全 文 ：第２０卷 第２期
Ｖｏｌ．２０ Ｎｏ．２
草 地 学 报
ＡＣＴＡ ＡＧＲＥＳＴＩＡ ＳＩＮＩＣＡ
２０１２年 ３月
Ｍａｒ． ２０１２
不同消毒方式对假俭草种子愈伤诱导的影响
刘明稀１，２，郭振飞２，３＊
（１．湖南农业大学，湖南 长沙 ４１０１２８；２．华南农业大学生命科学学院，广东 广州 ５１０６４２；
３．华南农业大学广东省森林植物种质创新与利用重点实验室，广东 广州 ５１０６４２）
摘要：为确定假俭草（Ｅｒｅｍｏｃｈｌｏａ ｏｐｈｉｕｒｏｉｄｅｓ）再生体系中种子外植体的消毒方式，经过预备试验后共设计Ａ，Ｂ，Ｃ，
Ｄ共４组２系列８种消毒方式。Ａ１：３．５％次氯酸钠消毒２５ｍｉｎ，Ａ２：浓硫酸灼烧３０ｓ＋３．５％次氯酸钠消毒２０
ｍｉｎ，Ｂ１：７％次氯酸钠消毒２０ｍｉｎ，Ｂ２：浓硫酸灼烧３０ｓ＋７％次氯酸钠消毒２０ｍｉｎ，Ｃ１：０．０５％升汞消毒２０ｍｉｎ，
Ｃ２：浓硫酸灼烧３０ｓ＋０．０５％升汞消毒１５ｍｉｎ，Ｄ１：０．１％升汞消毒１５ｍｉｎ，Ｄ２：浓硫酸灼烧３０ｓ＋０．１％升汞消毒
１０ｍｉｎ。结果表明：Ａ２的愈伤诱导效果最好，达到５２％；Ｄ１的愈伤诱导率最低，仅１７．３３％，其他处理的愈伤诱导
率介于二者之间。发现浓硫酸灼烧假俭草种子３０ｓ，可显著提高出愈率；试验证实消毒剂次氯酸钠比升汞有利于
假俭草种子的愈伤诱导。
关键词：假俭草；消毒方式；愈伤诱导
中图分类号：Ｑ９４３．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００７－０４３５（２０１２）０２－０３８３－０６
Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｎ Ｃａｌｕｓ Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ
Ｃｅｎｔｉｐｅｄｅｇｒａｓｓ（Ｅｒｅｍｏｃｈｌｏａ ｏｐｈｉｕｒｏｉｄｅｓ）
ＬＩＵ Ｍｉｎｇ－ｘｉ １，２，ＧＵＯ Ｚｈｅｎ－ｆｅｉ ２，３＊
（１．Ｈｕｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ，Ｈｕｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ４１０１２８，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ５１８０２０，Ｃｈｉｎａ；
３．Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔ Ｐｌａｎｔ Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ，
Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ５１０６４２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｉｓ ｃｒｕｃｉａｌ ｔｏ ｃｒｏｐ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｂｙ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｅｘｐｌａｎｔ ｓｔｅｒｉｌｉｚａ－
ｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ａｒｅ ｋｅｙ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ａｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ．Ｅｉｇｈｔ ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ（Ａ１：３．５％
ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ ２５ｍｉｎ，Ａ２：ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ ｓｕｌｐｈｕｒｉｃ ａｃｉｄ ３０ｓ＋３．５％ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ ２０ｍｉｎ，Ｂ１：
７％ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ ２０ｍｉｎ，Ｂ２：ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ ｓｕｌｐｈｕｒｉｃ ａｃｉｄ ３０ｓ＋７％ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ ２０ｍｉｎ，
Ｃ１：０．０５％ ｍｅｒｃｕｒｙ ｂｉｃｈｌｏｒｉｄｅ ２０ｍｉｎ，Ｃ２：ｍｅｒｃｕｒｙ ｂｉｃｈｌｏｒｉｄｅ ３０ｓ＋０．０５％ ｍｅｒｃｕｒｙ ｂｉｃｈｌｏｒｉｄｅ １５ｍｉｎ，
Ｄ１：０．１％ ｍｅｒｃｕｒｙ ｂｉｃｈｌｏｒｉｄｅ １５ｍｉｎ，Ｄ２：ｍｅｒｃｕｒｙ ｂｉｃｈｌｏｒｉｄｅ ３０ｓ＋０．１％ ｍｅｒｃｕｒｙ ｂｉｃｈｌｏｒｉｄｅ １０ｍｉｎ）ｗｅｒｅ
ｔｅｓｔｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ａｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ Ｃｅｎｔｉｐｅｄｅ ｇｒａｓｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ Ａ２ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ｗｉｔｈ ５２％ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｆｏｒ Ｃｅｎｔｉｐｅｄｅ ｇｒａｓｓ，ｗｈｅｒｅａｓ ｔｈｅ Ｄ１ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｒｅｓｕｌｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ
ｌｏｗｅｓｔ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ（１７．３３％）．Ｓｅｅｄｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｂｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ ｓｕｌｆｕｒｉｃ ａｃｉｄ ｗｉｔｈ ３０ｓｈａｄ ａ ｈｉｇｈｅｒ
ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｎｏｔ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ ｓｕｌｆｕｒｉｃ ａｃｉｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ａｌｓｏ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｓｏ－
ｄｉｕｍ ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｔｈａｎ ｍｅｒｃｕｒｙ ｂｉｃｈｌｏｒｉｄｅ ｆｏｒ Ｃｅｎｔｉｐｅｄｅ ｇｒａｓｓ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｃｅｎｔｉｐｅｄｅｇｒａｓｓ；Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ；Ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
假俭草 （Ｅｒｅｍｏｃｈｌｏａ ｏｐｈｉｕｒｏｉｄｅｓ （Ｍｕｎｒｏ）
Ｈａｃｋ）作为我国最重要的本土暖季型草种，主要分
布在长江流域及其以南地区，尤其在我国年降水量
８００ｍｍ以上的南方有着广泛的野生资源，是禾本
科黍亚科蜈蚣草属中唯一可用作草坪草的种。具有
植株低矮、分蘖能力强、茎叶密集、耐贫瘠、生长缓
慢、耐粗放管理、再生能力强、病虫害少等优点［１，２］，
是建植各类草坪及高等级公路边坡护坡、堤坝护埂、
治理水土流失的理想材料。耐寒性不强是假俭草的
主要缺点，在暖季型草中，假俭草的抗旱能力只属中
收稿日期：２０１１－１１－２１；修回日期：２０１２－０１－０６
基金项目：广东省科技计划项目（２００６Ｂ２０２０１０３５）；湖南农业大学校青年科学基金（２０１０ＱＮ３０）资助
作者简介：刘明稀（１９７５－），男，湖南新化人，博士，讲师，主要从事草坪草、牧草及能源草生物技术育种，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｍｘ７５１２２１＠１６３．ｃｏｍ；＊通
信作者 Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｆｇｕｏ＠ｓｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
草 地 学 报 第２０卷
等，总体上不如狗牙根（Ｃｙｎｏｄｏｎ ｄａｃｔｙｌｏｎ）、结缕草
（Ｚｏｙｓｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ）以 及 钝 叶 草 （Ｓｔｅｎｏｔａｐｈｒｕｍ
ｈｅｌｆｅｒｉ）［３］。此外，在质地、高度等草坪性状方面也
存在改良的必要。
目前，系统选育、辐照育种等常规方法是假俭草
育种的主要手段，但效果并不理想，其商业化品种未
超１０个［４］。品种的局限性限制了该草种的广泛推
广，鉴于常规育种的局限性和生物技术近年来在作
物育种上的卓著成效，有必要对假俭草开展系统的
生物育种研究。无论是采用细胞工程方法还是基因
工程方法进行品种改良，再生体系的建立都是必不
可少的环节，选择适合的外植体消毒方式对于高效
再生体系的建立影响重大，因此，本研究探讨了不同
消毒方式对假俭草种子愈伤诱导影响。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
考虑到取材的方便性，以湖南野生假俭草（采自
湖南新化，种植于湖南农业大学草业科学系草坪基
地）的成熟种子作为研究再生体系的外植体材料。
１．２ 试验方法
１．２．１ 假俭草种子自然发芽率的测定 不同的消
毒处理会影响种子活性（用发芽率表征种子活性），
而种子活性会影响其愈伤诱导，假俭草种子自然发
芽率为各种消毒处理对其发芽率的影响提供了参考
依据。
种子自然发芽率的确定：５０粒饱满成熟种子放
在铺有湿润滤纸的培养皿上，温度２６℃，全黑暗（Ｄ）、
１６ｈＬ／８ｈＤ光周期及全光照（Ｌ）３种条件下各设３
次重复，２周后统计３种光条件下的平均发芽率，取
其中最高平均值记为自然发芽率，确定获得最高平均
发芽率的光照参数为适宜光照条件，在消毒处理后的
种子萌发中采用相同的光照条件。计算方法：发芽率
＝发芽的种子数／接种的种子数×１００％，平均发芽率
即３次重复发芽率的算术平均值。
１．２．２ 浓硫酸处理时间的确定 浓硫酸（９８％）处
理种子时间设置３０，６０，９０ｓ这３个时间梯度，种子
经灼烧后立即用自来水漂洗去除残留硫酸，观察不
同处理时间的灼烧效果，灼烧时间确定原则是大部
分种皮被破坏，对种子活性影响较小。灼烧后进行
发芽率测定，参考自然发芽率确定合适的灼烧时间。
１．２．３ 不同消毒方式所需消毒时间的确定及相应
种子发芽率的测定 各种消毒方式达到无菌效果所
需的时间不同，对种子活性（发芽率）影响也不相同。
通过考察种子接种后的污染情况来确定消毒效果：
每个消毒处理接种３培养皿，培养期间只要有一个
出现污染，即认为该消毒处理方式不当；通过比较种
子消毒后的发芽率和自然发芽率来考察各处理对种
子活性的影响。
消毒剂选用外植体消毒时常用的次氯酸钠
（３．５％和７％）和升汞（０．１％和０．０５％），各考察２
个浓度。次氯酸钠消毒时间设置１０，１５，２０，２５ｍｉｎ
共４个时间梯度，升汞消毒时间设置５，１０，１５，２０
ｍｉｎ共４个时间梯度。同时采用１．２．２中确定的浓
硫酸处理时间，各２个浓度的２种消毒剂处理分成
浓硫酸灼烧和未经浓硫酸灼烧２大系列。观察消毒
效果，确定消毒时间，统计消毒后的发芽率并和自然
发芽率比较，以考察不同处理方式对种子活性产生
的影响。
各种不同的消毒方式处理后，用无菌水漂洗６
次，然后转入 ＭＳ培养基上，每培养皿接种５０粒左
右，在室温２６℃和合适光照条件下２周后统计不同
处理方式的无菌发芽率，各处理３个重复，以其平均
值作为该处理方式的无菌发芽率，对有污染的处理
方式不予统计。计算方法：无菌发芽率＝发芽的种
子数／接种的种子数×１００％。
１．２．４ 不同消毒处理对愈伤诱导的影响 根据
１．２．２和１．２．３的试验结果，将确定出各２个浓度
的２种消毒剂的４组（Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ）２系列（浓硫酸处
理、未经浓硫酸处理）共８种消毒方式的消毒时间，
且８种消毒方式可能会对应不同的种子活性，而不
同的种子活性可能会对愈伤诱导产生不同的影响。
Ａ１：３．５％次氯酸钠消毒２５ｍｉｎ，Ａ２：浓硫酸灼烧
３０ｓ＋３．５％次氯酸钠消毒２０ｍｉｎ，Ｂ１：７％次氯酸钠
消毒２０ｍｉｎ，Ｂ２：浓硫酸灼烧３０ｓ＋７％次氯酸钠消
毒２０ｍｉｎ，Ｃ１：０．０５％升汞消毒２０ｍｉｎ，Ｃ２：浓硫酸
灼烧３０ｓ＋０．０５％升汞消毒１５ｍｉｎ，Ｄ１：０．１％升汞
消毒１５ｍｉｎ，Ｄ２：浓硫酸灼烧３０ｓ＋０．１％升汞消毒
１０ｍｉｎ，将不同消毒处理的种子接种在愈伤诱导培
养基上，诱导培养基参照文献［５］：ＭＳ＋２，４－Ｄ ４．５
ｍｇ·Ｌ－１＋６－ＢＡ ０．１ｍｇ·Ｌ－１，３个重复，每皿接种
５０粒左右，第３５ｄ统计出愈率。根据出愈率确定合
适消毒方式。出愈率＝愈伤数／外植体数×１００％。
１．２．５ 数据统计与分析 数据为３次独立试验的
平均值。采用 Ｅｘｃｅｌ ２００３ 进行初步处理，运用
ＳＰＳＳ １７．０软件进行分析，采取新复极差法（Ｄｕｎ－
４８３
第２期 刘明稀等：不同消毒方式对假俭草种子愈伤诱导的影响
ｃａｎ）对数据进行差异显著性分析。
２ 结果与分析
２．１ 假俭草种子自然发芽率
自然发芽率能了解种子的活性状况，为后面消
毒效果考察提供比较的依据。假俭草在上述３种光
条件下的发芽率虽以１６ｈＬ／８ｈＤ最高，为４４．
７％，全光和全黑暗条件下的发芽率分别为４４％和
４２％，但三者间差异不显著，可见所设计的光照条件
对假俭草种子萌发无显著影响。本研究选取发芽率
稍高的１６ｈＬ／８ｈＤ作为假俭草种子萌发的光照条
件，确定假俭草种子的自然发芽率为４４．７％。
２．２ 浓硫酸处理后的发芽率
假俭草种皮结实致密，外面裹有一层蜡质，不利
于种子萌发及愈伤组织的诱导。浓硫酸的短暂处理
一方面能起到破损种皮的作用，另一方面还具有杀
菌作用，可减少后续的消毒时间，均有利于愈伤的诱
导，但过度的处理会因其强烈的腐蚀性而损伤种子
活性，直接影响出愈率。因此必须考虑处理时间对
发芽率的影响。
图１ 不同光条件下的自然发芽率
Ｆｉｇ．１ Ｎａｔｕｒａｌ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｉｎ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｉｇｈｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
表１ 浓硫酸处理不同时间后假俭草种子的发芽率
Ｔａｂｌｅ １ Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ Ｃｅｎｔｉｐｅｄｅｇｒａｓｓ ｓｅｅｄｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｂｙ ｏｉｌ ｏｆ ｖｉｔｒｉｏｌ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ
处理时间
Ｔｉｍｅ ｏｆ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ／ｓ
平均发芽率
Ａｖｅｒａｇｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ／％
灼烧效果
Ｅｒｏｄｅ ｌｅｖｅｌ
３０ ４２．７±１．１５ａ 解剖镜下大部分种子的种皮破损
６０ ２６．７±１．１５ｂ 解剖镜下绝大部分种子的种皮破损，解剖镜下部分种子种皮内结构受损
９０ ５．３±１．１５ｃ 解剖镜下几乎全部种子的种皮破损，解剖镜下较多种子种皮内结构受损
注：同列不同小写字母代表指标在０．０５水平下差异显著（Ｐ＜０．０５），下同
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｍａｌ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｍｅａｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｔ ｔｈｅ ０．０５ｌｅｖｅｌ，ｔｈｅ ｓａｍｅ ａｓ ｂｅｌｏｗ
在处理３０～９０ｓ时，种子的发芽率呈急剧下降
趋势（表１），处理时间为３０ｓ时发芽率相对自然发
芽率４４．７％只是稍有下降，但处理后大部分种子种
皮已炭化脱落。加上强酸处理能够起到杀菌作用，
经此处理后预计能减少后续的消毒时间，这可能有
利于愈伤诱导。
２．３ 不同消毒方式所需时间及相应的种子发芽率
３．５％ 和 ７％ 次氯酸钠溶液以及 ０．１％ 和
０．０５％升汞消毒液分成浓硫酸灼烧３０ｓ和未经浓
硫酸灼烧２大系列共８种消毒方式，不同的消毒方
式所需的消毒时间有所不同（图２－ａ）。总体而言，升
汞所需的消毒时间比次氯酸钠短。消毒前采用浓硫
酸处理３０ｓ可在一定程度上缩短消毒时间，例如
３．５％的次氯酸钠＋浓硫酸３０ｓ比单独使用３．５％
次氯酸钠的消毒时间缩短５ｍｉｎ；无论是０．０５％还
是０．１％的升汞，消毒前先用浓硫酸处理３０ｓ均可
缩短消毒时间（图２－ａ）。
２种消毒剂对假俭草种子活性的影响非常明
显，虽然升汞所需时间短于次氯酸钠，但升汞消毒后
的种子活性显著低于次氯酸钠消毒后的种子活性
（图２－ｂ），在采用升汞作为消毒剂的各处理中，发芽
率最高的为１８％，比假俭草的自然发芽率（４４．７％）
降低了２６．７％；而在采用次氯酸钠作为消毒剂的各
处理中，发芽率最高的为３３．３％，对种子活性的损
害明显低于升汞。因此，本研究认为次氯酸钠更适
合作为假俭草种子无菌操作时的消毒试剂。
各种消毒处理中发芽率最高的方案是３．５％的
次氯酸钠浓度处理２５ｍｉｎ，其发芽率为３３．３％（图
２－ｂ），但先经浓硫酸处理３０ｓ，再用３．５％浓度处理
２０ｍｉｎ的发芽率也达到３２．７％（图２－ｂ），比相应方
案（不经浓硫酸处理）的发芽率稍有降低，但其消毒
时间也缩短５ｍｉｎ。发芽率最低的是０．１％升汞消
毒１５ｍｉｎ，仅有 １４．７％，相对自然萌发率减少
６７．１％。但０．０５％和０．１％浓度升汞消毒前种子先
经浓硫酸处理３０ｓ，发芽率均比不经浓硫酸处理的
５８３
草 地 学 报 第２０卷
有所提高（图２－ｂ）。
一般情况下，浓硫酸处理也会降低种子的活性，
且随时间的延长急剧降低，但在较短的处理时间内，
比如本试验中的３０ｓ，种子发芽率仍有４２．７％（表
１），比其自然发芽率（４４．７％）稍有降低，但幅度很
小，短暂的浓硫酸处理只是对种皮造成破坏，并未伤
及种子内部结构，同时短暂的灼烧对种皮表面的微
生物产生触杀效果，因此减少了后续消毒时间，对于
升汞这类对假俭草种子活性损伤严重的消毒剂而
言，消毒时间的缩短会减弱消毒期间种子活性的损
伤，如２个浓度的升汞在消毒前先用浓硫酸灼烧３０
ｓ，反而分别提高了种子发芽率（图２－ｂ），而对次氯酸
钠这类对假俭草种子活性损伤较小的消毒剂而言，
未见类似效果，例如３．５％的次氯酸钠＋浓硫酸３０
ｓ比单独使用３．５％次氯酸钠的消毒时间缩短５
ｍｉｎ，但前者发芽率还是比后者低，可能是消毒剂时
间缩短对种子活性的增益小于浓硫酸的损伤效果，
尤其是在７％次氯酸钠这组处理中，浓硫酸的使用
并未减少消毒时间，但对种皮的破坏加剧了消毒剂
对种子活性的伤害，所以７％次氯酸钠＋浓硫酸３０
ｓ比单独使用７％次氯酸钠的种子发芽率显著下降
（Ｐ＜０．０５）（图２－ｂ）。
图２ 不同消毒方式所需的时间（ａ）及对假俭草发芽率的影响（ｂ）
Ｆｉｇ．２ Ｔｉｍｅ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ（ａ）ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ
ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｎ ｓｅｅｄ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ Ｃｅｎｔｉｐｅｄｅｇｒａｓｓ（ｂ）
２．４ 不同消毒处理对愈伤诱导的影响
根据１．２．４进行试验，结果表明 Ａ２的愈伤诱
导率最高，达到５２％；Ｄ１的愈伤诱导率最低，仅
１７．３３％，其他处理的愈伤诱导率介于二者之间。发
现相同种类及浓度的消毒剂，使用前先用浓硫酸灼
烧种子３０ｓ，可显著提高出愈率；同时还发现次氯酸
钠比升汞有利于假俭草种子的愈伤诱导。
３ 讨论
３．１ 假俭草种子的消毒方式、发芽率、愈伤诱导率
三者的关系
消毒的目的是为获得无菌外植体，外植体的质
量会影响到后续愈伤组织的诱导，以种子为外植体
时，种子活性是影响其愈伤诱导的重要因素。不同
消毒方式对种子活性的损伤不同，就假俭草而言，本
研究发现升汞对其种子的伤害明显大于次氯酸钠
（图２－ｂ）。浓硫酸本身对种子有伤害作用，但在采
用升汞作为消毒剂时，消毒前先用浓硫酸处理３０ｓ
可缩短消毒时间（图２－ａ）而提高发芽率（图２－ｂ）。
对７％次氯酸钠而言，因在所设计的试验中未能缩
短消毒时间，加上使用浓硫酸致使种皮破损，加剧了
消毒剂对种子活性损伤和浓硫酸直接伤害种子活性
这２个不利因素，造成发芽率显著下降；对３．５％次
氯酸钠而言，浓硫酸的处理虽然也存在上述２个不
利因素，但消毒时间缩短５ｍｉｎ，尽管最终表现出种
子发芽率下降的现象，但不显著（图２－ｂ）。通过分
析发现，Ｃ２和Ｄ２比相应的Ｃ１和Ｄ１缩短消毒时间
５ｍｉｎ，前者的发芽率高于后者；Ａ２比Ａ１缩短消毒
时间５ｍｉｎ，但Ａ２的发芽率还是低于Ａ１，说明升汞
（０．１％和０．０５％）处理５ｍｉｎ比３．５％次氯酸钠处
理５ｍｉｎ对种子的伤害大，减少５ｍｉｎ消毒时间后
升汞处理比次氯酸钠处理获益更多，进一步证明升
汞对假俭草种子活性的损伤大于次氯酸钠。
组织培养中外植体的消毒方式多种多样，消毒
剂选用的原则是获得无菌效果且不太影响愈伤的诱
６８３
第２期 刘明稀等：不同消毒方式对假俭草种子愈伤诱导的影响
导。本试验结果表明，采用次氯酸钠作为消毒剂的
愈伤诱导效果远比升汞好；采用次氯酸钠作为消毒
剂时，不论是否经浓硫酸处理，愈伤诱导率随消毒剂
浓度的提高而显著降低。在采用升汞作为消毒剂
时，如果同样都经浓硫酸处理３０ｓ，则愈伤诱导率也
是随消毒剂浓度的提高而减小，不经浓硫酸处理的
时候也如此；但如果将升汞的４种消毒方式一起比
较，则愈伤诱导率就不是随消毒剂浓度提高而降低，
如高浓度处理（Ｄ２：０．１％升汞＋浓硫酸处理３０ｓ）
的愈伤诱导率反而比低浓度处理（Ｃ１：０．０５％升汞）
的高。所以，次氯酸钠作为消毒剂的愈伤诱导效果
远比升汞好，低浓度消毒剂处理的愈伤诱导效果比
高浓度消毒剂处理好，同时浓硫酸处理对假俭草种
子的愈伤诱导有明显的促进作用。
愈伤的诱导跟外植体活性是紧密相关的，一般
来说随种子活性提高而增大。本试验结果表明，次
氯酸钠对种子活性的伤害程度远远小于升汞，采用
次氯酸钠作为消毒剂的愈伤诱导率远比升汞高，这
说明２种不同的消毒剂主要是通过影响外植体的活
性而影响愈伤诱导率的。所以一般认为在其他条件
相同的时候，外植体活性（发芽率）高则愈伤诱导率
高。通过比较图２－ｂ和图３，发现在升汞处理中，愈
伤诱导率表现出随发芽率提高而增大的严格对应关
系，但在次氯酸钠处理中，只是整体具有这种趋势，
并不是严格的对应关系。例如，Ａ２和Ｂ２均比 Ａ１
和Ｂ１的发芽率低，而 Ａ２和Ｂ２的愈伤诱导率却显
著高于Ａ１和Ｂ１，但是在都不经浓硫酸处理或都经
浓硫酸处理的时候，愈伤诱导率跟种子发芽率也是
一种严格的正相关对应，如 Ａ１的种子发芽率显著
高于Ｂ１，Ａ１相应的愈伤诱导率也显著高于Ｂ１；Ａ２
跟Ｂ２也有类似关系。所以，愈伤的诱导跟外植体
的活性紧密相关，也表明浓硫酸处理对愈伤诱导存
在某种促进作用。
３．２ 浓硫酸在假俭草种子愈伤诱导中的作用
本研究中，无论是采用升汞还是次氯酸钠作为
消毒剂，经浓硫酸处理系列的愈伤诱导率均显著高
于其对照，并且试验结果中出现种子发芽率低而愈
伤诱导率高的情况，以及愈伤最高诱导率并没出现
在种子发芽率最高点的现象，这跟浓硫酸的使用有
关。浓硫酸的短暂处理可产生如下效果：①杀灭种
子表面的微生物；②使大部分种子的种皮破损；③损
伤种子内部结构，直接降低种子的活性；④因破坏种
皮结构，加剧消毒剂对种子活性的伤害。对于第③
图３ 不同消毒处理方式的愈伤诱导率
Ｆｉｇ．３ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｗａｙｓ
ｏｎ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ
点，可以通过合理控制灼烧时间来减少对其活性的
损伤，如本研究所确定的浓硫酸处理３０ｓ，可以使
大部分种子种皮炭化脱落，而发芽率相对自然发芽
率只稍微下降。浓硫酸处理３０ｓ后，杀灭种子表面
的部分微生物，因而可以缩短后续消毒剂的使用时
间，除７％次氯酸钠处理外，采用３．５％次氯酸钠、
０．０５％升汞和０．１％升汞作为消毒剂时，增加浓硫
酸处理３０ｓ的消毒方式均相应缩短消毒时间，减弱
了消毒剂对种子的伤害作用。本研究认为这是浓硫
酸处理提高愈伤诱导率的原因之一。
通过比较各种消毒处理后种子的发芽率和愈伤
诱导率可以发现，愈伤诱导率均高于其相应的发芽
率，这说明有些种子虽然不具备萌发能力，但仍具备
产生愈伤的潜能。这种现象在理论上是存在的，因
为种子的萌发必须要求种子具备完整的、具有活力
的胚结构，但愈伤的产生则不然，只要种子内存在仍
具有活力的结构或组织就可以在激素的刺激下产生
愈伤。然而，当假俭草致密的种皮及蜡质层存在时，
那些尚存在活力的组织或器官产生的愈伤无法穿破
种皮而窒息于种皮之内，而在浓硫酸破坏了种皮之
后就能顺利出愈，本研究认为这是浓硫酸处理提高
愈伤诱导率的主要原因。对于次氯酸钠而言，２种
浓度的消毒剂增加浓硫酸处理３０ｓ后，发芽率均下
降，尤其是Ｂ２的发芽率比Ｂ１的发芽率显著下降，
但Ｂ２的愈伤诱导率均显著高于Ｂ１；对于消毒剂升
汞而言，显然增加浓硫酸处理３０ｓ后能通过缩短消
毒时间而提高发芽率，但提高幅度未达显著水平，而
愈伤诱导率显著提高。这种发芽率低而愈伤诱导率
高或者发芽率提高不显著而愈伤诱导率显著提高的
７８３
草 地 学 报 第２０卷
原因，可能是由于浓硫酸破损种皮后，使得一些已经
不能正常萌发，但尚存在有活力的组织或器官的种
子诱导出愈伤。所以本研究认为浓硫酸破损种皮是
提高愈伤诱导率的主要原因。
另外，通过Ｄ２和Ｃ１的组间数据比较发现，有
浓硫酸处理的高浓度升汞处理Ｄ２比没有浓硫酸处
理的低浓度升汞处理Ｃ１不但提高了发芽率，而且
提高了愈伤诱导率，因为Ｄ２处理把消毒时间缩短
到１０ｍｉｎ，相对Ｃ１处理的２０ｍｉｎ，大大缩短了消毒
时间，所以使得高浓度的升汞比低浓度升汞消毒后
的发芽率和愈伤诱导率都得到提高。这一方面说明
长时间的升汞消毒（尽管是在低浓度下）对愈伤诱导
极为不利，另外也再次说明浓硫酸对假俭草种子愈
伤诱导具有积极作用。鉴于浓硫酸的上述作用，在
一些其他草坪草种子如结缕草等的组织培养中可以
借鉴。
４ 结论
浓硫酸灼烧３０ｓ＋３．５％次氯酸钠消毒２０ｍｉｎ
的消毒方式下愈伤诱导效果最好，达到５２％；浓硫
酸灼烧假俭草种子３０ｓ，可显著提高出愈率；消毒剂
次氯酸钠比升汞有利于假俭草种子的愈伤诱导。
参考文献
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［５］ 刘明稀．假俭草组织培养和转基因研究［Ｄ］．广州：华南农业
大学，２００４
（责任编辑 李美娟
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“第十二届国际草坪学术大会”在北京召开
由国际草坪学会主办（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｕｒｆｇｒａｓｓ Ｓｏｃｉｅｔｙ）、北京林业大学草坪研究所承办的“第十二届国
际草坪学术大会”（Ｔｈｅ １２ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｕｒｆｇｒａｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ）（ＩＴＲＣ２０１３）将于２０１３年７月１４
日至１９日在北京友谊宾馆隆重召开。届时来自世界各地的草坪科学家、学者、从业人员等将共同交流和探
讨草坪科学研究、草坪建植和养护管理等相关技术，并将实地参观考察草坪设施和运动场馆。
本次大会旨在促进国际草坪业在草坪科学研究及草坪建植与管理技术方面的交流与合作，为草坪科学
家、草坪从业人员、研究人员和学生展示草坪科研最新成果、交流体会和心得以及讨论共同关心的问题创造
良好的平台，并能对我国草坪教学科研水平的不断提高和草坪业的健康发展起到积极的促进作用。
本次大会议题主要包括草坪建植与管理、草坪有害生物防治、运动场草坪根系层建造、草坪草遗传育种、
草坪草生理及草坪土壤等。大会将特邀国内外草坪业知名的专家学者就不同的议题做特邀报告等。另有来
自美国、意大利、加拿大、澳大利亚、新西兰等国家和地区著名的草坪科学家和从业人员也将在会上展示其草
坪科研最新成果。
会后将在国际草坪学会研究论文集（ＩＴＳ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｖｏｌｕｍｅ）上公开出版会议论文，目前大会正
在征集会议论文，其中提交论文题目的截止时间是２０１２年２月１日，提交论文初稿的截止时间是２０１２年５
月１日。欢迎踊跃投稿。详情请登陆：
国际草坪学会网站：ｈｔｔｐ：／／ｔｕｒｆｓｏｃｉｅｔｙ．ｃｏｍ
会议网站：ｈｔｔｐ：／／ｔｕｒｆｓｏｃｉｅｔｙ．ｃｏｍ／ｉｔｒｃ２０１３
ＩＴＳ会议论文信息网站：ｈｔｔｐ：／／ｉｔｓｒｊ－ｖｏｌｕｍｅ１２．ｏｒｇ
联 系 人：韩烈保 尹淑霞 通讯地址：北京林业大学１１６信箱
联系电话：０１０－６２３３７９８２ ６２３３６２８４ 传 真：０１０－６２３２２０８９
Ｅ－ｍａｉｌ：ｉｔｒｃ２０１３＠１６３．ｃｏｍ
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