全 文 :园 艺 学 报 2006, 33 (5) : 957~962
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期 : 2005 - 11 - 08; 修回日期 : 2006 - 06 - 01
基金项目 : 国家 ‘863’项目 (2001AA241143) ; 国家科技攻关项目 (2002BA515B10 - 4)
早熟油桃子叶和胚轴离体培养再生植株的研究
韩明玉 张满让 田增胜 孙跃峰 田玉命 王安柱 赵彩平
(西北农林科技大学园艺学院 , 陕西杨凌 712100)
摘 要 : 以早熟油桃 ‘华光 ’和 ‘曙光 ’为试材 , 对影响其子叶和胚轴再生的植物生长调节剂浓度及
组合、培养基、胚发育时期等因素进行了研究。结果表明 : 子叶培养中 , 华光花后 60 d为最佳取材时期 ,
其子叶在 MS + TDZ 2 mg/L +NAA 0104 mg/L的培养基上再生率为 75% ; 曙光则要取花后 68 d成熟期子叶 ,
其在 MS +BA 8 mg/L +NAA 0104 mg/L培养基上再生率为 6617%。胚轴培养中 , 上、下胚轴无显著差异 ,
华光胚轴再生以 G + TDZ 310 mg/L + KT 110 mg/L + NAA 310 mg/L效果较好 ; 曙光胚轴再生以 QL + TDZ
210 mg/L +NAA 015 mg/L效果较好。
关键词 : 油桃 ; 胚轴 ; 子叶 ; 再生植株
中图分类号 : S 66211 文献标识码 : A 文章编号 : 05132353X (2006) 0520957206
Plan t Regenera tion w ith in V itro Culture from Cotyledon s and Hypocotyls of
Early2r ipen Nectar ines ( P runus persica var. nec ta rina )
Han M ingyu, ZhangManrang, Tian Zengsheng, Sun Yuefeng, Tian Yuming, Wang Anzhu, and Zhao Caip ing
(College of Horticulture, N orthw est A & F U niversity, Yang ling, Shaanxi 712100, China)
Abstract: The cotyledons and hypocotyls of early2ripen nectarine varieties, ‘Huaguang’ and ‘Shu2
guang’, were cultured in order to study the factors affecting their regeneration, such as density and combina2
tion of p lant growth moderators, culture medium and embryo develop ing phases. Cotyledons of different devel2
opment stages, namely 30, 40, 50, 60 days after blossom and mature cotyledons respectively, was cultured
with MS medium m ixed with BA, TDZ, ZT, KT and NAA. The results showed that the best time to culture
cotyledons of‘Huaguang’was 60 days after blossom and the regeneration rate of the cotyledons was 75%
when they were cultured with MS + TDZ 2 mg/L +NAA 0104 mg/L. Mature cotyledons, 68 days after blos2
som , were the best for‘Shuguang’and the regeneration rate was 6617% when the cotyledons were cultured
with MS +BA 8 mg/L +NAA 0104 mg/L. There was no remarkable difference between upper and lower hypo2
cotyls in their culture. The G medium combined with TDZ 310 mg/L , KT 110 mg/L , and NAA 310 mg/L was
the best for Huaguangpis hypocotyls regeneration. The QL medium combined with TDZ 210 mg/L and NAA 015
mg/L was the best for Shuguangpis hypocotyls regeneration. The hypocotyls could directly regenerate p lants.
Key words: Nectarine; Hypocotyl; Cotyledon; Plant regeneration
建立高效稳定的再生体系一直是桃基因工程发展的甁颈〔1〕。国外对合子胚再生已有较多的研
究〔2~5〕, 以合子胚的各部分 (包括胚轴和子叶 ) 为外植体可诱导器官发生〔3〕和体细胞发生〔2, 4, 5〕, 但
再生率低 ; 国内栽培品种研究较少 , 且主要集中在中晚熟品种上〔6〕, 并且也存在再生率不稳定、再
生效果不理想等问题。
油桃 ( P runus persica var. nectarina) 是目前我国桃育种的主要方向 , 特别是早熟油桃再生体系的
研究还没有相关报道。
作者进行了早熟油桃 ‘华光 ’和 ‘曙光 ’不同时期子叶再生植株的研究 , 以这两个品种幼胚的
胚轴为外植体进行离体培养 , 以期建立一个稳定的油桃再生体系 , 为以后通过基因工程改良油桃的性
园 艺 学 报 33卷
状奠定基础。
1 材料与方法
111 材料
果实取自陕西杨凌夏家沟村 , 以 ‘华光 ’ (丽格兰特 ×瑞光 2号 ) 和 ‘曙光 ’ (瑞光 3号 ×
NJN76) 为试材 , 其生育期分别是 65 d和 68 d, 分别取花后 30、40、50、60 d和成熟期果实。果实
成熟后胚的大小为 015 mm左右。
112 子叶培养再生植株试验
11211 采样时期及细胞分裂素的筛选 各发育阶段 (盛花后 30、40、50、60 d) 和成熟期果实均取
100个 , 灭菌后进行接种〔7〕, 接种前先把子叶划伤。每瓶接种 4片子叶 , 每个处理 3瓶 , 重复 5次。
基本培养基均为 MS; 细胞分裂素为 62BA、TDZ、ZT、KT; 生长素 NAA; 蔗糖 30 g /L; 琼脂 517 g/L;
pH 518。接种后先暗培养 28 d, 然后转入光下进行光、暗交替培养 , 光周期为 14 h, 温度均为 (25 ±
2) ℃。
11212 培养基筛选 选用 MS、G、W PM为基本培养基〔8〕, 细胞分裂素为 62BA 510 mg/L , 生长素为
NAA 0104 mg/L, 培养条件同上 , 确定子叶再生的最佳培养基。
11213 暗培养天数的筛选 暗培养天数设 4个处理 : 14、21、28、35 d, 基本培养基为 MS, 附加
62BA 510 mg/L, NAA 0104 mg/L。每瓶 4个子叶 , 每个处理重复 15次。均放在光下培养 40 d后统计
不定芽再生数量。
11214 不定芽的增殖及再生苗的生根 子叶再生的不定芽分别转至 W PM、MS和 G培养基上 , 均添
加 62BA 210 mg/L, IBA 015 mg/L , 1个月以后统计增殖效果。子叶再生的不定芽经增殖后接种在
1 /2MS培养基 , 分别附加不同浓度 IBA上生根 , 调查生根率和每个茎尖平均有效根数量。
113 胚轴培养再生不定芽试验
11311 胚轴的部位对其再生不定芽的影响 将早熟油桃华光发育 65 d、曙光发育 68 d的成熟胚灭
菌、剥皮接种到 W PM + 62BA 110 mg/L + IBA 012 mg/L的培养基上 , 培养 14~20 d后 , 下胚轴发育
为 018~110 cm , 上胚轴发育为 110~115 cm。
将萌发的上胚轴由中间分开切成上下两部分 , 然后将上下部分及下胚轴分别切成 5 mm左右的小
段 , 中间用手术刀刻伤 , 华光接种于 G + TDZ 310 mg/L + KT 110 mg/L +NAA 310 mg/L , 曙光接种于
QL + TDZ 210 mg/L +NAA 015 mg/L培养基中 , 常温光下培养 , 28 d后统计再生率。每个三角瓶接种
5段 , 每个处理 2瓶 , 重复 6次。
11312 暗培养和培养基对胚轴再生不定芽的影响 将萌发的小苗的上下胚轴分别切成 5 mm左右的
小段 , 中间用手术刀刻伤 , 接种于 G + TDZ 310 mg/L + KT 110 mg/L + NAA 310 mg/L和 QL + TDZ
210 mg/L +NAA 015 mg/L培养基中 , 常温下暗培养 0、7和 14 d后 , 转入正常光下培养 , 28 d后统
计再生率。每瓶接种 5段 , 每个处理 2瓶 , 重复 6次。
11313 生长调节剂组合对上胚轴再生不定芽的影响 将萌发的小苗的胚轴分别切成 5 mm左右的小
段 , 中间用手术刀刻伤 , 接种于不同浓度的 TDZ、KT和 NAA 组合胚轴再生培养基 G21~G26和
QL21~QL26 (详见表 6) 中 , 常温光下培养 , 28 d后统计再生率。每个三角瓶接种 5段 , 每个处理 2
瓶 , 重复 6次。
114 试验数据的记录与处理
在每次进行数据记录的同时记录外植体的生长状态及愈伤组织的形态等。再生率 ( % ) = (再
生不定芽外植体数 /接种外植体数 ) ×100; 平均再生不定芽数 =再生不定芽总数 /能再生的外植体
数。数据处理采用 SAS 811统计分析软件进行。
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5期 韩明玉等 : 早熟油桃子叶和胚轴离体培养再生植物的研究
2 结果与分析
211 子叶培养再生植株
21111 不同培养基的影响 将华光和曙光花后
60 d的子叶分别接种至 G、W PM、MS培养基上 ,
1个月后统计再生不定芽的子叶外植体数 , 计算
再生率。
由表 1可知 , 在 3种培养基中 , MS培养基上
再生率最高 , W PM培养基上最低 , 说明 MS为油
桃子叶再生植株的较适培养基。
21112 不同取样时期及细胞分裂素的影响 不同 表 1 子叶培养中不同培养基对再生率的影响Table 1 Effects of d ifferen t m ed ium in cotyledon s cultureon the regenera tion ra te ( % )培养基Medium 62BA(mg/L) NAA(mg/L) 华光Huaguang 曙光ShuguangW PM 510 0104 8133 ±3143c 16167 ±7143bMS 510 0104 40100 ±5161a 31167 ±6108aG 510 0104 28133 ±4188b 20100 ±5154b 注 : 同一列中不同字母表示邓肯氏新复极差测验在 P < 0105水平下差异显著。Note: D ifferent letters in the same column mean significance atP < 0105 level by Duncanpis SSR test.
取样时期的子叶 , 再生能力差异很大。花后 30、40和 50 d可能由于果实种胚太小 , 华光和曙光两个
品种的子叶再生率均为 0。花后 60、65及 68 d的子叶在不同细胞分裂素的作用下 , 再生率为 0~
75100%。
由表 2可以看出 : (1) 细胞分裂素 TDZ对华光的子叶再生作用效果明显高于 62BA、ZT和 KT。
TDZ浓度为 2 mg/L时 , 华光花后 60 d的子叶再生率可高达 75100% , 且子叶再生不定芽最高可达 15
个。而 ZT效果最差。华光花后 65 d的子叶比花后 60 d的子叶在不同细胞分裂素及其浓度处理中再生
率差异较小。 (2) 曙光花后 68 d的子叶在 62BA浓度为 8 mg/L时再生率为 66167% , 子叶再生不定
芽最高可达 17个 , 且不定芽生长快 , 叶色鲜绿。曙光花后 68 d的子叶比花后 60 d的子叶在不同细胞
分裂素及其浓度处理中再生率差异较小。由此可见 , 华光的最佳取样时期为花后 60 d, 细胞分裂素为
TDZ 2 mg/L; 曙光为花后 68 d, 62BA 8 mg/L。
表 2 子叶培养中细胞分裂素对再生率的影响
Table 2 Effects of d ifferen t cytok in in s in cotyledon s culture on the regenera tion ra te ( % )
细胞分裂素
Cytokinin (mg/L)
华光 Huaguang
花后 60 d
60 days after blossom
花后 65 d
65 days after blossom
曙光 Shuguang
花后 60 d
60 days after blossom
花后 68 d
68 days after blossom
62BA 2 8133 ±2123f 42186 ±5166b 33133 ±3109b 33133 ±4176b
4 25100 ±3151d 41167 ±5117b 25100 ±3167c 40100 ±3175b
6 50100 ±4146b 30100 ±3137d 25100 ±4146c 50100 ±4161a
8 8133 ±3103f 20100 ±4103d 50100 ±5137a 66167 ±5172a
TDZ 2 75100 ±5157a 55156 ±4196a 33133 ±4151b 25100 ±3183c
4 58133 ±4195b 50100 ±5102a 16167 ±2194d 16167 ±3143c
6 50100 ±4167b 50100 ±5119a 25100 ±4148c 8133 ±2197d
8 41167 ±3149c 40100 ±4148b 33133 ±4161b 8133 ±3174d
ZT 2 0 16167 ±3166e 0 16167 ±3166c
5 0 25100 ±3149c 0 16167 ±4132c
8 16167 ±3108e 33133 ±2129d 16167 ±3183d 41167 ±6117b
KT 2 0 16167 ±4103e 0 0
5 16167 ±2193e 25100 ±5181d 0 16167 ±4119c
8 33133 ±3161d 50100 ±5159a 16167 ±4152d 16167 ±5102c
注 : NAA均为 0104 mg/L。同一列中不同字母表示邓肯氏新复极差测验在 P < 0105水平下差异显著。
Note: NAA concentration is 0104 mg/L. D ifferent letters in the same column mean significance at P < 0105 level by Duncanpis SSR test.
21113 不同暗培养时间的影响 由表 3可知 , 对于华光 , 暗培养 28 d为最佳。对于曙光 , 暗培养 28
d与 35 d为佳 , 二者差异不显著。暗培养 14 d的子叶仅仅变黄、膨大 , 子叶基部与划伤处没有出现
芽状突起 , 转入光暗交替培养 10 d后 , 子叶转绿 , 但最终无不定芽产生。暗培养时间过长也不利于
不定芽的产生。
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园 艺 学 报 33卷
21114 子叶再生不定芽的观察结果 接种后先进
行暗培养 , 暗培养 10 d左右 , 子叶开始膨大变黄 ,
至 18 d时 , 部分子叶基部和划伤处开始出现乳白
色芽状突起 , 随着暗培养时间的延长 , 芽状突起不
断的增多 , 至 28 d时 , 基本上每个处理上都有芽
状突起。转入光下培养一周后 , 子叶转绿 , 芽状突
起开始萌发 , 产生不定芽 , 此后 20 d之内是不定
芽再生的高峰时期 , 最高每片子叶上再生不定芽高
达 17个 , 40 d后每个处理都不再产生不定芽。
21115 不定芽的增殖与生根 把子叶再生的不定
芽转至增殖培养基 W PM、MS和 G (均添加 62BA 表 3 子叶暗培养时间对再生率的影响Table 3 Effect of cotyledon s culture tim e in the dark onthe regenera tion ra te ( % )暗培养时间Days in the dark ( d) 华光Huaguang 曙光Shuguang14 0 021 7114 ±2143c 5100 ±2138b28 37193 ±4101a 21167 ±4117a35 30100 ±3145b 16167 ±4162a 注 : 同一列中不同字母表示邓肯氏新复极差测验 P < 0105水平差异显著。Note: D ifferent letters in the same column mean significance atP < 0105 level by Duncanpis SSR test.
210 mg/L、 IBA 015 mg/L) , 一个月以后统计其增殖效果。结果表明 , 不定芽在 G + 62BA 210 mg/L +
IBA 015 mg/L培养基上增殖效果最好 , 平均每个不定芽可增殖 4~5个幼苗 , 且叶色鲜绿 , 部分苗高
可达 3 cm左右。
将增殖后得到的再生苗接种至生根培养基上 (表 4) , 华光的生根率均在 9414%以上 , 以 IBA浓
度为 214 mg/L时 , 每个再生苗平均有效根数最高 , 为 6194个 , 与 IBA 014和 112 mg/L处理差异极
显著。曙光的生根率最高为 9414% , 此处理的每个再生苗的有效根数量也最高 , 为 5172个 , 与其它
处理的差异极显著。
表 4 不同浓度 IBA对再生苗生根的影响
Table 4 Effect of d ifferen t IBA concernm en t on rooting of shoots
培养基
Medium
IBA
(mg/L)
华光 Huaguang
生根率
Rate of rooting( % )
平均生根数 Means of root
number of shoot(条 /再生苗 )
曙光 Shuguang
生根率
Rate of rooting( % )
平均生根数 Means of root
number of shoot(条 /再生苗 )
1 /2MS 014 9414 3156 ±0140 C 8819 2183 ±0141 B
1 /2MS 018 9414 5172 ±0143 CBA 6617 2100 ±0144 B
1 /2MS 112 100 4117 ±0127 C 7718 3128 ±0152 B
1 /2MS 116 9414 5117 ±0140 CBA 6617 2111 ±0142 B
1 /2MS 210 100 6122 ±0133 BA 9414 5172 ±0140 A
1 /2MS 214 100 6194 ±0129 A 6111 3128 ±0165 B
注 : 表中平均值后不同字母表示邓肯氏新复极差测验差异极显著 ( P < 0101)。
Note: D ifferent letters in the same column mean significance at P < 0101 level by Duncanpis SSR test.
212 胚轴培养再生不定芽
21211 胚轴的不同部位及极性再生不定芽能力的差异 试验发现 , 上、下胚轴在再生能力上没有差
异。但由于上胚轴伸长较下胚轴长 , 因而更适合用做胚轴再生。由表 5可以看出 , 上胚轴的形态学上
部再生率与下部差异显著。形态学上部无论在再生率和每外植体再生不定芽数上均比下部高 , 这可能
是胚轴生长的极性所造成的。
表 5 上胚轴的不同部位再生不定芽能力的差异
Table 5 Effect of m orphology position on plan t d irect regenera tion from hypocotyl
形态学位置
Morphology position
华光 Huaguang
再生率
Regeneration rate ( % )
再生不定芽数 Means of shoots
number of regenerating exp lants
曙光 Shuguang
再生率
Regeneration rate ( % )
平均再生不定芽数 Mean of shoots
number of regenerating exp lants
上部 Up 23104 ±3146a 2110 ±0136 19198 ±5112a 1179 ±0166
下部 Down 16173 ±5103b 1183 ±0144 14109 ±4179b 1106 ±0174
注 : 同一列中不同字母表示邓肯氏新复极差测验 P < 0105水平差异显著。
Note: D ifferent letters in the same column mean significance at P < 0105 level by Duncanpis SSR test.
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5期 韩明玉等 : 早熟油桃子叶和胚轴离体培养再生植物的研究
21212 暗培养时间及培养基对上胚轴再生不定芽的影响 试验结果表明 , 暗培养 0、7和 14 d对胚
轴再生不定芽的影响没有显著差异 , 华光再生率在 17193% ~19129%之间 , 曙光再生率在 16123% ~
17118%之间。
G和 QL培养基上华光上胚轴再生不定芽的情况没有显著差异 (再生率为 19149%和 18152% ) ;
但曙光品种有显著差异 , 在 G培养基上再生率为 16150% , 在 QL培养基上为 18187%。
21213 生长调节剂组合对上胚轴再生不定芽的影响 由表 6可以看出 , 华光油桃在 G培养基上以 G2
5的再生率最高达到 23143% , 与其它处理差异显著 ; 在 QL培养基上以 QL23的效果最好 , 再生率达
到 18162% , 与其它处理差异显著 ; 在 QL22培养基上每个外植体再生不定芽数量最多 , 为 2101个。
曙光油桃在 G培养基上以 G24再生率最高达到 16169% , 与其它处理差异显著 ; 在 QL培养基上以
QL24的效果最好 , 再生率达到 17147% , 与其它处理差异显著 ; 在 QL25培养基上每个外植体再生不
定芽数量最多 , 为 1133个。
表 6 不同生长调节剂 ( PGR) 组合对上胚轴再生不定芽的影响
Table 6 Effect of d ifferen t com b ina tion s of plan t growth regula tors ( PGR) on plan t d irect regenera tion from hypocotyl
编号
Code
PGR (mg/L)
TDZ KT NAA
华光 Huaguang
再生率 Regeneration
rate ( % )
再生不定芽数 Means of shoots
number of regenerating exp lant
曙光 Shuguang
再生率 Regeneration
rate ( % )
再生不定芽数 Mean of shoots
number of regenerating exp lant
G21 0 015 110 0 - 0 -
G22 015 210 0 0 - 7133 ±2107c 1101 ±0137
G23 110 410 410 8138 ±1144c 1139 ±0128 10139 ±1138b 1129 ±0133
G24 210 0 015 16181 ±4143b 1117 ±0130 16169 ±3137a 1103 ±0134
G25 310 110 310 23143 ±3139a 1108 ±0121 11178 ±4134b 1127 ±0136
G26 410 310 210 8132 ±3151c 1122 ±0129 6163 ±2146c 1121 ±0131
QL21 0 015 110 0 - 0 -
QL22 015 210 0 11131 ±2139c 2101 ±0155 0 -
QL23 110 410 410 18162 ±3144a 1113 ±0141 6135 ±3136d 1118 ±0144
QL24 210 0 015 14153 ±2141b 1109 ±0129 17147 ±2143a 1106 ±0139
QL25 310 110 310 6167 ±1138d 1151 ±0138 11119 ±4133b 1133 ±0134
QL26 410 310 210 0 - 9196 ±1139c 1107 ±0139
注 : 同一列中不同字母表示邓肯氏新复极差测验 P < 0105水平差异显著。
Note: D ifferent letters in the same column mean significance at P < 0105 level by Duncanpis SSR test.
3 讨论
311 在早熟油桃的子叶再生培养中 , 华光品种以花后 60 d为最佳取材时期 , 其子叶在 MS + TDZ 2
mg/L +NAA 0104 mg/L的培养基上再生率为 75100% ; 曙光则要取其花后 68 d成熟期子叶 , 其在 MS
+ 62BA 8 mg/L +NAA 0104 mg/L培养基上再生率为 66167%。胚轴再生培养中 , 胚在果实成熟后适于
作为胚轴再生的外植体 , 上、下胚轴无显著差异 , 暗培养对再生的影响差异不显著。华光油桃胚轴再
生以 G + TDZ 310 mg/L + KT 110 mg/L + NAA 310 mg/L效果较好 ; 曙光油桃胚轴再生以 QL + TDZ
210 mg/L +NAA 015 mg/L效果较好。再生的不定芽经增殖后在 1 /2MS培养基中 , 华光油桃在 IBA浓
度为 214 mg/L时 , 曙光油桃在 IBA浓度为 210 mg/L时其生根率和每个茎尖的有效根数量最高。
312 细胞分裂素为 TDZ的处理中 , 每个处理中都有子叶再生植株 , 且再生率差别不大 , 但是 , 随着
TDZ浓度的增加 , 玻璃化苗增多 , 且有深绿色类似叶片的组织大量出现在子叶划伤处 , 这些组织最终
不能发育成苗。在细胞分裂素为 62BA的处理中 , 不定芽生长快 , 暗培养 28 d后 , 放入光下培养 20 d
即有大量不定芽高度达 2 cm, 而细胞分裂素为 TDZ的处理中不定芽生长慢 , 暗培养 28 d后 , 放入光
下培养 40 d, 高度才达 1 cm。细胞分裂素 ZT、KT的效果明显不如 62BA和 TDZ, 再生率较低 , 不定
芽发生少 , 每片子叶仅有不定芽 1~2个 , 而在 62BA和 TDZ的处理中 , 许多子叶上再生的不定芽数
可高达 10个以上。
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园 艺 学 报 33卷
在细胞分裂素为 TDZ的处理中 , 在子叶表面产生的扭曲肥大类似叶片的组织 , 与阎国华等〔1〕在
子叶再生中报道的 “肥厚、发育畸形的类叶片形态 ”应该是同一种结构的物质 , 这些组织可能是在
高浓度细胞分裂素的强烈刺激下产生的 , 如果及时将其转入另外一种合适的培养基 , 能否产生不定
芽 , 值得做进一步探讨。
313 阎国华等〔7〕报道了以京艳和晚蜜合子胚下胚轴为外植体直接再生不定芽 , 其中京艳最高再生率
为 9512% , 晚蜜为 4313%。本试验表明 , 早熟油桃华光和曙光也能由其上、下胚轴直接再生不定芽 ,
但是再生率较低 , 产生的不定芽从胚轴的形态学上端未产生愈伤组织的地方生出。华光最高再生率为
23143% , 曙光为 17147%。这其中的差异可能是由于品种不同而造成的。对于早熟油桃胚轴再生不
定芽应继续研究 , 提高再生率 , 以利于稳定高效再生体系的建立。
张永庆等〔9〕报道了以玉露桃叶片、胚轴、未成熟胚等为外植体进行再生研究 , 结果发现 , 大部
分外植体均能产生愈伤组织 , 但是只有花后 45~50 d或 75 d的未成熟胚产生的愈伤组织能够分化出
不定芽。本试验发现 , 在胚轴再生不定芽的诱导中 , 几乎所有的处理均能产生愈伤组织 , 其中部分为
乳白色或淡黄色球粒状、质地疏松的胚性愈伤组织。但既使产生的胚性愈伤组织转接到附加 IBA 110
mg/L + KT 110 mg/L的 G培养基中 , 在继代 2~3次后也会变褐死亡 , 而不能够分化出不定芽。
314 影响桃子叶再生不定植株的因素很多 , 本试验仅仅从基本培养基、细胞分裂素、取样时期和暗
培养天数等几个方面做了一些探讨。子叶再生不定芽的过程是子叶基因型、培养基、激素配比、暗培
养时间等等一系列因子复杂的相互作用过程 , 其中还有许多问题值得进行深入的探讨。
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