全 文 ：收稿日期:2013 － 10 － 30 接受日期:2013 － 12 － 20
资助项目:浙江省蚕桑产业科技创新团队专项(No． 2011Ｒ50028)，浙
江省农业新品种选育重大科技专项(No． 2012C12910)，现
代农业产业技术体系建设专项(No． CAＲS-22)。
第一作者信息:钱文春(1968 －)，男，高级农艺师。
E-mail:cbb2068003@ sina． com
通信作者信息:计东风，研究员。
Tel:0571-86404088，E-mail:dongfeng_ji@ 126． com
* Corresponding author． E-mail:dongfeng_ji@ 126． com
2014，40(3):0506 － 0512
ISSN 0257 － 4799;CN 32 － 1115 /S
E-mail:CYKE@ chinajournal． net． cn
不同品种桑椹中的矢车菊-3-芸香苷(C3Y)含量及桑椹 C3Y 的
抗氧化作用
钱文春1 柳丽萍1 钟 石2 杨永健1 殷益明1 李有贵2 计东风2
(1湖州市经济作物技术推广站，浙江湖州 313000; 2浙江省农业科学院蚕桑研究所，杭州 310021)
摘 要 矢车菊-3-芸香苷(C3Y)是桑椹花青素的主要成分之一。采用超声波辅助有机溶剂浸提法提取 8 个果桑品种桑椹鲜
果中的 C3Y，当料液质量浓度为 0. 125 g /mL时的提取效率较高。以体积比 91∶ 9的 0. 2%磷酸-乙腈为高效液相色谱(HPLC)
流动相可有效分离检测桑椹提取液中的 C3Y。8 个果桑品种桑椹鲜果中的 C3Y 含量存在明显差异，桑品种日本田橙的桑椹
C3Y质量分数高达 0. 135 5%左右，而桑品种桂花蜜的桑椹 C3Y质量分数仅有 0. 000 4%。常温保存桑椹鲜果中的 C3Y 不稳
定，4 h后降解率达 23. 15%左右，48 h后降解率高达 67. 13%左右，所以采摘后的桑椹鲜果应及时提取 C3Y，并在密闭、低温环
境中储藏。体外试验结果表明，桑椹 C3Y对羟自由基(·OH)具有明显的清除效果，但对超氧阴离子自由基(O2 －)的清除作用
不明显，对 H2O2诱导损伤人胚肝细胞 L-O2 具有明显的促增殖保护作用，提示桑椹 C3Y是桑椹花青素抗氧化及对 H2O2 诱导
损伤肝细胞起保护作用的主要功能性成分。
关键词 桑椹;矢车菊-3-芸香苷;稳定性;抗氧化;人胚肝细胞 L-O2
中图分类号 S886. 9 文献标识码 A 文章编号 0257 － 4799(2014)03 － 0506 － 07
Content and Anti-oxidant Activity of Cyanidin-3-rutinoside from
Mulberry Fruit of Different Varieties
QIAN Wen-Chun1 LIU Li-Ping1 ZHONG Shi2 YANG Yong-Jian1 YIN Yi-Ming1 LI You-Gui2
JI Dong-Feng2*
(1Huzhou Economic Crop Technology Promotion Station，Huzhou Zhejiang 313000，China;2Sericultural Ｒesearch Institu-
te，Zhejiang Academy of Agricultural Sciences，Hangzhou 310021，China)
Abstract Cyanidin-3-rutinoside (C3Y)is one of the main ingredients of mulberry anthocyanins． Ultrasound-assisted or-
ganic solvent method was applied to extract C3Y from mulberry fruit of 8 varieties． High extraction rate was achieved
when material to solvent ratio was 0. 125 g /mL． C3Y extracted from mulberry fruit could be efficiently separated and de-
termined by HPLC using 0. 2% phosphoric acid and acetonitrile (91 ∶ 9，V/V)as mobile phase． Significant difference
was observed in C3Y content of mulberry fruit between different varieties，among which the highest content was 0. 135
5% in Ｒiben Tiancheng，and the lowest content was only 0. 000 4% in Guihuami． C3Y was not stable in mulberry fruit
when preserved under room temperature after harvesting．
The degradation rate was around 23. 15% after 4 h of
preservation and up to 67. 13% after 48 h of preserva-
tion． Therefore，fresh mulberry fruit should be used to ex-
tract C3Y timely after harvesting． Moreover，the extracted
C3Y should be stored under airtight and low temperature
condition． In vitro experiment on C3Y activity indicated
that mulberry fruit C3Y had an evident effect on scaven-
ging hydroxyl radical (·OH)，but had no obvious effect
DOI:10.13441/j.cnki.cykx.2014.03.021
第 3 期 钱文春等:不同品种桑椹中的矢车菊-3-芸香苷(C3Y)含量及桑椹 C3Y的抗氧化作用 507
on scavenging superoxide anion radical (O2 －)． Mulberry fruit C3Y also showed a significant proliferative and protective
effect against H2O2-induced injury on L-O2 human embryonic hepatic cells． These results suggest that mulberry fruit C3Y
is the main functional ingredient of mulberry anthocyanins having antioxidative effect to H2O2 and protective effect to in-
jured hepatic cells．
Key words Mulberry fruit;Cyanidin 3-rutinoside;Stability;Anti-oxidation;Human embryonic hepatic cell L-O2
桑椹花青素属于水溶性黄酮类化合物，对人体有
多种生理保健功能［1］。研究表明，桑椹花青素
中主要有矢车菊-3-O-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-gluco-
side，C3G)和矢车菊-3-芸香苷(cyanidin-3-rutino-
side，C3Y)等成分［2］。现代药理学研究证明，C3G
具有抗氧化［3］，抗癌［4］，保护肝脏［5］、心脑血管［6］、
神经系统［7］等多种医疗保健作用，但对 C3Y的药理
活性研究报道极少。本实验室前期对桑椹 C3G 的
分离提取方法以及桑椹鲜果中 C3G 的稳定性等进
行了报道［8］。本项研究在利用高效液相色谱
(HPLC)法定量检测桑椹 C3Y 的基础上，比较不同
果桑品种桑椹鲜果中的 C3Y含量及其稳定性，并研
究桑椹 C3Y体外清除自由基的活性以及对 H2O2 诱
导损伤肝细胞的保护作用，为桑椹花青素的开发利
用提供试验依据。
1 材料与方法
1. 1 材料及主要试剂和仪器
供试果桑品种包括台湾 72C、大 10、台湾 46C、
8632、四季果桑、安杂八号、桂花蜜、日本田橙。自湖
州市南浔区练市镇朱家兜村蚕桑专业合作社种植
桑园，采摘供试桑品种的成熟桑椹鲜果，立即提取
C3Y或 － 20 ℃保存。人胚肝细胞 L-O2 由中国科学
院上海生物化学与细胞生物学研究所提供。
矢车菊-3-芸香苷标准品(美国 Sigma 公司);丙
二醛(MDA)含量测定试剂盒，超氧化物歧化酶
(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性测定试
剂盒，抗羟自由基(·OH)及超氧阴离子自由基
(O2 －)活性测定试剂盒，均购自南京建成生物工程
研究所;MTT 和 DMSO(美国 Sigma 公司);ＲPMI
1640 培养基(美国 GIBCOBＲL 公司);胎牛血清
(FBS)(杭州四季青生物材料研究所);胰蛋白酶
(美国 Amresco公司)。
HF-1B超声波提取仪(北京弘祥隆生物技术开
发有限公司)，高效液相色谱仪-2487 紫外检测器
(美国 Waters 公司)，Nikon-TS100 型倒置光学显微
镜(日本 Nikon 公司)，Infinite M200 酶标仪(瑞士
TECAN公司)。
1. 2 桑椹 C3Y的提取与含量测定
1. 2. 1 提取工艺基本流程及料液质量浓度筛选
基本工艺流程:鲜果清洗、晾干→匀浆→溶剂定
容→超声波提取(功率 1 100 W，60 min)→提取液
14 000 r /min 离心 20 min→取上清液。料液质量浓
度筛选:准确称取大 10 的桑椹鲜果 10 g，研磨成匀
浆，按料液质量浓度 0. 500 0、0. 200 0、0. 125 0、
0. 091 0、0. 071 4、0. 058 8、0. 050 0、0. 034 5 g /mL加
入溶剂，按照上述基本工艺流程提取 C3Y。8 组提
取物样品的上清液经 HPLC 测定 C3Y 含量，试验重
复 3 次。
1. 2. 2 C3Y 含量测定的标准曲线建立 采用
HPLC法［8］测定桑椹提取液中的 C3Y含量。色谱条
件为:色谱柱 SunFire(30 mm ×100 mm，5 μm)，流动
相 0. 2%磷酸-乙腈(体积比 91∶ 9)，流速 1 mL /min，
检测波长 520 nm，进样量 50 μL。同时配制质量浓
度为 10、20、40、60 μg /mL的 C3Y标准品溶液，分别
测定 HPLC峰面积。以色谱峰面积(X)对标准品溶
液质量浓度(Y)进行线性回归，得出线性回归方程。
鲜果中 C3Y 的质量分数 = 测试液中 C3Y 总质量
(g)/鲜果质量(g)× 100%。
1. 2. 3 检测方法的稳定性试验 将 C3Y 标准品溶
解于流动相 0. 2%磷酸-乙腈(体积比 91∶ 9)中，配制
成 20 μg /mL 溶液，常温(25 ℃)下放置 0、3、6、9、
12、18、24、48 h，测定 C3Y 含量，计算 C3Y 降解率。
C3Y降解率 =(1 －测试液中 C3Y 质量浓度 /20)×
100%。试验设置 3 个重复。
1. 3 桑椹 C3Y的稳定性试验
取不同桑品种成熟桑椹鲜果 － 20 ℃保存 7 d后
的冻果 10 g，解冻后立即匀浆;另取大 10 的成熟鲜
果 10 g，于常温(25 ℃)下放置 0、0. 5、4、7、10、13、
24、30、48 h 后匀浆。匀浆液定容至 90 mL，按照
“1. 2. 1”步骤提取 C3Y，用 HPLC法测定上清液中的
C3Y含量。试验重复 3 次。
508 蚕 业 科 学 2014;40 (3)
1. 4 桑椹 C3Y的体外抗氧化活性测定
将经 HPLC分离纯化并由自动收集器收集的桑
椹 C3Y，通过旋转蒸发去除有机溶剂及冷冻干燥后，
用蒸馏水溶解配制成质量浓度为 6. 25 ～ 400 μg /mL
的待测液。抗羟自由基及超氧阴离子自由基活性
测定严格按试剂盒说明书操作。在反应体系中，1
mL测试液在 37 ℃下反应 1 min，使反应体系中
H2O2浓度降低 1 mmol /L 作为一个抑制羟自由基
(·OH)活力单位(U);在反应体系中，1 L 测试液在
37 ℃下反应 40 min 抑制超氧阴离子自由基(O2 －)
的活性，相当于 1 mg 维生素 C 抑制 O2 －的变化值，
以此作为抑制 O2 －的一个活力单位(U)。对·OH或
O2 －的清除率 =测试样清除活力 /总活力 × 100%。
1. 5 桑椹 C3Y对 H2O2 诱导损伤人胚肝细胞L-O2
的保护作用试验
1. 5. 1 细胞增殖率测定 人胚肝细胞 L-O2 采用
ＲPMI 1640培养基(加 10%灭活 FBS，不含抗生素)置
于37 ℃、饱和湿度、5% CO2培养箱中培养，2 d换液 1
次。取处于对数生长期、活细胞数 ＞ 95%的L-O2细
胞，经胰蛋白酶消化后，用 ＲPMI 1640 培养液吹打制
成浓度为 1 × 105 mL －1的细胞悬液，加入 96 孔培养
板，每孔 100 μL，在 5% CO2、37 ℃培养箱中培养 24
h。待细胞完全贴壁后，试验组每孔分别加入质量浓
度为 100、200 和 400 μg /mL 的桑椹 C3Y 溶液 100
μL，正常对照组每孔加入含 0. 1% DMSO的无血清培
养液 100 μL，每组处理 8 个重复孔;另设仅含无血清
培养液 200 μL 的空白对照孔，用于 MTT 测定调零。
培养箱中孵育 48 h后，加入 5 mg /mL MTT 20 μL，继
续培养 4 h，去上清液，加入 DMSO 150 μL，在摇床上
振动摇匀，用酶标仪测定各孔 D(570 nm)值。试验重
复 3次。细胞增殖率 =(试验组 D值 －正常对照组 D
值)/正常对照组 D值 ×100%。
1. 5. 2 H2O2诱导浓度选择 在 96 孔培养板中加
入浓度为 1 × 105 mL －1的 L-O2 细胞悬液，每孔 100
μL。待细胞完全贴壁后，试验组分别加入终浓度为
0. 2、0. 4、0. 8、1. 6、2. 0、2. 4、2. 8、3. 2 和 3. 6
μmol /mL的 H2 O2溶液，正常对照组加入含 0. 1%
DMSO的无血清培养液，每组处理 8 个重复孔，并设
仅含无血清培养液的空白对照孔。培养箱中孵育
48 h后，按“1. 5. 1”中的方法测定各孔 D(570 nm)
值，按下式计算 H2O2 对细胞的平均抑制率，以确定
H2O2诱导人胚肝细胞 L-O2 损伤的浓度:细胞抑制
率 =(正常对照组 D值 －试验组 D值)/正常对照组
D值 × 100%。
1. 5. 3 桑椹 C3Y对细胞损伤的抑制率测定 在 96
孔培养板中加入浓度为 1 × 105 mL －1的 L-O2 细胞悬
液，每孔 100 μL。待细胞完全贴壁后，试验组每孔
加入 9. 6 μmol /mL H2O2溶液 50 μL 后再分别加入
200、400 和 800 μg /mL 桑椹 C3Y 溶液 50 μL;正常
对照组每孔加入含 0. 1% DMSO 的无血清培养液
100 μL;H2 O2损伤模型组每孔加入 9. 6 μmol /L
H2O2溶液 50 μL和含 0. 1% DMSO的无血清培养液
50 μL。每组处理 8 个重复孔，另设仅含无血清培养
液 200 μL的空白对照孔用于 MTT测定调零。培养
箱孵育 48 h，按“1. 5. 1”方法测定各孔 D(570 nm)
值，并计算平均抑制率。
1. 5. 4 细胞中的 MDA 含量、SOD 活性和 GSH-Px
活性测定 取对数生长期的 L-O2 细胞，经胰蛋白
酶消化后，分别用 ＲPMI 1640 培养液吹打制成浓度
为 1 × 106 mL －1的细胞悬液，加入 24 孔培养板(1
mL /孔)，在 5% CO2、37 ℃培养箱中培养 24 h，待细
胞完全贴壁后，按“1. 5. 3”的方法，每孔加入 9. 6
μmoL /mL H2O2和 800 μg /mL桑椹 C3Y 溶液各 500
μL，并设正常对照组和 H2O2损伤模型组，每组处理
设 4 个重复孔。培养箱孵育 48 h 后收集细胞，用 9
g /L NaCl配制成相同细胞浓度，超声波破碎后，按
试剂盒说明书测定 MDA 含量、SOD 活性和 GSH-Px
活性。
1. 6 统计学分析
试验数据以 珋x ± s 表示，用 SPSS 12. 0 软件进行
多重方差分析。
2 结果与分析
2. 1 HPLC 法检测桑椹 C3Y 含量的线性范围及
C3Y标准品溶液的稳定性
从桑椹 C3Y 和 C3Y 标准品的 HPLC 图谱(图
1)可见，以体积比 91∶ 9的 0. 2%磷酸-乙腈作为流动
相时，桑椹 C3Y获得良好分离，色谱峰清晰。
绘制桑椹 C3Y含量检测的标准曲线(图 2)，并
建立线性回归方程:Y = 2. 061X － 1. 583，Ｒ2 =
0. 998。桑椹 C3Y 的质量浓度在 10 ～ 60 μg /mL 范
围内，其浓度与对应的峰面积呈现良好的线性关系。
C3Y标准品溶液在配制 12 h内稳定性良好，降解率 ＜
2%，但放置 48 h后，其降解率达到 15. 06%(图 3)。
第 3 期 钱文春等:不同品种桑椹中的矢车菊-3-芸香苷(C3Y)含量及桑椹 C3Y的抗氧化作用 509
A． C3Y标准品 B．桑椹提取液
A． C3Y standard sample B． Mulberry fruit extraction
图 1 C3Y标准品和桑椹提取液的 HPLC图谱
Fig. 1 HPLC spectrogram of C3Y standard sample
and mulberry fruit extraction
图 2 HPLC法测定桑椹 C3Y含量的标准曲线
Fig. 2 Standard curve for mulberry C3Y content
measurement by HPLC
图 3 25 ℃下 20 μg·mL －1 C3Y标准品溶液的稳定性
Fig. 3 Stability of 20 μg·mL －1 C3Y standard sample
solution at 25 ℃
2. 2 料液质量浓度对桑椹鲜果 C3Y 提取效果的
影响
如图 4所示，桑椹鲜果的 C3Y 提取量随溶剂用
量增加而提高，当料液质量浓度为 0. 125 g /mL 时提
取效果较好，继续增加溶剂量时其提取量却随之下
降，而料液质量浓度达到 0. 034 5 g /mL时，提取量又
显著上升。从节约溶剂和 C3Y 提取效果考虑，选择
桑椹鲜果 C3Y提取的料液质量浓度为 0. 125 g /mL。
图 4 料液质量浓度对桑椹鲜果 C3Y提取效果的影响
Fig. 4 Effect of material to solvent ratio on extraction
efficiency of C3Y from mulberry fruit
2. 3 不同桑品种桑椹鲜果中的 C3Y 含量及其稳
定性
不同果桑品种桑椹鲜果中的 C3Y 含量存在明
显差异(图 5):日本田橙桑椹鲜果中 C3Y 的质量分
数最高达 0. 135 5%，桂花蜜桑椹鲜果中 C3Y 的质
量分数仅为 0. 000 4%，二者相差约 339 倍。桑椹鲜
510 蚕 业 科 学 2014;40 (3)
果冷冻保存 7 d后，其中的 C3Y含量明显降低，在除
桂花蜜外的 7 个供试果桑品种的桑椹中，C3Y 的降
解率为 20% ～30%，降解幅度较大。进一步将采摘
的桑品种大 10 的桑椹鲜果在常温下保存不同时间，
测定桑椹中的 C3Y 含量变化，结果如图 6 所示:桑
椹鲜果采摘后 0. 5 h 内，C3Y 比较稳定，降解不明
显;放置 4 h，桑果中 C3Y 的降解率达到 23. 15%左
右;随着时间延长降解率逐步升高，放置 48 h，桑椹
C3Y的降解率高达 67. 13%左右。
1—台湾 72C，2—大 10，3—台湾 46C，4—8632，
5—四季果桑，6—安杂八号，7—日本田橙，8—桂花蜜。
1—Taiwan72C，2—Da 10，3—Taiwan46C，4—8632，
5—Siji Guosang，6—Anzabahao，7—Ｒiben Tiancheng，8—Guihuami．
图 5 不同果桑品种桑椹鲜果冷冻(－20 ℃)保存
7 d后 C3Y的含量变化
Fig. 5 C3Y content change in fresh mulberry fruit of different
varieties stored in － 20 ℃ for 7 days
图 6 果桑品种大 10 桑椹鲜果常温(25 ℃)保存
不同时间的 C3Y降解率
Fig. 6 C3Y degradation rate in mulberry fruit of Da10
stored in 25 ℃ for various durations
2. 4 桑椹 C3Y的体外抗氧化作用
由图 7 可知，桑椹 C3Y对羟自由基(·OH)具有
明显的清除作用。当处理组 C3Y 质量浓度在
6. 25 ～ 100 μg /mL 范围内，对·OH 的清除率随其浓
度增加而明显提高;C3Y 在 100 ～ 200 μg /mL 浓度
范围内，对·OH 的清除率随其浓度增加而快速提
升;C3Y的质量浓度为 400 μg /mL 时，对·OH 的清
除率达到91. 84%。桑椹 C3Y对超氧阴离子自由基
(O2 －)的清除活性较弱，C3Y 的质量浓度达到 400
μg /mL时，清除率仍 ＜ 5%。
图 7 桑椹 C3Y体外清除自由基的活性
Fig. 7 In vitro scavenging activity of mulberry
fruit C3Y to free radicals
2. 5 桑椹 C3Y对 H2O2诱导损伤肝细胞的保护作用
图 8 H2O2对人胚肝细胞 L-O2 的生长抑制作用
Fig. 8 Inhibition of H2O2 to growth of L-O2 human
embryonic hepatic cells
2. 5. 1 H2O2 诱导浓度 由图 8 可知，随着 H2O2处
理浓度的不断升高，H2O2对人胚肝细胞 L-O2 生长表
现出明显的抑制作用，其对 L-O2 细胞的半数抑制浓
度(IC50)约为 2. 4 μmol /mL。为此，本研究选用 2. 4
μmol /mL H2O2 诱导制备人胚肝细胞损伤模型。
第 3 期 钱文春等:不同品种桑椹中的矢车菊-3-芸香苷(C3Y)含量及桑椹 C3Y的抗氧化作用 511
2. 5. 2 桑椹 C3Y对细胞的保护作用 桑椹 C3Y对
H2O2诱导损伤的 L-O2 细胞具有明显的保护作用，
随处理组桑椹 C3Y 浓度增加，其保护作用逐渐增
大，活细胞数量显著高于H2O2诱导损伤模型组(P ＜
0. 01)(图 9)。电子显微镜下观察细胞的增殖情况
(图 10)与 MTT 测定结果基本一致:正常细胞贴壁
生长，分界清楚，呈不规则多边形;桑椹 C3Y 对正常
细胞的形态无明显影响;H2O2处理可导致单位面积
内细胞数量明显减少，细胞萎缩脱落;加入桑椹 C3Y
则可减轻 H2O2对细胞的损伤，细胞数量显著增加，
细胞形态未见明显异常。另外，桑椹 C3Y对正常细
胞的增殖也有显著促进作用(数据略)。
1—正常对照组，2—H2O2诱导损伤模型组，3 ～ 5—分别为 50、100、
200 μg·mL －1桑椹 C3Y处理组。＊＊P ＜ 0. 01。
1—Normal control group，2—Model group of H2O2 injury，
3 － 5—Treatment group with 50，100，
200 μg·mL －1 mulberry fruit C3Y，respectively．
图 9 桑椹 C3Y促进 H2O2诱导损伤人胚肝细胞
L-O2 增殖的作用
Fig. 9 Proliferation effect of mulberry fruit C3Y to H2O2 induced
injury on L-O2 human embryonic hepatic cells
A．正常对照组 B． 200 μg·mL －1桑椹 C3Y处理组
C． 2. 4 μmol·mL －1 H2O2 诱导损伤模型组
D． 2. 4 μmol·mL －1 H2O2 + 200 μg·mL －1 C3Y处理组
A． Normal control group B． 200 μg·mL －1 C3Y treatment group
C． 2. 4 μmol·mL －1 H2O2 treatment group
D． 2. 4 μmol·mL －1 H2O2 + 200 μg·mL －1 C3Y treatment group
图 10 电子显微镜下观察桑椹 C3Y对人胚肝细胞
L-O2 增殖的影响
Fig. 10 Proliferation effect of mulberry fruit C3Y on L-O2
human hepatic embryonic cells observed under
electron microscope
2. 5. 3 桑椹 C3Y 的胞内抗氧化作用 测定桑椹
C3Y处理 H2O2诱导损伤肝细胞 L-O2 中的 MDA 含
量和 SOD、GSH-Px活性，结果如表 1 所示。当用质
量浓度为 200 μg /mL的桑椹 C3Y处理后，能够清除
L-O2 细胞内产生的 MDA，提高细胞抗氧化酶 SOD
和 GSH-Px的活性，桑椹 C3Y 表现出明显的胞内抗
氧化作用。
表 1 桑椹 C3Y对人胚肝细胞 L-O2 部分生化指标的影响(珋x ± s，n = 4)
Table 1 Effect of mulberry fruit C3Y on the biochemical parameters of L-O2 human hepatic cells (珋x ± s，n = 4)
组别
Group
MDA浓度 / (mmol·L －1)
Concentration of MDA
SOD活力 / (kU·L －1)
Activity of SOD
GSH-Px活力 / (kU·L －1)
Activity of GSH-Px
正常对照组 Normal control group 0. 78 ± 0. 12 49. 75 ± 5. 24 139. 65 ± 10. 52
H2O2诱导损伤模型组 H2O2 model group 2. 54 ± 0. 34＊＊ 12. 53 ± 4. 65＊＊ 22. 75 ± 4. 59＊＊
200 μg·mL －1桑椹 C3Y处理组
Treatment group with 200 μg·mL －1
mulberry fruit C3Y
1. 17 ± 0. 13＊＊，## 31. 17 ± 5. 89＊＊，## 51. 46 ± 8. 27＊＊，##
＊＊示与正常对照组比较 P ＜ 0. 01;##示与模型组比较 P ＜ 0. 01。
Compared with normal control group，＊＊P ＜ 0. 01． Compared with model group，##P ＜ 0. 01．
512 蚕 业 科 学 2014;40 (3)
3 讨论
本项研究采用 HPLC 法检测不同果桑品种桑椹
鲜果中的 C3Y 含量存在明显差异，其中日本田橙的
桑椹 C3Y质量分数高达 0. 135 5%左右，而桂花蜜的
桑椹 C3Y质量分数仅有0. 000 4%。稳定性试验结果
表明，桑椹鲜果 － 20 ℃冷冻保存可适当减缓 C3Y的
降解，常温(25 ℃)下放置桑椹 C3Y的降解率随着时
间延长而显著增高，可能是由于桑椹长期暴露于空气
中导致 C3Y被氧化分解［9 － 10］，再次证明桑椹鲜果采
摘后须及时提取花青素，并在密闭、低温环境中储藏。
江岩［11］进行的桑椹花青素粗提物抗氧化试验
表明其可显著提高果蝇体内抗氧化酶 GSH-Px、SOD
及 CAT 的活性，降低 MDA 的含量。进一步试验发
现桑椹花青素具有显著的体外清除二苯代苦味酰
肼自由基(DPPH 自由基)、超氧阴离子自由基
(O2 －)和羟自由基(·OH)能力［12］。Tsuda 等［3］利用
亚油酸自动氧化系统、脂质体系统、兔血红细胞膜
系统和鼠肝粗粒体系统对 C3G 和矢车菊色素(Cy)
的抗氧化活性进行检测，发现在所用系统中 C3G 和
Cy都具有很强的抗氧化活性:在脂质体系统和兔血
红细胞膜系统中，Cy 具有与 A-生育酚同样的抗氧
化活性并且比 C3G的抗氧化活性强;在鼠肝粗粒体
系统中，Cy和 C3G 表现出比 A-生育酚更强的抗氧
化活性。本项研究通过体外清除自由基的试验发
现，桑椹 C3Y 对·OH 具有明显的清除作用，但对
O2 －的清除活性较弱。体外细胞培养实验发现桑椹
C3Y对 H2O2诱导损伤的人胚肝细胞 L-O2 具有明显
的保护作用，并随处理组桑椹 C3Y 浓度增加，活细
胞数量显著高于 H2O2诱导损伤模型组(P ＜ 0. 01)。
推测桑椹 C3Y发挥对 H2O2 诱导损伤肝细胞保护作
用的原因可能是具有对细胞的促增殖作用和对·OH
的显著清除活性，并能清除细胞内产生的 MDA 以
及提高细胞内抗氧化酶 SOD和 GSH-Px的活性。具
体的保护作用机制有待进一步研究。
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