全 文 ：第 19 卷
第 2 期

Vol. 19
No. 2
草
地
学
报
ACTA AGRESTIA SINICA



2011 年
3 月

M ar.

2011
内蒙古地区草地螟白僵菌不同地区遗传多样性分析
刘爱萍1 , 曹艺潇1 , 徐林波1 , 高书晶1, 吴晋华1 , 谢丙仁2
( 1. 中国农业科学院草原研究所, 呼和浩特
010010; 2. 内蒙古草原工作站,呼和浩特
010010)
摘要: 应用 ISSR(简单重复序列间隔区)标记对采集自内蒙古 3个地区的17 株白僵菌(Beauv er ia B ass iana ( Ba ls. )
Vuill. )菌株进行遗传多样性分析,探讨了白僵菌在不同地区之间和地区内部的遗传多样性。结果表明: 从 21 个引
物中筛选出 15 个多态性高、稳定性好的 ISSR引物, 建立了 ISSR的最佳反应体系。在 ISSR试验中, 15 个 ISSR 引
物共扩增出 90 条带,其中 87 条为多态性条带, 群体多态位点百分率( PPL )为 96. 67% , Nei
s 基因多样性指数( H )
为 0. 4309, Shannon
s 信息多样性指数( I)为 0. 6106。在群体间的遗传相似度聚类分析中, 内蒙古中部和西部地区
的遗传一致度最高为 0. 9897,兴安盟地区和鄂尔多斯市地区的遗传一致度最高为 0. 9621。
关键词:白僵菌; ISSR ;遗传多样性; 亲缘关系
中图分类号: Q938. 11



文献标识码: A




文章编号: 1007
0435( 2011) 02
0340
06
Genetic Diversity of Beauveria bassiana on Loxostege sticticalis
L. in Inner Mongolia
LIU Ai
ping1 , CAO Yi
xiao1 , XU Lin
bo1 , GA O Shu
jin1 , WU Jin
hua1 , XIE Bing
ren2
( 1. Grassland Research Ins ti tute of Chinese Academ y of Agriculturl Sciences, H ohhot , Inn er Mongolia 010010, China;
2. Prairie S tat ion of In ner Mongolia, Hohh ot, Inner M on gol ia 010010, C hina)
Abstract: Genet ic diversity of 17 Beauver ia bassiana st rains col lected fr om 3 dif ferent ar eas of Inner M on

golia w as est imated using inter
simple sequence repeat ( ISSR) marker s. F ifteen high reproducibility and
po lymor phism ISSR pr imer s w ere cho sen fr om the tw enty
one samples. The opt imal react ive condit ions
w ere determ ined fo r using these primers. With 15 ISSR primers, a total of 90 f ragments w er e amplified, in
w hich in which 87 w ere polymorphic. The per centage o f po lymo rphic loci ( PPL) was 96. 67%. Nei
s g e

netic diversity index ( H ) w as 0. 4309 and Shannon
s genet ic diver sity index ( I) w as 0. 6106. The cluster a

nalysis of the inter
populat ion genet ic differ ent iat ion show ed that the highest genet ic similarity of the w est

ern part compar ed w ith the central reg ion was 0. 9897 point and the highest genet ic sim ilarity of the eastern
part w ith the w estern part w as 0. 9621 point .
Key words: Beauver ia bassiana; ISSR; Genet ic diversity; Sibship


球孢白僵菌 ( B eauv eria Bassiana ( Bals. )
Vuill. )是森林生态系统中最为常见的一种昆虫病
原真菌,属世界性分布物种,在我国广泛应用于防治
多种农林害虫、温室害虫和土壤害虫 [ 1] ,取得了重大
的经济、生态及社会效益。由于自然群体中的白僵
菌存在较大的异质性和较高的遗传多样性,因此, 为
更好地了解和阐明群体基因流、菌株分型、遗传结构
以及人为引种后的宿存动态和环境安全性, 有必要
加强对其种内不同菌株间遗传多样性和亲缘关系的
研究。随着分子生物学技术的日新月异, 从分子水
平上对白僵菌的遗传多样性进行研究成为一种新的
趋势[ 1~ 4]。当前主要使用的几种分子标记方法各有
优劣: RFLP 标记是遍布低拷贝编码序列, 非常稳
定,但 RFLP 实验操作繁琐, 检测周期长, 成本高
昂,不适于大规模试验, 使其应用受到限制。AFLP
技术是对生物基因组分析的一种较为理想的方法,
但步骤繁琐、费时、所需试验设备和试剂费用较高而
且操作复杂,限制了其应用。RAPD技术虽然操作
简单方便,但是由于其稳定性较差等原因,其应用也
受到限制。
ISSR引物开发不像 SSR引物一样需测序获得
SSR两侧的单拷贝序列。与SSR标记相比 , ISSR
收稿日期: 2010
11
22;修回日期: 2011
01
20
基金项目:公益性行业(农业)科研专项项目
草地害虫寄生性天敌昆虫利用新技术
( 201103002)资助
作者简介:刘爱萍( 1961
) ,女,内蒙古呼和浩特人,研究员,主要从事草地害虫生物防治研究, E
mail: liuaiping806@ sohu . com
第 2期 刘爱萍等:内蒙古地区草地螟白僵菌不同地区遗传多样性分析
引物可以在不同的物种间通用, 而 SSR标记具有较
强的种特异性; 与 RA PD和 RFLP 相比, ISSR揭示
的多态性较高, 可以获得几倍于 RAPD的信息量,
精确度几乎可与 RFLP 相媲美, 检测非常方便, 是
一种非常有发展前途的分子标记[ 2, 3]。ISSR技术的
针对性、稳定性和重复性较好,又无须事先知道微卫
星的侧翼序列, 而且一次扩增检测的位点在 3~ 8个
或者更多[ 4, 5] ,多态检出率高 [ 6, 7]。ISSR标记可以用
于物种的分类和系统学比较, 推测物种的进化,以及
品种鉴定或地区遗传学研究, 还可以作为构建遗传
图谱的工具。目前, ISSR标记已广泛应用于植物品
种鉴定、遗传作图、基因定位、遗传多样性、进化及分
子生态学研究中[ 8]。因此, 本试验的遗传多样性部
分采用 ISSR分子标记技术, 对内蒙古地区草地螟
( L oxostege sti ct ical is L. )白僵菌不同地区、不同菌
株进行研究。
1
材料和方法
1. 1
供试材料来源
供试的 17株菌株采自内蒙古地区的 5个样地,
详见表 1。
表 1
球孢白僵菌菌株来源一览表
T able 1
Collected locations o f B. bassiana
序号
Ordinal
菌株
St rain No.
采集地点
Collect ion sites
经度( E)
Longitude
纬度( N)
Lat itude
01 Bb
D01 兴安盟 代钦塔拉苏木 121
31
23. 65
45
13
07. 04

02 Bb
D02 兴安盟 代钦塔拉苏木 121
31
23. 91
45
13
06. 74

03 Bb
D03 兴安盟 义和道卜苏木 121
56
09. 37
44
51
19. 35

04 Bb
D04 兴安盟 义和道卜苏木 121
56
07. 09
44
51
19. 04

05 Bb
Y01 乌兰察布市 四子王旗 121
16
12. 03
41
22
47. 24

06 Bb
Y02 乌兰察布市 四子王旗 121
16
12. 03
41
22
47. 24

07 Bb
Y03 乌兰察布市 四子王旗 121
16
12. 03
41
22
47. 24

08 Bb
Y04 乌兰察布市 四子王旗 121
16
12. 03
41
22
47. 24

09 Bb
Y05 乌兰察布市 四子王旗 121
16
12. 03
41
22
47. 24

10 Bb
Y06 乌兰察布市 四子王旗 121
16
12. 03
41
22
47. 24

11 Bb
Y07 呼和浩特市 托克托县 111
11
39. 45
40
16
38. 75

12 Bb
S01 鄂尔多斯市 达拉特旗 110
01
58. 84
40
24
01. 72

13 Bb
S02 鄂尔多斯市 达拉特旗 110
01
58. 84
40
24
01. 72

14 Bb
S03 鄂尔多斯市 准格尔旗 111
14
24. 15
39
51
5105

15 Bb
S04 鄂尔多斯市 准格尔旗 111
14
24. 15
39
51
5105

16 Bb
S05 鄂尔多斯市 准格尔旗 111
14
24. 15
39
51
5105

17 Bb
S06 鄂尔多斯市 准格尔旗 111
14
24. 15
39
51
5105



注:表中序号 1~ 17即为下文图中泳道样品顺序
Note: Number 1~ 17 of tab le is the same as the order of lanes in th e below f igures
1. 2
试验方法
1. 2. 1
基因组 DNA的提取
参照朱衡等 [ 9]的方法并进行了一定的改进, 将
保存于 PDA 斜面的各供试菌株分别移植于直径
90 mm的 PDA 平板上, 在 25
无光恒温箱内生长
5 d,刮取菌丝,液氮研磨。
1. 2. 2
琼脂糖凝胶电泳
用 0. 8%琼脂糖凝胶检测所提取的 DNA 质量。
1. 2. 3
引物筛选
不同引物有其不同的反应条件, 而且不是每个
引物都适合于所有物种。因此, 引物的筛选是必不
可少的,同时还要对个别引物进行反应条件的优化。
根据预实验进行摸索 PCR反应的各项指标,如反应
最佳浓度、退火温度等。从 21条引物中选出 15 条
扩增条带清晰,多态性好的引物用于本试验的 PCR
反应。引物序列见图 2。
1. 2. 4
ISSR
PCR扩增反应及检测
ISSR
PCR扩增反应在 PTC
200 PCR 仪上进
行。反应体系( 15
L)为: 0. 1
L 的 Taq DN A 聚合
酶( 2. 5 U

L- 1 ) , 10
PCR buf fer 1. 5
L, dNT Ps
( 25 mM) 1. 5
L, 1. 0
L 引物, 1. 0
L DNA 模板,
ddH 2O 9. 9
L。PCR 扩增程序: 94
预变性 3
m in, 94
变性2 min, 48~ 60
退火(根据引物不同
退火温度进行调节) 1 min, 72
延伸 3 min, 35 个循
环后, 72
延伸 10 min。扩增产物在 4
下保存。
扩增产物用 2. 5%琼脂糖凝胶电泳进行检测, 所用
电泳缓冲液为 l
T AE缓冲液,电压为 5 V
cm- 1。
用 EB显色,在自动凝胶成像系统上观察并拍照。
341
草
地
学
报 第 19卷
表 2
供试引物序列
Table 2
Inter
simple sequence r epeat( ISSR ) primers
引物号
Primer
序列( 5

3
)
S equences( 5

3
)
BIS 1 AGAGAGAGAGAGAGAGG
BIS 2 AAGAAGAAGAAGAAGAAG
BIS 3 T ATAT AT ATAT AT ATAGT
BIS 4 ACACACACACACACACT
BIS 5 ACACACACACACACACCC
BIS 6 ACACACACACACACACCT
BIS 7 CT CTCT CT CTCT CT CTAT
BIS 8 AGAGAGAGAGAGAGAGTC
BIS 9 T GT GTGT GT GTGCC
BIS 10 AGAGAGAGAGAGAGAGS
BIS 11 AGAGAGAGAGAGAGAGYT
BIS 12 AGAGAGAGAGAGAGAGYC
BIS 13 ACACACACACACACACYC
BIS 14 ACACACACACACACACYT
BIS 15 CT CTCT CT CTCT CT CTRT
1. 3
数据统计
ISSR扩增产物以 0, 1和 9统计建立 ISSR数据
库。每个可辨带代表一个变异,在相同迁移位置, 有
带记为 1,无带记为 0,扩增失败或者缺失记为 9[ 10]。
利用 PopGen 32软件计算以下遗传多样性参数 [ 11] :
多态位点数 AP( Number of polymorphic loci)和多
态位点百分率 PPL ( Propor tat ion of po lymo rphic
loci) ; 等位基因平均数 Na ( A ver age number o f
alleles per loci ) ; 有效等位基因数 Ne ( Ef fect iv e
number of al leles per loci) ; N ei
s基因多样性指数
H( Gene div ersity ) ; Shannon 信息指数 I( Shannon

s informat ion index) ; 遗传分化系数 Gst ( T he coef

f icient of g ene dif ferent iation among populat ions
w ithin species) ; 用非加权平均法 UPGMA ( U n

weighted pair group w ith arithmet ic average ) , 对
ISSR DNA 片段数据进行聚类分析, 构建聚类图。
遗传一致度( GS)使用 Nei[ 12] 的计算方法,通过遗传
一致度 I的数据,这 2个居群间的遗传距离可用下
列公式计算: D= - lnI。
2
结果与分析
2. 1
白僵菌总基因组 DNA提取结果
由图 1可知,所有泳道均得到单一的条带,而且
明亮一致,基本没有降解现象。因此,所提取的白僵
菌基因组 DNA 质量良好,可以用于 PCR反应。
图 1
白僵菌基因组 DNA 检测图
Fig . 1
Genomic DNA ext racted f rom Beauv er ia bas siana
2. 2
ISSR扩增产物的多态性分析
本研究对 21个 ISSR引物进行筛选, 选择了扩
增结果稳定的、多态性好的 15 个引物进行分析, 这
15个引物在 17株菌株中共扩增出 90条带, 其中 87
条为多态条带,多态百分比为 96. 67% ,平均每个引
物扩增出 5. 8条带(表 3及扩增图谱图 2、图 3)。
2. 3
群体遗传变异与遗传多样性
对内蒙古地区 17 株菌株的遗传多样性研究表
明,多态位点百分率( PPL)为 96. 67% , Nei
s 基因
多样性指数( H )为 0. 4309, Shannon信息指数( I)为
0. 6106。从各个地区来看,兴安盟地区的多态位点
百分率最高( PPL = 85. 12%) , 乌兰察布
呼和浩特
市地区的多态位点百分率最低( PPL= 77. 10% ) ,即
兴安盟地区遗传多样性较高。从各个地区的 Shan

non多样性指数可知, 兴安盟地区最大达到 0
3020,
乌兰察布
呼和浩特市地区最小为 0. 2700。根据
Shannon多样性指数的大小将各种源排序为: 兴安
盟地区> 鄂尔多斯地区> 乌兰察布
呼和浩特地区
(具体数值见表 4) 。
PopGen分析结果表明, 地区内基因多样度
( H s)为 0. 1126,总基因多样度( H t )为 0. 4320。各
个地区之间的基因分化系数( Gst )是 0. 7392。以上
结果表明,遗传变异主要来源于地区间,各地区内的
群体遗传变异较小。
2. 4
遗传一致度与遗传距离分析
遗传距离是显性频率的函数, 用于分析群体间
的遗传相似性,遗传一致度常用来判断群体间的亲
缘关系,所测定的 3个地区的遗传一致度( GS)和遗
传距离( GD)见表 5。由表 5 可知, 其遗传一致度的
变化范围为 0. 9601~ 0. 9897, 表明 3个地区的白僵
菌之间的亲缘关系很近。其中以乌兰察布
呼和浩
342
第 2期 刘爱萍等:内蒙古地区草地螟白僵菌不同地区遗传多样性分析
特地区和鄂尔多斯 2个地区的遗传一致度最高为
0. 9897, 其亲缘关系相对最近。而兴安盟地区的遗
传一致度最高为 0. 9621,其亲缘关系相对较远。
表 3
15 条 ISSR引物序列、退火温度和扩增结果
Table 3
Sequences o f 14 ISSR pr imer s, annealing temperatures and amplification r esults
引物号
Prim ers
序列( 5

3
)
Sequen ces ( 5

3
)
退火温度
Annealin g
temperature,

总扩增位点数
T otal numbers of
polymorphic b ands
多态性位点数
Number of
polym orphic bands
多态带百分率
T he percentage of
polymorp hic ban ds, %
BIS 1 ( AG) 8G 50. 0 7 6 85. 71
BIS 2 ( A AG) 6 48. 0 6 6 100
BIS 3 ( TA) 8GT 58. 0 6 6 100
BIS 4 ( AC) 8 T 51. 0 5 5 100
BIS 5 ( AC) 8CC 56. 0 7 6 85. 71
BIS 6 ( AC ) 8CT 54. 0 7 7 100
BIS 7 ( CT ) 8AT 52. 0 5 5 100
BIS 8 ( AG) 8T C 54. 0 6 6 100
BIS 9 ( TG) 6CC 50. 0 5 5 100
BIS 10 ( AG) 8S 52. 0 5 5 100
BIS 11 ( AG) 8YT 53. 0 6 6 100
BIS 12 ( AG) 8YC 52. 3 5 5 100
BIS 13 ( AC) 8YC 52. 0 7 7 100
BIS 14 ( AC) 8YT 55. 0 5 5 100
BIS 15 ( CT ) 8RT 52. 3 8 7 87. 50
总计 Total 90 87
平均 M ean 6 5. 8 96. 67
表 4
白僵菌地区内的遗传多样性
T able 4
Genetic diver sity of B. bassiana ( Standard dev iations in parenthesis)
地区
Populat ion
等位基因数
Na
有效等位基因数
Ne
Nei
s基因多样性
指数H
Shannon
s信息多样性
指数 I
多态位点百分率
PPL, %
兴安盟 1. 8512
0. 3663 1. 2798
0. 2899 0. 1856
0. 1578 0. 3020
0. 2320 85. 12
乌兰察布
呼和浩特 1. 7710
0. 4289 1. 2501
0. 2806 0. 1675
0. 1568 0. 2700
0. 2265 77. 10
鄂尔多斯 1. 8373
0. 3786 1. 2611
0. 3013 0. 1699
0. 1596 0. 2768
0. 2263 83. 73
表 5
3 个地区的 ISSR 位点的 Nei
s遗传一致度(右上角)和遗传距离(左下角)
Table 5
Nei
s genetic similar ity ( above diag onal) and genetic distance ( below diagonal) of ISSR among 3 populations
地区 Populat ion 鄂尔多斯 乌兰察布
呼和浩特 兴安盟
鄂尔多斯市 - 0. 9897 0. 9601
乌兰察布
呼和浩特市 0. 0076 - 0. 9621
兴安盟 0. 0398 0. 0162 -
343
草
地
学
报 第 19卷
2. 5
个体间的聚类分析
根据不同菌株间的遗传距离进行 U PGMA 聚
类分析(图 4) , 17株菌株并没有严格按照地理来源
聚在一起,总体上同一地区菌株大部分都聚类在一
起,但也有个别菌株交替排列在其中,呼和浩特采集
的菌株 Bb
Y07 和鄂尔多斯地区聚为一类, 并没有
按照地理位置和乌兰察布
呼和浩特地区聚为一类,
从地理环境因素分析其原因可能是 Bb
Y07和乌兰
察布
呼和浩特地区其他菌株被大青山阻隔, 而这种
阻隔导致了 Bb
Y07 和其他菌株之间的遗传差异
性,从而没有聚为一类。另一个原因可能是 Bb
Y07
和鄂尔多斯地区均处在典型草原带的农垦区,因此
聚为一类。
图 4
17株菌株间的聚类分析图
F ig. 4
Cluster ing tr ee of 17 individual
3
讨论
本试验 DNA 的提取参考朱衡等[ 9] 的真菌基因
组 DNA 提取方法进行, 同时进行了一定的改进。
利用新鲜菌丝体不经冻干直接进行 DNA 提取, 也
获得较高质量的 DNA 模板。利用新鲜菌丝体进行
DNA 的提取可以使得整个提取过程更加快捷,大大
减少所需时间。通过对草地螟白僵菌 ISSR反应体
系各影响因素的摸索, 建立了一套适合于草地螟白
僵菌的 ISSR
PCR及电泳技术优化体系。
通过选用的 15个 ISSR 引物在 17个白僵菌菌
株的扩增图谱分析表明, ISSR引物表现出很高的遗
传多态性,多态性带型达到了 96. 67%, 而且扩增结
果均具有很好的重复性。研究表明, ISSR 引物序列
较长,退火温度高, 因而具有较高的多态性和稳定
性,不仅应用于种间鉴定,而且也是种下不同菌株亲
缘关系鉴定的有用的分子标记 [ 13]。因此应用 ISSR
分子标记技术研究草地螟白僵菌群体的遗传多样性
和遗传结构在理论上是合理的,实践上是可行的。
从遗传多样性分析可知, 兴安盟地区白僵菌的
遗传多样性水平较高,多态位点百分率为 85. 12% ,
Nei
s 基因多样性( H )达 0. 1856, Shannon 信息指
数( I)为 0. 3020。白僵菌生长对生境要求很严格,
温度、湿度和光照对真菌的生长影响很大,说明兴安
盟比其他 2个地区适合于白僵菌的生长, 因而该地
区的白僵菌表现出了较高的种内遗传多态性。
内蒙古地区草地螟白僵菌总体上是按照地理区
域化分的;其中乌兰察布
呼和浩特地区和鄂尔多斯
地区遗传距离较近, 遗传一致度较高, 亲缘关系较
近。兴安盟与其他地区相比遗传距离较远,遗传一
致度较低,亲缘关系相对较远。聚类分析也得到同
样的结论,乌兰察布
呼和浩特地区和鄂尔多斯地区
先聚为一类, 然后再与兴安盟地区聚为一类。整个
聚类图的分布与地理位置远近的格局大致吻合, 即
地理位置较近的地区首先聚在一起。因此,内蒙古
自治区草地螟白僵菌的遗传变异多集中在地区间,
地区内部的变异较少, 大致按照地理位置的划分而
划分。
4
结论
采用 ISSR 引物对草地螟白僵菌的遗传多样性
进行了研究,通过试验建立了草地螟球孢白僵菌的
扩增反应条件, 获得了稳定、可重复的扩增技术体
344
第 2期 刘爱萍等:内蒙古地区草地螟白僵菌不同地区遗传多样性分析
系。ISSR具有较好的稳定性和多态性,对于白僵菌
的遗传多样性研究具有较高的一致性和可信度, 是
用于研究球孢白僵菌多样性的有效方法。
通过各项指标分析发现内蒙古地区的草地螟球
孢白僵菌变异主要发生在不同地区间, 兴安盟呈现
较高的遗传多样性, 不同菌株基本按照地区分类, 同
一地区的菌株基本聚为一类, 随着地理位置的远近
其遗传距离也相应发生变化。
参考文献
[ 1]
L A Cast rillo, J D Vandenberg, S P Wraight . S train
specif ic
detect ion of int roduced Beauveria bassiana in agricultural f ields
b y use of sequence
characteriz ed am plif ied region m ark ers [ J] .
J ournal of In verteb rate Path ology, 2003, 82( 2) : 77
80
[ 2]
李旻.用 SSR及 ISSR 对白僵菌遗传多样性的研究[ D] .安徽:
安徽农业大学, 2006
[ 3]
李旻,王四宝,樊美珍,等.森林生态系中球孢白僵菌遗传多样
性的 ISSR分析[ J] .遗传, 2006, 28( 8) : 977
983
[ 4]
C hat terjee S N, Vijayan K, Roy G C, et al . IS SR profil ing of g e

net ic variabilit y in the ecotypes of A nth eraea my li t ta Drury,
th e tr opical T asar si lkw orm[ J] . Ru ssian Journal of Genetics,
2004, 40( 2) : 210
217
[ 5]
Cano J,A Rezusta, M Sole, et al . Inter
single
sequence
repeat
PCR
typing as a new tool for identif ication of Microsporum canis st rains
[ J] . Journal of Dermatological Science, 2005, 39( 1) : 17
21
[ 6]
沈金雄,傅廷栋,杨光圣.甘蓝型油菜 SSR、ISSR标记的遗传多
样性及其与杂种表现的关系 [ J ] .中国农业科学, 2004, 37( 4 ) :
477
483
[ 7]
谢佳燕,张知彬. IS SR标记技术及其在遗传多样性研究中的应
用[ J] .兽类学报, 2004, 24( 1) : 71
77
[ 8]
H an Q, In glis G D, H ausner G. Phylogenet ic relat ionships a

mong st rain s of the entomopath ogenic fu ngus, Nomuraea ri

leyi , as revealed b y part ial

tub ulin s equences and inter
s imple
sequen ce repeat ( ISSR) analysis . [ J] Letters in Applied Micro

biology, 2002, 34: 376
383
[ 9]
朱衡,瞿峰,朱立煌.利用氯化苄提取适于分子生物学分析的真
菌 DNA[ J ] .真菌学报, 1994, 13( 1) : 34
40
[ 10] 周延清. DNA 分子标记技术在植物研究中的应用 [ M ] .北京:
化学工业出版社, 2005
[ 11] Scot t M P, H aym es K M, W illiams S M. Paren tage analysis u

sing RAPD PCR[ J ] . Nucleic Acids Research, 1993, 20: 54
93
[ 12] Nei M . Gen et ic distan ce betw een populat ions [ J] . American
Natur alis t, 1972, 106: 283
292
[ 13] Neisters H G M, Goes sen s W H F, Meis J F M G, et al . Rapid
polymeras e chain react ion
based ident if ication as say s for Candi

daspecies[ J] . J ournal of Clinical M icrobiology, 1993, 31: 904

910
(责任编辑
李美娟)

草地学报
稿件格式要求
1.摘要中必须包括目的、材料、方法、结果以及结论共 5 个部分。中英文摘要尽量压缩在 300 字以内。
2.摘要中第一次出现的物种名称必须给出拉丁文。拉丁文书写格式要求科(含科)以上是正体,属、种是斜体, 命名
人是正体。如: 甜高粱( S orghum saccharatum Moench)是禾本科( G ramineae)植物。
3.英文标题中的每个实词头字母大写。作者姓名的英文格式要求为, 三个字的: L I Mei
juan, 两个字的: L I Ping, 复
姓的: OUYANG Hui
jing。
4.中英文关键词均要用分号隔开, 英文关键词每个词组的第一个单词头字母大写; 多位作者之间要用逗号隔开。
5.基金项目出现多个时用分号隔开即可。
6.作者简介中要包括出生年, 性别,民族(汉族可以省略) , 籍贯(到市一级) ,学历, 职位,研究方向/从事内容, 邮箱。
7.文章中单位格式使用负次幂, 例如: g
kg- 1 , 粒
m- 2等。
8.文章中数字和单位之间要保留一定的空隙, 例如 2 cm, 5 g 等, 但%和
除外。
9.显著性检验值 P要求大写并且斜体, 即: P < 0. 05, 或 P< 0. 01.
10. 图横纵坐标以及图注要给出英文或拉丁文对照;表中内容(除大段文字描述外)要给出英文对照或拉丁文对照。
11.文章中年代、年份、月份、时段等直接用
-
连接, 如 70- 80 年代, 2000- 2005年 , 8- 12 月, 7: 20- 9: 20 等; 数值
范围之间要用
~
来连接, 如 20~ 30 g, 10~ 20 cm 等。
12. 参考文献只列出与本文有关的近期主要文献,未公开发表的不能引用。文献采用顺序编码制著录, 文中按其出
现先后顺序用阿拉伯数字连续排序, 视具体情况将序号作为上角标, 或作为语句的组成部分。如: 李刚[ 1~ 3] 做了大量


;

按文献[ 8]提供的

。文后则按其在文中的序号顺序排列。专著[ M ] ;期刊[ J] ;论文集[ C] ; 报纸 [ N ] ; 学位
论文[ D] ; 专利[ P] ;标准[ S]。
345