全 文 ：园 　艺 　学 　报 　2005, 32 (6) : 1136～1139
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期 : 2004 - 11 - 22; 修回日期 : 2005 - 01 - 16
基金项目 : 河南省高等学校创新人才基金项目 ; 河南省自然科学基金项目 (0311031400) ; 河南省高校优秀中青年骨干教师基金
项目 ( G2002009)3 通讯作者 Author for correspondence ( E2mail: fudeshang@henu1edu1cn)
桂花胚的离体培养
袁王俊　董美芳　尚富德 3
(河南大学生命科学学院 , 开封 475001)
摘 　要 : 以不同发育时期的桂花胚为试材 , 研究了不同生长调节剂组合、基本培养基、光照时间、蔗
糖浓度对离体胚萌发 , 以及不同培养基对萌发幼苗生根的影响。结果表明 : 诱导胚萌发较理想的培养基为
B5 + 62BA 210 mg·L - 1 +NAA 011 mg·L - 1 +蔗糖 3% ～5% , 光照 12 h·d - 1 ; 生根较合适的培养基为 B5 +
IBA 210 mg·L - 1 +蔗糖 3%。
关键词 : 桂花 ; 胚 ; 离体培养 ; 萌发 ; 生根
中图分类号 : S 685113　　文献标识码 : A　　文章编号 : 05132353X (2005) 0621136204
In V itro Culture of Em bryo of O sm an thus fragrans
Yuan W angjun, Dong Meifang, and Shang Fude3
(College of L ife Science, Henan U niversity, Ka ifeng 475001, Ch ina)
Abstract: Factors which affect germ ination of different stage embryos of O sm anthus fragrans Lour. and
rooting were studied. Results showed that the op timum medium for embryo culture was B5 + 62BA 210 mg·
L - 1 +NAA 011 mg·L - 1 + 3% sucrose, light were 12 h·d - 1. The op timum medium on rooting was B5 +
IBA 210 mg·L - 1 + sucrose 3%.
Key words: O sm anthus fragrans; Embryo; In vitro culture; Germ ination; Rooting
1　目的、材料与方法
桂花 (O sm anthus fragrans Lour. ) 又名木犀。目前我国有 4个品种群 , 100多个品种 , 每个品种
群都有优、缺点 , 而综合性状优良的品种较少 , 选育综合各个品种群优点的优良品种是桂花育种的目
标之一。桂花种子有后熟作用〔1, 2〕, 采收后需要在湿润条件下保存到第 2年才能萌发 , 如贮藏不当 ,
在贮藏的过程中腐烂率高达 50%以上 , 成为桂花杂交育种的限制条件之一。为了缩短育种年限和提
高萌发率 , 我们进行了桂花胚离体培养条件的研究 , 希望能为杂交育种提供技术支持。
试材取自河南大学校园内栽培的桂花树 , 品种为籽银桂。分别于球形胚期、鱼雷胚期、胚形态成
熟期采种。胚形态成熟期又分为 : 胚乳尚未硬化、胚乳硬化、果皮发紫 3个时期。
果实采收后 , 首先用自来水冲洗干净 , 去掉肉质的外果皮和中果皮 , 沥干水分 , 在超净工作台上
用 75%的酒精消毒 1 m in, 然后用 011%的升汞消毒 10 m in, 最后用无菌水冲洗 6～8遍 , 剥取胚 , 接
种在诱导培养基上。每瓶接种 5个 , 3瓶为 1个处理 , 每个处理设 3次重复。培养温度 (25 ±1) ℃,
光照 12 h·d - 1或全黑暗 , 光照强度 1 500～2 000 lx。每天观察胚的动态变化 , 45 d时统计萌发率 ,
进行方差分析。待苗高达 2 cm以上时转入生根培养基中生根。
诱导培养基 : 基本培养基分别是 MS、B5、DCR; 植物生长调节剂为不同浓度的 62BA和 NAA的
组合。生根培养基 : B5 和不同浓度 NAA或 IBA的组合。
2　结果与分析
　6期 袁王俊等 : 桂花胚的离体培养 　
211　不同生长调节剂对桂花胚离体萌发的影响
添加不同浓度 62BA与 NAA对桂花胚进行培
养 45 d, 结果如表 1所示 : 桂花胚在不含 62BA的
培养基上不能萌发。62BA能促进桂花胚的萌发 ,
显著提高萌发率。NAA对胚的生长也有一定的作
用。NAA浓度不宜大于 011 mg·L - 1 , 62BA浓度
以 210 mg·L - 1为宜。62BA浓度为 015 mg·L - 1
时萌发率非常低 , 浓度为 110 mg·L - 1时萌发率
虽较高但生长不良。62BA浓度大于 210 mg·L - 1 ,
NAA浓度大于 011 mg·L - 1 , 茎的生长受到抑制 ,
愈伤化严重 , 成苗率下降。62BA 210 mg·L - 1 +
NAA 011 mg·L - 1胚的诱导 , 萌发率达到 8617% ,
生长健壮 (图 1, A、B )。桂花种子休眠的原因
可能是其胚内存在某种抑制物 , 如 ABA等。而细
胞分裂素可以解除这种抑制 , 促使其提前萌发。
表 1　62BA和 NAA对桂花胚离体萌发的影响
Table 1　The effect of 62BA, NAA on the germ ina tion of
em bryo of O. fragrans
序号
Code
62BA
(mg·L - 1 )
NAA
(mg·L - 1 )
萌发率 Germ i2
nation rate ( % )
试管苗长势
W ay p lantlet growing
1 0 0 0a
2 0 110 0a
3 0 210 0a
4 015 011 3111b +
5 110 011 8010c + +
6 210 011 8617c + + + +
7 210 015 2010b +
8 310 011 2617b +
　　注 : 培养基 B5 + 3%蔗糖 ; 光照 12 h·d - 1 ; 取材时期 04 -
20。不同小写字母表示在 5%水平上差异显著 , 下表同。
Note: Media being B5 + 3% sucrose; L ight 12 h·d - 1 ; Date
04 - 20. The different small letters indicate the significance at 5%
level, the same below.
图 1　桂花胚的离体培养
A. 变绿的胚 ; B. 胚萌发的幼苗 ; C、D. 生根的诱导苗。
F ig. 1　 In v itro culture of em bryos of O sm an thus fragrans
A. Embryos turning green; B. Plantlets derived from embryos; C and D. Plantlets with roots.
212　果实不同发育时期对离体胚萌发的影响
取不同发育时期的胚进行离体培养成功率差异很大 (表 2)。球形期胚珠培养一段时间后胚珠发
褐死亡。鱼雷期的胚仅发绿 , 个体有所增大 , 但生长点始终没有萌发 , 这可能是营养条件不能满足此
时期胚发育的要求。随着胚的进一步发育 , 可以在离体条件下萌发 , 胚乳硬化后萌发率达到最高点。果
皮发紫后萌发率虽不能提高 , 但生长速度明显提高 , 幼苗长势也比较健壮。试验中还发现 , 胚乳硬化
后 , 胚的剥离更加容易 , 成功率更高。因此桂花胚的离体培养应该在胚乳硬化到种子完全成熟前进行。
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园 　　艺 　　学 　　报 32卷
213　不同基本培养基对桂花胚离体萌发的影响
本试验选用了 3 种不同的基本培养基 B5、
MS、DCR。MS培养基含有较高的钾盐和硝酸盐 ,
B5 培养基钾盐含量较高 , 但硝酸盐含量较低 , 而
DCR培养基的钾盐和硝酸盐都比较低。从表 3可
以看出 , DCR培养基萌发率显然比 B5 和 MS低 ,
B5 和 MS培养基之间萌发率没有明显差异 , 但 MS
培养基诱导苗生长缓慢 , 说明桂花胚萌发过程中
对钾盐需求较高 , 硝酸盐虽对萌发率没有影响 ,
但影响胚的生长 , 含量过高 , 胚生长不良。综合
考虑 , 较好的基本培养基为 B5。
214　不同蔗糖浓度对桂花胚离体萌发的影响
以胚乳硬化后的胚为材料 , 在 B5 + 62BA 210
mg·L - 1 + NAA 011 mg·L - 1基础上 , 添加不同
浓度的蔗糖。结果表明 : 蔗糖 3%和 5%对胚萌
发效果较好 , 萌发率分别为 8617%和 8212% ,
植株生长健壮 , 茎杆粗壮。培养基中不含蔗糖
时胚不能萌发 ; 但蔗糖浓度过高 ( 7% ) , 也使
萌发率下降 (2414% ) , 这可能是较高的蔗糖浓
度引起培养基渗透压的改变 , 导致胚的萌发受
到抑制〔3〕。
表 2　不同取材时期对桂花离体胚萌发的影响
Table 2　The effect of stage to fetch ma ter ia l on the
germ ina tion of em bryo of O. fragrans
时期
Date
(M2D) 胚胎发育期Stage of embryo 萌发率Germ inationrate ( % ) 试管苗长势W ay p lantletgrowing
12201 球形胚 Global embryo 0a
03225 鱼雷形胚 Torpedo embryo 0a
04208 胚乳未硬化 Unsclerotic endosperm 4212b + +
04220 胚乳硬化 Sclerotic endosperm 8617c + + + +
04226 果皮发紫 Purp le pericarp 8819c + + + +
　　注 : 培养基 B5 + 62BA 015 mg·L - 1 +NAA 011 mg·L - 1 ; 光
照 12 h·d - 1。
Note: Media being B5 + 62BA 015 mg·L - 1 + NAA 011 mg·
L - 1 ; L ight 12 h·d - 1.
表 3　不同基本培养基对桂花离体胚萌发的影响
Table 3　The effect of ba sic m ed ia on the germ ina tion of
em bryo of O. fragrans
基本培养基
Basic media
萌发率
Germ ination rate ( % )
试管苗长势
W ay p lantlet growing
MS 8212a + + +
B5 8617a + + + +
DCR 4212b + +
　　注 : 62BA 210 mg·L - 1 , NAA 011 mg·L - 1 , 3%蔗糖 ; 光照
12 h·d - 1 ; 取材时期 04 - 20。
Note: 62BA 210 mg·L - 1 , NAA 011 mg·L - 1 , 3% sucrose;
L ight 12 h·d - 1 ; Date 04 - 20.
215　不同光照条件对桂花胚离体萌发的影响
在以上研究的基础上 , 以胚乳硬化后的胚为
材料 , 研究光照条件对胚萌发的影响 , 发现光照
是桂花胚离体萌发的必需条件。将材料置于全黑
暗条件下 30 d, 胚虽有一定的生长 , 但始终没有
生长点出现。在 12 h·d - 1光照条件下 , 5 d后胚
开始变绿和增大 , 20 d左右开始萌发 , 萌发率
8617% , 生长健壮。全黑暗条件下 30 d后 , 置于
12 h · d - 1光照下 , 胚也能很快萌发 , 萌发率
8414% , 但节间较长 , 生长稍弱。
216　生根培养基的筛选
当胚诱导的无菌苗长度超过 2 cm时 , 带胚根
或切去胚根转入生根培养基进行生根培养 (表 4)。
表 4　不同培养基对桂花胚培养幼苗生根的影响
Table 4　The effects of d ifferen t m ed ia on rooting of
em bryo of O. fragrans
IBA
(mg·L - 1 )
NAA
(mg·L - 1 )
生根率
Rooting rate ( % )
生根条数
Number of rooting
无胚根 0 0 0a 0
W ithout 110 0 617b 1100
radicle 210 0 3517c 1100
310 0 1313b 1100
带胚根 0 0 2414b 1127
W ith 110 0 4617c 1163
radicle 210 0 7111d 2163
310 0 0a 0
0 111 3018b 1143
0 210 3516c 1138
　　注 : 培养基 B5 + 3%蔗糖 ; 光照 12 h·d - 1。
Note: Media being B5 + 3% sucrose; L ight 12 h·d - 1.
结果显示 , 切去胚根不利于根的诱导 , 而带有胚根则根的诱导较为容易。试验中发现胚轴部位在
萌发过程中会产生愈伤组织 , 如果切除胚轴以下部位 , 则会降低生根率 , 所以在操作时只剥除愈
伤组织而不能切除胚根。带有胚根时 , IBA浓度为 210 mg·L - 1生根率最高 , 而且单株生根数也最
多 , 根较粗壮。浓度较高时 , 没有根的生成。浓度较低或不加 IBA , 生根率和单株生根数都显著降
低。NAA 210 mg·L - 1生根率较低。因此 , B5 + IBA 210 mg·L - 1最适合桂花胚苗的生根培养 (图
1, C、D )。
在试验中发现 , 萌发后的胚苗只要加强管理成苗率可达 100%。通过胚的离体培养 , 可以使桂花
种子提前 10个月萌发 , 解决了桂花种子需要长期贮藏、发芽晚和贮藏期间腐烂的问题。
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　6期 袁王俊等 : 桂花胚的离体培养 　
参考文献 :
1　杨康民 , 朱文江. 桂花. 上海 : 上海科学技术出版社 , 2000. 1～50
Yang K M, Zhu W J. O sm anthus fragrans. Shanghai: Shanghai Scientific and Technical Publishers, 2000. 1～50 ( in Chinese)
2　尚富德 , 伊艳杰 , 张　彤. 河南 17个桂花品种的 RAPD分析. 园艺学报 , 2004, 31 (5) : 685～687
Shang F D, Yi Y J, Zhang T. The RAPD analysis of 17 O sm anthus fragrans cultivars in Henan p rovince. Acta Horticulturae Sinica, 2004, 31
(5) : 685～687 ( in Chinese)
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Zhang G Y, Cheng Z H, L i J, Zhou W A, W ang X H. Studies on tip meristem culture rap id p ropagation and induction of in vitro stolon of
many flower betony (S tachys floridana Schuttl. ex Benth. ) . Acta Horticulturae Sinica, 2004, 31 (1) : 106～108 ( in Chinese)
收稿日期 : 2005 - 03 - 14; 修回日期 : 2005 - 08 - 09
基金项目 : 北京市自然科学基金资助项目 (6012009)3 通讯作者 Author for correspondence
南京不同类型梅花品种香气成分的比较研究
金荷仙 1, 2 　陈俊愉 33 　金幼菊 4 　 (1 中国林业科学研究院林业研究所 , 北京 100091; 2 浙江林学院园林与
艺术学院 , 临安 311300; 3 北京林业大学园林学院 , 北京 100083; 4 北京林业大学生物中心 , 北京 100083)
Com par ison of D ifferen t Cultivars of P runus m um episM a jor Ga s Ingred ien ts
J in Hexian1, 2 , Chen Junyu33 , and J in Youju4 ( 1 Research Institu te of Forestry, Chinese Academ y of Forestry, B eijing
100091, China; 2 School of Landscape A rchitecture, Zhejiang Forestry College, L inpian 311300, China; 3 College of Landscape A r2
chitecture, B eijing Forestry U niversity, B eijing 100083, China; 4B iology Center, B eijing Forestry University, B eijing 100083, China)
关键词 : 梅花 ; 动态顶空套袋采集法 ; 挥发性物质
中图分类号 : S 685117　　文献标识码 : A　　文章编号 : 05132353X (2005) 0621139201
1　材料与方法 　采用活体植株动态顶空套袋采集法和 TCT/GC /MS (热脱附 /气相色谱 /质谱联用 ) 技术分析南京梅花
山真梅种系直枝梅类宫粉型 ‘玉露宫粉 ’、玉蝶型 ‘宇治里 ’、黄香型 ‘黄金鹤 ’、朱砂型 ‘姬千鸟 ’、绿萼型 ‘变绿
萼 ’、洒金型 ‘复瓣晚跳 ’及垂枝梅类白碧垂枝型 ‘双碧垂枝 ’的香气组成。2002年 3月 5日采样 , 将采样后的吸附
管套上聚四氟乙烯套 , 放在干燥器中低温保存。样品分析时间为 2002年 4月 27日。同时采集和分析空气作对照。采
用 Xcalibur112版本软件及 N IST98谱图库进行梅花香气成分的检索 , 兼顾挥发物出峰的保留时间鉴定。其含量比较采
用归一化法 , 以百分含量表示。热脱附 ( TCT) 的主要条件 : 载气压力 20 kPa; 色谱进样口温度 250℃ (10 m in) ; 冷
阱富集温度 - 120℃, 进样时冷阱骤然升温至 260℃; GC的工作条件 : 色谱条件为 CP2Sil8 Low B leed /MS柱 (60 m ×
0125 mm ×0125μm) 程序升温 : 40℃保持 3 m in后 , 以 6℃ /m in速率升至 250℃, 再保持 3 m in; 停止采集后 , 色谱柱
在 270℃继续运行 5 m in; MS的工作条件 : 离子化方式 E I源 ; 电子能量 70 eV; 质量范围 : m /z 29～350; GC /MS接口
温度 : 250℃; 源温 : 200℃, 灯丝发射电流 : 150μA。
2　结果 　表 1为扣除空气后的数据 , 表明乙酸苯甲酯与α - 蒎烯、β - 蒎烯、3 - 蒈烯等一起以不同的配比构成了梅
花香气的主要成分。朱砂型梅花的香气较淡 , 由此可推测 , 乙酸苯甲酯可能是影响梅花香气浓淡的关键化学成分 , 其
含量可以作为梅花香气浓淡的主要标志 , 按香气浓淡依次为玉蝶型、绿萼型、垂枝梅类白碧垂枝型、洒金型、宫粉
型、黄香型、朱砂型。
鉴于野外采集挥发物的条件所限 , 本研究未在同一时段对不同品种梅花的挥发物进行采集。因此 , 本试验结果有
待进一步验证。
表 1　南京不同类型梅花品种主要香气成分比较
Table 1　Com par ison of ma jor vola tile com ponen ts from d ifferen t cultivars of P runus m um e in Nan jing ( % )
品种
Cultivar
α
- 蒎烯
α2
p inene
苯甲醛
Benzalde2
hyde
β
- 蒎烯
β2p inene 1, 3, 8 - 对孟三烯 1, 3, 82p2
menthatriene
3 - 蒈烯
32carene 2 - 壬烯 -1 - 醇22nonen2
12ol. 〔E〕2 庚基过氧化氢Hydroperoxide.hep tyl 乙酸苯甲酯Acetic acid,phenylmethylester
玉露宫粉 Yulu Gongfen 23178 0138 17196 ND 21134 0123 0106 35146
宇治里 Yu Zhi L i ND 0149 ND ND ND ND 1139 98112
黄金鹤 Huangjin He 43154 ND 27131 24151 ND 0159 0111 20179
姬千鸟 J i Q ianniao 33144 ND 29153 0104 35162 ND ND ND
变绿萼 B ian Lü2e 0186 2110 1158 1144 ND 1149 0109 89187
复瓣晚跳 Fuban W antiao 18117 0133 1158 12129 16190 0176 0117 49194
双碧垂枝 Shuangbi Chuizhi 10144 1100 8150 ND 9193 0148 ND 68114
　　注 :“ND”表示未检出。Note: ND: not detected.
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