全 文 ：第20卷 第4期
Vol.20 No.4
草 地 学 报
ACTA AGRESTIA SINICA
2012年 7月
Jul. 2012
乳白香青内生菌RC14抑菌能力测定及其鉴定
李振东1,2,陈秀蓉1*,杨成德1,李 鹏1
(1.甘肃农业大学草业学院 草业生态系统教育部重点实验室 甘肃省草业工程实验室 中-美草地畜牧业可持续发展研究中心,
甘肃 兰州 730070;2.甘肃省社会科学院农村发展研究所,甘肃 兰州 730070)
摘要:以高寒草地优势植物乳白香青(Anaphalislactea)内生细菌RC14为研究对象,采用平板对峙法测定其对植
物病原真菌的抑菌能力;并利用16SrDNA序列分析结合形态特征和生理生化特性对RC14进行鉴定。结果表明:
RC14对多种植物根部病原菌和叶斑病菌均具有良好的抑制作用,抑制的病原菌种类有葡萄孢属(Botrytis)、蠕孢
属(Bipolaris)、链格孢属(Alternaria)、镰孢菌属(Fusarium)和丝核菌属(Rhizoctonia)等植物病原真菌属,说明
RC14具有较广的抑菌谱。RC14菌体杆状,大小为1.9~3.3μm×0.7~0.8μm,G+,中生芽孢,形态特征和生理
生化特性及16SrDNA基因序列综合分析结果表明RC14为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。本研究结果为开发
和利用高寒草地所特有植物的内生拮抗菌提供了理论依据,为开发生物农药提供菌种资源。
关键词:高寒草地;内生拮抗菌;枯草芽孢杆菌;鉴定
中图分类号:Q946;S432 文献标识码:A 文章编号:1007-0435(2012)04-0753-06
DeterminationoftheCapacitytoAntagonistictowardsPathogenicFungi
andIdentificationofAnaphalislacteaEndophyticBacteriaRC14
LIZhen-dong1,2,CHENXiu-rong1*,YANGCheng-de1,LIPeng1
(1.PrataculturalColege,GansuAgriculturalUniversity,KeyLaboratoryofGrasslandEcosystemMinistryofEducation,Grass
EngineeringLaboratoryofGansuProvince,Sino-U.S.CentersforGrazinglandEcosystemSustainability,Lanzhou,GansuProvince730070,
China;2.InstituteofRuralDevelopment,GansuAcademyofSocialSciences,Lanzhou,GansuProvince730070,China)
Abstract:ThestudyisfocusedontheendophyticbacteriumRC14ofdominantplantAnaphalislacteainal-
pinegrassland.AntimicrobialspectraofRC14aredeterminedusingPDA-plateconfrontation.Morphologi-
cal,physiologicalandbiochemicalcharacteristicsofRC14areidentifiedusing16SrDNAgenesequencea-
nalysis.ResultsshowthatRC14hasacapacitytoinhibitrootspathogensandleafspotpathogensinsever-
alvarietiesofplants,andcaninhibitpathogenicfungisuchasBipolaris,Botrytis,Fusarium,Alternaria
andRhizoctoniaindicatingawideantimicrobialspectrumofRC14.RC14isgram-positivewith1.9~3.3
μm×0.7~0.8μmrod-shapeandcanproducesporeinthecenter.Morphologicalcharacteristics,physio-
logicalandbiochemicalcharacteristicsand16SrDNAgenesequenceanalysisshowthatRC14isBacillus
subtilis.Thisstudywilprovideevidenceforexploringandutilizingantimicrobialendophyticbacteriainal-
pinegrasslandandwilalsoprovidestrainresourceformakingbiologicalpesticides.
Keywords:Alpinegrassland;Antagonisticendophyticbacteria;Bacillussubtilis;Identification
据联合国粮农组织(FAO)统计,每年因农作物
遭受病害造成的平均减产量为总产量的10%~
15%[1]。农作物病害80%以上是由真菌引起的[2],
控制真菌病害是提高农作物产量的有效措施。目前
主要采用化学农药防治真菌病害,但由于长时间大
量使用化学农药会导致化学农药残留和农业生态系
统的失衡等一系列后果,严重威胁着人类健康[3-7],
这已成为制约现代农业可持续发展的主要障碍。生
防菌以无毒无害、长效性和环境兼容性好等优点成
为突破这一障碍的有效手段。植物内生细菌由于其
可产生抗生素、水解酶类等抗菌活性物质,诱导系统
抗性、生态位竞争等作用机制在植物体内长期发挥
生防作用,已被认为是植物病害生物防治的天然资
源[8-14]。
收稿日期:2011-12-19;修回日期:2012-02-20
基金项目:国家自然基金项目(31160122);草业生态系统教育部重点实验室(甘肃农业大学)开放课题(CYzs-2011011)资助
作者简介:李振东(1978-),男,甘肃临夏人,副研究员,博士,研究方向为草地生物多样性,E-mail:lizhendong22@163.com;*通信作者
Authorforcorrespondence,E-mail:chenxiurong@gsau.edu.cn
草 地 学 报 第20卷
植物内生细菌是指那些在其生活史的一定阶
段,或全部阶段生活于健康植物的组织和器官内的
细菌,感染了内生细菌的宿主植物(至少是暂时)不
表现出外在病症,可用组织学方法或从彻底表面消
毒的植物组织中分离,也可以从植物组织内直接扩
增出细菌DNA的方法来证明其存在[15]。目前,已
经从块根芍药(Paeoniaanomala)、铁棍山药(Di-
oscoreaopposita)、甘草(Glycyrrhizaglabra)、蓝麻
黄(Ephedraglauca)、蛇足石杉(Huperziaserra-
ta)等药用植物和水稻(Oryzasativa)、辣椒(Capsi-
cumannuum)、番茄(Lycopersiconesculentum)、黄
瓜(Cucumissativus)、马铃薯(Solanumtuberos-
um)、棉 花 (Gossypium hirsutum)、油 菜 (Rape
plant)等作物,以 及 苦 豆 子 (Sophoraalopecu-
roides)、桑树(Morusalba)、樟树(Cinnamomum
camphora)、红树(Rhizophoraapiculata)、大花金
挖耳(Carpesiummacrocephalum)等植物体内已分
离筛选到对多种植物病原真菌和细菌性植物病害具
有良好抑制或防治效果的内生细菌[16-22]。
目前,对于高寒草地乳白香青(Anaphalislact-
ea)内生细菌抗病的研究鲜见报道。乳白香青别名
大矛香艾、大白矛香、甘旦巴扎(藏名),属菊科
(Compositae)香青属(Anaphalis)多年生草本植物,
分布于我国西北地区,主要生长在海拔2000~4500
m的山坡草地、草甸、针叶林下。全株密被灰白色
绒毛,高10~50cm,根状茎粗壮,根茎木质化,分
枝,茎丛生,直立。生长于山坡、草地、灌木丛中。乳
白香青为藏药,全草入药,具有活血散瘀、平肝潜阳、
祛痰、清热止咳、外用止血的功效[23]。乳白香青中
含有大量具有生物活性及药理作用的黄酮类化合
物,且无毒无害,有抗癌、抗辐射、抗炎、镇痛、解热作
用,对肝、肾脏和心血管等有保护作用[24]。乳白香
青的乙醇提取物对食用油脂有一定的抗氧化效
果[25]。本试验以东祁连山高寒草地乳白香青内生
细菌RC14为研究对象,对其抑制植物病原真菌能
力进行测定,并利用16SrDNA序列分析结合形态
特征和生理生化特性对RC14进行鉴定,以期为开
发和利用高寒草地所特有的植物内生拮抗菌提供依
据,也为开发生物农药提供菌种资源。
1 材料与方法
1.1 供试菌株
供试菌株RC14分离自2007年7月在甘肃省
天祝县金强河地区采集的优势植物乳白香青[26]。
枯草芽孢杆标准菌株(Bacillussubtilis)购自中国普
通微生物菌种保藏管理中心。
植物病原真菌:①小麦根腐病菌(Bipolarisso-
rokiniana)、②西瓜尖镰孢(Fusariumoxysporum
f.Niveum)、③番茄灰霉病菌(Botrytiscinerea)、④
番茄早疫病菌(Alternariasolani)、⑤油菜菌核病菌
(Sclerotiniasclerotiorum)、⑥棉花立枯病菌(Rhi-
zoctoniasolani(cottonstrain)KühnSchl.),由甘
肃农业大学植物病理实验室提供。
1.2 试剂和培养基
蛋白酶K、溶菌酶、氯仿、苯酚、TaqDNA聚合
酶、dNTP和DNA marker购自生工生物工程(上
海)有限公司。用于细菌基因组DNA提取的试剂
制备参考《精编分子生物学实验指南》[27]。
所用培养基[28]:RC14的活化和保存用牛肉膏
蛋白胨培养基,植物病原真菌的培养和对峙试验用
马铃薯葡萄糖培养基(PDA)。
1.3 方法
1.3.1 RC14对病原菌抑菌谱的测定 菌株RC14
抑菌效果的测定采用平板对峙培养法。将供试植物
病原真菌在PDA培养基上进行活化和扩大培养,
打成直径为7mm的菌饼。菌株RC14在牛肉膏蛋
白胨培养基上活化培养2d。在PDA平板中央接
种制作好的植物病原菌菌饼,在距植物病原菌菌饼
25mm处按十字法点接菌株RC14,每皿接4点,3
个重复,以每皿点接4点无菌水在距植物病原菌菌
饼25mm处为对照,置25℃智能霉菌培养箱内恒
温培养7~14d,待对照皿中植物病原菌长满培养皿
后测量菌株RC14的抑菌带宽度(即菌株RC14菌
落边缘到相对植物病原菌菌落边缘的距离)。
1.3.2 菌株RC14的鉴定 形态特征的观察和生
理生化测定:参考文献[29-30]的方法进行菌落形态
观察,以枯草芽孢杆菌标准菌株为对照菌株,进行菌
株RC14的菌体形态观察和生理生化特性测定。
16SrDNA序列分析:参考奥斯伯等[27,31-32]的
方法提取菌株RC14的细菌基因组DNA。PCR扩
增引物根据细菌16SrDNA两端的保守序列设计,
引物1的序列:5′-CGGGATCCTACGGCTACCT-
TGTTACGACTT-3′,引 物 2 的 序 列:5′-CCG-
GATCCAGAGTTTGATCATGGCTCAGCA-3′。
引物由生工生物工程(上海)有限公司合成。PCR
反应体系:1μLdNTP(5mmol·L-1),5μL10×
457
第4期 李振东等:乳白香青内生菌RC14抑菌能力测定及其鉴定
bufer(含25mol·L-1 MgCl2),0.3μLTaqDNA聚
合酶 (5U·L-1),1μL引物1(10μmol·L-1),1μL
引物2(10μmol·L-1),1μL菌株 RC14基因组
DNA,(1μL无菌超纯水为阴性对照)补无菌超纯水
至50μL。扩增程序:①预变性94℃,5min;②变性
94℃40s,退火60℃30s,延长72℃50s,35个循
环;③延伸72℃8min。PCR扩增结束后取5μL
PCR扩增产物,用1%琼脂糖凝胶在80V电压下进
行电泳检测,将目的条带(1500bp左右),亮度高且
无非特异性条带的PCR扩增产物置于-20℃下保
存,目的片段的测序由生工生物工程(上海)有限公
司完成。
将菌株RC14的16SrDNA基因序列与 Gen-
Bank数据库相关基因序列进行Blastn相似性分
析;再用DNA序列分析软件CLUSTALX1.8进行
多重序列比较,菌株RC14的16SrDNA基因系统
发育树的构建采用 Mega4.0软件中的邻接法
(Neighbor-Joining),遗传距离的计算采用Tamura-
Nei公式,枝长代表了分歧程度,枝上的数字是500
次bootstrap重抽样分析的支持百分比。
2 结果与分析
2.1 抑菌作用测定
对峙试验结果表明,RC14对所选的6株病原
真菌中的番茄灰霉病菌、小麦根腐病菌、西瓜尖镰
孢、番茄早疫病菌和棉花立枯病菌5株有不同的拮
抗作用(图1),抑菌带宽分别为:10,8,6,6和5
mm;RC14对油菜菌核病菌生长没有抑制能力。表
明菌株RC14对多种植物根部病原菌和叶斑病菌均
具有良好的抑制作用,抑制的病原菌种类涉及到蠕
孢属(Bipolaris)、葡萄孢属(Botrytis)、镰孢菌属
(Fusarium)、链格孢属(Alternaria)和丝核菌属
(Rhizoctonia)等植物病原真菌属,说明RC14具有
较广的抑菌谱。
图1 RC14与5种病原真菌对峙照片
Fig.1 PlateconfrontationofRC14andfivegeneraofpathogenicfungi
注:1.棉花立枯病菌,2.番茄灰霉病菌,3.小麦根腐病菌,4.西瓜尖镰孢,5.番茄早疫病菌
Note:1.Rhizoctoniasolani(cottonstrain)KühnSchl.,2.Botrytiscinerea,3.Bipolarissorokiniana,
4.Fusariumoxysporumf.Niveum,5.Alternariasolani
2.2 菌株RC14的鉴定
2.2.1 16SrDNA 序列系统发育学分析 经过
0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,提取的菌株RC14基因
组DNA条带清楚,无非特异性条带,亮度较高,说
明该DNA样品纯度较好,浓度高,可用作16SrD-
NA基因序列的PCR扩增模板。16SrDNA基因序
列PCR扩增产物在1%琼脂糖凝胶电泳检测时,有
一明亮的DNA特异性条带在1500bp左右,并且无
非特异性DNA条带(图2)。说明获得的目的DNA
片段纯度好、浓度高。经测序PCR扩增所得菌株
RC14的16SrDNA基因片段有1235个碱基,其在
GenBank数据库中的登录号为FJ263383。
经Blast相似性分析,菌株RC14与枯草芽孢杆
菌(AB305268)的相似度均达99%。从系统发育树
来看(图3),菌株RC14与枯草芽孢杆菌(AB305268
和AY553094)聚在一起,虽然没有与枯草芽孢杆菌
的5株模式菌株 NRRLB-23049,JCM1465,IAM
12118,DSM10和NRS744聚在同一支上,但RC14
557
草 地 学 报 第20卷
图2 RC1416SrDNAPCR电泳图
Fig.2 PCRelectrophoresisof16SrDNAofRC14
与5株模式菌株的遗传距离均小于0.0012。因此,
初步鉴定RC14为枯草芽孢杆菌。
2.2.2 形态特征和生理生化特性 菌株RC14为好
氧菌,具有运动性,革兰氏阳性,菌体杆状,中生芽孢
(图4),大小为1.9~3.3μm×0.7~0.8μm,菌落近
圆形,边缘不整齐,中央隆起、有褶皱,不透明,灰白色
(图5)。菌株RC14的生理生化特征(表1)所测试项
目均与枯草芽孢杆菌标准菌株的反应相同。根据
16SrDNA基因序列系统发育学分析及伯杰氏细菌鉴
定手册第八版[29]和东秀珠[30]《常见细菌系统鉴定手
册》确定RC14为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。
图3 RC14的16SrDNA系统发育树
Fig.3 16SrDNAphylogenetictreeofRC14
图4 RC14革兰氏染色
Fig.4 RC14gramstain
图5 RC14的菌落
Fig.5 ColonyofRC14
表1 RC14的生理生化特征
Table1 PhysiochemicalpropertiesofRC14
试验项目
Testitem
枯草芽孢杆菌
B.subtilis
RC14
葡萄糖利用Glucoseutilization + +
葡萄糖产气 Gasproductionfromglucose - -
阿拉伯糖利用Arabinoseutilization + +
甘露醇利用 Manicolutilization + +
VP试验 V.P.test + +
淀粉水解Starchhydrolysis + +
马尿酸盐水解Benzoylglychydrolysis - -
硝酸盐还原Nitratereduction + +
接触酶Catalase + +
明胶液化Gelatinliquefaction + +
酪蛋白水解Caseinhydrolysis + +
丙二酸盐利用 Malonateutilization - -
3 讨论
目前广泛用于防治植物病害的主要芽孢杆菌种
类有:枯草芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌(B.poly-
myxa)、蜡状芽孢杆菌(B.cereus)、短小芽孢杆菌
(B.pumilis)和巨大芽孢杆菌(B.megaterium)
等[33]。枯草芽孢杆菌具有极强的抗逆能力,其内生
657
第4期 李振东等:乳白香青内生菌RC14抑菌能力测定及其鉴定
孢子能够对热、干燥、辐射、静水压、极端pH值和一
些有毒化学物品等有很强抵抗能力[34-35]。能够产生
丰富的抗菌活性物质,抑制植物病原菌的范围很广,
对包括植物根部、枝干、叶、花和收获后的果品在内
的多种植物真菌和细菌性病害具有拮抗作用。枯草
芽孢杆菌能够拮抗超过30种的植物病原菌[36]。彭
细桥等[37]报道烟草(Nicotianatabacum)内生枯草
芽孢杆菌 H-1 对烟草青枯病的田间防效高达
84.3%。郑音[38]研究表明碱蓬(Suaedaglauca)内
生枯草芽孢杆菌对茄病镰孢菌(F.solani)、尖刀镰
孢菌(F.oxysporum)和草酸青霉(Penicillumoxa-
licum)等病原菌具有较强的抑菌活性。文才艺
等[39]从樟树内分离出一株枯草芽孢杆菌EBS05对
多种植物病原真菌有一定的拮抗活性。本文报道的
一株乳白香青内生枯草芽孢杆菌RC14对植物病原
真菌具有抗菌谱广的特征,抑制的病原菌种类涉及
到蠕孢属、葡萄孢属、镰孢菌属、链格孢属和丝核菌
属等植物病原真菌属。说明植物体内存在对植物病
原真菌具有拮抗能力的枯草芽孢杆菌。枯草芽孢杆
菌在植物体内抢占生态位,与病原菌竞争营养物质,
分泌抗菌物质以抑制病原菌生长,同时诱导植物防
御系统抵御病原菌入侵,从而达到生防的目的。
雍彬等[40]从华重楼(ParispolyphyllaSmith
var.chinensis)中筛选出19株具有拮抗活性内生细
菌,占分离到菌株总数的27.5%,楚敏等[41]从生姜
(Zingiberofficinale)块根中分离到14株具有拮抗
作用的菌株,占分离菌数的61%。说明药用植物内
含有丰富的植物病害生防资源菌,是重要的植物病
害生防资源菌的来源之一。本文研究的菌株RC14
分离自乳白香青(藏药),也支持这一结论。同时,试
验植物健康的乳白香青采自东祁连山高寒草地,因
此,高寒草地这种特殊生境中的植物也是植物病害
生防资源菌的来源之一,这与赵国玉等[42]认为“今
后在寻找真菌致病菌的拮抗菌时,其寻找范围不应
仅仅局限于致病菌所寄生的植物或染植株的根际土
壤”一致。
国内鲜见乳白香青病害的报道,未见蠕孢属、葡
萄孢属、镰孢菌属、链格孢属和丝核菌属等属的植物
病原真菌为害乳白香青的报道。笔者在天祝县金强
河采样时少见有乳白香青发生病害,说明乳白香青
对植物病原真菌有较强的抑菌能力。乔卿梅等[43]
认为植物内生菌侵入宿主植物后,可增强与植物抗
逆有关基因的表达速度和强度,从而增强相关抗逆
酶的活性,使宿主植物对病虫害等生物胁迫和非生
物胁迫的抗逆性增强。因此本文认为菌株RC14在
乳白香青内的生活可能对乳白香青抗植物病原真菌
有良好的作用。有研究认为植物内生细菌通过产生
抗生素、生物碱、水解酶及植物生长调节剂等次生代
谢产物或与病原菌竞争营养和生态位等方式来抑制
植物病害发生和发展从而有利于植物生活,达到间
接促生作用[21,44-45],菌株RC14对乳白香青的生长
可能具有一定的促进作用。侯金伟和南志标[46]研
究表明病原真菌是导致土壤种子库种子死亡的一个
重要原因,菌株RC14对减少土壤种子库中乳白香
青种子的死亡可能具有一定的作用,这对保持乳白
香青优势种的地位有积极作用。因此,本文认为
RC14是1株具有开发潜力的生防菌,但其抑菌机
理及环境相容性等问题尚需进一步研究。
4 结论
高寒草地优势植物乳白香青内生细菌RC14菌
体杆状,大小为1.9~3.3μm×0.7~0.8μm,革兰
氏阳性,中生芽孢,形态特征和生理生化特性及16S
rDNA基因序列综合分析结果表明:RC14为枯草芽
孢杆菌且具有较广的抑菌谱,对多种植物根部病原
菌和叶斑病菌均具有良好的抑制作用,抑制的病原
菌种类涉及葡萄孢属、蠕孢属、链格孢属、镰孢菌属
和丝核菌属等植物病原真菌属。
参考文献
[1] 刘志俊,段渝峰.生物农药新概念新发展[J].农药科学与管理,
2003,24(7):28-32
[2] 曾庆桂,朱笃,颜日明,等.一株抗真菌的蛇足石衫内生细菌分
离鉴定及培养基条件优化[J].微生物学通报,2008,35(4):
512-518
[3] 于淑池,张利平,王立安.拮抗细菌作为生物防治手段研究进展
[J].河北农业科学,2004,8(1):62-65
[4] 台莲梅,金红,贾锡云.农作物病害生物防治研究进展[J].黑龙
江八一农垦大学学报,2002,14(3):21-24
[5] 潘以楼,汪智渊,吴汉章.油菜菌核病菌对多菌灵的抗药性及其
稳定性[J].江苏农业学报,1997,13(1):32-35
[6] 石志琦,周明国,叶钟音.核盘菌对菌核净的抗药性机制初探
[J].农药学学报,2000,2(2):47-51
[7] GossenBD,RimmerSR,HoleyJD.Firstreportofresist-
ancetobenomylfungicideinSclerotiniasclerotiorum[J].Plant
Disease,2001,85(11):1206
[8] 胡莉莉,窦美安,谢江辉,等.香蕉枯萎病抗病性研究进展[J].
广西热带农业,2006(1):16-18
[9] SturzAV,ChristieBR,NowakJ.Bacterialendophytes:po-
tentialroleindevelopingsustainablesystemsofcropproduc-
757
草 地 学 报 第20卷
tion[J].CriticalReviewsinPlantSciences,2000,19(1):1-30
[10]文才艺,吴元华,田秀玲.植物内生菌研究进展及其存在的问题
[J].生态学杂志,2004,23(2):86-91
[11]ChrisPC,BacterialE.Theencyclopediaofpestmanagement
[M].NewYork:MarcelDekker,2002:43-46
[12]BarraquioWL,RevilaL,LadhaJK.Isolationofendophytic
bacteriadiazotrophicbacteriafromwetlandrice[J].Plantand
Soil,1997,194(2):15-24
[13]ChenC,BauskeEM,MussonG,etal.Bidogicalcontrolof
Fusariumwiltoncottonbyuseofendophyticbacteria[J].Bio-
logicalControl,1995,5(1):83-91
[14]罗明,芦云,张祥林.棉花内生细菌的分离及生防益菌的筛选
[J].新疆农业科学,2004,41(5):277-282
[15]StoneJK,BaconCW,WhiteJF.Anoverviewofendophytic
microbes:endophytismdefined[C]//BaconC W,WhiteJF,
eds.Microbialendophytes.NewYork:MarcelDekker,2000:
3-29
[16]布热比亚·艾山,阿依努尔·阿不都热合曼,米克热木·牙生,
等.新疆块根芍药(Paeoniaanomala)内生细菌 XJU-PA-1的
鉴定及特性分析[J].生物技术,2011,21(1):51-54
[17]张建新,刘起丽,赵丹丹,等.铁棍山药内生菌的分离及对白菜
软腐菌拮抗菌的筛选[J].河南农业科学,2009(10):94-96
[18]苗则彦,吕国忠,赵奎华,等.黄瓜内生细菌E1-E4防治黄瓜枯
萎病研究[J].中国生态农业学报,2006,14(4):261-262
[19]陈利军,史洪中,陈月华.油菜内生球毛壳菌抑菌作用初步测
定[J].河南农业科学,2005(7):54-56
[20]李振东,陈秀蓉,李鹏,等.珠芽蓼内生菌Z5产IAA和抑菌能
力测定及其鉴定[J].草业学报,2010,19(2):61-68
[21]石晶盈,陈维信,刘爱媛.植物内生菌及其防治植物病害的研究
进展[J].生态学报,2006,26(7):2395-2400
[22]牟志美,路国兵,冀宪领,等.桑树内生拮抗细菌Burkholderia
cepaciaLu10-1的分离鉴定及其内生定殖[J].微生物学报,
2008,48(5):623-630
[23]赵汝能.甘肃中草药资源志:上[M].兰州:甘肃科学技术出版
社,2003:1379
[24]包锦渊,卢永昌,白鹤松,等.乳白香青中黄酮类成分的定性定
量分析[J].分子科学学报,2009,25(1):72-74
[25]卢永昌,马金花.三种藏药对食用油脂抗氧化性的初步研究
[J].中国油脂,2007,32(5):58-60
[26]满百膺,陈秀蓉,李振东.高寒牧草内生细菌分离培养条件的
优化[J].草原与草坪,2008(5):27-30
[27]奥斯伯F,布伦特R,金斯顿RE,等.精编分子生物学实验指
南[M].北京:科学出版社,1998:39-40
[28]方中达.植病研究方法[M].第3版.北京:中国农业出版社,
1998:182-183
[29]布坎南RE,吉本斯NE.伯杰细菌鉴定手册[M].北京:科学
出版社,1984:729-748
[30]东秀珠,蔡妙英.常见细菌系统鉴定手册[M].北京:科学出版
社,2001:353-412
[31]李振东,陈秀蓉,李鹏,等.珠芽蓼内生固氮菌鉴定及其固氮基
因分析[J].草地学报,2009,17(5):552-557
[32]司丙文,王宗礼,孙启忠,等.山竹岩黄芪青贮中优质乳酸菌的
分离和鉴定[J].草地学报,2012,20(1):166-170
[33]周晓梅,刘强,王瑛璐,等.拮抗菌生物防治农作物病害的研究
进展[J].吉林师范大学学报:自然科学版,2010,31(4):36-39
[34]NicholsonWL,MunakataN,HorneckG,etal.Resistance
ofbacterialendosporestoextremeterrestrialandextraterres-
trialenvironments[J].Microbiologyand MolecularBiology
Reviews,2000,64(3):548-572
[35]SetlowPJ.SporesofBacillussubtilis:Theirresistancetoand
kilingbyradiation,heatandchemicals[J].JournalofApplied
Microbiology,2006,101(3):514-525
[36]MoyneAL,ClevclandTE,TuzunS.Molecularcharacteriza-
tionandanalysisoftheoperonencodingtheantifungallipocp-
tidcbacilomycinD[J].FEMSMicrobiologyLetter,2004,234
(1):43-49
[37]彭细桥,周国生,邓正平,等.烟草青枯病内生拮抗菌的筛选、鉴
定及其防效测定[J].植物病理学报,2007,37(6):670-674
[38]郑音.辽宁碱蓬营养成分分析及有益内生菌筛选[D].大连:
辽宁师范大学,2011:53
[39]文才艺,尹志刚,陈建光,等.樟树内生细菌EBS05的鉴定及其
抗菌活性物质性质的研究[J].微生物学通报,2009,36(7):
988-993
[40]雍彬,张超,马沁沁,等.华重楼内生菌Iun35的分离及其抗菌
蛋白的性质[J].应用与环境生物学报,2011,17(4):537-540
[41]楚敏,张志东,王玮,等.姜内生菌多样性及微生物拮抗作用的
初步研究[J].新疆农业科学,2011,48(11):2061-2066
[42]赵国玉,古力山·买买提,吾甫尔·米吉提.准噶尔乌头中一
株农作物致病菌拮抗菌的分离及鉴定[J].生物技术,2009,19
(3):48-51
[43]乔卿梅,程茂高,王长林.药用植物内生菌在天然药物开发中
的应用[J].郑州牧业工程高等专科学校学报,2008(1):24-27
[44]KeelC,DéfagoG.Interactionsbetweenbeneficialsoilbacteria
androotpathogens:Mechanismsandecologicalimpact[C]//
ACGange,VKBrown,ed.Multitrophicinteractionsinter-
restrialsystems.London:Blackwel ScientificPublishers,
1997:27-46
[45]陈秀蓉,南志标.细菌多样性及其在农业生态系统中的作用
[J].草业科学,2002,19(9):34-38
[46]侯金伟,南志标.植物病原真菌对土壤种子库的影响[J].草业
学报,2009,18(4):241-250
(责任编辑 刘云霞)
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