全 文 ：园 艺 学 报 2004，31(2)：239—240
Acta Horticu|turae Sinica
芥蓝游离小孢子培养初报
何杭军 ， 王晓武 汪炳良
( 中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京 100081； 浙江大学农业与生物技术学院园艺系，杭州 310029)
摘 要：以芥蓝的5个基因型为试材，对游离小孢子培养诱导胚状体发生及植株再生进行了初步探讨。
结果表明：供体基因型对成功诱导胚状体发生至关重要；振荡培养明显有利于胚状体的发育；改良MS和
B 培养基对诱导植株再生没有差别。
关键词：芥蓝；游离小孢子；胚状体；振荡培养；再生植株
中图分类号：S 635 文献标识码：A 文章编号：0513-353X(2004)02-0239-02
Embryogenesis and Plant Regeneration of Chinese Kale via Isolated Micro-
spore Culture
He Hangjun ，Wang XiaowuH，and Wang Bingliang
( Institute of Vegetables and Flowers，Chinese Academy ofAgricuhural Science，Beijing 100081，China； Department ofHorti—
culture，Zhejiang University，Hangzhou 310029，China)
Abstract：Isolated microspores of 5 Chinese kale genotypes were cultured． It was found that only
those late—uninucleate and binucleate microspores could grow into division． The results also showed that
genotypes had important impact on embryoid induction． Effect of shaking culture on embryoids develop-
ment was examined． The results demonstrated that slow shaking could promote development of embryoids
and increase the proportion of cotyledonary embryoids．MS and B5 media showed no difference on plant
regeneration．
Key words：Chinese kale；Isolated mierospore；Embryoid；Shaking culture；Plant regeneration
1 目的、材料和方法
芸薹属作物中，自德国Licherl1 首次报道利用游离小孢子培养获得再生植株后，目前，已在多种
芸薹属作物中获得小孢子培养的再生植株。而芥蓝小孢子培养未见有成功报道。本文以芥蓝的5个基
因型为试材，初步研究了诱导胚状体发生的技术和程序，同时还研究了不同培养基对植株诱导的影
响，以期为芥蓝的遗传育种提供一种较为有效的方法。
试材的编号分别为A30、A42、A43、A95、A99。于每天早晨7时左右，选取芥蓝的主花序或第
一 分枝花序处于花序轴伸长前后的花蕾用于游离小孢子培养。将生长状况良好的花蕾用75％的酒精
消毒30 S，再用7％的饱和次氯酸钠消毒15 min，并用预冷的无菌水冲洗3次，每次5 min。然后将消
过毒的花蕾置于灭过菌的研钵中，加人少量B 洗涤培养基 ，用研棒迅速将花蕾研碎，挤出小孢
子，然后用300目的双层尼龙网过滤，收集滤液。滤液在100 g的速度下离心3次，每次5 min，最后
一 次用NLN．13 L13 培养基清洗。清洗 3次后的小孢子重悬于 NLN．13培养基中，培养基不加任何激
素。用血球计数板调整小孢子密度为2×10 个／mL，然后以每皿2 mL小孢子悬浮液分装人 min
的玻璃培养皿，Parafilm封口，置于33~C恒温箱静置暗培养48 h后，然后于25~C下继续静置培养约
2—3周后统计胚状体的数目。
收稿日期：2003—04—08；修回日期：2003—06—12
}通讯作者 Corresponding author，E—mail：wangxw@mail．caas．neL ca
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园 艺 学 报 31卷
小孢子培养 15～18 d后已有从球形至子叶期各个阶段的胚状体。挑出子叶期的胚接种到改良MS
和B 培养基上，暗培养24 h后置于25％，6000 Ix，14 h／d光照的条件下继续培养，胚状体经过
3～4周继代培养后长成幼苗。
2 结果与分析
2．1 基因型对芥蓝胚状体发生的影响
游离小孢子培养1 d后，部分小孢子就出现明显的膨大，培养2—3 d，小孢子就出现细胞分裂。
在5个供试的基因型中有3个观察到小孢子的细胞分裂，但最终只有A99基因型获得胚状体，还有两
种未有任何反应。具有胚胎发生能力的A99出胚率约为6．72胚／蕾，其余材料出胚率为零。研究表
明，基因型对成功诱导小孢子胚胎发生影响很大，这与前人的研究结果一致。
2．2 振荡培养对胚状体生长发育的影响
小孢子培养15～18 d后已有从球形至子叶期各个阶段的胚状体，挑出子叶期的胚，将剩下的胚
分成两组，一组继续在25cC培养箱中静置培养；另一组置于60 r／min、25~C的摇床上培养，两组都每
隔两天更换新鲜培养基。培养 10 d后，发现在震荡条件下幼胚发育迅速，胚体粗壮，且最终大部分
幼胚都能发育成子叶期的胚。而静置培养的幼胚发育迟缓，较幼小，只有少部分能发育至子叶期胚。
在振荡培养条件下子叶期胚状体的频率约是静置条件下的3倍，高达67．41％。
2．3 不同培养基对植株再生的影响
将子叶期的胚状体挑出并转至改良MS和B 培养基中培养，两者都不加任何激素。培养2～3 d，
胚状体开始变绿，胚根伸长并长出根毛，经过一星期左右的培养，整个胚状体都变成绿色，并在象两
片子叶的地方抽出小芽。最终，MS和B 培养基都能成功诱导胚状体成苗，除了一些幼弱的胚状体在
诱导过程中褐化外，其余的胚状体都能成功诱导成苗。
本文首次报道了芥蓝小孢子培养成功并获得了再生植株，研究还证明，振荡培养对提高芥蓝小孢
子胚状体的发育具有明显的促进作用。究其原因，这可能与振荡培养促进幼胚的呼吸作用以及把毒素
迅速稀释有关。本项研究未在较广的基因型范围内获得成功，说明成功诱导芥蓝的小孢子培养的影响
因素还很多，有待再进行研究。
参考文献：
1 Lichb~r R．Induction ofhaploid plants from isolated pollen ofBrasica n4lpu~．Plant Breeding，1982，105：427—434
2 Gamborg 0 L，Miler R A，ojima K．Nutrient requirements of suspension cultures of soybean root cels．Exp．Cel Res．。1968。50：151
3 LichterR．Anther culture ofBrass／ca rmpusin aliquidmedium．Z Pflanzenphysio1．。1981。103：229—237
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