全 文 ：第 18 卷 第 2 期
Vol. 18 No. 2
草 地 学 报
ACTA AGRESTIA SINICA
2010 年 3 月
Mar . 2010
胶质芽孢杆菌遗传多样性 ISSR分析
赵 艳1 , 洪坚平1* , 张晓波2
( 1. 山西农业大学资环学院, 山西 太谷 030801; 2. 海南大学农学院, 海南 海口 571737)
摘要: 胶质芽孢杆菌( Bacillus mucil aginosus)具有分解土壤矿物释放钾素和水溶性磷的能力而被广泛用于微生物
肥料的生产,为了解不同禾本科植物根际胶质芽孢杆菌遗传多样性, 利用 ISSR 标记对 31 份胶质芽孢杆菌材料进
行遗传差异分析。从 100 条通用 ISSR引物中筛选到 18 条重复性好、条带清晰的引物, 31 份材料共产生多态性条
带 112条, 依据 ISSR数据, 利用非加权平均法( UPGMA)构建聚类树,将 31 份胶质芽孢杆菌材料分为主要的 2 个
聚类;材料间的遗传相似系数值为 0. 21- 0. 97; 其中菌株 K04(山西太谷 )与 K17(海南三亚) 以及 K08(北京 )与
K25(海南文昌)之间的遗传相似系数最小( 0. 21) , 从山西太谷不同植物根际分离的菌株 K03 与 K04 之间的遗传相
似系数最大( 0. 97) ; 协表相关系数( r)为 0. 94, 表明聚类分析的结果与原遗传距离矩阵之间的拟合程度极高。利用
主成分分析可将 31 个材料清晰地分为 3 个类群, 与聚类树( GS = 0. 55)所得到的结论相一致。研究结果表明不同
植物根际分离的胶质芽孢杆菌材料间表现出较为丰富的遗传多样性, 同时表明菌株的聚类结果和其地域性分布之
间呈现出较明显相关性。
关键词:胶质芽孢杆菌; ISSR; UPGMA; PCO; 遗传多样性
中图分类号: Q943 文献标识码: A 文章编号: 1007-0435( 2010) 02-0212-07
Analysis of Genetic Diversity in Bacillus mucilaginosus
Determined by Inter-simple sequence repeats Markers
ZHAO Yan
1
, HONG Jian-ping
1*
, ZHANG Xiao-bo
2
( 1. C ol lege of Resources & Environm ent , Shanxi agricultural univer sity, T aigu , S han xi Province 030801;
2. Hainan univer sity of agricu lture, H aik ou , H ainan Province 571737)
Abstract: T he Baci llus mucilag inosus was w idely used for the product ion o f microbial fert ilizer by its abil-i
ty to deg rade soluble soil mineral compounds w ith the release of potassium and w ater-so luble phosphorous.
The object ive of this study w as to assess the genet ic diversity o f Bacil lus muci laginosus isolated f rom rh-i
zosphere of dif ferent gramineous plant . The genet ic variat ion of 31 Bacil lus mucilaginosus accessions has
been analyzed by Inter-simple sequence r epeats ( ISSR) marker s. Eighteen screened from 100 genera-l pur-
pose pr imer s generated 112 highly repeatable po lymo rphic bands. A dendrogram const ructed on the basis
of the unw eighted pair group method arithmet ic average ( U PGMA) clustering alg orithm revealed that 31
accessions formed tw o primary distinct clusters. Genet ic similarity coef ficients calculated from the ISSR
data ranged from 0. 21 to 0. 97 w ith the low est value of 0. 21 measured betw een K04 and k17 from T aigu,
Shanxi and Sanya, Hainan, K08 and K25 from Beijing and Wenchang, Hainan, respect ively. T he highest
value of 0. 97 w as measured betw een K03 and K04 from T aigu, Shanxi. T he cophenet ic corr elat ion coeff-i
cient ( r) w as 0. 94, indicat ive of a very good fit betw een the data matrix and the result ing cluster analy sis.
Principal co ordinate analysis ( PCO) clear ly g rouped 31 accessions on the thr ee axes, and the PCO cluste-
r ing pat tern co rresponded w ell w ith the dendr ogram ( GS= 0. 55) . In conclusion, these results r ev ealed a
high genet ic diversity among Bacil lus mucilag inosus accessions iso lated f rom various plant rhizosphere,
and the clustering and geogr aphical or ig in of accessions w ere co rrelated obviously.
Key words: Baci llus muci laginous ; ISSR; U PGMA; PCO; Genetic Div ersity
胶质芽孢杆菌( Bacil lus mucilaginosus )俗称硅
酸盐细菌[ 1] ,可分解长石、云母等铝硅酸盐类的原生
态矿物,使土壤中难溶性 K、P等转变为可溶性以供
植物生长利用,同时还会产生多种生物活性物质促
进植物生长[ 2] 。大量实验[ 3]表明以胶质芽孢杆菌为
主要成份的生物钾肥在缺钾土壤上对各种农作物表
收稿日期: 2009-11-16;修回日期: 2010- 01-05
基金项目:海南省自然科学基金( 309009) ;山西省科技攻关项目( 2006031099- 01-03)资助
作者简介:赵艳( 1981- ) ,女,山西太谷人,讲师,博士研究生,研究方向为土壤微生物, E-mail: yanbo315@ 126. com, * 通讯作者 Author for
cor resp on dence, E-m ail: angiaoo@126. com
第 2期 赵艳等:胶质芽孢杆菌遗传多样性 ISSR 分析
现出较好的增产效果, 是行业内学者普遍认可的微
生物菌剂。我国钾肥资源严重不足,国家每年需大
量外汇进口无机钾肥;因此,开发利用生物钾肥不仅
保护生态环境并带来较高的经济效益。目前对于胶
质芽孢杆菌的研究主要集中在解钾强度及促生效应
等方面,对于遗传多样性方面的研究却不多见。
简单序列重复间区 ( Inter-simple sequence r e-
peat )标记技术是在 SSR基础上发展起来的一项新
的标记技术[ 4] , 该分子标记技术根据生物广泛存在
SSR的特点,利用在生物基因组常出现的 SSR本身
设计引物,无需预先克隆和测序; 且具有多态性高,
重复性好, 能够提供更多的信息等优点[ 5] ,已广泛用
于生物遗传连锁图谱的构建[ 6] 、基因定位 [ 7]、种质资
源鉴定[ 8]、分类[ 9]、进化和遗传多样性分析[ 10, 11] 等
方面的研究。本研究运用 ISSR分子标记技术对 31
份胶质芽孢杆菌材料进行遗传多样性分析,从分子
水平上探讨这些菌株的遗传多样性, 对胶质芽孢杆
菌资源的鉴定及开发利用具有一定的参考价值。
1 材料与方法
1. 1 供试材料
供试菌株为从不同植物(大部分为禾本科牧草
及草坪草)根际土样中分离得到的 30株胶质芽孢杆
菌(已根据菌落形态、菌体形态及生理生化反应并参
照对照菌株 K31按照伯杰氏分类法对所筛选到的
菌株进行鉴定) (表 1) , 分离纯化后菌株转接于 LB
培养基斜面, 4 保存备用。
参照菌株为胶质芽孢杆菌 LICC10201 (编号
K31) ,购于辽宁省菌种保藏中心。
表 1 胶质芽孢杆菌材料的编号和来源
Table 1 Accession code and o rigins of Bacillus mucilaginosus accessions
材料编号
Acces sion code
土壤类型
Soil type
采集地
C ol lect locat ion
植物
Plant
K01
褐土
Drab soil
山西太谷
T aigu, Sh anxi
小麦
Tr i ti cum aest iv um L.
K02
褐土
Drab soil
山西太谷
T aigu, Sh anxi
玉米
Zea mays L.
K03
褐土
Drab soil
山西太谷
T aigu, Sh anxi
高粱
S org hum vulg are Pers.
K04
褐土
Drab soil
山西太谷
T aigu, Sh anxi
谷子
P enni se tum g laucum L .
K05
褐土
Drab soil
山西太谷
T aigu, Sh anxi
草地早熟禾
P oa p ratensi s L.
K06
褐土
Drab soil
山西太谷
T aigu, Sh anxi
羊草
L eymus chinensi s Tzvel.
K07
草甸土
Meadow soi l
北京
Beijin g
野牛草
Buchloe d actyloid es ( Nut t . ) E ngelm .
K08
潮土
Moisture s oil
北京
Beijin g
高羊茅
Festuca arun dinacea S chreb.
K09
潮土
Moisture s oil
北京
Beijin g
披碱草
E ly musd ahuri cus Tu rcz.
K10
棕壤土
Brun isolic soil
北京
Beijin g
一年生黑麦草
L ol ium mu lt i f l or um L.
K11
棕壤土
Brun isolic soil
北京
Beijin g
多年生黑麦草
L ol ium p erenne L.
K12
草甸土
Meadow soi l
北京
Beijin g
匍匐翦股颖
A gr ost isstolonif era P alustr i s Huds.
K13
草甸土
Meadow soi l
北京
Beijin g
细弱翦股颖
A g rosti sstoloni f e ra acp i llari s L.
K14
棕壤土
Brun isolic soil
北京
Beijin g
无芒雀麦
Bromus inermis Ley ss.
K15
棕壤土
Brun isolic soil
北京
Beijin g
假俭草
E remochloa op hiuroides Munro.
K16
滨海盐土
S eashore s alin e soil
海南三亚
Sanya, H ainan
华南地毯草
Ax onop us compr essus Sw . Beauv.
213
草 地 学 报 第 18卷
续表
材料编号
Acces sion code
土壤类型
Soil type
采集地
C ol lect locat ion
植物
Plant
K17
滨海盐土
S eashore s alin e soil
海南三亚
Sanya, H ainan
华南半细叶结缕草
Zoysia matr el la L.
K18
滨海盐土
S eashore s alin e soil
海南三亚
Sanya, H ainan
狗牙根
Cynodon dac ty lon L.
K19
滨海盐土
S eashore s alin e soil
海南三亚
Sanya, H ainan
海滨雀稗
P aspalum vag inatum Sw .
K20
砖红壤
laterit e
海南文昌
Wenchang, Hainan
甘蔗
Sac charum of f i cinarum L.
K21
滨海沙土
S eashore s andy soil
海南文昌
Wenchang, Hainan
坚尼草
Panicum max imum Jacq.
K22
滨海沙土
S eashore s andy soil
海南文昌
Wenchang, Hainan
青绿黍
Panicum Max imum Var . Trichoglume
K23
滨海沙土
S eashore s andy soil
海南文昌
Wenchang, Hainan
黑籽雀稗
Pasp alu matu atum Trin .
K24
滨海沙土
S eashore s andy soil
海南文昌
Wenchang, Hainan
棕籽雀稗
P aspalum p l ica tulum M ichx.
K25
滨海沙土
S eashore s andy soil
海南文昌
Wenchang, Hainan
杂交旗草
Br achiaria hybrid ( ruz i z ien si s x bri zan tha )Var. Mulat .
K26
滨海沙土
S eashore s andy soil
海南文昌
Wenchang, Hainan
珊状旗草
B rachiaria br iz antha var . Marandu.
K27
砖红壤
laterit e
海南儋州
Dan zhou, Hainan
水稻
Ory za. sat i va L.
K28
滨海盐土
S eashore s alin e soil
海南儋州
Dan zhou, Hainan
沟叶结缕草
Zoysia matr el la L.
K29
滨海盐土
S eashore s alin e soil
海南儋州
Dan zhou, Hainan
中华结缕草
Zoy sia sinica Hance
K30
滨海盐土
S eashore s alin e soil
海南儋州
Dan zhou, Hainan
细叶结缕草
Zoysia t enui f ol ia Wil ld. ex Trin .
1. 2 总 DNA 的提取与浓度测定
菌体总 DNA 提取按照胡开辉微生物学实
验[ 12] 进行, 利用分光光度法检测DNA 纯度和浓度
后将其稀释为 20 ng/L 备用。
1. 3 ISSR 反应体系
ISSR-PCR扩增反应体系为 20 L,各反应成分
用量分别为: React ion Buf fer ( 10 ) 2. 0 L、MgCl2
( 25 mmo l/ L ) 1. 6 L、dNT P( 2 mmol/ L ) 2. 0 L、
引物( 2. 0 mo l/ L ) 4. 0 L、模板 DNA ( 20 ng /L)
3. 0 L、Taq DNA 聚合酶( 5 U /L) 0. 2 L、ddH 2O
7. 2 L。ISSR引物、T aq DNA 聚合酶和 dNTP 均
购于上海生工。
PCR反应在 Biometr a Per sonal Thermal Cy-
cler上进行。扩增程序为: 94 预变性 5 min, 94
变性 1 min, 45- 60 退火 1 min, 72 延伸 2 m in,
35个循环后于 72 最终延伸 7 min。
1. 4 ISSR引物筛选及电泳检测
随机使用菌株 K04、K17和 K31共 3份材料的
总 DNA 模板进行 PCR 扩增, 从 100条 ISSR 引物
中选择重复性好且能产生清晰条带的引物,并筛选
其各自对应的最适退火温度,再对全部材料进行 PCR
扩增。
反应结束后向扩增产物加入 4 L 上样缓冲液,
在 1 TBE 缓冲系统中,用含有 0. 5 g/ L 溴化乙锭(
EB) 的 1. 8% 琼脂糖凝胶进行电泳 ( 5 V/ cm) , 2 h
后用凝胶电泳成像系统对凝胶检测并照相保存。
1. 5 数据处理
以 0或 1对电泳谱带进行统计,建立二元数据
矩阵,在相同迁移位置, 有扩增带记为 1, 无带记为
0; 利用软件 NT SYSpc V2. 10e 计算遗传相似系数
( Genet ic similarity, GS) [ 13] ; 然后利用非加权组平
均法( U nw eighted Pair-Group M ethod w ith Arith-
met ic means, U PGMA ) 构建聚类树[ 14] 及 PCO
( Principal Coordinate analysis)分析[ 15] ;根据 U PG-
MA聚类后的树形图矩阵( cophenetic matrix)与原
遗传距离, 利用软件 NTSYSpc V2. 10e 的子模块
MXCOMP 计算协表相关系数 r ( Cophenetic co rre-
lat ion coef ficient) ,来验证聚类树与原距离矩阵的
拟合程度( r 0. 9 表示 very good fit ; 0. 9> r0. 8
214
第 2期 赵艳等:胶质芽孢杆菌遗传多样性 ISSR 分析
表示 Good f it; 0. 7 r< 0. 8表示 Poor f it ; r < 0. 7表
示 Very poo r f it) [ 16] 。
2 结果与分析
2. 1 胶质芽孢杆菌 ISSR多态性分析
从 100条 ISSR 引物中共筛选出 18 条重复性
高、条带清晰的引物,对 31份胶质芽孢杆菌扩增(表
2)。这些引物的最适退火温度范围为 45. 5 -
58. 5 ; 18条引物共扩增出 181 条带, 平均每条引
物扩增出 10. 05条带; 其中扩增条带数最多的引物
为 U BC849 ( 15) (图 1a) , 扩增条带数最少的为
UBC886( 6) (图 1b) ;在 181条带中,有 112条重复性
好、清晰的多态性条带,多态性条带比率为 62%。
表 2 18 条 ISSR引物序列、退火温度和扩增结果
Table 2 Sequences o f 18 ISSR pr imer s, annealing temperatures and amplification r esults
引物编号
Prim er code
引物序列( 5- 3)
Prim er sequence
退火温度
Annealing
temperature( )
总扩增条带数
Total n umbers of
polymorphic bands
多态性条带数
Number of
polym or phic bands
多态性比率
Percentage of
polymorphic b ands ( % )
U BC 809 AGA GAG AGA GAG AGA GG 55. 5 11 9 82
U BC 813 CTC T CT CT C TCT CT C TT 48. 5 10 7 70
U BC 821 GTG TGT GT G T GT GTG T T 58. 5 12 7 58
U BC 825 ACA CAC ACA CAC ACA CT 55. 5 9 6 67
U BC 828 T GT GT G T GT GTG TGT GA 48. 0 7 5 71
U BC 831 AT A T AT AT A T AT AT A TYA 51. 5 12 6 50
U BC 840 GAG AGA GAG AGA GAG AYT 53. 0 11 5 45
U BC 849 GTG TGT GT G T GT GT G T YA 56. 0 15 9 60
U BC 855 ACA CAC ACA CAC ACA CYT 46. 5 9 5 56
U BC 864 AT G AT G AT G AT G AT G AT G 53. 5 7 5 71
U BC 872 GAT AGA T AG AT A GAT A 52. 0 11 7 64
U BC 876 GAT AGA TAG ACA GAC A 46. 5 8 5 63
U BC 878 GGA T GG AT G GAT GGA T 56. 5 11 7 64
U BC 880 GGA GAG GAG AGG AGA 55. 0 13 8 62
U BC 882 VBV ATA T AT AT A T AT AT 49. 5 10 7 70
U BC 886 VDV CT C TCT CTC T CT CT 55. 0 6 4 67
U BC 888 BDB CAC ACA CAC ACA CA 45. 5 11 6 54
U BC 891 HVH T GT GT G T GT GTG TG 57. 0 8 4 50
总计 Total 181 112 62
215
草 地 学 报 第 18卷
2. 2 胶质芽孢杆菌 ISSR聚类分析
基于 18 条 ISSR 引物的扩增结果, 用 N T-
SYSpc V2. 10e软件算出31份胶质芽孢杆菌材料间
的遗传相似系数( GS )值范围为 0. 21- 0. 97。其中
遗传相似系数值最大( 0. 97)的材料为 K03和 K04,
分别从山西太谷地区褐土的高梁、谷子根际分离得
到,其次是来自北京的 K09与 K13、K14与 K15, 以及
来自海南的 K26与 K29,材料间的遗传相似系数值达
到0. 96,说明上述材料之间的亲缘关系较近。遗传相
似系数值最小( 0. 21)的材料为来自山西太谷的 K04
与来自海南三亚的 K17、以及北京的K08与海南文昌
的K25,说明这些材料间其亲缘关系较远。
基于遗传相似系数, 按 U PGMA 法进行聚类分
析,获得了 31份材料的聚类树(图 2)。由聚类树将
31份胶质芽孢杆菌材料初步分为 2大类型(在等值
线 GS= 0. 53处) , 其中第 1大分支除了 K16与 K23
来自南方地区外, 其余材料都来源于北方地区(包括
参照菌株 K31) ; 而第 2大分支则全部是从南方地区
分离的材料; 在等值线 GS= 0. 55 处, 可以把 31份
材料分为 3个分支, 其中第一分支为山西地区的材
料先聚类在一起后又与来自海南的 2个材料聚类在
一起,分离自北京的菌株全部聚类在第 2分支, 其中
K08(分离自北京地区高羊茅根际)和参照菌株 K31
聚类在一起;第 3分支全部为从南方地区分离的菌
株(与等值线 GS= 0. 65处聚类相同) ;根据聚类图,
等值线 GS= 0. 65处又可把 31份材料聚为 5 类,其
中来自南方的材料分为 3类,北方的材料分为 2类;
根据以上聚类结果, 说明本实验分离到的胶质芽孢
杆菌材料间的亲缘关系与其地理来源存在较为明显
的联系。
图 2 基于 ISSR数据构建的 31 份胶质芽孢杆菌材料的 UPGMA聚类树
F ig . 2 Dendrogr am with U PGM A o f 31 Bacillus mucilaginosus accessions based on the ISSR data
2. 3 协表相关系数分析
利用软件 NT sys V2. 10e 的子模块 MXCOMP
计算得到协表相关系数 r ( Cophenet ic correlat ion
coef ficient)为 0. 94,说明 U PGMA聚类后的聚类树
与原距离矩阵之间的拟合程度极高,聚类树可以准
确地反映各参试材料间的遗传距离。
2. 4 胶质芽孢杆菌材料的 PCO分析
通过 NTsys V2. 10e软件的子模块 DCENTER
和 EIGEN 对 31 份胶质芽孢杆菌材料间的 ISSR标
216
第 2期 赵艳等:胶质芽孢杆菌遗传多样性 ISSR 分析
记的原始矩阵进行 PCO 分析(图 3) , 从图中可以清
楚地看出 31份材料的分布位置,位置相靠近者表示
关系密切,远离者表示关系疏远。结果表明主成分
分析结果与 U PGMA 聚类非常吻合。
图 3 基于 ISSR数据的 31 份胶质芽孢杆菌材料的 PCO分析
Fig . 3 P rincipal component ( PCO ) analy sis of 31 Bacil lus mucilag inosus accessions based on the ISSR data
3 讨论
3. 1 ISSR结合了 RAPD和 SSR的优点,具有较高
的多态性和稳定性,但引物及反应退火温度的筛选
直接影响实验结果, 所以在实验中引物的筛选和
PCR反应退火温度的摸索是该实验较关键的部
分[ 17, 18]。袁庆华等 [ 19] 以 6 份北京苜蓿假盘菌
( P seud op ez i z a med icagini s ( Lib. ) Sacc. )菌株为
试材,对 44 条 ISSR 引物在不同退火温度进行扩
增,结果发现 22条能产生条带清晰且多态性丰富的
图谱,最适退火温度为47- 50 ; 李旻等[ 20]应用 IS-
SR分子标记对 48份 B eauveria bassiana ( Bals. )
Vuill. 材料的遗传多样性进行了研究, 筛选出 12个
引物用于正式的扩增分析, 引物的最佳退火温度为
48- 54 ;本研究从 100条通用 ISSR引物中共筛
选出 18条扩增效果好的引物,这些引物的最适退火
温度范围为 45. 5- 58. 5 , 表明不同分析材料所需
要的试验条件具有差异。
3. 2 ISSR标记提供了一种分析遗传多样性、反映
材料间遗传关系的快速方法。许多菌物的遗传多样
性都已进行了 ISSR 分析, 如黑粉病菌 ( Usti la-
go) [ 21]、松木层孔菌( Dothi str oma p ini ) [ 22]、松枯梢
病( Sp haer op sis sap inea) [ 23]、高卢蜜环菌( A rmil l-
ar ia gal l ica Marxm. & Romagn. )
[ 24]、以及嗜酸丝
状放线菌 [ 25, 26] ; 于红梅等 [ 27] 对皮下盘菌属( H ypo-
derma) 23个菌株进行了 ISSR分析,结果表明 8 个
引物可将23个菌株聚为 6类,各菌株之间的 ISSR标
记的遗传相似性系数( GS)变异范围为 0. 30- 0. 82。
我国地域气候差异较大, 不同地区间的胶质芽
孢杆菌资源非常丰富, 本试验利用 ISSR 分子标记
对 31份胶质芽孢杆菌进行遗传多样性分析,结果表
明,筛选到的 18 个 ISSR 通用引物, 多态性条带比
率为 62% ,而且扩增结果均具有很好的重复性, 能
够将 31份胶质芽孢杆菌材料分开, 相似系数( GS)
为 0. 21- 0. 97,从而在分子水平上证实了不同禾本
科植物根际的胶质芽孢杆菌材料之间具有较丰富遗
传多样性。利用 U PGMA 法构建聚类树和 PCO分
析,将供试的 31份胶质芽孢杆菌材料基本分为 3个
类型,研究结果对于我国胶质芽孢杆菌资源的评价、
开发、利用及保护具有重要的意义。
3. 3 一些学者利用 ISSR 标记研究了棉花黄萎病
菌( Vert icil l ium d ahliae ) [ 28]、茄子黄萎病菌[ 29] 的遗
217
草 地 学 报 第 18卷
传多样性,表明不同菌株材料间亲缘关系与其地理
来源没有明显相关性。但杨水英等[ 30] 利用 r ep-
PCR对稻瘟病菌(Mag nap orthe gr isea )不同材料间
指纹图谱的研究表明菌株的遗传谱系与其采集地点
间有明显的相关性。本试验利用 ISSR 对胶质芽孢
杆菌材料的多样性进行研究, 结果表明除菌株 K16
与 K23外,其余各材料的聚类与其地理来源具有明
显联系,这一结果有待于进一步研究。但总体上, 试
验结果揭示了来源于不同地区的胶质芽孢杆菌材料
间遗传分化程度较高, 但来源于相同地区的材料间
遗传分化程度较低。
4 结论
4. 1 本试验利用 ISSR 标记对 31份胶质芽孢杆菌
进行遗传多样性分析, 从 100 条 ISSR通用引物中
共筛选出 18 条重复性高、条带清晰的引物, 引物的
最适退火温度范围为 45. 5- 58. 5 。
4. 2 依据 ISSR 数据, 利用非 加权平均 法
( UPGMA)构建聚类树,将31份胶质芽孢杆菌材料分为
主要的2个聚类;材料间遗传相似系数值为0. 21- 0. 97。
4. 3 利用筛选得到的 18条 ISSR 引物对 31 份胶
质芽孢杆菌菌株的遗传多态性进行评价, 结果表明
菌株的多态位点比率为 62%, 聚类分析和 PCO 分
析认为菌株间亲缘关系与其地理分布关系密切。
参考文献
[ 1 ] Liu W X, Xu X S, Wu X H , e t al . Decom posit ion of s ilicate
min erals by Bacil lus mucilaginosus in liquid cultu re[ J] . Env-i
ronm ental Geochem ist ry and H ealth, 2006, 28 ( 2) : 120-130
[ 2] 葛诚.微生物肥料生产应用基础[ M ] .北京: 中国农业出版社,
2000, 81- 84
[ 3] 中国微生物菌种保委员会农业微生物中心.中国农业菌种目录
[ M ] .北京:中国农业科技出版社, 1991, 1011
[ 4] Cekic C, Bat tey N H , Wilkinson M J . T he poten tial of IS SR-
PCR prim er- pai r combin at ions for genet ic lin kage analysis u-
sin g th e seasonal f low ering locus in Fragaria as a mode[ J ] .
T heoret ical and Applied Genet ics, 2001, 103( 4) : 540-546
[ 5] Shen J, Din g X, Liu D, et al . Inter s imple sequ ence repeats
( ISSR) molecular fingerprint ing markers for authent icating popu-
lat ions of Dendr obium of f icinale KIMURA et MIGO[ J] . Biolog-i
cal and Pharmaceut ical Bullet in, 2006, 29(3) : 420-422
[ 6] Amel S, M ik htar T, Salw a Z, et al . Inter- simple sequen ce r e-
peat fin gerprin t s to ass ess gen et ic diversity in t rnis ian fig( F i-
cus cari ca L. ) germ plasm[ J] . Genetic Resources and Crop E-
volut ion, 2004, 51: 269-275
[ 7] Ge X, Yu Y, Zhao N, e t al . Gen et ic variat ion in the endan-
gered inner m on gol ia en demic shrub T et raena mong ol i ca Ma-
z im. ( Zygophyllaceae) [ J ] . Biolgical Conservat ion, 2003, 111:
427-434
[ 8] Wolfe A D, Xian g Q, Kephart S R. Assessin g hyb ridizat ion in
natural populat ions of P enstemon ( S crophulariaceae) usin g hy-
pervariab le intersimple sequen ce repeat ( IS SR) bands [ J ] .
M ilecular Ecology, 1998, 7: 1107-1125
[ 9] Danilova T V, Dan ilov S S, Karlov G I. As ses sment of genet ic
polmorphism in hop ( H imu lus lup ulu s L . ) cul tivars by ISSR-
PCR analys is[ J] . Russ ian J ou rnal of Gen et ics, 2003, 39: 1252-
1257
[ 10] Pomper K W, Crab tr ee S B, Brow n S P, et al . As ses sment of
genet ic diversity of paw paw ( A simina t ri l oba) cult ivators with
inters imple sequence repeat markers[ J] . J ou rnal American S o-
ciety for H ort icultural Science, 2003, 128 ( 4) : 521-525
[ 11] T alh inhas T, Neves-Mart ins J, Leito J . ISSR mark ers reveal
high levels of gen et ic diversity among L upinus ssp [ J] . Plant
Breeding, 2003, 122: 507-510
[ 12] 胡开辉.微生物学实验[ M ] .北京:中国林业出版社, 2004, 116
[ 13] Roh lf F J . NT SYS-pc: Numerical T axonomy and Mult ivariate
Analysis Sys tem, Vers ion 2. 1, User Gu ide[ M ] . New York :
Exeter Softw are, 2000.
[ 14] Leg endre, L ou is. Numerical ecology[ M ] . Elsevier, 1998, 319-
321
[ 15] Gower, J. C. . Some pr op ert ies of latent r oot an d vector meth-
od s used in m ult ivariate analysis [ J ] . Biomet rik a, 1996, 53:
325-338
[ 16] Lapointe, F. J. and P. Legendre. Stat is ti cal s ignifican ce of the
matrix correlat ion coeff icient for comparing independ ent phy-
logenet ic tr ees[ J] . Syst . Biol , 1992, 41: 378- 384
[ 17] Gao J , Zhan g S , Qi L , e t al . Applicat ion of ISSR marker to
fin gerprin tin g of elit e cult ivars ( variet ies/ clones ) from differ-
ent sect ion s of the genus Populus L[ J] . Silvae Gen et ica, 2006,
55( 1) : 124
[ 18] 王方,袁庆华.冰草 ISSR-PCR反应体系的建立与优化[ J] . 草
地学报, 2009, 17( 5) : 354-357
[ 19] 袁庆华,张君艳.苜蓿假盘菌 ISSR 反应体系优化及指纹图谱
构建[ J] .草地学报, 2008, 16 ( 1) : 17-23
[ 20] 李旻,王四宝,樊美珍,等.森林生态系中球孢白僵菌遗传多样
性的 IS SR分析[ J ] .遗传, 2006, 28 ( 8) : 977- 983
[ 21] Menzies J G, Bakkeren G, M atheson F. U se of in ter s imple
sequ ence repeats and ampli fied f ragm ent len gth polym or-
phism s to analyz e gen et ic relation ship s am on g small grainin-
fect ing species of Ust i lag o[ J ] . E cology and Populat ion Biolo-
gy, 2003, 23( 2) : 167-175
[ 22] H irst P, Richardson T E, Carson S D, Bradshaw R E. Dothi s-
tr oma p ini genet ic diversi ty is low in New Zealand [ J ] . New
Zealand Journ al of Forest ry S cien ce, 2000, 29( 3) : 459- 472
[ 23] Burgess T, W ingf ield M J, W ingfield B W . Simple sequ ence re-
peat mark ers dist inguish among morp hotyp es of Sp haer op si s
sap inea[ J] . Applied an d En vi ronmen tal M icrobiology, 2001,
67 ( 1) : 354-362
[ 24] 孙立夫,杨国亭,秦国夫,等. 用 ISSR 标记高卢蜜环菌系统发
生学的尝试[ J] .植物研究, 2003, 23( 3) : 317-322
[ 25] 徐春光,梁秀梅,黄英,等.云南酸性土壤中度嗜酸链霉菌的多
样性[ J] .微生物学报, 2008, 48: 421-425
[ 26] 丁芸,黄英,阮继生,等.嗜酸丝状放线菌的选择性分离与多样
性[ J] .微生物学报, 2009, 49( 6) : 710-717
[ 27] 于红梅,林英任,陈莉,等.皮下盘菌属种内及种间遗传多样性
的 IS SR分子标记[ J ] .微生物学杂志. 2009, 29( 2) : 12- 16
[ 28] 姜占发.棉花黄萎病菌基因组 ISSR分子指纹分析[ D] : [硕士
学位论文] .石家庄:河北农业大学, 2002
[ 29] 李海莲.茄子黄萎病病原菌鉴定及其 ISSR 分子指纹分析[ D] :
[硕士学位论文] .石家庄:河北农业大学, 2005
[ 30] 杨水英,肖崇刚,韩海波, 等.重庆稻瘟病菌不同菌株 DNA 指
纹图谱分析[ J] .西南农业大学学报, 2002, 24 ( 3) : 235-237
(责任编辑 李 扬)
218