全 文 ：园 　艺 　学 　报 　2005, 32 (6) : 1125～1128
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期 : 2005 - 01 - 17; 修回日期 : 2005 - 06 - 28
基金项目 : 四川省教育厅资助项目 ; 四川省重点学科建设项目
光叶子花茎段愈伤组织的诱导及其植株再生的研究
龚　伟　胡庭兴　宫渊波　熊庆娥　王景燕　张　健　李　俊
(四川农业大学生态林业工程省级重点实验室 , 雅安 625014)
摘 　要 : 研究了光叶子花 (B ougainvillea g labra Choisy) 茎段愈伤组织的诱导及植株再生。结果表明 :
愈伤组织诱导以 MS +BA 310 mg·L - 1 + 2042D 012 mg·L - 1 +NAA 011 mg·L - 1培养基最好 , 茎段愈伤组织
的诱导率和分化率分别达 7812%和 2516%。不定芽的产生有两种类型 : 直接从茎段基部诱导产生不定芽和
茎段基部形成大块愈伤组织后再从愈伤组织上分化出不定芽。丛生苗诱导以 MS + BA 210 mg·L - 1 + NAA
011 mg·L - 1为培养基 , 增殖倍数可达 514, 当培养基中 BA 310 mg·L - 1和 2042D 015～110 mg·L - 1时再生
植株会出现叶片变异现象。MS +BA 012 mg·L - 1 + GA3 015 mg·L - 1 +NAA 011 mg·L - 1培养基对有效苗培
养具有较好的效果 ; 生根诱导以 MS +NAA 310 mg·L - 1培养基诱导率最高 , 为 8813%。
关键词 : 光叶子花 ; 茎段 ; 愈伤组织诱导
中图分类号 : S 685116　　文献标识码 : A　　文章编号 : 05132353X (2005) 0621125204
Ca llus Induction and Plan t Regenera tion from Stem Segm en t of B ouga invillea
g labra Cho isy
Gong W ei, Hu Tingxing, Gong Yuanbo, Xiong Q ingpie, W ang J ingyan, Zhang J ian, and L i Jun
(S ichuan Provincial Key Laboratory of Ecological Forestry Eng ineering, S ichuan A gricu ltura l U niversity, Yapian 625014, China)
Abstract: This paper mainly dealt with the studies on callus induction and p lant regeneration from stem
segment of B ougainvillea g labra Choisy. The results showed thatMS medium supp lemented with BA 310 mg·
L - 1 + 2042D 012 mg·L - 1 +NAA 011 mg·L - 1 was best for callus induction in which the induction rate and
differentiation rate of callus were 7812% and 2516% , respectively. Two types of shoots were observed: the
first type of shootswas directly induced from the bottom of stem segment, the second type of shoots differentia2
ted from the callus induced at the bottom of stem segment. MS medium containing BA 210 mg·L - 1 + NAA
011 mg·L - 1 was best for clump shoots induction in which the ratio of multip lication was 514, while BA and
2042D increased to 310 mg·L - 1 and 015 - 110 mg·L - 1 respectively would result in leaf variation of regener2
ated p lants. MS medium containing BA 012 mg·L - 1 + GA3 015 mg·L - 1 +NAA 011 mg·L - 1 gave best re2
sult for efficient seedling culture. MS medium containing NAA 310 mg·L - 1 was best for root induction where
the rate of rooting was 8813%.
Key words: B ouga invillea g labra Choisy; Stem segment; Callus induction
1　目的、材料与方法
光叶子花 (B ougainvillea g labra Choisy) 属紫茉莉科叶子花属 , 原产巴西 , 极具观赏价值 , 近年
来苗木供不应求 , 我国引入的同属植物还有叶子花 (B ouga invillea spectabilis W illd)。目前有关光叶子
花和叶子花的组织培养主要是通过茎尖、顶芽、带腋芽茎段诱导形成再生植株〔1～3〕。本试验旨在通过
茎段直接诱导产生不定芽或诱导愈伤组织产生不定芽 , 并在此基础上探索最佳培养程序 , 进一步完善
快繁技术 , 为其组培苗工厂化生产提供科学资料。
2002年 5月中旬 , 以四川农业大学林木遗传育种实验场盆栽光叶子花栽培变种玫瑰叶子花
园 　　艺 　　学 　　报 32卷
(B. g labra‘Sanderiana’) 为取材植株 (图版 , 1)。选取生长健壮、无病虫害的半木质化枝条 , 剪成
约 4～5 cm的茎段 , 去除叶片 , 先在 1% 洗衣粉和 1% 消洗灵水中漂洗 10 m in, 再用自来水冲洗 1 h,
然后在无菌超净工作台上用 75%酒精消毒 015 m in, 转入 011%的升汞溶液中消毒 6～8 m in, 最后用
无菌水冲洗 5～6次。将材料切割成 015～1 cm的茎段接种于愈伤组织诱导培养基上 , 暗培养 7 d后
转入光照培养。诱导培养以 1 /2MS、MS、B5为基本培养基 , 添加不固浓度的 BA、2042D、NAA , 琼
脂 017% , 蔗糖 3%。培养温度为 (25 ±2) ℃, 光照强度 1 500～2 000 lx, 光照 12 h /黑暗 12 h。每处
理接种 60个外植体 , 培养 50 d后统计外植体愈伤组织的诱导率和分化率。将获得的愈伤组织块和不
定芽接种于继代增殖培养基上培养 , 继代培养以 MS为基本培养基。经过 1～2次继代后愈伤组织逐
渐分化出不定芽 , 每个处理接种 30个外植体 , 继代时间 40 d, 继代 5次后统计增殖倍数。将继代后
的丛生苗接种于有效苗培养基上 , 每个处理接种 30个约 1 cm2 芽丛 , 培养 30 d后统计有效苗 (苗高
> 3 cm ) 数和有效苗高。将 3 cm以上的芽苗切割接入生根培养基中 , 每处理接种 60个无根单苗 ,
30 d后统计生根情况。
2　结果与分析
211　愈伤组织的诱导和不定芽的发生
将光叶子花茎段接种于愈伤组织诱导培养基中培养 , 12 d后部分外植体基部开始膨大 , 随后便
逐渐开始形成黄白色颗粒状的愈伤组织 , 30 d后部分早期形成的愈伤组织开始转绿并逐渐分化出小
丛芽 , 而未分化出小丛芽的外植体基部愈伤组织生长较迅速。观察发现其不定芽的发生有两种类型 :
一是茎段基部膨大产生较少愈伤组织后很快分化出不定芽 (A型 , 图版 , 2) ; 二是茎段基部形成较
大的愈伤组织且经过较长时间才分化出不定芽 (B型 , 图版 , 3、4)。李师翁等〔2〕曾用叶子花的嫩茎
和叶为外植体诱导愈伤组织 , 杜天奎等〔3〕也采用叶片为外植体诱导愈伤组织 , 虽然都能高频率诱导
产生愈伤组织 , 但没能诱导产生不定芽 , 这可能与所取材料、培养基和愈伤组织分化所需时间长短有
关。
从表 1中可以看出 , 茎段愈伤组织的形成和分化都受培养基类型、生长调节剂种类及浓度的影
响 , 以 MS为基本培养基比以 1 /2MS和 B5为基本培养基好 , 添加了 BA的培养基比没添加的好 , 说
明 MS更适合于光叶子花茎段愈伤组织的诱导和分化 , BA对其有较好的促进作用。另外 A9培养基有
较高的愈伤组织诱导率和分化率 , 因此比较适合光叶子花茎段愈伤组织诱导和分化的培养基为 A9,
即 MS +BA 310 mg·L - 1 + 2042D 012 mg·L - 1 +NAA 011 mg·L - 1。
表 1　培养基对光叶子花茎段愈伤组织诱导和芽分化的影响
Table 1　Effects of m ed ium on ca llus induction of B ouga invillea g labra Cho isy stem segm en t and shoots d ifferen tia tion
培养基 Medium
代号
Code
基本培养基
Basic medium
BA
(mg·L - 1 )
2042D
(mg·L - 1 )
NAA
(mg· L - 1 )
存活茎段数
No. of survived
stem segments
诱导率
Induction
rate ( % )
分化率
Rate of
differentiation ( % )
A1 1 /2MS 0 012 011 47 614 0
A2 1 /2MS 110 012 011 39 3815 0
A3 1 /2MS 210 012 011 53 5417 1013
A4 1 /2MS 310 012 011 42 6119 1514
A5 1 /2MS 410 012 011 45 4617 0
A6 MS 0 012 011 50 1210 0
A7 MS 110 012 011 43 4615 510
A8 MS 210 012 011 47 6811 1818
A9 MS 310 012 011 55 7812 2516
A10 MS 410 012 011 46 5615 1115
A11 B5 0 012 011 41 918 0
A12 B5 110 012 011 54 4216 0
A13 B5 210 012 011 48 5010 1215
A14 B5 310 012 011 42 5711 813
A15 B5 410 012 011 46 4113 513
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　6期 龚 　伟等 : 光叶子花茎段愈伤组织的诱导及其植株再生的研究 　
212　丛生苗的诱导
将获得的愈伤组织和愈伤组织分化出的小丛芽转入各继代培养基中进行丛生苗诱导。在第 1次继
代培养中大部分的愈伤组织能在 C1、C2、C5、C6、C9、C10培养基上分化出不定芽 , 其中以 C5培
养基的分化率最高 , 接种的不定芽在各培养基上均能增殖。在第 2、3次继代培养过程中发现 , 切割
后的小芽块在接种后 6～8 d愈伤组织才开始逐渐恢复生长和分化能力 , 在 30 d左右分化出的芽苗生
长较迅速 , 之后便逐渐减缓 , 40 d后芽苗生长趋于平稳且愈伤组织基本上停止生长和分化 , 50 d后
部分丛生苗叶片开始枯黄脱落 , 愈伤组织基部培养基变黄 , 有的甚至从丛生苗基部长出根来 , 初步拟
定适宜的继代培养周期为 40 d。从第 4次继代培养开始 , 丛生苗的增殖倍数趋于稳定 (图版 , 5)。
从表 2可以看出 , 相同 BA浓度的培养基中 , 随着 2042D浓度的升高丛生苗增殖倍数逐渐降低 ,
说明 2042D对光叶子花丛生苗的诱导有一定的抑制作用。在 C11和 C12两种培养基上诱导出的丛生
苗均存在极个别芽苗的个别叶片变异现象。光叶子花的叶片是全缘的 , 但经以上两种培养基诱导后个
别叶片先端变成了 2～5浅裂。在以往有关光叶子花和叶子花组织培养的报道中未见再生植株叶片变
异现象报道。出现光叶子花组培苗叶片变异的可能原因 : (1) 高浓度的 BA和 2042D共同作用的结
果 , 有研究表明含有多种生长调节剂时诱变率要大于单一生长调节剂的 , 而 2042D的复合生长调节剂
诱变率又大于其单一生长调节剂的诱变率〔4〕; (2) 本试验是通过愈伤组织途径产生的再生植株 , 大
量试验研究表明通过愈伤组织途径产生的再生植株可能产生变异。本研究结果表明 , MS + BA 210
mg·L - 1 +NAA 011 mg·L - 1效果较好 , 不仅丛生苗增殖倍数较高 , 而且对愈伤组织分化出不定芽也
有较好的促进作用。
表 2　生长调节剂对光叶子花丛生苗诱导的影响
Table 2　Effects of growth regula tor on B ouga invillea g labra Cho isy clum p shoots induction
培养基 Medium
代号 Code BA (mg·L - 1 ) 2042D (mg·L - 1 ) NAA (mg·L - 1 ) 增殖倍数Ratio of multip lication 芽苗高度Height of shoots( cm) 叶片生长状况Leaf growth state
C1 110 0 011 313 210 正常 Normally
C2 110 012 011 219 119 正常 Normally
C3 110 015 011 218 116 正常 Normally
C4 110 110 011 215 113 正常 Normally
C5 210 0 011 514 214 正常 Normally
C6 210 012 011 512 119 正常 Normally
C7 210 015 011 413 115 正常 Normally
C8 210 110 011 317 114 正常 Normally
C9 310 0 011 416 118 正常 Normally
C10 310 012 011 318 116 正常 Normally
C11 310 015 011 315 115 叶变异 Leaf variation
C12 310 110 011 314 112 叶变异 Leaf variation
213　有效苗培养
通过愈伤组织诱导出的丛生芽增殖系数较高 , 但绝大部分芽苗高度在 2 cm左右而且比较幼嫩 ,
不宜进行生根诱导。将丛生苗进行有效苗培养 30 d后 , 4种培养基 (植物生长调节剂浓度单位为
mg·L - 1 , 下同 ) MS +BA 012 + NAA 011, MS + BA 012 + GA3 015 + NAA 011, MS + BA 015 + NAA
011和 MS +BA 015 + GA3 015 +NAA 011中的有效苗数分别为 315、411、214、218; 有效苗高分别为
318、416、312、315 cm。以上结果表明 , 在有效苗培养时降低 BA浓度并添加适量的 GA3 , 对丛生苗
的长高有较好的促进作用 , 并且芽苗的木质化程度大大提高 , 采用第 2种培养基对有效苗培养有较好
的效果 (图版 , 6)。
214　生根诱导
切取有效苗转入生根培养基中进行生根诱导 , 4 d后芽苗基部切口处开始突起 , 6 d后逐渐分化
出根的生长点 , 7 d后能形成白色的小根 , 30 d后 7种培养基 MS、MS + NAA 110、MS + NAA 210、
MS +NAA 310、MS + IBA 110、MS + IBA 210和 MS + IBA 310中生根率分别为 0、5117%、7010%、
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8813%、5617%、6813%、8313% ; 生根时间分别为 > 30、13、9、7、14、12、8 d; 根数分别为 0、
118、310、316、117、311、411; 根长分别为 0、116、215、311、113、212、218 cm。以上结果表
明 , 添加 NAA和 IBA对光叶子花不定根的诱导具有较好的促进作用 , 并且两者在相同浓度下对不定
根的诱导效果相当 , 都随浓度的增加生根率提高 , 生根时间缩短 , 根数和根长增加。因此 , 第 4种和
第 7种培养基对不定根的诱导效果最好 , 而且生根整齐、健壮、多呈辐射状伸长 (图版 , 7)。
215　生根苗移栽
将发育良好的生根苗移离培养室 , 在室温散射光下培养 3 d, 打开封口膜于温室大棚中预培养
2 d, 洗去根部培养基 , 移栽于经福尔马林消毒的河沙和蛭石 ( 1∶1) 为基质的小花盆中 , 置于半荫
处 , 并用地膜覆盖保湿 10 d, 每天揭开地膜通风 30 m in, 注意浇水 , 15 d后便可去除遮荫网直接在自
然条件下生长 (图版 , 8) , 30 d成活率可达 90%以上 (移栽 300株 , 成活 274株 )。
参考文献 :
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图版说明 : 1. 取材母株 ; 2. 不定芽 (A型 ) ; 3. 愈伤组织 ; 4. 不定芽 (B型 ) ; 5. 丛生苗 (40 d) ; 6. 有效苗培养 ; 7. 生根培养
(30 d) ; 8. 移栽成活的试管苗 (60 d)。
Explana tion of pla tes: 1. Maternal p lant; 2. Type A of shoots induced from stem segment; 3. Callus induced from stem segment; 4. Type B of
shoots induced from callus; 5. Clump shoots (40 d) ; 6. Efficiency seedlings culture; 7. Rooting seedlings (30 d) ; 8. Survived in vitro p lantlets
transp lanted in flowerpots (60 d) .
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