全 文 ：园 　艺 　学 　报 　2005, 32 (6) : 1080～1083
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期 : 2005 - 01 - 14; 修回日期 : 2005 - 05 - 24
基金项目 : 教育部优秀教师资助计划项目 ( 2075 ) ; 高等学校全国优秀博士学位论文作者专项基金项目 ( 200253 ) ; 农业部
‘948’项目 (2004246)3 通讯作者 Author for correspondence ( E2mail: htang@ sicau1edu1cn)
不同基因型梨叶片离体培养和植株再生
刘翠琼　汤浩茹 3 　罗　娅
(四川农业大学林学园艺学院 , 雅安 625014)
摘 　要 : 以 ‘巴梨 ’、‘身不知 ’和 ‘早酥 ’梨试管苗叶片为外植体 , 对不定芽进行了诱导、增殖和生
根。重点探讨了基本培养基、植物生长调节剂配比、AgNO3 不同浓度和 NH +4 2N与 NO -3 2N比例对不定芽再
生的影响。结果表明 , MS + TDZ 015 mg/L + IBA 011 mg/L为 ‘巴梨 ’叶片不定芽发生的最佳培养基。在
QL + TDZ 110 mg/L +NAA 011 mg/L培养基上 , 暗培养 3周后转光下培养 , ‘身不知 ’和 ‘早酥 ’分别获得
8916%、8112%的不定芽再生率和 3145、3173的平均再生芽数 ; 对 ‘巴梨 ’和 ‘早酥 ’不定芽再生有效
促进的 AgNO3 浓度范围为 011～015 mg/L, 011～410 mg/L的 AgNO3、1∶2～7的 NH +4 2N∶NO -3 2N和 21150
mmol/L的 K+对 ‘身不知 ’叶片再生均有促进作用 , 缺乏 NH +4 2N不利于不定芽的再生 ; 转移到 MS + BA
110 mg/L + IBA 011 mg/L培养基上能快速增殖 ; 在 MS、1 /4MS + IBA 110～215 mg/L +蔗糖 5～15 g/L +活
性炭 015～110 g/L上获得了不同程度的生根苗。
关键词 : 梨 ; 叶片 ; 再生 ; 组织培养
中图分类号 : S 66112　　文献标识码 : A　　文章编号 : 05132353X (2005) 0621080204
L eaf Culture and Plan tlet Regenera tion of Pears w ith D ifferen t Genotypes
L iu Cuiqiong, Tang Haoru3 , and Luo Ya
(College of Forestry and Horticu lture, S ichuan A gricultura l U niversity, Yapian 625014, Ch ina)
Abstract: Taking leaves from the vitro cuttings of Pyrus comm unis L. ‘Bartlett’, P. pyrifolia Nak.
‘Shenbuzhi’and P. bretschneideri Rhed. ‘Zaosu’as exp lants, the adventitious bud were induced, p ropa2
gated, and rooted. The effects of basic media, p lant growth regulators and their concentration, AgNO3 with
different concentration and the ratios of the nitrate: ammonium on adventitious bud regeneration were studied.
The results showed that the best bud regeneration medium from leaves of‘Bartlett’wasMS + TDZ 015 mg/L
+ IBA 011 mg/L. The bud regeneration rate of‘Shenbuzhi’ and ‘Zaosu’ respectively from leaves was
reached 8916% and 8112% , with an average regeneration buds of 3145 and 3173 on QL + TDZ 110 mg/L +
NAA 011 mg/L after three weeks dark p retreatment. The bud regeneration frequency of‘Shenbuzhi’ from
leaves was enhanced on medium containing AgNO3 011 - 410 mg/L , 1∶2 - 7 of the nitrate: ammonium with
K+ 21150 mmol/L , while inhibited without nitrate; The subculture medium for in vitro p roliferation of three
cultivars wasMS +BA 110 mg/L + IBA 011 mg/L; The rooting rate in varying degrees was obtained in the
media ofMS, 1 /4MS supp lemented with IBA at 110 - 215 mg/L and sucrose at 5 - 15 g/L and AC ( actived
charcoal) at 015 - 110 g/L.
Key words: Pear; Leaf; Regeneration; Tissue culture
1　目的、材料与方法
有关梨的叶片不定芽再生的研究虽有一些报道 , 但再生率 (尤其是出芽数 ) 普遍较低〔1, 2〕。本试
验以 ‘巴梨 ’ ( Pyrus comm unis L. ‘Bartlett’)、‘身不知 ’ ( P. pyrifolia Nak. ‘Shenbuzhi’) 和 ‘早
酥 ’ ( P. bretschneideri Rhed. ‘Zaosu’) 3个品种为试材 , 对试管苗叶片进行了不定芽的诱导、增殖
和生根 , 并重点探讨了影响高频不定芽再生的因素。
　6期 刘翠琼等 : 不同基因型梨叶片离体培养和植株再生 　
2001年春从四川农业大学梨品种资源圃 25年生树上采集刚萌动的芽培养出试管苗 , 然后取继代
35～40 d的试管苗顶部刚展开的叶片 , 剪去叶柄 , 垂直于叶片中脉横切 2刀 , 以远轴面接触培养基 ,
接种在 MS、NN69和 QL〔3〕并附加不同植物生长调节剂 (表 1) 的诱导培养基上 , 用 Parafilm密封 ;
然后在筛选出的最佳培养基上附加不同浓度的 AgNO3 (表 2) ; 同时以 ‘身不知 ’为试材 , 用 KNO3
调节 NN69培养基中 NH +4 2N 与 NO -3 2N 的不同比例 (表 3)。各处理均添加蔗糖 30 g/L , 琼脂 615
g/L, pH 518。每品种接种 30～40个叶片 , 先暗培养 3周 , 然后转移至光下培养 , 50 d时统计不定芽
再生率和再生芽数。试验重复 3次。培养条件为 (25 ±1) ℃, 光照 4 800 lx, 光周期 16 h /d。
2　结果分析与讨论
211　叶片不定芽的诱导
21111　叶片不定芽的生长动态 　暗培养约 10 d, 叶片开始隆起肿胀 , 叶脉膨大 , 在切口处开始产生
少量的白色愈伤组织。25 d左右 , 在叶片远轴端、近轴端伤口处、叶片中脉处均分化出了单芽或丛
芽 (图版 , 1～3) , 甚至少数叶片还发育出了体胚苗 (图版 , 4)。30～40 d时不定芽大量形成 , 随后
产生不定芽的速度逐渐减缓 , 仅是不定芽伸长生长形成不定梢。
21112　培养基和植物生长调节剂对不同基因型不定芽再生的影响 　在相同的培养基 QL + TDZ 110
mg/L +NAA 011 mg/L上 , ‘身不知 ’和 ‘早酥 ’的不定芽再生率高达 8916%和 8112% , 平均每叶不
定芽数也达 3145和 4173, 而 ‘巴梨 ’却仅为 1016%和 1185 (表 1) ; 而且 ‘身不知 ’叶片产生不定
芽的速度较快 , 接种后 20 d左右就可见不定芽大量发生。由此可见 , 基因型对梨不定芽的再生率起
着十分重要的作用。
表 1　不同品种不同培养基对梨叶片不定芽再生率和每叶再生芽数的影响
Table 1　Effects of spec ies and m ed ia on bud regenera tion ra te and num ber of buds per leaf
基本培养基
Basic media
植物生长调节剂
Plant growth regulator
(mg/L)
BA IBA NAA TDZ
巴梨 Bartlett
再生率
Regeneration
rate ( % )
再生芽数
Number of buds
per leaf
身不知 Shenbuzhi
再生率
Regeneration
rate ( % )
再生芽数
Number of buds
per leaf
早酥 Zaosu
再生率
Regeneration
rate ( % )
再生芽数
Number of buds
per leaf
MS 3 011 0 0 0 0 0 0
MS 6 011 1113 0134 516 0178 416 0141
MS 6 011 2412 0165 814 0183 613 0150
MS 011 015 6218 3100 1813 1150 1015 0186
NN69 011 015 2619 1178 5910 1166 1911 1103
NN69 5 014 1216 1123 3516 1138 1119 1100
NN69 011 110 1615 2110 7114 2132 5217 1188
NN69 011 115 3510 1152 6216 2145 2918 1112
NN69 014 110 2713 2103 2116 1123 7510 4115
QL 011 110 1016 1185 8916 3145 8112 4173
QL 011 015 1510 1121 2517 1152 2513 1120
基本培养基的种类影响着不定芽的再生效果 , 同时这种效果还因基因型的不同而异。对 ‘巴梨 ’
而言 , 在 TDZ 015 mg/L + IBA 011 mg/L组合中 , MS对不定芽的诱导效果明显好于 NN69, 表现为再
生率高 , 再生不定芽数量大 (图版 , 5) , 这与 Shibli等的研究结果〔4〕相同 , QL效果最差 , 表明 MS +
TDZ 015 mg/L + IBA 011 mg/L是 ‘巴梨 ’最适宜的不定芽诱导培养基 ; 而对于 ‘身不知 ’和 ‘早
酥 ’而言 , 再生效果 QL >NN69 >MS。在 QL + TDZ 110 mg/L +NAA 011 mg/L培养基上 , 再生率分别
达到了 8916% (图版 , 6) 和 8112% ; 相反在 MS培养基上的叶片产生的愈伤特别容易褐变。
此外 , 叶片不定芽的再生能力还受植物生长调节剂种类及其浓度的影响。在 MS + IBA 011 mg/L
培养基上 , 015 mg/L的 TDZ对不定芽的诱导率普遍高于 610 mg/L的 BA; 当 BA为 310 mg/L时 , 3
个品种都没有不定芽产生 , 而当 BA上升至 510～610 mg/L , 都有不同程度的不定芽再生能力 , 表明
高浓度的 BA对于梨叶片不定芽的诱导是十分必要的。
1801
园 　　艺 　　学 　　报 32卷
21113　不同 AgNO3 浓度对不定芽再生的影响 　在筛选出的最佳培养基 (‘巴梨 ’: MS + TDZ 015 mg/
L + IBA 011 mg/L; ‘身不知 ’和 ‘早酥 ’: QL + TDZ 110 mg/L +NAA 011 mg/L) 上 , 研究 AgNO3 不
同的浓度对叶片不定芽分化的影响。当 AgNO3 在 011～015 mg/L时 , 对 ‘巴梨 ’和 ‘早酥 ’不定芽
再生均有一定的促进作用 , 且 AgNO3 为 015 mg/L时 ‘巴梨 ’不定芽再生率与对照呈极显著差异 , 当
其浓度超过 110 mg/L时二者都表现出抑制作用 ; 对于 ‘身不知 ’来说 , 011～410 mg/L的AgNO3浓
度都可不同程度地促进叶片不定芽的发生 , 但与对照差异不显著 (表 2)。
表 2　AgNO 3 对不定芽再生率和每叶再生芽数的影响
Table 2　Effects of AgNO 3 on bud regenera tion ra te and num ber of buds per leaf
AgNO3
(mg/L)
巴梨 Bartlett
再生率 Regeneration
rate ( % )
再生芽数 Number of
buds per leaf
身不知 Shenbuzhi
再生率 Regeneration
rate ( % )
再生芽数 Number of
buds per leaf
早酥 Zaosu
再生率 Regeneration
rate ( % )
再生芽数 Number of
buds per leaf
0 5717 ±211 bB 2186 ±0148 aA 8613 ±219 aA 3126 ±0146 aA 7814 ±317 abAB 4145 ±1109 aA
011 6518 ±310 aAB 3112 ±0139 aA 9212 ±412 aA 3178 ±0197 aA 8513 ±619 aA 5106 ±0159 aA
015 7216 ±616 aA 3126 ±0180 aA 9016 ±213 aA 3159 ±0174 aA 8215 ±317 aAB 4178 ±0131 aA
110 3312 ±519 cC 2195 ±0124 aA 8917 ±715 aA 3127 ±0176 aA 7216 ±318 bB 2134 ±0140 bB
210 0 dD 0 bB 8712 ±118 aA 2187 ±0133 aA 0 cC 0 cC
410 0 dD 0 bB 8618 ±210 aA 215 ±0139 aA 0 cC 0 cC
　　注 :大小写字母表示显著性水平 ( a = 0105, A = 0101)。Note: Cap ital and lowercase indicate significance.
21114　NH +4 2N∶NO -3 2N及 K+浓度对 ‘身不知 ’不定芽再生的影响 　以 ‘身不知 ’为试材 , 在 NN69
+ TDZ 110 mg/L +NAA 011 mg/L培养基上 , 用 KNO3 调节 NN69培养基中 NH +4 2N与 NO -3 2N的不同比
例 , 除 K+外 , 其它元素离子种类和浓度不变 (表 3)。当 NH +4 2N∶NO -3 2N为 0∶1时 , 没有不定芽的发
生 , 说明 NH +4 2N对于梨不定芽的诱导是必不可少的 ; 随着 NH +4 2N与 NO -3 2N比例和 K+浓度的逐渐
提高 , 不定芽再生幅度也随之加大。1∶7的 NH +4 2N∶NO -3 2N并配合 21150 mmol/L的 K+时 ‘身不知 ’
叶片再生率就极显著地高于其他处理 , 不定芽再生率和平均芽数分别达到 9714%和 2187 (表 3) , 说
明较高比例的 NH +4 2N与 NO -3 2N和 K+浓度对于梨叶片不定器官的诱导具有协同作用。但更高浓度的
NO -3 是否对外植体产生抑制作用有待于进一步的探索。
表 3　不同 NH +4 2N∶NO -3 2N对 ‘身不知’梨叶片不定芽再生的影响
Table 3　Effects of the ra tios of the n itra te∶namm on ium on bud regenera tion from leaves of‘Shenbuzh i’
NH +4 2N∶NNO -3 2N 浓度 Concentration (mmol/L)总 N Total N NH +4 NO -3 K + 不定芽再生率Bud regeneration rate ( % ) 平均每叶再生芽数Number of buds per leaf
0∶1 18140 0100 18140 18190 0 dC 0 cB
1∶2 27140 9100 18140 9190 6812 ±114 cB 2100 ±0147 bA
1∶3 27140 6190 20150 14110 7016 ±216 bcB 2106 ±0135 bA
1∶4 27150 5150 22100 17100 7211 ±215 bcB 2123 ±0129 abA
1∶5 27100 4150 22150 18150 7614 ±318 bB 2185 ±0125 aA
1∶7 28100 3150 24150 21150 9714 ±113 aA 2187 ±0173 aA
　　注 :大小写字母表示显著性水平 ( a = 0105, A = 0101)。Note: Cap ital and lowercase indicate significance.
212　不定芽的增殖
将产生的不定芽转移到 MS +BA 110 mg/L + IBA 011 mg/L培养基上进行增殖。结果表明在该培
养基上不定芽伸长和增殖生长良好 , 表现为茎粗、叶大 , 月增殖倍数达到 4～5 (图版 , 7)。
213　生根培养
分别选取长约 115 cm生长健壮的单苗接入生根培养基 , ‘巴梨 ’茎段在 1 /4 MS + IBA 110 mg/L
+蔗糖 1510 g/L上光照培养 10 d后转入 1 /4MS +蔗糖 1510 g /L上 , 培养 25 d后生根率为 8715% , 平
均根数为 6142; ‘早酥 ’茎段转入 MS + IBA 215 mg/L +蔗糖 1510 g/L上暗培养 10 d后转入 MS +蔗
糖 1510 g/L +AC 015 g/L上生根率获得了 7510% , 平均根长达到 7148, 但平均苗的根干质量偏低 ,
仅为 114 mg; ‘身不知 ’接种在 1 /4MS + IBA 215 mg/L +蔗糖 510 g/L上暗培养 10 d后转入 1 /4MS +
蔗糖 510 g/L +AC 015 g/L光培养 , 生根率为 8313% (图版 , 8)。
2801
　6期 刘翠琼等 : 不同基因型梨叶片离体培养和植株再生 　
参考文献 :
1　Lane W D, Iketani H, Hayashi T. Shoot regeneration from cultured leaves of Japanese pear ( Pyrus pyrifolia) . Plant Cell, Tissue and O rgan
Culture, 1998, 54: 9～14
2　孙清荣 , 刘庆忠 , 赵瑞华. 西洋梨叶片直接再生体细胞胚. 园艺学报 , 2003, 30 (1) : 85～86
Sun Q R, Liu Q Z, Zhao R H. Somatic embryo genesis from in vitro leaves of pear. Acta Horticulturae Sinica, 2003, 30 (1) : 85～86 ( in Chinese)
3　王乔春 , Svensson M. 培养基种类对梨试管苗增殖的影响. 四川农业大学学报 , 1993, 11 (1) : 77～81
W ang Q C, Svensson M. The role of media in shoot multip lication of pear cultures in vitro. Journal of Sichuan Agricultural University, 1993,
11 (1) : 77～81 ( in Chinese)
4　Shibli R A, A jlouni M M A, Obeidat A A. D irect regeneration from pear ( Pyrus syriaca) leaf exp lant. Advances in Horticultural Science,
2000, 14 (1) : 12～18
图版说明 : 1. 叶片远轴端直接发生的不定芽 ; 2. 叶片近轴端直接发生的不定芽 ; 3. 叶片远轴端中脉上直接分化出的不定芽 ; 4. 体胚
发育成苗 ; 5. ‘巴梨’在 MS + TDZ 015 mg/L + IBA 011 mg/L培养基上发生的不定芽 ; 6. ‘身不知’在 QL + TDZ 110 mg/L +NAA 011
mg/L培养基上发生的不定芽 ; 7. 不定芽的增殖 ; 8. 试管苗的生根情况。
Explana tion of pla tes: 1. D irect bud regeneration from the abaxial section of the leaf; 2. D irect bud regeneration from the p roximal section of the
leaf; 3. D irect bud regeneration from the main vein of the distal section of leaf; 4. Plantlet from somatic embryo; 5. Adventitious bud regeneration
of‘Bartlett’pear on medium with MS + TDZ 015 mg/L + IBA 011 mg/L; 6. Adventitious bud regeneration of‘Shenbuzhi’pear on medium
with QL + TDZ 110 mg/L +NAA 011 mg/L; 7. Proliferation of adventitious shoots; 8. Rooting state of the vitro seedlings.
3801