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Analysis on the Constituents of the Absolute Oil of Lysimachia foenum-graceum Hance and Study on the Application of the Insecticidal Activity of Its Components

灵香草净油化学成分分析及杀虫活性组分的应用研究



全 文 :武汉植物学研究 2007,25(4):417~420
Journal of Wuhan Botanical Research
灵香草净油化学成分分析及杀虫活性组分的应用研究
袁 萍,袁 晓
(中国科学院武汉植物园,武汉 430074)
摘 要:对灵香草净油成分进行Gc.Ms—Ds分析,共分离得到104个色谱峰,鉴定出66个化学成分,其中6个化学
成分为首次报道,净油主要成分为脂肪酸。分别用灵香草原材料粉末及乙酸乙酯、95%乙醇等不同溶剂的提取液,
对跳蚤进行了味杀、触杀试验,试验结果表明:其活性组分在乙酸乙酯提取液中。把该提取液稀释到5%时,对动物
体表的跳蚤有较好的杀灭效果。
关键词:灵香草;净油;色质联用;乙酸乙酯提取液 ;跳蚤
中图分类号:Q949.96;Q946 文献标识码:A 文章编号:1000—470x(2007)04-0417—04
Analysis on the Constituents of the Absolute Oil of Lysimachia
foenum—graceum Hance and Study on the Application of
the Insecticidal Activity of Its Components
YUAN Ping,YUAN Xiao’
(Wuhan Botanical Garden,The Chinese Academy ofSciences,Wuhan 430074,China)
Abstract:The Chemical constituents of the absolute oil of Lysimachia foenum—graceum Hance were ana—
lysed by GC—MS—DS. Sixty—six chemical constituents were identified among 1 04 GC spectral peaks.Six
chemical constituents were reported first.Major constituents in the absolute oil are made up of aliphatic
acids.The tasting and touching toxic tests against fleas were carried on respectively with the extracted SO—
lutions of ethy acetate,95% ethanol from the raw powder of L.foenum—graecum Hance.The results
showed that the actitve components are focused in the ethyl acetate extracted solution and only 5% diluted
ethyl acetate extracted solution is able to kil fleas functionally in the touching tests.
Key words:Lysimachia厂0en m—graecum Hance;Absolute oil;GC—MS—DS;Ethyl acetate extracted solu—
tion;F1ea
灵香草(Lysimachia厂0en m—gracum Hance)别名
香草、薰草,属报春花科排草属,多年生草本,分布于
我国云南、广东、广西、四川、贵州等地的深山林下或
沟谷旁阴湿处。近年来广西等地大量引种栽培,栽
培面积不断扩大,其中以广西大瑶山生产的灵香草
最为正宗,香味独特持久,经济价值很高。在医药上
用于治疗感冒、头疼、咽喉肿痛、驱蛔虫等,在工业上
是高档香烟调香的重要原料。民间用灵香草的原草
经烘烤后悬挂在房前、衣柜中,用来驱蚊虫、杀虫防
蛀等 -3]。
灵香草天然资源丰富,经济价值高,民间广泛用
它杀虫。为了开发其更广泛的用途,我们对灵香草
净油作了化学成分分析,并分别用灵香草全草粉碎
后的粉末、用不同溶剂提取其粉末的提取液,对动物
身上常见的害虫跳蚤进行了系列杀灭试验。
1 材料和方法
1.1 材料
灵香草(Lysimachia厂0en m—gracum Hance)采集
于广西省大瑶山宁海山庄旁的山坡上,鲜草经瑶民
用微火烤干。溶剂为分析纯乙酸乙酯、乙醇、10%的
氯氰菊酯乳油。杀虫试验选用鲜活跳蚤及带跳蚤的
小猫。
1.2 灵香草净油成分鉴定
仪器为 6890A气相色谱仪(美 国 HP公司),
6890A气相色谱/HP5973MSD色质联用仪(美国HP
公司)。
气相色谱仪分析条件:SE-54石英柱,柱长30 in,
内径 0.25 mm,检测器FID,温度 50—290~(2,升温速
率4oC/min,分流比30:1。
收稿日期:2006—11—24,修回日期:2007.06.12。
作者简介:袁萍(1956一),女,高级实验师,主要从事药用植物学研究。
通讯作者(E·mail:yuanxiao@lOSe.whiob.ae.ca)。
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418 武 汉 植 物 学 研 究 第 25卷
气相色谱/质谱联用分析条件:SE-30弹性石英
毛细管柱,柱长 30 m,内径 0.25 mm,初始温度
5O℃,升温速率 6℃/min,终止温度 290℃。质谱条
件:电子能量 70eV,离子源温度 230℃,扫描范围
35~650 AMU,扫描时间1.30 s,分辨率 1000。
用 GC—MS—DS检测灵香草净油色谱峰,对总离
子流图中的各峰经质谱扫描后得到质谱图,经计算
机质谱数据库检索,按各色谱峰的质谱裂片图并结
合有关文献 鉴定灵香草净油的化学成分,按面
积归一法确定各组分的相对含量。
1.3 试验方法
在本实验室取灵香草干草,粉碎过40目筛后为
原粉。将一部分原粉用6O~9O℃石油醚回流2次,
得灵香草浸膏,得率为干草的8%0;再用 95%的乙醇
对浸膏热溶后置人低温 一2O℃脱蜡,过滤浓缩后得
率为干草的6%0,颜色呈棕色,具有很浓的烟香味,
此膏为净油。净油通过气相色谱找出最佳分离条件
后,用气相色谱/质谱分析其化学成分。分别用溶剂
乙酸乙酯、95%乙醇提取另一部分原粉,得不同溶剂
提取的干膏,再用75%的乙醇按 1:1比例稀释干膏,
稀释后的浓度为 1 mg/mL,即为乙酸乙酯溶解液和
95%乙醇溶解液。另以75%的乙醇和 10%的氯氰
菊酯乳油做对照,对同窝小猫身上捕捉的鲜活跳蚤
作味杀和触杀试验。以全身布满跳蚤的4只同样大
小的猫作应试体试验。
灵香草不同的提取液及原粉对跳蚤的昧杀试
验:称量灵香草原粉50 mg,用滤纸包好置人试管底
(试管大小:直径 ×高 =1.5 em×16 em),离管底
2 em处放置一直径为2.5 em的圆形滤纸片,纸片上
放2O只跳蚤,共放 3管,并编为 1号(1a、1b、1c)。
取乙酸乙酯溶解液0.2 mL吸附到棉花球上,将其置
人管底,然后离管底每隔 1 em放置 1片滤纸,共放
置2片,在最上层滤纸上放置 20只跳蚤并编为 2a
(2al、2a2、2a3);95%乙醇溶解液编为3号(3a、3b、
3c);以75%的乙醇和 10%的氯氰菊酯乳油做对照,
分别编为4号(4a、4b、4c)、5号(5a、5b、5c)。杀灭试
验方法同2a号。试验共设5个处理组,每组3个重复。
将跳蚤置人 乙酸乙酯溶解液 (0.2 mL)后30 rain
出现死亡的,再将溶解液的量逐步减少为 0.1 mL、
2O L,并按上述方法继续试验,编号为 2b(2bl、
2b2、2b3)、2c(2el、2e2、2c3)。观察不同的溶解液、
不同吸附量的溶解液杀灭跳蚤的情况,记录跳蚤的
死亡时间。
灵香草不同的溶解液及原粉对跳蚤的触杀试
验:实验编号不变,但方法改变。1号称量 50 mg灵
香草原粉置人试管底,将跳蚤放置在粉末上。2~5
号分别取各种溶解液 5O L直接注射到直径为
1.5 em的滤纸片上置人管底,将2O只跳蚤放置人有
溶解液的纸片上,每号仍是3个重复。对试验中杀
灭效果好的乙酸乙酯溶解液,再逐步将吸附量减少
为2O (2b)、1O L(2c),按上述方法继续试验。
观察记录不同的溶解液、不同吸附量的溶解液杀灭
跳蚤的死亡时间。
灵香草不同溶解液及原粉对附着动物体外的跳
蚤的触杀试验:筛选杀灭效果最好的灵香草乙酸乙
酯溶解液用 75%乙醇稀释到20%、10%、5%,应
试体为4只同样大小的家猫,每只猫身上都有 100
只以上的跳蚤。实验分三次进行,每次间隔 l0~
15 d(此时间用以小猫体外跳蚤的繁殖)。第一次
用20%的溶解液喷洒猫的腹部及大腿内侧;第二
次遮住猫的眼睛,用 10%溶解液喷洒猫全身;第
三次用5%的溶解液喷洒猫全身;并用75%的乙醇
作空白对照。
2 结果和分析
2.1 灵香草净油的分析
经过 GC—MS—DS共检测出 104个色谱峰,鉴定
出66个化学成分,其中丁香醛、亚油酸乙酯、角鲨
烯、二酞酸酯、植醇、咕吨酮等6种化学成分为首次报
道[6-10],净油主要成分为脂肪酸,其分析结果见表 1。
表 1 灵香草净油化学成分和含量
Table 1 The components and contents of absolute oil from Lysimachia foenum—graecum Hance
峰号
Peak c
o

m
△物
,ound F

or

um

la
?N ompou 峰号Peak c
o

m
△物
)ound F

or

um

la
0 .
乙 s 乙0untent N0

乙 p 乙0unt。m
1 苯酚(pheno1) C6H5OH 0.013 7 2一乙酰吡略(2一aeethylpyrrole) C6H7NO 0.158
(一 ... ) ‘ hy ‘⋯cyclopentanedione H8O2 o.o5o 9 邻·甲氰基苯酚(0一methoxypheno1) C7Hs02 0.023
4 苯甲醇(benzenemethano1) C7H8O 0.022 1O 芳樟醇(1inaloo1) CloHl8O 0.020
5 N一甲基_2一吡咯酮(n—methyl-2一pyrrolidinone)C5H9NO 0.019 12 异丙氰酸(isopropyl eyanate) C3 H7 NO 0.183
6 2-甲基一3一丁烯.2一醇(2一methyl-3一buten-2一o1)C5Hl00 0.150 13 苯乙醇(benzeneethal101) C8HloO 0.320
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第4期 袁 萍等:灵香草净油化学成分分析及杀虫活性组分的应用研究 419
续表 1
峰号
Peak c 。 F

or

um

la

N mpo ten
峰号
Peak c
O

Ff
合物
round。 F

or

urn

la N omp
0.
Lo un(】s L0un f
0.
L s L0un£em
14 2,4-二甲基苯酚(2,4-dimethylpheno1) CsHw0 0.162 61 2一萘甲醇(2-naphthalene—methona1) cIlHi0O 0.199
15 3,5一二甲基苯酚(3,5-dimethylpheno1) C8Hl0O 0.161 62 甲氧基丁香酚(methoxyleugeno1) C}lH“02 0.584
16 龙脑(borneo1) Cl0Hl8O 0.049 65 高香草酸(homovanilie acid) C9 H10 04 0
. 420
19 甲氧甲酚(ereoso1) C8Hl002 0.215 66 丁香醛(s州ngaldehyde) C9 Hl0 04 0.433 20
二甲基香豆灵(mesitene laelacne) C7 Hz 02 0.013
67;3

4.5一rimethy—aeetophenone) 02 l t 24
( ,3
0 ethylsuccinimide) C 9N 2 “.6362
-di
7O 补骨酯素(psoralen) c1l H6Os 0.364


(
基’l-5一methyl。oheno1) C9H120 0.1033
-eth 71 乙酰丁香酮(aeetosyringone) C10HI204 0.561
26 3一甲基苯酚(pseudocumeno1) C9Hl2O 0.065 73 芴酮(fluorenone) Cl3Hs0 0.745
27 4一乙基之一甲基苯酚(4一ethyl-2一methoxy) C9H120 0.17 74;3

4.-trimethoxy—anisole) l004 Iu 19
28 2,3-~-氢一1一茚酮(2,3-dihydro一1一indanone) CgHs0 0.049
75:(一(..,4,6 。-三羟 一.。甲 ) 卜卜 C ‘l4v40 0.101 2 trihydroxy-3 toluene1 butanone(
一孥基 2 hy )rox y 9 ‘l0 2⋯ 酮aetophenone cH。o o.o17
34 3一甲基一1一茚酮(3·methyl一1一indanone) C10Hi0O 0.146 77 菲(phenanthrene) CI4Hm 1.459
36 2,6--Ep氧基苯酚(2,6-dimethoxypheno1) C8Hl003 1.727 氢exahydrofame—sylaeetone) 60 l8 0l ’
37 丁香酚(eugeno1) Cl0H1202 0.187
。 ( ..一
. . 。
ihy )r,o l6 ‘l2i蒽n 。 thraquinone) c16H12 o.12l 38 一甲 oxy-4一propylpheno1) c mH14 2 .0272
- meth 82 咕吨酮(xanthenone) Cl3H8O2 2
. 37
43 3,4,5一三甲氧基甲苯(3,4,5-trimeth) Cl0Hl4O3 0.146 83 1一甲苯菲(1一toluene—phenanthrene) cl5Hl2 0
. 268
4_4 香兰素(vaniln) C8H8Os 0.483 84 周萘酮(perinaphthenone) Cl3 H8 O 0

764
89 2一苯萘(2-benzene—naphthalene) c6Hl2 0.177 45

methvlterephthaldehvde) 0.u9 38 2 ’
90 9,10崽 醌(9,10一anthraquinone) Cl4Hs02 0。055
47 (3
.ae .et 一


- )差 8⋯4h y ’。 py一二ran氢-24喃-dione cH9o 1.83o 91十六酸乙酯(ethyl palmitate) Cl8H3~02 1.6O4
48 异丁香酚(isoeugeno1) cl0 H12 O2 0.340 92 亚油酸甲酯(1inoleie acid methyl ester) Cl9H3402 0.230
49 亚联苯(biphenylene) Cl2 H8 0.0 13 9 (
. .
15 octadeca 2 ‘Ⅺ ⋯ ~methyl ester) c。9 H32o2 0.233
5O 乙酰香兰酮 (aeetovanillone) C9 Hl0 0.576 94 荧蒽(PAH) cl6Hl0 0.308
4
m

一 th

oxy 9 ‘10h
氧o ⋯ b—
e

nze

a

te m

e

thy

l
4
e

s t
y
e r
xy一。一c9Hl。 o.129 95 植醇植醇(ph~o1) C20H400 4.702
96 芘(pyrene) Cl6Hl0 0.131
54 (

一二
一基4一甲墨 u 乙酮 h cH O4 1.5902 6-dihydroxy4 methoxyactophenone 9tl0 98亚油酸乙酯(1inoleie acid ethyl ester) C20Hs602 3.08
56 氧芴(dibenzonfuran) cI2H8O 0.518 99 亚油酸(1inoleie acid) Cl8H32O2 58.77
57 丙酮愈创木(guaiaeylaeetone) C10Hl2O3 0.346 100 角鲨烯(squalene) C30Hso 1.21
103 二酞酸酯(PAES) c24H38O4 0.021
58 二氢猕猴桃内酯(dihydroactinidiolide) cI】Hl6O2 0.342 104 胆甾烯(eholesteno1) c27H“ 0.677
表 2 灵香草原粉及不同溶解度对跳蚤的昧杀效果
含药拿 死亡时间 Death time(min) 十 草 管 死亡时间 Death time(min)
· 1i U I|Ⅲ
sample ney/Tube 5 10 2O 3O 60 150 360 sample ney/Tube 5 lO 20 3O 60 150 360
1a 50 mg —- .- —. .. —. —. —. 2c3 2O uL 一 一 一 一 一 一 一
1b 50 mg —. —. —. —. —. —. —. 3a 0.2 mL 一 一 一 一 一 一 一
1e 50 mg —- —. —. —. —. —. —. 3b 0.2 mL 一 一 一 一 一 一 一
2a1 0.2 mL + + + + + + + 3e 0.2 mL 一 一 一 一 一 一 一
2a2 O.2 mL + + + + + + + 4a 0.2 mL 一 一 一 一 一 一 一
2a3 O.2 mL + + 4- 4- 4- + + 4b 0 2 mL .. —. —、 —. —. —. —
2b1 O.1 mL 一 一 一 十 + + + 4c 0 2 mL —. —. 一 —. —. —. .
2b2 0.1 mL 一 一 一 + + + + 5a 0
. 2 mL + + + + + + +
2b3 O.1 mL 一 一 十 + + + + 5b 0.2 mL + + + + + + +
2c1 2O uL 一 一 一 一 一 一 一 5c 0.2 mL + + + + + + +
2c2 2O L 一 一 一 一 一 一 一
注:1号样品(1 a,1b,1 c)为灵香草原粉;2号样品(2al,2a2,2a3,2bl,2b2,263,2el,2c2,2c3)为乙酸乙脂溶解液;3号样品(3a,3b,3c)
为95%乙醇溶解液;4号样品(4a,4b,4c)为75%乙醇;5号样品(5a,5b,5c)为 10%氯氰菊脂乳油。“+”表示跳蚤死亡,“一”表示跳
蚤未死亡。
Notes:No.1 of sample(1 a,lb,1c)一R0w powder;No.2 of sample(2al,2a2,2a3,2bl,2b2,2b3,2cl,2c2,2e3)-EtoAc extracted solution;
N0.3 of sample(3a,3b,3c)__95% EtoH extracted solution;No.4 of sample(4a,4b,4c)—75% EtoH;No.5 of sample(5a,5b,5c)一1O%
Cypermethfin oil.“+”,flea death;“一”,none death.
2.2 灵香草原粉及溶解液对跳蚤的昧杀效果
在味杀试验中,灵香草乙酸乙酯溶解液对跳蚤
的味杀效果好,当溶解液取0.1 mL时,跳蚤在30 rnin
后死亡;75%的乙醇对跳蚤无味杀效果;10%的氯氰
菊酯乳油对跳蚤有很好的味杀效果,当取样量为
0.2 mL时,跳蚤在5 min内即死亡;灵香草原粉对跳
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420 武 汉 植 物 学 研 究 第 25卷
蚤无味杀效果。结果详见表 2。
2.3 灵香草原粉及溶解液对跳蚤的触杀效果
灵香草乙酸乙酯溶解液对跳蚤的触杀试验比味
杀试验效果好,在味杀试验 中,当溶解液用量为
0.1 mL时,跳蚤在30 min后死亡;而在触杀试验中,
当溶解液用量为20 L时,跳蚤在 5 min后即死亡;
当溶解液取 10 L时,跳蚤接触到带有药液的滤纸
在 2.5 h后死亡。75%的乙醇对跳蚤无触杀效果,
10%的氯氰菊酯乳油对跳蚤有很好的触杀效果。灵
香草原粉对跳蚤无触杀效果 ,结果详见表3。
表 3 灵香草原粉及不同溶解液对跳蚤的触杀效果
Table 3 The touch kiling experiment on the flea with diferent extracted solutions of L foe.u,n—graecum Hance
样吊 薹 管 死亡时间 Death time(min) # 含 薹 管 死亡时间 Death time(min)
· u1 W I_ 。 l1U Ⅷ I 。
sample tency 5 10 20 30 60 150 360 sample tency 5 10 20 30 60 150 360
1a 50 mg .— .— —— .— —. .— —. 2c3 10 LLL 一 一 一 一 + + +
1b 50 mg .— —. —— —. .— —. .— 3a 5O LLL 一 一 一 ~ 一 一 +
1 e 50 mg .— .— —— —- .— .— .— 3b 5O LLL 一 一 一 一 一 一 +
2a1 5O LLL + + + + + + + 3c 5O LLL 一 一 一 一 一 一 +
2a2 5O LLL + + + + + + + 4a 5O LLL 一 一 一 一 一 一 一
2a3 5O LLL + + + + + + + 4b 5O LLL 一 一 一 一 一 一 一
2b1 2O LLL + + + + + + + 4c 5O LLL 一 一 一 一 一 一 一
2b2 2O LLL + + + + + + + 5a 5O LLL + + + + + + +
2b3 2O LLL + + + + + + + 5b 5O LLL + + + + + + +
2c1 10 LLL 一 一 一 一 一 + + 5c 5O LLL + + + + + + +
2c2 10 LLL 一 一 一 一 一 + +
注:表中注释同表 2。
Note:Annotations in Table 3 are the same as that in I le 2
2.4 灵香草乙酸乙酯溶解液对动物附着跳蚤的触
杀效果
灵香草干膏用 75% 乙醇稀释到 20%、10%、
5%,并用75%乙醇作空白对照,对全身布满跳蚤的
4只同样大小的猫进行喷洒,喷洒后的结果为:用
20%浓度的乙酸乙酯溶解液喷洒猫的腹部及腿部,
猫略感有刺激,全身出现颤抖,15 min后症状消失。
腿部及腹部的跳蚤立即死亡或跳到地面铺的白纸
上,没有喷洒药的部位如头部,仍然见跳蚤。清洗猫
身上的药液,让小猫回到布满跳蚤的窝里.10~15 d
后,小猫全身又布满跳蚤,用稀释到 10%的溶解液
对小猫全身喷洒,猫身上的跳蚤立即死亡或蹦到地
面铺的白纸上,1 h后观察,猫全身未发现跳蚤.未
见小猫有不 良反应。用 5%的溶解液重 复上述试
验,效果与 10%溶解液基本一致。用75%乙醇对跳
蚤全身喷洒后,部分跳蚤跳到地面铺的白纸上,猫身
上未见跳蚤死亡。
3 讨论
从试验结果可知,灵香草乙酸乙酯溶解液对跳
蚤的触杀试验比味杀试验效果好。味杀试验中,当
溶解液取0.1 mL时,跳蚤在30 min后死亡;而在触
杀试验中,当溶解液取 20 L时,跳蚤在 5 min后死
亡;当溶解液取 10 L时,跳蚤接触到带有药液的滤
纸2.5 h后死亡。灵香草原粉对跳蚤味杀和触杀均
无效果,这与当地民间流传灵香草干草能杀死多种
害虫不太相符。分析其原因,是否我们购买的灵香
草是当地瑶民用火烤后的灵香草原草,可能火过旺,
有的草烤成了焦黑状,破坏了其中的一些化学成分,
影响杀灭效果?因此,我们又采集新鲜灵香草,自然
风干后,重新提取,重复触杀试验,结果与上述试验
结果基本一致。试验证明:灵香草原粉杀灭跳蚤无
效,乙酸乙酯溶解液杀灭跳蚤效果较好。通过试验
确定了有效组分后,参照中华人民共和国标准 GB/
17322.9.1998,用载体吸附溶解液在强迫器中进行
杀灭试验,其结果与上述试验一致(结果待发表)。
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