全 文 ：植物科学学报　 ２０１４ꎬ ３２(１): ５０~ ５７
Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｊｏｕｒｎａｌ
　 　 ＤＯＩ:１０􀆰 ３７２４ / ＳＰ􀆰 Ｊ􀆰 １１４２􀆰 ２０１４􀆰 １００５０
丹参 ＳｍＧＧＰＰＳ３基因的克隆及表达分析
化文平１ꎬ２ꎬ 宋双红１ꎬ 智 媛１ꎬ 王喆之１∗
(１. 药用资源与天然药物化学教育部重点实验室ꎬ 西北濒危药材资源开发国家工程实验室ꎬ 陕西师范大学ꎬ 西安 ７１００６２ꎻ
２. 陕西学前师范学院生物科学与技术系ꎬ 西安 ７１００６２)
摘　 要: 香叶基香叶基焦磷酸合酶(Ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌ ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅꎬ ＧＧＰＰＳ)是植物细胞二萜类物质
合成的重要调节靶点ꎮ 本研究从药用植物丹参中克隆了一条新的 ＧＧＰＰＳ 基因 (ＳｍＧＧＰＰＳ３)ꎬ 基因全长
２９０８ ｂｐꎬ 包含一个 ９３１ ｂｐ的内含子和一个 ９６０ ｂｐ的编码序列ꎮ 推测的氨基酸序列与蓖麻、 橡胶、 拟南芥等植
物 ＧＧＰＰＳ一致性达到 ６７％以上ꎮ 实时定量 ＰＣＲ 结果显示ꎬ ＳｍＧＧＰＰＳ３ 基因在丹参不同发育时期不同器官中
表达差异显著ꎬ 同时受茉莉酸甲酯和病原菌的诱导ꎮ 遗传互补实验也表明ꎬ ＳｍＧＧＰＰＳ３编码蛋白具有 ＧＧＰＰ合
酶的活性ꎮ
关键词: 丹参ꎻ 香叶基香叶基焦磷酸合酶(ＧＧＰＰＳ)ꎻ 基因克隆ꎻ 基因表达
中图分类号: Ｑ９４３􀆰 ２　 　 　 　 　 文献标识码: Ａ　 　 　 　 　 文章编号: ２０９５￣０８３７(２０１４)０１￣００５０￣０８
　 　 　 收稿日期: ２０１３￣０７￣２２ꎬ 修回日期: ２０１３￣０９￣２８ꎮ
　 基金项目: 陕西省教育厅项目(１２ＪＫ０８３３)ꎻ 陕西省博士后科研项目ꎻ 陕西学前师范学院基金(１１ＫＪ００７)ꎮ
　 作者简介: 化文平(１９８０－)ꎬ 男ꎬ 博士ꎬ 讲师ꎬ 从事药用植物生物技术研究(Ｅ￣ｍａｉｌ: ｈｕａｗｅｎｐｉｎｇ＠１２６􀆰 ｃｏｍ)ꎮ
　 ∗通讯作者(Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ􀆰 Ｅ￣ｍａｉｌ: ｚｚｗａｎｇ＠ｓｎｎｕ􀆰 ｅｄｕ􀆰 ｃｎ)ꎮ
Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ＳｍＧＧＰＰＳ３
Ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ
ＨＵＡ Ｗｅｎ￣Ｐｉｎｇ１ꎬ２ꎬ ＳＯＮＧ Ｓｈｕａｎｇ￣Ｈｏｎｇ１ꎬ ＺＨＩ Ｙｕａｎ１ꎬ ＷＡＮＧ Ｚｈｅ￣Ｚｈｉ１∗
(１. Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ Ｃｒｕｄｅ Ｄｒｕｇｓ ｉｎ Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ ｏｆ Ｃｈｉｎａꎬ Ｓｈａａｎｘｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｘｉ􀆳ａｎꎬ
７１００６２ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２. Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ Ｓｈａａｎｘｉ Ｘｕｅｑｉａｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｘｉ􀆳ａｎ ７１０１００ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌ ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ (ＧＧＰＰＳ) ｉｓ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｔａｒｇｅｔ ｓｉｔｅ ｆｏｒ
ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｃｅｌｌｓ. Ｎｏｗꎬ ａ ｎｏｖｅｌ ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌ ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ
ｓｙｎｔｈａｓｅ ｇｅｎｅ (ＳｍＧＧＰＰＳ３) ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｐｌａｎｔ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ. Ｔｈｅ ｆｕｌｌ￣
ｌｅｎｇｔｈ ＳｍＧＧＰＰＳ３ ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ ２９０８ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓꎬ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ａ ９３１￣ｂｐ ｉｎｔｒｏｎ ａｎｄ ｏｎｅ ９６０￣ｂｐ
ＯＲＦ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ. Ｔｈｅ ｄｅｄｕｃｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ＳｍＧＧＰＰＳ３ ｓｈｏｗｅｄ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ６７％ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ
ｗｉｔｈ ＧＧＰＰＳｓ ｆｒｏｍ Ｒｉｃｉｎｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓꎬ ｒｕｂｂｅｒ ａｎｄ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ. Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＲＴ￣ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ
ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ＳｍＧＧＰＰＳ３ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｓｔａｇｅｓ ａｎｄ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ ｅｘａｍｉｎｅｄꎬ ａｎｄ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｍｅｔｈｙｌ ｊａｓｍｏｎａｔｅ(ＭｅＪＡ) ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ.
Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅꎬ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＳｍＧＧＰＰＳ３ ｉｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ
ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ＳｍＧＧＰＰＳ３ ｅｎｃｏｄｅｄ ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ＧＧＰＰ ｓｙｎｔｈａｓｅ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａꎻ ＧＧＰＰＳꎻ Ｇｅｎｅ ｃｌｏｎｅꎻ Ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
　 　 香叶基香叶基焦磷酸合酶 (Ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌ
ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅꎬ ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌ ｄｉｐｈｏｓ￣
ｐｈａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅꎬ ＧＧＰＰＳ) (ＥＣ: ２􀆰 ５􀆰 １􀆰 ２９)ꎬ 又
称牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶ꎬ 催化 １分子法尼
基焦磷酸(Ｆａｒｎｅｓｙｌ ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅꎬ ＦＰＰ)和 ３ 分子
异戊烯基焦磷酸( Ｉｓｏｐｅｎｔｅｎｙｌ ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅꎬ ＩＰＰ)
缩合生成 ２０ 碳的香叶基香叶基焦磷酸 (Ｇｅｒａ￣
ｎｙｌｇｅｒａｎｙｌ ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅꎬ ＧＧＰＰ )ꎬ 为赤霉素
类、 二萜类、 胡萝卜素类、 醌和维生素 Ｅ 侧链等
物质骨架结构的合成提供了起始前体物[１]ꎮ 同时ꎬ
它还能催化 ＤＭＡＰＰ 或 ＧＰＰ(Ｃ１０)作为烯丙基单
体的转移反应ꎬ 实现蛋白的异戊二烯化(ｐｒｅｎｙｌａ￣
ｔｉｏｎ) [２]ꎮ ＧＧＰＰ是多种次生代谢物的前体物质ꎬ
且在模式植物拟南芥的研究中发现细胞中 ＧＧＰＰ
物质的含量制约着拟南芥二萜类物质的合成[３]ꎬ
ＧＧＰＰＳ作为 ＧＧＰＰ合成的最后步骤的调控酶ꎬ 调
控着植物代谢中碳流的方向ꎬ 是二萜类物质合成途
径中的一个关键酶ꎮ 目前ꎬ 已在多个物种中开展了
该基因的克隆和功能分析ꎮ
丹参酮是大宗药材丹参中的一类主要活性成
分ꎬ 包含以丹参酮ⅡＡ 为主的 ４０ 余种二萜醌类化
合物ꎬ 具有扩张血管和保护心肌等功效ꎬ 在临床上
被广泛应用于心血管疾病的治疗[４ꎬ５]ꎮ 近年来ꎬ 研
究发现丹参酮还具有抗氧化、 抗炎、 抗菌、 抗肿瘤
等药理作用ꎬ 并已广泛应用于各种临床治疗[６ꎬ７]ꎮ
随着丹参市场需求的日益增加ꎬ 通过基因工程等调
控手段改造丹参酮合成途径ꎬ 提高丹参酮类物质含
量ꎬ 已成为丹参育种和缓解丹参资源压力的重要途
径ꎮ
在丹参中对二萜类的重要调控位点 ＧＧＰＰＳꎬ
也已进行了大量的研究ꎬ 并成功克隆了丹参 ＧＧ￣
ＰＰＳ基因家族的 ＳｍＧＧＰＰＳ１ 和 ＳｍＧＧＰＰＳ２ 两个
成员的编码基因[８－１０]ꎬ 前人对 ＳｍＧＧＰＰＳ１ 和
ＳｍＧＧＰＰＳ２基因结构、 表达及蛋白活性进行了研
究ꎬ 发现 ＳｍＧＧＰＰＳ１和 ＳｍＧＧＰＳ２可能分别主要
参与叶绿素等物质的合成和花中花青素的合
成[８－１０]ꎮ 在丹参高通量转录组测序数据库[１１]中ꎬ
我们发现了另一条 ＧＧＰＰＳ 编码基因 (命名为:
ＳｍＧＧＰＰＳ３)ꎮ 本研究对 ＳｍＧＧＰＰＳ３ 的全长序列
进行了克隆ꎬ 并对其表达模式和 ＧＧＰＰ 合酶活性
进行了分析ꎬ 以期为进一步研究丹参 ＧＧＰＰＳ 基因
在丹参酮等二萜类物质合成中的作用奠定基础ꎮ
１　 材料与方法
１􀆰 １　 材料
丹参(Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ Ｂｕｎｇｅ)种子采自陕西
商洛ꎬ 种植于人工气候箱(宁波ꎬ ＲＸＺ２５００Ｄ) 内ꎬ
培养条件为: 光照强度 １５０ μｍｏｌ􀅰ｍ－２􀅰ｓ－１ꎬ 光周
期为光照 １６ ｈ /黑暗 ８ ｈꎻ 温度(２５±２)℃ꎬ 湿度
４８％ꎮ 对种子萌发后 ２ ｄ、 ２ 周、 ２ 个月以及花期
(一年生)的植株分别取材ꎬ 作为萌芽期、 幼苗期、
生长期和花期的实验材料ꎮ 花期的丹参分别取根、
茎、 叶和花ꎮ 取幼苗期的材料用于 ＭｅＪＡ和菌的诱
导处理ꎮ 上述材料取材后均液氮速冻并 －８０℃
储藏ꎮ
ＲＮＡ提取试剂盒和 ＤＮａｓｅ等购自 ＯＭＥＧＡ公
司ꎻ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ⅱ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ、 ｐＭＤ１９￣Ｔ
ｓｉｍｐｌｅ ｖｅｃｔｏｒ和反转录试剂盒购自 ＴａＫａＲａ 生物
公司ꎻ 甘蓝黑腐病黄单胞菌 (Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍ
ｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ. ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓꎬ ＸＣ)和大肠杆菌 ＤＨ５α
均由本实验室保存ꎻ ｐＡＣＣＲ２５ＡｃｒｔＥ 及 ｐＢＨ(含
ｍｏｕｓｅ ＧＧＰＰＳ 基因 ) 质粒由德国 Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔäｔ
Ｋｏｎｓｔａｎｚ 大学的 Ｓａｎｄｍａｎｎ 博士赠送ꎮ ｐＢｌｕｅ￣
ｓｃｒｉｐｔ ⅡＳＫ(－)空载质粒由 ｐＢＨ 质粒改造而成ꎮ
１􀆰 ２　 方法
１􀆰 ２􀆰 １　 ＳｍＧＧＰＰＳ３基因的克隆
经 Ｂｌａｓｔ Ｘ分析发现ꎬ 在丹参高通量转录组数
据中 ｕｎｉｇｅｎｅ５３００５(４８８ ｂｐ)与蓖麻 ＧＧＰＰＳ 基因
编码蛋白序列存在很高的相似性ꎬ 将序列命名为
ＳｍＧＧＰＰＳ３ꎮ 依据此序列设计 ＢＤ ｗａｌｋｉｎｇ 引物
(见表 １)ꎬ 扩增 ＳｍＧＧＰＰＳ３ 基因的两端未知序
列ꎮ 以 ＣＴＡＢ法提取丹参基因组 ＤＮＡ[１２]ꎬ 并构建
ＢＤ Ｇｅｎｏｍｅ ＷａｌｋｅｒＴＭ文库[１３]ꎮ
每一次染色体步移包含两个独立的 ＰＣＲ 扩
增ꎬ 每一个扩增由两步 ＰＣＲ 反应组成ꎮ 具体流
程包括: Ｐｒｉｍａｒｙ ＰＣＲ 反应以接头引物 ＡＰ１ 和特
异引物 ＧＳＰ１ 为引物ꎬ 文库 ＤＮＡ 为模板ꎬ 反应
程序为: 扩增 ７ 个循环(９４℃变性 ２５ ｓꎬ ７０℃延
伸 ３ ｍｉｎ)ꎬ 而后再扩增 ３２ 个循环 ( ９４℃变性
２５ ｓꎬ ６７℃延伸 ３ ｍｉｎ)ꎻ 第二轮 ＰＣＲ 反应以 １０
倍稀释的 Ｐｒｉｍａｒｙ ＰＣＲ 反应产物为模板ꎬ 以接头
引物 ＡＰ２ 和特异引物 ＧＳＰ２ 为引物进行扩增ꎬ 扩
增程序为: 扩增 ５ 个循环(９４℃变性 ２５ ｓꎬ ７０℃
延伸 ３ ｍｉｎ)ꎬ 而后再扩增 ２０ 个循环(９４℃变性
２５ ｓꎬ ６７℃延伸 ３ ｍｉｎ)ꎮ 第二轮 ＰＣＲ 产物经过
纯化ꎬ 连接到 ｐＭＤ１９ ￣Ｔ 载体ꎬ 转入 ＤＨ５α 菌克
隆后ꎬ 送上海生工生物工程技术服务有限公司进
行测序ꎮ
１５　 第 １期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 化文平等: 丹参 ＳｍＧＧＰＰＳ３基因的克隆及表达分析
表 １　 ＳｍＧＧＰＰＳ３基因 ５′和 ３′序列克隆所用引物
Ｔａｂｌｅ １　 Ｐｒｉｍｅｒｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ｔｈｅ ５′ ａｎｄ ３′ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ＳｍＧＧＰＰＳ３ ｇｅｎｅ
引物　 Ｐｒｉｍｅｒ 引物序列　 Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
接头引物
Ａｄａｐｔｏｒ ｐｒｉｍｅｒ
ＡＰ１
ＡＰ２
５′￣ＧＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧＣ￣３′
５′￣ＡＣＴＡＴＡＧＧＧＣＡＣＧＡＧＴＧＧＴ￣３′
３′端引物
Ｆｏｒ ３′ ｅｎｄ
ＧＳＰ１
ＧＳＰ２
５′￣ＡＣＧＡＡＡＣＴＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＧＡＴ￣３′
５′￣ＴＧＴＡＴＧＧＡＧＴＣＧＡＧＡＡＡＧＣＧＡＴＧＧＡＧＧＴ￣３′
５′端第一轮引物
Ｆｉｒｓｔ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ＧＳＰ１
ＧＳＰ２
５′￣ＣＴＣＡＴＣＡＴＣＴＧＡＡＧＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＴＡＧＧ￣３′
５′￣ＣＴＣＣＡＣＡＧＡＣＡＧＣＡＧＡＧＣＡＣＴＧＧＣＣＣＡＴ￣３′
５′ 端第二轮引物
Ｓｅｃｏｎｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ＧＳＰ１
ＧＳＰ２
５′￣ＡＡＧＴＧＧＧＡＴＧＧＴＴＧＣＣＡＧＣＡＴＡＣＧＡＡ ￣３′
５′￣ＧＡＴＴＧＣＣＴＡＧＴＴＣＡＡＧＣＡＡＡＧＴＴＧＧＡＣＧＴ ￣３′
　 　 测序序列经 ＣＡＰ ３ 程序(ｈｔｔｐ: / / ｐｂｉｌ. ｕｎｉｖ￣
ｌｙｏｎ１. ｆｒ / ｃａｐ３. ｐｈｐ)拼接ꎬ 得到 ２９０８ ｂｐ 长的片
段ꎬ 包含 ８９１ ｂｐ的 ５′端序列和完整的 ＯＲＦꎮ 依据
该 ｇＤＮＡ序列ꎬ 我们设计以下引物扩增得到 ＳｍＧ￣
ＧＰＰＳ３ 基因的全长ꎬ 引物序列为: Ｇ３Ｓ￣Ｓ: ５′￣
ＧＴＧＧＡＴＣＣＴＡＴＧＴＴＴＧＣＴＧＣＣＧＡＡＧＧＴＣＡＣ￣３′
(下划线为 Ｂａｍ ＨⅠ酶切位点)和 Ｇ３Ｓ￣Ｒ: ５′￣
ＡＡＡＴＡＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＡＣＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＣＣＡＡＴ￣
３′(下划线为 Ｎｏｔ Ⅰ酶切位点)ꎮ
１􀆰 ２􀆰 ２　 序列分析
利用 ＤＮＡＳｔａｒ 软件及 ＰｒｏｔＰａｒａｍ 等在线工具
进行核酸及氨基酸序列的理化性质分析、 开放阅读
框(Ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅꎬ ＯＲＦ)的查找和翻译ꎻ
核酸及氨基酸序列的同源性分析和多序列比对采用
Ｂｌａｓｔ ( ｈｔｔｐ: / / ｂｌａｓｔ. ｎｃｂｉ. ｎｌｍ. ｎｉｈ. ｇｏｖ / Ｂｌａｓｔ.
ｃｇｉ) 和 Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ ( ｈｔｔｐ: / / ｂｌａｓｔ. ｎｃｂｉ. ｎｌｍ. ｎｉｈ.
ｇｏｖ / Ｂｌａｓｔ. ｃｇｉ)在线工具完成ꎻ 蛋白质信号肽的预
测、 跨膜结构域和亚细胞定位等分析主要采用在线工
具 ＳｉｇｎａｌＰ ３􀆰 ０ ｓｅｒｖｅｒ(ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ. ｃｂｓ. ｄｔｕ. ｄｋ /
ｓｅｒｖｉｃｅｓ / ＳｉｇｎａｌＰ / )、 ＴＭＨＭＭ ( ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ. ｃｂｓ.
ｄｔｕ. ｄｋ / ｓｅｒｖｉｃｅｓ / ＴＭＨＭＭ￣２􀆰 ０/ )和 Ｐｓｏｒｔ ( ｈｔｔｐ: / /
ｗｗｗ. ｐｓｏｒｔ. ｏｒｇ / )完成ꎻ 蛋白质二级结构的预测
利用 ＳＯＰＭＡ在线工具完成ꎮ
１􀆰 ２􀆰 ３　 ＳｍＧＧＰＰＳ３编码蛋白ＧＧＰＰ合酶活性检测
将含 ＳｍＧＧＰＰＳ３基因的 Ｔ载体质粒经由 Ｂａｍ
ＨⅠ和 ＮｏｔⅠ双酶切后与 ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ⅱ ＳＫ(－)质
粒相连ꎮ 将连接产物转入 Ｅ. ｃｏｌｉ ＤＨ５αꎬ 随机挑
选所得阳性克隆ꎬ 于新鲜 ＬＢ 培养基(含 ５０ ｍｇ / Ｌ
的氨苄青霉素 Ａｍｐ)中培养ꎬ 经菌落 ＰＣＲ 检测挑
选阳性克隆并提取质粒 ＤＮＡꎮ 所获得的质粒标记
为 ｐＢＧＧＰＰＳꎮ 将 ｐＢＧＧＰＰＳ 质粒分别与 ｐＡＣ￣
ＣＲ２５ΔｃｒｔＥ质粒和 ｐＢＨ (含 ｈｕｍａｎ ＧＧＰＰＳ基因)
转化大肠杆菌 Ｅ. ｃｏｌｉ ＤＨ５αꎬ 在含有氨苄青霉素
(Ａｍｐꎬ ５０ ｍｇ / Ｌ)和氯霉素 (Ｃｈｌꎬ ２５ ｍｇ / Ｌ)的
ＬＢ平板上 ３７℃筛选培养 １６~１８ ｈꎮ 挑取单菌落在
含有以上两种抗生素的两种培养基上继代培养１２~
１４ ｈ后ꎬ 在含 Ｃｈｌ 抗生素 ＬＢ 固体培养基上划线ꎬ
２８℃恒温培养 ２~３ ｄ 后观察菌线颜色变化ꎮ 选用
含质粒 ｐＡＣＣＲ２５ΔｃｒｔＥ、 ｐＡＣＣＲ２５ΔｃｒｔＥ ＋ｐＢｌｕｅ￣
ｓｃｒｉｐｔ Ⅱ ＳＫ(空载)的菌株为阴性对照ꎻ 含 ｐＡＣ￣
ＣＲ２５ΔｃｒｔＥ ＋ ｐＢＨ 和 ｐＡＣＣＲ２５ΔｃｒｔＥ ＋ ｐＢＧ (含
ＳｍＧＧＰＰＳ１基因)的菌株为阳性对照ꎮ
１􀆰 ２􀆰 ４　 表达模式检测
用ＯＭＧＥＡ公司的ＲＮＡ提取试剂盒提取丹参各
样品的总 ＲＮＡꎬ 第一条链 ｃＤＮＡ合成严格按照反转
录试剂盒 ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ® ＲＴ ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ(ＴａＫａＲａ)说
明书合成ꎮ 合成的样品 ｃＤＮＡ稀释 ５０倍后为模板进
行实时荧光定量 ＰＣＲ反应ꎮ 以持家基因 β￣ａｃｔｉｎ 为
内参 ( β￣ａｃｔｉｎＦ: ５′￣ＡＧＧＡＡＣＣＡＣＣＧＡＴＣＣＡＧＡ￣
ＣＡ￣３′ 和 β￣ａｃｔｉｎＲ: ５′￣ＧＧＴＧＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＣＴ￣
ＧＴＴ￣３′)ꎬ 检测 ＳｍＧＧＰＰＳ３ 基因的表达量ꎮ 采用
Ｐｒｉｍｅｒ Ｐｒｅｍｉｅｒ ５􀆰 ０ 设计荧光定量 ＰＣＲ 扩增引物
(Ｆ: ５′￣ＧＧＣＣＡＧＴＧＣＴＣＴＧＣＴＧＴＣＴＧＴＧ￣３′和 Ｒ: ５′￣
ＴＣＧＧＣＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＧＣＴＴ￣３′)ꎮ ＰＣＲ 反应程序
为: ９５℃ ３ ｍｉｎꎻ ９５℃ １０ ｓꎬ ６０℃ ３０ ｓꎬ ４０ 个循
环ꎮ 每个样品 ３ 个重复ꎮ 数据分析采用比较
“２－ΔΔＣｔ”的方法[１４]ꎮ 采用 ＳＰＳＳ １３􀆰 ０ 中 ｏｎｅ￣ｗａｙ
ＡＮＯＶＡ方法进行单因素方差分析ꎬ 利用 Ｔｕｋｅｙ
ｔｅｓｔ分析各样品间基因表达差异的显著性ꎬ 并以不
同字母符号标识样品间显著性差异(ｐ<０􀆰 ０５)ꎮ
２５ 植 物 科 学 学 报 第 ３２卷　
２　 结果
２􀆰 １　 ＳｍＧＧＰＰＳ３基因的克隆及分析
对我们获得的丹参高通量转录组数据进行分析
发现ꎬ 除 ＳｍＧＧＰＰＳ１ 和 ＳｍＧＧＰＰＳ２ 外ꎬ ｕｎｉ￣
ｇｅｎｅ５３００５(４８８ ｂｐ)与蓖麻(Ｒｉｃｉｎｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓꎬ
ＥＥＦ３２５８４)、 橡胶(Ｈｅｖｅａ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓꎬ ＢＡＦ９８３０３)
等植物 ＧＧＰＰＳ 序列具有较高的一致性(>７０％)ꎮ
利用 ＢＤ ｗａｌｋｉｎｇ 和 ＲＴ￣ＰＣＲ 的方法ꎬ 我们分别从
丹参 ｇＤＮＡ和 ｃＤＮＡ水平获得了丹参 ＳｍＧＧＰＰＳ３
基因全长序列ꎬ ｇＤＮＡ 长 ２９０８ ｂｐꎬ 包含一个
９３１ ｂｐ的内含子和 ８９１ ｂｐ的 ５′端序列ꎻ 克隆得到
ｃＤＮＡ序列全长 １０５１ ｂｐꎬ 包含 ９６０ ｂｐ 的 ＯＲＦꎬ
编码 ３１９ 个氨基酸ꎬ 编码蛋白理论分子量为
３４􀆰 ９３ ｋＤꎬ 等电点 ｐＩ ５􀆰 ３９ꎮ 采用 Ｂｌａｓｔｐ 程序分
析 ＳｍＧＧＰＰＳ３ 基因编码氨基酸ꎬ 发现其与蓖麻
(ＥＥＦ３２５８４)、 橡胶 (ＢＡＦ９８３０３)、 拟南芥 ＡｔＧ￣
ＧＰＳ３(Ａ. ｔｈａｌｉａｎａꎬ ＡＡＡ８１８７９􀆰１)等植物 ＧＧＰＰＳ
同源氨基酸序列的一致性分别为 ７８％、 ７６％、
６７％ꎬ 而与丹参 ＳｍＧＧＰＰＳ１ 和 ＳｍＧＧＰＰＳ２ 的一
致性仅为 ４２％和 ４０％ꎮ
将 ＳｍＧＧＰＰＳ３ 推导的氨基酸序列与 ＳｍＧＧ￣
ＰＰＳ１ 和 ＳｍＧＧＰＰＳ２ 序列进行多序列比对分析
发现(见图１) ꎬ推导的ＳｍＧＧＰＰＳ３氨基酸序列同
所有比对序列中的一致、 保守、 半保守的氨基酸位点分别用星号(∗)、 冒号(:)和点( .)标识ꎬ 两个富含 Ａｓｐ
的功能域用粗线标识ꎮ
Ｉｄｅｎｔｉｃａｌꎬ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ａｎｄ ｓｅｍｉ￣ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ ａｌｌ ａｌｉｇｎｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｒｅ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｂｙ ａｓｔｅｒｉｓｋｓ(∗)ꎬ
ｃｏｌｏｎｓ(:)ꎬ ａｎｄ ｄｏｔｓ( .)ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｔｈｅ ｔｗｏ Ａｓｐ￣ｒｉｃｈ ｄｏｍａｉｎｓ ａｒｅ ｍａｒｋｅｄ ｂｙ ｂｏｌｄ ｌｉｎｅｓ(━) .
图 １　 丹参 ＳｍＧＧＰＰＳ推导氨基酸多序列比对结果
Ｆｉｇ􀆰 １　 Ｍｕｌｔｉ￣ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＳｍＧＧＰＰＳ ｄｅｄｕｃｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
３５　 第 １期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 化文平等: 丹参 ＳｍＧＧＰＰＳ３基因的克隆及表达分析
ＳｍＧＧＰＰＳ１和 ＳｍＧＧＰＰＳ２一样ꎬ 都含有 ＧＧＰＰＳ
蛋白富含天冬氨酸 (Ａｓｐꎬ Ｄ)的两个特征结构:
(１) [ＬＩＶＭ] (２)￣ｘ￣Ｄ￣Ｄ￣ｘ(２ꎬ４)￣Ｄ￣ｘ(４)￣Ｒ￣Ｒ￣[ＧＨ]
对应序列: ＬＩＨＤＤＬＰＣＭＤＤ ＤＰＳＲＲＧꎻ (２) [ＬＩＶＭ￣
ＦＹ]￣Ｇ￣ｘ(２)￣[ＦＹＬ]￣Ｑ￣[ＬＩＶＭ]￣ｘ￣Ｄ￣Ｄ￣[ＬＩＶＭＦＹ]￣ｘ￣
[ＤＮＧ]对应序列: ＶＧＩＬＹＥＶＶＤＤＩＲ(Ｘ 代表任意氨
基酸)ꎮ
ＴａｒｇｅｔＰ １􀆰 １ Ｓｅｒｖｅｒ[１５]和 ＳｉｇｎａｌＰ ３􀆰 ０ Ｓｅｒｖｅｒ[１６]
等软件分析结果显示ꎬ ＳｍＧＧＰＰＳ３ 为非分泌性蛋
白(Ｎｏｎ￣ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ)ꎻ ＭｉｔｏＰｒｏｔ Ⅱ服务器[１７]
分析结果显示该蛋白定位于线粒体中(ｍｉｔｏｃｈｏｎ￣
ｄｒｉａ可信度: ０􀆰 ９２５)ꎮ
采用 ＳＯＰＭＡ 在线程序[１８]对 ＳｍＧＧＰＰＳ３ 的
预测结果显示ꎬ ＳｍＧＧＰＰＳ３ 的二级结构包含: α
螺旋(６０􀆰 １９％)、 不规则卷曲(２８􀆰 ８４％)、 β 转角
(５􀆰 ６４％)和 β片层(５􀆰 ３％)ꎮ 可见 ＳｍＧＧＰＰＳ３ 蛋
白主要是由螺旋和不规则卷曲组成ꎮ
２􀆰 ２　 ＧＧＰＰ合酶活性检测
类胡萝卜素是生物体内一类重要的二萜类物
质ꎮ 将噬夏孢欧文氏菌(Ｅｒｗｉｎｉａ ｕｒｅｄｏｖｏｒａ)中类
胡萝卜素合成相关的基因簇(ｃｒｔ ｇｅｎｅ)[ｃｒｔＢ(ｐｈｙ￣
ｔｏｅｎｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ)、 ｃｒｔＥ (ＧＧＰＰ ｓｙｎｔｈａｓｅ )、 ｃｒｔＩ
(ｐｈｙｔｏｅｎｅ ｄｅｓａｔｕｒａｓｅ)、 ｃｒｔＸ ( ｚｅａｘａｎｔｈｉｎ β￣ｇｌｕ￣
ｃｏｓｉｄａｓｅ)、 ｃｒｔＹ ( ｌｙｃｏｐｅｎｅ ｃｙｃｌａｓｅ) 和 ｃｒｔＺ ( β￣
ｃａｒｏｔｅｎｅ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ)]构建于同一载体ꎬ 在大肠
杆菌宿主中可产生桔黄色类胡萝卜素[１９]ꎮ ｐＡＣ￣
ＣＡＲ２５ΔｃｒｔＥ 质粒包含除 ｃｒｔＥ 以外的 ５ 个 ｃｒｔ 基
因ꎬ 可用于检测未知基因是否具有 ＧＧＰＰ 合酶活
性[２０]ꎮ 采用遗传互补的方法ꎬ 用 ＳｍＧＧＰＰＳ３ 基
因在大肠杆菌中进行表达ꎬ 在 ｐＡＣＣＲ２５ΔｃｒｔＥ 质
粒存在情况下ꎬ 生长 ２ ｄ后的大肠杆菌呈现桔黄色
(图 ２)ꎮ 说明 ＳｍＧＧＰＰＳ３与 ｃｒｔＥ基因具有类似的
功能ꎬ 可以互补 ｐＡＣＣＲ２５ΔｃｒｔＥ 质粒中缺失的
ｃｒｔＥ基因ꎬ 在大肠杆菌中产生类胡萝卜素ꎮ 证明
ＳｍＧＧＰＰＳ３为具有 ＧＧＰＰ合酶功能的活性基因ꎮ
２􀆰 ３　 ＳｍＧＧＰＰＳ３ 在丹参不同发育时期、 不同器
官中的表达
ｑＰＣＲ检测在丹参不同发育时期ꎬ 不同器官中
ＳｍＧＧＰＰＳ３ 都有不同程度表达ꎮ 实验结果显示
ＳｍＧＧＰＰＳ３在丹参萌芽期表达较低ꎬ 在幼苗期和
Ａ: ｐＡＣＣＲ２５ΔｃｒｔＥꎻ Ｂ: ｐＡＣＣＲ２５ΔｃｒｔＥ ＋ ｐＢＨꎻ Ｃ: ｐＡＣ￣
ＣＲ２５ΔｃｒｔＥ ＋ ｐＢＧＧＰＰＳ１ꎻ Ｄ: ｐＡＣＣＲ２５ΔｃｒｔＥ ＋ ｐＢＧＧ￣
ＰＰＳ３ꎻ Ｅ: ｐＡＣＣＲ２５ΔｃｒｔＥ ＋ ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ⅱ ＳＫ(－) .
ｐＢＨ ｃｏｎｔａｉｎｓ ｈｕｍａｎ ＧＧＰＰＳꎻ ｐＢＧＧＰＰＳ１ ｃｏｎｔａｉｎｓ ＳｍＧＧ￣
ＰＰＳ１.
图 ２　 ＳｍＧＧＰＰＳ３功能互补实验结果
Ｆｉｇ􀆰 ２　 Ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｏｆ ＳｍＧＧＰＰＳ３ ｉｎ Ｅ. ｃｏｌｉ
生长期的丹参植株中表达较高ꎻ 而在花期丹参中各
个器官中都有表达ꎬ 但在根中表达最高ꎬ 其次为
茎、 叶ꎬ 花中最低ꎬ 且低于其他各个时期的平均量
(图 ３)ꎮ 可见ꎬ ＳｍＧＧＰＰＳ３ 在丹参中呈组成型表
达ꎬ 但以根中为主ꎮ
２. ４　 ＳｍＧＧＰＰＳ３在ＭｅＪＡ和 ＸＣ诱导下的表达
已有研究证明红豆杉 Ｔａｘｕｓ ｂａｃｃａｔａ、 番茄
Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ和冷杉 Ｐｉｃｅａ ａｂｉｅｓ 等多个
物种中的 ＧＧＰＰＳ基因均可被 ＭｅＪＡ 和其衍生物诱
导表达[２１ꎬ２２]ꎮ 本研究采用 ５ ｍｍｏｌ / Ｌ ＭｅＪＡ溶液处
理丹参 ４８ ｈ后ꎬ ＳｍＧＧＰＰＳ３表达量达到检测时间
段的最大值ꎬ 与对照(０ ｈ)相比表达变化显著ꎬ 约
为对照的 ２倍(图 ４: Ａ)ꎬ 在我们前期研究中也曾
发现 ＭｅＪＡ对 ＳｍＧＧＰＰＳ１同样具有诱导效应ꎮ 此
外ꎬ 用黑腐病病原菌(ＸＣ)处理 ４８ ｈ 后ꎬ ＳｍＧＧ￣
ＰＰＳ３表达量约达到对照的 ３ 倍ꎬ 显著高于对照
(０ ｈ)(图 ４: Ｂ)ꎮ 可见ꎬ ＳｍＧＧＰＰＳ３ 同 ＳｍＧＧ￣
ＰＰＳ１一样ꎬ 也有可能参与丹参对逆境胁迫的响
应ꎮ
３　 讨论
ＧＧＰＰ在相应的二萜类产物合成中起着重要的
调控作用ꎬ如红豆杉悬浮细胞中ＴｍＧＧＰＰＳ活性
４５ 植 物 科 学 学 报 第 ３２卷　
相同字母表示组间差异不显著(ｐ>０􀆰 ０５)ꎬ 不同字母表
示组间差异显著ꎮ
Ｍｅａｎ ｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｌｅｔｔｅｒ ｄｏ ｎｏｔ ｄｉｆｆｅｒ ｓｉｇ￣
ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ(ｐ>０􀆰 ０５)ꎬ Ｍｅａｎｓ ｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒ￣
ｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｓｈｏｗ ｄｉｆｆｅｒ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ .
图 ３　 ＳｍＧＧＰＰＳ３在丹参不同发育时期和
不同器官中的表达
Ｆｉｇ􀆰 ３　 Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ＳｍＧＧＰＰＳ３ ｉｎ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｓｔａｇｅｓ ａｎｄ ｏｒｇａｎｓ
图 ４　 ＳｍＧＧＰＰＳ３在 ＭｅＪＡ(Ａ)和 ＸＣ(Ｂ)诱导下的表达
Ｆｉｇ􀆰 ４　 Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ ＳｍＧＧＰＰＳ３ ｕｎｄｅｒ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｂｙ ＭｅＪＡ(Ａ) ｏｒ ＸＣ(Ｂ)
的增加ꎬ 可提高紫杉醇产量[２３]ꎮ 我们在丹参中过
表达 ＳｍＧＧＰＰＳ１同样使得丹参酮ⅡＡ 的含量提高
了一倍(数据尚未发表)ꎮ 然而ꎬ 萜类的合成往往
在不同的细胞器中完成ꎬ 如类胡萝卜素、 赤霉素、
ＡＢＡ、 叶绿素等二萜类物质的合成是在质体中ꎻ 蛋
白质的香叶酰香叶酰化和聚戊烯醇的合成则在细胞
质中ꎻ 多萜醇的合成则在线粒体中[２４]ꎮ 同时ꎬ 由
于萜类物质种类多ꎬ 在植物组织中分布不同ꎬ 且在
抗虫害、 病害等方面具有重要作用ꎬ 在进化压力选
择下造成不同的萜类合酶家族成员在不同的细胞器
中合成不同的萜类产物[２５]ꎮ 如ꎬ ＡｔＧＧＰＳ３主要定
位于拟南芥根部ꎬ 可能参与赤霉素等二萜类物质的
合成ꎻ ＡｔＧＧＰＳ４ 与 ＡｔＧＧＰＳ２ 蛋白主要定位于根
微管组织和雌蕊中ꎬ 可能主要参与蛋白质的香叶酰
香叶酰化ꎬ 而不是参与萜类的合成ꎻ ＡｔＧＧＰＳ６ 的
启动子活性很弱ꎬ 在各组织中几乎检测不到ꎬ 可能
仅在特定的胁迫环境下表达ꎻ ＡｔＧＧＰＳ１ 在多个器
官中都有表达ꎬ 是拟南芥中二萜类物质合成的主要
酶[２６]ꎮ
前期的研究ꎬ 已从丹参中克隆得到 ２ 条 ＧＧ￣
ＰＰＳ基因[８－１０]ꎮ 其中 ＳｍＧＧＰＰＳ１存在于质体类细
胞器中ꎬ 主要在丹参叶中表达ꎻ 在丹参毛状根中过
表达 ＳｍＧＧＰＰＳ１ 后ꎬ 丹参酮类的含量降低[８－１０]ꎮ
本研究在丹参正常植株中过表达 ＳｍＧＧＰＰＳ１ 后同
样发现ꎬ 在丹参酮含量增加的同时叶绿素含量大量
增加ꎬ 推测 ＳｍＧＧＰＰＳ１可能主要参与叶绿素等物
质的合成ꎮ ＳｍＧＧＰＳ２主要在成熟植株的根和花中
表达ꎬ 推测其主要参与花中花青素的合成[８]ꎮ 本
研究克隆得到的 ＧＧＰＰＳ３ 基因编码蛋白与蓖麻、
橡胶、 拟南芥等植物 ＧＧＰＰＳ的一致性远高于其与
ＳｍＧＧＰＰＳ１或 ＳｍＧＧＰＰＳ２ 的一致性ꎬ 预示着其
可能发挥不同的功能ꎮ ＧＧＰＰＳ３ 基因编码蛋白与
ＳｍＧＧＰＰＳ１和 ＳｍＧＧＰＰＳ２ 一样ꎬ 都含有转异戊
烯基转移酶家族的两个特征结构域ꎮ 第二个结构域
中最后的一位氨基酸(精氨酸(Ｒ))与特征结构域
中的[ＤＮＧ]虽有所变化ꎬ 但酶活性检测显示该编
码蛋白仍具有 ＧＧＰＰ 合酶的活性ꎬ 表明该位点氨
基酸残基在该结构域中未起决定作用ꎮ 但与 ＳｍＧ￣
ＧＰＰＳ１和 ＳｍＧＧＰＰＳ２ 的表达相比ꎬ ＳｍＧＧＰＰＳ３
在各个组织中普遍表达ꎬ 组织器官的特异性表达没
有前两条基因的强ꎮ 表达分布类似于拟南芥中的
ＡｔＧＧＰＳ１蛋白[２６]ꎬ 推测其可能是丹参中二萜类物
５５　 第 １期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 化文平等: 丹参 ＳｍＧＧＰＰＳ３基因的克隆及表达分析
质合成的主要合酶ꎮ 另外ꎬ ＳｍＧＧＰＰＳ３ 在根部的
表达最高ꎬ 这与丹参中丹参酮类物质主要在丹参根
部分布的特点类似ꎬ 预示其很可能在丹参酮的合成
中起着关键的作用ꎮ
参考文献:
[ １ ] 　 Ｋｏｊｉｍａ Ｎꎬ Ｓｉｔｔｈｉｔｈａｗｏｒｎ Ｗꎬ Ｖｉｒｏｏｎｃｈａｔａｐａｎ Ｅꎬ
Ｓｕｈ ＤＹꎬ Ｉｗａｎａｍｉ Ｎꎬ Ｈａｙａｓｈｉ Ｔꎬ Ｓａｎｋａｗ Ｕ.
Ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌ ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅｓ ｆｒｏｍ Ｓｃｏｐ￣
ａｒｉａ ｄｕｌｃｉｓ ａｎｄ Ｃｒｏｔｏｎ ｓｕｂｌｙｒａｔｕｓ. ｃＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇꎬ
ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎꎬ ａｎｄ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｔｏ ａ ｆａｒｎｅ￣
ｓｙｌ ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ [ Ｊ] . Ｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍ Ｂｕｌｌ
(Ｔｏｋｙｏ)ꎬ ２０００ꎬ ４８(７): １１０１－１１０３.
[ ２ ] 　 Ｌａｓｋａｒｉｓ Ｇꎬ Ｄｅ Ｊｏｎｇ ＣＦꎬ Ｊａｚｉｒｉ Ｍꎬ Ｖａｎ Ｄｅｒ Ｈｅｉｊ￣
ｄｅｎ Ｒꎬ Ｔｈｅｏｄｏｒｉｄｉｓ Ｇꎬ Ｖｅｒｐｏｏｒｔｅ Ｒ. Ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒ￣
ａｎｙｌ ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｔａｘａｎｅ ｐｒｏ￣
ｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｔａｘｕｓ ｂａｃｃａｔａ ｃｅｌｌｓ[ Ｊ] . Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓ￣
ｔｒｙꎬ １９９９ꎬ ５０(６): ９３９－９４６.
[ ３ ] 　 Ａｈａｒｏｎｉ Ａꎬ Ｇｉｒｉ ＡＰꎬ Ｄｅｕｅｒｌｅｉｎ Ｓꎬ Ｇｒｉｅｐｉｎｋ Ｆꎬ ｄｅ
Ｋｏｇｅｌ ＷＪꎬ Ｖｅｒｓｔａｐｐｅｎ ＦＷꎬ Ｖｅｒｈｏｅｖｅｎ ＨＡꎬ
Ｊｏｎｇｓｍａ ＭＡꎬ Ｓｃｈｗａｂ Ｗꎬ Ｂｏｕｗｍｅｅｓｔｅｒ ＨＪ.
Ｔｅｒｐｅｎｏｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｎ ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ ａｎｄ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ
Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｐｌａｎｔｓ[Ｊ] . Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ ２００３ꎬ １５
(１２): ２８６６－２８８４.
[ ４ ] 　 Ｌｉｎ ＴＨꎬ Ｈｓｉｅｈ ＣＬ. Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｓａｌ￣
ｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ (Ｄａｎｓｈｅｎ) ｏｎ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ
[Ｊ] . Ｃｈｉｎ Ｍｅｄꎬ ２０１０ꎬ ５: ２２.
[ ５ ] 　 Ｌｉ ＹＧꎬ Ｓｏｎｇ Ｌꎬ Ｌｉｕ Ｍꎬ Ｗａｎｇ ＺＴ. Ａｄｖａｎｃｅｍｅｎｔ
ｉｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓａｌｖｉａｅ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅ Ｒａｄｉｘ ｅｔ Ｒｈｉｚｏ￣
ｍａ ( Ｄａｎｓｈｅｎ ) [ Ｊ ] . Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ａꎬ ２００９ꎬ
１２１６(１１): １９４１－１９５３.
[ ６ ] 　 Ｗａｎｇ Ｘꎬ Ｃｈｅｕｎｇ ＣＭꎬ Ｌｅｅ ＷＹꎬ Ｏｒ ＰＭꎬ Ｙｅｕｎｇ
ＪＨ. Ｍａｊｏｒ ｔａｎｓｈｉｎｏｎｅｓ ｏｆ Ｄａｎｓｈｅｎ(Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒ￣
ｒｈｉｚａ) ｅｘｈｉｂｉｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｏｄｅｓ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｎ ｈｕ￣
ｍａｎ ＣＹＰ１Ａ２ꎬ ＣＹＰ２Ｃ９ꎬ ＣＹＰ２Ｅ１ ａｎｄ ＣＹＰ３Ａ４
ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ [ Ｊ] . Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅꎬ ２０１０ꎬ １７
(１１): ８６８－８７５.
[ ７ ] 　 Ｙａｎｇ Ｗꎬ Ｊｕ ＪＨꎬ Ｊｅｏｎ ＭＪꎬ Ｈａｎ Ｘꎬ Ｓｈｉｎ Ｉ. Ｄａｎ￣
ｓｈｅｎ(Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ) ｅｘｔｒａｃｔ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｖｉａ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｋｔ
ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｐ２７ ｌｅｖｅｌ[ Ｊ] . Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ Ｒｅｓꎬ ２０１０ꎬ
２４(２): １９８－２０４.
[ ８ ] 　 张蕾. 丹参牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶基因的克
隆与功能研究[Ｄ] . 北京: 中国人民解放军军事医
学科学院ꎬ ２００９.
[ ９ ] 　 Ｋａｉ Ｇꎬ Ｌｉａｏ Ｐꎬ Ｚｈａｎｇ Ｔꎬ Ｚｈｏｕ Ｗꎬ Ｗａｎｇ Ｊꎬ Ｘｕ
Ｈꎬ Ｌｉｕ ＹＹꎬ Ｚｈａｎｇ Ｌｉｎ. Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎꎬ ｅｘｐｒｅｓ￣
ｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇꎬ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ
ｇｅｎｅ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌ ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｙｎ￣
ｔｈａｓｅ ｆｒｏｍ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ[ Ｊ] . Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏ￣
ｐｒｏｃ Ｅꎬ ２０１０ꎬ １５(２): ２３６－２４５.
[１０] 　 Ｈｕａ ＷＰꎬ Ｓｏｎｇ Ｊꎬ Ｌｉ ＣＱꎬ Ｗａｎｇ ＺＺ. Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｏｆ
ＳｍＧＧＰＰｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｉｎ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔ￣
ｉｏｒｒｈｉｚａ[Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｒｅｐｏｒｔｓꎬ ２０１２ꎬ ３９
(５): ５７７５－５７８３.
[１１] 　 Ｈｕａ ＷＰꎬ Ｚｈａｎｇ Ｙꎬ Ｓｏｎｇ Ｊꎬ Ｚｈａｏ ＬＪꎬ Ｗａｎｇ ＺＺ.
Ｄｅ ｎｏｖｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｉｎ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉ￣
ｏｒｒｈｉｚａ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｇｅｎｅｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅ￣
ｓｉｓ ｏｆ ａｃｔｉｖｅ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ [ Ｊ] . Ｇｅｎｏｍｉｃｓꎬ ２０１１ꎬ
９８(４): ２７２－２７９.
[１２] 　 Ｓｔｅｗａｒｔ ＣＮꎬ Ｖｉａ ＬＥ. Ａ ｒａｐｉｄ ＣＴＡＢ ＤＮＡ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ
ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｕｓｅｆｕｌ ｆｏｒ ＲＡＰＤ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ
ＰＣＲ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ [ Ｊ] . Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓꎬ １９９３ꎬ １４
(５): ７４８－７５０.
[１３] 　 Ｓｏｎｇ Ｊꎬ Ｗａｎｇ ＺＺ. Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇꎬ ｅｘｐｒｅｓ￣
ｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ ａｍ￣
ｍｏｎｉａ￣ｌｙａｓｅ ｇｅｎｅ(ＳｍＰＡＬ１) ｆｒｏｍ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉ￣
ｚａ [ Ｊ ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｒｅｐｏｒｔｓꎬ ２００９ꎬ ３６
(５): ９３９－９５２.
[１４] 　 Ｖａｎｄｅｓｏｍｐｅｌｅ Ｊꎬ Ｄｅ Ｐｒｅｔｅｒ Ｋꎬ Ｐａｔｔｙｎ Ｆꎬ Ｐｏｐｐｅ
Ｂꎬ Ｖａｎ Ｒｏｙ Ｎꎬ Ｄｅ Ｐａｅｐｅ Ａꎬ Ｓｐｅｌｅｍａｎ Ｆ. Ａｃｃｕ￣
ｒａｔｅ ｎｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＲＴ￣ＰＣＲ
ｄａｔａ ｂｙ ｇｅｏｍｅｔｒｉｃ ａｖｅｒａｇｉｎｇ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｉｎｔｅｒｎａｌ
ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｅｎｅｓ [ Ｊ ] . Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ２００２ꎬ ３
(７): ｒｅｓｅａｒｃｈ００３４.
[１５] 　 Ｅｍａｎｕｅｌｓｓｏｎ Ｏꎬ Ｂｒｕｎａｋ Ｓꎬ ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ Ｇꎬ Ｎｉｅｌ￣
ｓｅｎ Ｈ. Ｌｏｃａｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｕｓｉｎｇ ＴａｒｇｅｔＰꎬ
ＳｉｇｎａｌＰ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏｏｌｓ[ Ｊ] . Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃꎬ ２００７ꎬ
２(４): ９５３－９７１.
[１６] 　 Ｂｅｎｄｔｓｅｎ ＪＤꎬ Ｎｉｅｌｓｅｎ Ｈꎬ ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ Ｇꎬ Ｂｒｕｎａｋ
Ｓ. Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｇｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅｓ: ＳｉｇｎａｌＰ
３􀆰 ０[Ｊ] . Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌꎬ ２００４ꎬ ３４０(４): ７８３－７９５.
[１７] 　 Ｃｌａｒｏｓ ＭＧꎬ Ｖｉｎｃｅｎｓ Ｐ. Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ
ｐｒｅｄｉｃｔ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｌｙ ｉｍｐｏｒｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ
ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ [ Ｊ] . Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍꎬ １９９６ꎬ
２４１(３): ７７９－７８６.
[１８] 　 Ｇｅｏｕｒｊｏｎ Ｃꎬ Ｄｅｌｅａｇｅ Ｇ. ＳＯＰＭＡ: ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｉｍ￣
６５ 植 物 科 学 学 报 第 ３２卷　
ｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｐｒｅｄｉｃ￣
ｔｉｏｎ ｂｙ ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ａｌｉｇｎ￣
ｍｅｎｔｓ[ Ｊ] . Ｃｏｍｐｕｔ Ａｐｐｌ Ｂｉｏｓｃｉꎬ １９９５ꎬ １１ (６):
６８１－６８４.
[１９] 　 Ｍｉｓａｗａ Ｎꎬ Ｎａｋａｇａｗａ Ｍꎬ Ｋｏｂａｙａｓｈｉ Ｋꎬ Ｙａｍａｎｏ
Ｓꎬ Ｉｚａｗａ Ｙꎬ Ｎａｋａｍｕｒａ Ｋꎬ Ｈａｒａｓｈｉｍａ Ｋ. Ｅｌｕｃｉ￣
ｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｒｗｉｎｉａ ｕｒｅｄｏｖｏｒａ ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ ｂｉｏｓｙｎ￣
ｔｈｅｔｉｃ ｐａｔｈｗａｙ ｂｙ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｇｅｎｅ ｐｒｏｄ￣
ｕｃｔｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ [ Ｊ] . Ｊ Ｂａｃｔｅ￣
ｒｉｏｌꎬ １９９０ꎬ １７２(１２): ６７０４－６７１２.
[２０] 　 Ｋａｉｎｏｕ Ｔꎬ Ｋａｗａｍｕｒａ Ｋꎬ Ｔａｎａｋａ Ｋꎬ Ｍａｔｓｕｄａ Ｈꎬ
Ｋａｗａｍｕｋａｉ Ｍ. Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＧＧＰＳ１ ｇｅｎｅｓ
ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌ ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅｓ
ｆｒｏｍ ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ[Ｊ] . Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃ￣
ｔａꎬ １９９９ꎬ １４３７(３): ３３３－３４０.
[２１] 　 Ａｍｅｎｔ Ｋꎬ Ｖａｎ Ｓｃｈｉｅ ＣＣꎬ Ｂｏｕｗｍｅｅｓｔｅｒ ＨＪꎬ Ｈａ￣
ｒｉｎｇ ＭＡꎬ Ｓｃｈｕｕｒｉｎｋ ＲＣ. Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｌｅａｆ ｓｐｅｃｉ￣
ｆｉｃ ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌ ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ａｎｄ
ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｏｆ(ＥꎬＥ) ￣４ꎬ８ꎬ１２￣ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｔｒｉｄｅｃａ￣１ꎬ３ꎬ７ꎬ
１１￣ｔｅｔｒａｅｎｅ ｉｎ ｔｏｍａｔｏ ａｒｅ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎ ｂｏｔｈ ｊａｓ￣
ｍｏｎｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ
[Ｊ] . Ｐｌａｎｔａꎬ ２００６ꎬ ２２４(５): １１９７－１２０８.
[２２] 　 Ｓｃｈｍｉｄｔ Ａꎬ Ｇｅｒｓｈｅｎｚｏｎ Ｊ. Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｃｈａｒａｃ￣
ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｓｏｐｒｅｎｙｌ ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅｓ ｗｉｔｈ
ｆａｒｎｅｓｙｌ ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ ａｎｄ ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌ ｄｉｐｈｏｓ￣
ｐｈａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｆｒｏｍ Ｎｏｒｗａｙ ｓｐｒｕｃｅ(Ｐｉｃｅａ
ａｂｉｅｓ) ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｌｅｏｒｅｓｉｎ ｆｏｒ￣
ｍａｔｉｏｎ [ Ｊ ] . Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ ２００７ꎬ ６８ ( ２１ ):
２６４９－２６５９.
[２３] 　 Ｌａｓｋａｒｉｓ Ｇꎬ Ｂｏｕｎｋｈａｙ Ｍꎬ Ｔｈｅｏｄｏｒｉｄｉｓ Ｇꎬ ｅｔ ａｌ.
Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌ ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ
ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｔａｘａｎｅ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ Ｔａｘｕｓ ｂａｃｃａｔａ
ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅｓ ａｆｔｅｒ ｅｌｉｃｉｔａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｅｔｈｙｌ ｊａｓｍｏｎａｔｅ
[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ １９９９ꎬ １４７(１): １－８.
[２４] 　 Ｇｒａｙ ＪＣ. Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｉｓｏｐｒｅｎｏｉｄ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｉｎ
ｈｉｇｈｅｒ ｐｌａｎｔｓ[Ｍ] . Ｃａｌｌｏｗ ＪＡ ｅｄ. Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｂｏ￣
ｔａｎｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ: Ｖｏｌ. １４. Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ: Ａｃａｄｅ￣
ｍｉｃ Ｐｒｅｓｓꎬ １９８８: ２５－９１.
[２５] 　 Ｔｈｏｌｌ Ｄꎬ Ｌｅｅ Ｓ. Ｔｅｒｐｅｎｅ ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ
ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ[Ｊ]. Ｔｈｅ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ Ｂｏｏｋꎬ
２０１１ꎬ ９: ｅ０１４３.
[２６] 　 Ｏｋａｄａ Ｋꎬ Ｓａｉｔｏ Ｔꎬ Ｎａｋａｇａｗａ Ｔꎬ ｖａｎ ｄｅｒ Ｈｅｉｊｄｅｎ
Ｒꎬ Ｖｅｒｐｏｏｒｔｅ Ｒꎬ Ｊａｚｉｒｉ Ｍ. Ｆｉｖｅ ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌ
ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｏｒ￣
ｇａｎｓ ａｒｅ ｌｏｃａｌｉｚｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｒｅｅ ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｏｍｐａｒｔ￣
ｍｅｎｔｓ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ [ Ｊ ] . Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙꎬ
２０００ꎬ １２２: １０４５－１０５６.
(责任编辑: 张 平)
７５　 第 １期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 化文平等: 丹参 ＳｍＧＧＰＰＳ３基因的克隆及表达分析