
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周 彦 , 周常勇
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重庆地区柑桔衰退病毒多态性分析 植物保护学报 , 一