全 文 ：植物科学学报　 ２０１５ꎬ ３３(６): ８０８~８１８
Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｊｏｕｒｎａｌ
　 　 ＤＯＩ:１０􀆰 １１９１３ / ＰＳＪ􀆰 ２０９５￣０８３７􀆰 ２０１５􀆰 ６０８０８
柑橘 ＭＹＢ１５基因的克隆与表达分析
郭文芳∗ꎬ 刘德春∗ꎬ 杨 莉ꎬ 庄 霞ꎬ 张涓涓ꎬ 王书胜ꎬ 刘 勇∗∗
(江西农业大学农学院园艺系ꎬ 南昌 ３３００４５)
摘　 要:采用电子克隆和 ＲＴ￣ＰＣＲ方法从柚(Ｃｉｔｒｕｓ ｍａｘｉｍａ (Ｂｕｒｍ.) Ｍｅｒｒ.)、 枳(Ｐｏｎｃｉｒｕｓ ｔｒｉｆｏｌｉａｔａ (Ｌ.) Ｒａｆ.)和
柠檬(Ｃｉｔｒｕｓ ｌｉｍｏｎ (Ｌ.) Ｂｕｒｍ. ｆ.)实生苗中克隆了 ３ 个 ＭＹＢ 蛋白基因ꎬ 分别命名为 ＣｍＭＹＢ１５、 ＰｔＭＹＢ１５ 和
ＣｌＭＹＢ１５ꎻ 并用实时定量 ｑＲＴ￣ＰＣＲ技术检测了该基因在脱落酸(ＡＢＡ)、 干旱、 低温和高盐胁迫处理下的时空表
达ꎮ 结果显示ꎬ ＣｍＭＹＢ１５、 ＰｔＭＹＢ１５ 和 ＣｌＭＹＢ１５ 的 ｃＤＮＡ 序列全长分别为 ９９４、 ９９２、 ９８８ ｂｐꎬ 分别编码
２６７、 ２６６、 ２６５个氨基酸ꎬ 且编码的氨基酸序列 Ｎ 端均含有 ２ 个串联的不完全重复的 ＭＹＢ ＤＮＡ￣ｂｉｎｄｉｎｇ 结构
域ꎬ 由此推测该 ３个基因均属于 Ｒ２Ｒ３亚类ꎻ ＭＹＢ１５基因均能被 ＡＢＡ、 干旱、 低温和高盐胁迫诱导表达ꎬ 且在
柚、 枳和柠檬中存在表达差异ꎮ 本研究表明柚 ＣｍＭＹＢ１５、 枳 ＰｔＭＹＢ１５和柠檬 ＣｌＭＹＢ１５是ＭＹＢ基因家族成员ꎬ
可能在柑橘响应非生物胁迫过程中起到一定的作用ꎮ
关键词: 柚ꎻ 枳ꎻ 柠檬ꎻ ＭＹＢ１５基因ꎻ 基因克隆ꎻ 基因表达
中图分类号: Ｑ９４３􀆰 ２　 　 　 　 　 文献标识码: Ａ　 　 　 　 　 文章编号: ２０９５￣０８３７(２０１５)０６￣０８０８￣１１
　 　 　 收稿日期: ２０１５￣０５￣０９ꎬ 退修日期: ２０１５￣０６￣１５ꎮ
　 基金项目: 国家自然科学基金项目(３１２６０４６８)ꎻ 江西省青年自然科学基金项目(２０１１４ＢＡＢ２１４００６)ꎻ 江西省自然科学基金项目
(２０１４２ＢＡＢ２０４００８)ꎻ 江西省教育厅科技计划项目(ＧＪＪ１４２９２)ꎻ 江西农业大学科学研究基金项目(ＣＸ２０１１０１)ꎮ
　 作者简介: 郭文芳(１９８６－)ꎬ 女ꎬ 硕士ꎬ 主要从事果树分子生物学研究(Ｅ￣ｍａｉｌ: ｇｕｏｗｅｎｆａｎｇ１９８６＠１６３􀆰 ｃｏｍ)ꎻ 刘德春(１９８２－)ꎬ
男ꎬ 讲师ꎬ 主要从事果树分子生物学研究(Ｅ￣ｍａｉｌ: ｌｄｃ８７３３８０８００＠１６３􀆰 ｃｏｍ)ꎮ
　 ∗共同第一作者ꎮ
　 ∗∗通讯作者(Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ􀆰 Ｅ￣ｍａｉｌ: ｌｉｕｙｏｎｇｊｘａｕ＠１６３􀆰 ｃｏｍ)ꎮ
Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＭＹＢ１５ Ｇｅｎｅｓ ｆｒｏｍ Ｃｉｔｒｕｓ
ＧＵＯ Ｗｅｎ￣Ｆａｎｇ∗ꎬ ＬＩＵ Ｄｅ￣Ｃｈｕｎ∗ꎬ ＹＡＮＧ Ｌｉꎬ ＺＨＵＡＮＧ Ｘｉａꎬ ＺＨＡＮＧ Ｊｕａｎ￣Ｊｕａｎꎬ
ＷＡＮＧ Ｓｈｕ￣Ｓｈｅｎｇꎬ ＬＩＵ Ｙｏｎｇ∗∗
(Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅꎬ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｏｎｏｍｙꎬ Ｊｉａｎｇｘｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｎａｎｃｈａｎｇ ３３００４５ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｈｒｅｅ ＭＹＢ ｇｅｎｅｓꎬ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＣｍＭＹＢ１５ꎬ ＰｔＭＹＢ１５ ａｎｄ ＣｌＭＹＢ１５ꎬ ｗｅｒｅ ｃｌｏｎｅｄ ｆｒｏｍ
ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｏｆ ｐｏｍｅｌｏ (Ｃｉｔｒｕｓ ｍａｘｉｍａ (Ｂｕｒｍ.) Ｍｅｒｒ.)ꎬ ｔｒｉｆｏｌｉａｔｅ ｏｒａｎｇｅ (Ｐｏｎｃｉｒｕｓ ｔｒｉｆｏｌｉａｔａ (Ｌ.)
Ｒａｆ.) ａｎｄ ｌｅｍｏｎ ( Ｃｉｔｒｕｓ ｌｉｍｏｎ ( Ｌ.) Ｂｕｒｍ􀆰 ｆ.)ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬ ｂｙ ｉｎ ｓｉｌｉｃｏ ａｎｄ ｒｅｖｅｒｓｅ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ＰＣＲ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ. Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ ｃＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ
ｔｈｒｅｅ ｇｅｎｅｓ ｗｅｒｅ ９９４ꎬ ９９２ ａｎｄ ９８８ ｂｐꎬ ａｎｄ ｅｎｃｏｄｅｄ ２６７ꎬ ２６６ ａｎｄ ２６５ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓꎬ
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｔｈｅ Ｎ￣ｔｅｒｍｉｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｎｏｖｅｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｔｗｏ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ
ｒｅｐｅａｔ ＭＹＢ ＤＮＡ￣ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎｓꎬ ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｇｅｎｅｓ ｂｅｌｏｎｇｅｄ ｔｏ ｔｈｅ Ｒ２Ｒ３
ｓｕｂｃｌａｓｓ ｏｆ ｔｈｅ ＭＹＢ ｆａｍｉｌｙ. Ｍｏｒｅｏｖｅｒꎬ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｇｅｎｅｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ
ｂｙ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ (ｑＲＴ￣ＰＣＲ) ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｓｔｒｅｓｓ ｏｆ ＡＢＡꎬ ｄｒｏｕｇｈｔꎬ ｃｏｌｄ ａｎｄ ｓａｌｔ.
Ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ＭＹＢ１５ ｇｅｎｅｓ ｗｅｒｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ａｌｌ ｓｔｒｅｓｓ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ. Ｈｏｗｅｖｅｒꎬ ｔｈｅｉｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ａｆｔｅｒ ｓｔｒｅｓｓ ｄｉｆｆｅｒｅｄ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｃｉｔｒｕｓ ｓｐｅｃｉｅｓ.
Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｔｈａｔ ＣｍＭＹＢ１５ꎬ ＰｔＭＹＢ１５ ａｎｄ ＣｌＭＹＢ１５ ｗｅｒｅ ｍｅｍｂｅｒｓ ｏｆ
ｔｈｅ ＭＹＢ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙꎬ ａｎｄ ｍｉｇｈｔ ｐｌａｙ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｃｉｔｒｕｓ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ａｂｉｏｔｉｃ ｓｔｒｅｓｓ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｃｉｔｒｕｓ ｍａｘｉｍａꎻ Ｐｏｎｃｉｒｕｓ ｔｒｉｆｏｌｉａｔａꎻ Ｃｉｔｒｕｓ ｌｉｍｏｎꎻ ＭＹＢ１５ꎻ Ｃｌｏｎｉｎｇꎻ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ａｎａｌｙｓｉｓ
　 　 植物在受到外界环境胁迫时ꎬ 可通过信号传
导途径将逆境信号传递到胁迫应答的转录因子ꎬ
由各类转录因子调控体内相关功能基因的表达ꎬ
从而降低或消除给植株带来的危害[１ꎬ２] ꎮ 转录调
控在植物的胁迫应答反应中起着重要作用ꎬ 近年
来对转录因子的研究已成为提高植物抗性的分子
育种的重要工作ꎮ 研究发现ꎬ 植物可根据 ＤＮＡ
结合区域的不同将转录因子分为若干个家族ꎬ 与
植物逆境抗性相关的转录因子主要有: ｂＺＩＰ、
ＷＲＫＹ、 ＡＰ２ / ＥＲＦ 和 ＭＹＢ 四类[３] ꎮ 其中 ＭＹＢ
类转录因子数量多、 功能多样[４]ꎬ 如拟南芥(Ａｒａ￣
ｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ) ＭＹＢ 家族有 １９８ 个成员[５] ꎬ
水稻 (Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ) [６]、 葡萄 (Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ) [７]、
棉花(Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ Ｌｉｎｎ) [８]分别有 １８５ 个、 １０８ 个、
２００ 个成员ꎮ 前人已分离鉴定了许多参与植物
逆境胁迫应答的 ＭＹＢ 基因ꎬ 且对部分基因进行
了功能验证ꎮ 如曹慧忠 [９]分析了苹果中 ２０ 个
Ｒ２Ｒ３ 亚类 ＭＹＢ 基因在 ＮａＣｌ、 脱落酸(ＡＢＡ) 、
ＰＥＧ 及低温逆境胁迫下的表达模式ꎬ 结果表明
其中 ５ 个ＭｄＭＹＢ 基因能被以上 ４ 种胁迫诱导且
都上调表达ꎬ ６ 个 ＭｄＭＹＢ 基因能被 ２ ~ ３ 种胁
迫诱导表达ꎬ ２ 个 ＭｄＭＹＢ 基因只能被 １ 种胁迫
诱导表达ꎻ 棉花 ＧｂＭＹＢ５ 基因在 ＰＥＧ、 脱落酸
和赤霉酸诱导下均可增强表达ꎬ 且在茎、 叶和蕾中
均有表达ꎬ 尤以叶片中的表达水平最高[１０]ꎻ Ｌｉａｏ
等[１１]研究发现ꎬ 将从大豆中克隆的 ＧｍＭＹＢ７６ 和
ＧｍＭＹＢ１７７ 基因导入拟南芥ꎬ 经低温处理后的
转基因株系的存活率要远高于野生型ꎮ 也有研
究认为ꎬ 拟南芥 ＡｔＭＹＢ１５ 过量表达可提高 ＡＢＡ
合成、 信号转导和胁迫保护蛋白基因的表达水
平ꎬ 从而增强植株的抗盐和抗旱能力 [１２] ꎻ Ｄｉｎｇ
等 [１３]通过转基因功能验证也认为ꎬ ＡｔＭＹＢ１５ 转
基因拟南芥对 ＡＢＡ 的敏感度和抗旱能力都有明
显提高ꎮ
柑橘在生产过程中经常遭遇低温、 干旱和高盐
等非生物胁迫ꎬ 从而导致减产ꎬ 影响经济效益ꎬ 因
此提高抗逆性一直是柑橘育种工作的重要目标ꎮ 对
ＭＹＢ转录因子的研究在柑橘中已有报道ꎬ 主要是
关于其调控类黄酮的代谢和花青素的合成途径以及
对甜橙中 ＭＹＢ 基因家族的数据分析等方面ꎬ 如
ＣｓＭＹＢ８[１４]、 ＭＹＢＡ[１５]和 ＣｓＭＹＢ[１６]等ꎬ 而对与
抗逆相关的柑橘 ＭＹＢ 转录因子的研究较少ꎮ 枳是
柑橘中常用的砧木ꎬ 抗逆性较强ꎬ 而柚和柠檬是大
规模栽培的柑橘种类ꎬ 抗逆性相对较弱ꎬ 若能从抗
逆性较强的柑橘种类中克隆到抗逆转录因子并导入
柑橘栽培品种中ꎬ 较转入其他外源抗性功能基因更
容易获得抗性较强的柑橘新品种ꎮ 本研究拟从柚、
枳和柠檬中克隆 ３ 个新的 ＭＹＢ 家族基因ꎬ 并使用
实时定量 ＰＣＲ 技术对其在低温、 高盐和干旱等非
生物胁迫和 ＡＢＡ胁迫下的时空表达模式进行分析ꎬ
以期为柑橘抗逆分子育种提供候选基因资源和理论
依据ꎮ
１　 材料与方法
１􀆰 １　 试材及其处理
２０１３ 年 １０ 月将柚(Ｃｉｔｒｕｓ ｍａｘｉｍａ (Ｂｕｒｍ.)
Ｍｅｒｒ.)、 枳(Ｐｏｎｃｉｒｕｓ ｔｒｉｆｏｌｉａｔａ (Ｌ.) Ｒａｆ.)和柠檬
(Ｃｉｔｒｕｓ ｌｉｍｏｎ (Ｌ.) Ｂｕｒｍ. ｆ.)种子分别播种于 ＭＴ
培养基中(含 ８ ｇ / Ｌ琼脂、 ４０ ｇ / Ｌ蔗糖ꎬ ｐＨ ５􀆰８)ꎬ
置于江西农业大学农学院园艺系实验室培养箱
(２５℃ ± １℃ꎬ １６ ｈ 光照 / ８ ｈ 黑暗ꎬ 光照强度
１２ ０００ ｌｘꎬ)中培养ꎮ 待幼苗长至约 ２５ ｃｍ 时移植
到 Ｈｏａｇｌａｎｄ 培养液中预培养 ５ ｄꎬ 然后参照文献
[１７ꎬ１８]的方法对柑橘进行胁迫处理ꎮ 脱落酸
(ＡＢＡ)、 干旱和高盐处理时分别将幼苗转移到含
有１００ μｍｏｌ / Ｌ ＡＢＡ、 ２０％ ＰＥＧ ６０００和 ２５０ ｍｍｏｌ /
Ｌ ＮａＣｌ的 Ｈｏａｇｌａｎｄ 液体培养基中常温培养ꎻ 低
温处理时幼苗转移到 ４℃培养箱中培养ꎮ 柚、 枳和
柠檬的每个因素处理 ２０ ~ ２５个植株ꎬ 分别在每处
理后 ０(ＣＫ)、 １、 ３、 ６、 １２、 ２４ ｈ 取其叶片ꎬ 液
氮速冻ꎬ 置于－８０℃超低温冰箱储存、 备用ꎮ
１􀆰 ２　 柚、 枳和柠檬 ＲＮＡ提取及 ｃＤＮＡ合成
采用 Ｔｒｉｚｏｌ 总 ＲＮＡ 提取试剂盒( Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎꎬ
美国)分别提取柚、 枳和柠檬叶片总 ＲＮＡꎬ 然后
用 ＤＮａｓｅⅠ(Ｐｒｏｍｅｇａꎬ 美国)处理以去除 ＲＮＡ
中的基因组 ＤＮＡꎬ 最后用核酸蛋白仪检测总
ＲＮＡ的浓度ꎬ １％琼脂糖凝胶电泳检测其完整性ꎮ
以提取的总 ＲＮＡ为模板ꎬ 采用 Ｐｒｉｍｅ ＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ
试剂盒 ( ＴａＫａＲａꎬ 日本) 合成 ｃＤＮＡꎬ 存放于
－２０℃ꎬ 备用ꎮ
９０８　 第 ６期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 郭文芳等: 柑橘 ＭＹＢ１５基因的克隆与表达分析
１􀆰 ３　 ＣｍＭＹＢ１５、 ＰｔＭＹＢ１５和 ＣｌＭＹＢ１５基因克隆
通过检索 ＨａｒｖＥＳＴ￣Ｃｉｔｒｕｓ 数据库找到与植物
ＭＹＢ家族基因同源性很高的表达序列标签(ＥＳＴ)
序列ꎬ 数据库自动将这些 ＥＳＴ 序列拼接成一条一
致性序列ꎮ 基于该一致性序列使用引物设计软件
Ｐｒｉｍｅｒ ５设计合成一对基因特异性引物(ＱＳ: ５′￣
ＧＴＡＡＣＴＣＣＡＣＴＡＣＴＴＴＧＡＡ￣３′和 ＱＡ: ５′￣ＣＴＴＴＣ￣
ＣＣＴＴＡＴＴＣＧＴＣＴＣＡ￣３′)ꎬ 同时分别以柚、 枳和柠
檬叶片第一链 ｃＤＮＡ 为模板与 ＰＣＲ 扩增试剂
ＴＩＡＮＧＥＮ® ２ × Ｔａｑ ＰＣＲ ＭａｓｔｅｒＭｉｘ 进行 ＰＣＲ 扩
增ꎬ 获得 ＣｍＭＹＢ１５、 ＰｔＭＹＢ１５ 和 ＣｌＭＹＢ１５ 基因
全长序列ꎮ ＰＣＲ扩增程序为: ９５℃预变性 ５ ｍｉｎꎻ
９５℃变性 ３０ ｓꎬ ５１℃退火 ３０ ｓꎬ ７２℃延伸 １ ｍｉｎꎬ
３５个循环ꎻ 最后 ７２℃延伸 １０ ｍｉｎꎬ ４℃保存ꎮ 分
别将 ＰＣＲ产物进行 １％琼脂糖凝胶电泳分离ꎬ 再
利用 ＤＮＡ回收试剂盒(ＴＩＡＮＧＥＮ 公司)将 ＰＣＲ 目
的片段回收、 纯化ꎬ 然后与 ｐＭＤ® １８￣Ｔ 载体
(ＴａＫａＲａꎬ 日本)连接ꎬ 转化ꎬ 蓝白斑筛选ꎬ 最后
经菌液 ＰＣＲ鉴定均为阳性克隆后送深圳华大生物
工程股份有限公司测序ꎮ
１􀆰 ４　 ＣｍＭＹＢ１５、 ＰｔＭＹＢ１５和 ＣｌＭＹＢ１５的实时
定量 ＰＣＲ
利用 ＢＩＯ￣ＲＡＤ ＣＦＸ９６ 实时荧光定量 ＰＣＲ 仪
对柚、 枳和柠檬各胁迫取样点的 ｃＤＮＡ 模板进行
荧光相对定量分析ꎮ 荧光染料 ＳＹＢＲ® Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ
ＴａｑＴＭ购于大连宝生物公司ꎮ 以克隆的 ＣｍＭＹＢ１５
基因的 ｃＤＮＡ 序列为基础ꎬ 使用引物设计软件
Ｐｒｉｍｅｒ ５ 按照大连宝生物实时定量 ＰＣＲ说明书设
计合成该基因的特异性引物ꎬ ３ 个目的基因的扩
增引物均为 ＭＹＢ￣Ｆ: ５′￣ＧＣＡＧＣＡＡＧＧＴＴＡＣＣＡＧ￣
ＧＡＡＧ￣３′和 ＭＹＢ￣Ｒ: ５′￣ＧＧＡＡＧＡＴＧＡＴＧＣＣＴＧＴ￣
ＧＧＡＧ￣３′ꎻ均以柑橘 Ａｃｔｉｎ 为内参基因ꎬ Ａｃｔｉｎ 的
扩增引物为 Ａｃｔｉｎ￣Ｆ: ５′￣ＡＣＴＣＡＴＣＧＴＡＣＴＣＡＧＣ￣
ＣＴＴＴＧ￣３′和 Ａｃｔｉｎ￣Ｒ: ５′￣ＴＧＣＡＣＣＣＴＧＴＴＣＴＴＣＴ￣
ＴＡＣＴＧ￣３′ꎮ ｑＲＴ￣ＰＣＲ扩増采用 ２５ μＬ 反应体系ꎬ
包括 １２􀆰５ μＬ ＳＹＢＲ® Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ、 正反向引
物各 ０􀆰５ μＬ、 ９􀆰 ５ μＬ ｄｄＨ２Ｏ、 ２ μＬ ｃＤＮＡ 模板ꎮ
ｑＲＴ￣ＰＣＲ 反应程序采用两步法ꎬ 程序设置为:
９５℃预变性 ３０ ｓꎻ ９５℃变性 ５ ｓꎬ ６０℃退火 ３０ ｓꎬ
４０个循环ꎮ 每处理样品设 ３ 个重复ꎮ 利用 ２－△△ＣＴ
方法进行数据分析ꎮ
２　 结果与分析
２􀆰 １　 ＣｍＭＹＢ１５、 ＰｔＭＹＢ１５ 和 ＣｌＭＹＢ１５ 的 ｃＤＮＡ
序列分析
通过电子克隆和 ＲＴ￣ＰＣＲ 方法分别从柚、 枳
和柠檬中克隆到 ３ 个新的基因ꎬ 分别命名为
ＣｍＭＹＢ１５ (ＧｅｎＢａｎｋ 登录号: ＫＰ２２２３０９)、 Ｐｔ￣
ＭＹＢ１５(ＫＰ２２２３１０)和 ＣｌＭＹＢ１５(ＫＰ２２２３１１)ꎮ 测
序和生物信息学分析结果表明ꎬ 这 ３个基因的 ｃＤ￣
ＮＡ序列全长分别为 ９９４、 ９９２、 ９８８ ｂｐꎬ 分别含
有 ８０４、 ８０１、 ７９８ ｂｐ 的开放阅读框(ｏｐｅｎ ｒｅａｄ￣
ｉｎｇ ｆｒａｍｅꎬ ＯＲＦ)ꎬ 且分别编码 ２６７、 ２６６、 ２６５
个氨基酸ꎻ 碱基序列比对结果显示(图 １)ꎬ 该 ３个
基因序列的相似性达 ９８􀆰１３％ꎬ 有 ４０ 个碱基位点
存在差异ꎮ
２􀆰 ２　 ＣｍＭＹＢ１５、 ＰｔＭＹＢ１５ 和 ＣｌＭＹＢ１５ 的同源
性及进化分析
借助 ＮＣＢＩ数据库将碱基序列翻译成氨基酸序
列ꎬ 用 ＤＮＡｍａｎ 对 ＣｍＭＹＢ１５、 ＰｔＭＹＢ１５ 和
ＣｌＭＹＢ１５进行氨基酸序列比对ꎬ 结果显示ꎬ ３ 条
序列一致性达 ９７􀆰０１％ꎬ 其中有 １８ 个氨基酸位点
存在差异(图 ２)ꎮ 利用 ＩｎｔｅｒＰｒｏ Ｓｃａｎ 在线软件分
析 ＣｍＭＹＢ１５、 ＰｔＭＹＢ１５和 ＣｌＭＹＢ１５ 蛋白结构功
能域ꎬ 结果表明 ３个蛋白均具有 ＭＹＢ 家族的共有
特点ꎬ 即 Ｎ 端 ９ ~ ６１、 ６２ ~ １１６位点含有两段串
联的不完全重复的保守氨基酸序列ꎬ 每段约 ５０ ~
５５个氨基酸残基(即图 ２ 所示的 Ｒ２ 和 Ｒ３ 两个亚
结构域)ꎬ 且均属于 ＨＴＨ＿ ＭＹＢ 形式的功能位点ꎻ
同时该 ３个蛋白的 １４ ~ ６１、 ６７ ~ １１２位点均存在
Ｍｙｂ＿ＤＮＡ￣ｂｉｎｄｉｎｇ 结构域ꎬ 均属于 ＳＡＮＴ 超级家
族ꎮ 另外与其他已知物种中 ＭＹＢ 蛋白的多序列比
对发现ꎬ 在 Ｒ２ 结构域中含有 ３ 个保守的色氨酸
(Ｗ)残基ꎬ 分别间隔 １９ 个氨基酸ꎻ 在 Ｒ３ 结构域
中也含有 ３ 个保守的色氨酸(Ｗ)残基ꎬ 相互间隔
１８ 个氨基酸ꎬ 但在 Ｒ３ 中第一个色氨酸(Ｗ)被苯
丙氨酸(Ｆ)所取代(图 ２中▲表示的位置)ꎮ
为进一步分析柚 ＣｍＭＹＢ１５、 枳 ＰｔＭＹＢ１５ 和
柠檬 ＣｌＭＹＢ１５ 蛋白的进化关系ꎬ 利用 ＭＥＧＡ６ 软
件并采用最大似然法构建系统进化树ꎮ 结果显示
０１８ 植 物 科 学 学 报 第 ３３卷　
ＣｍＭＹＢ１５、 ＰｔＭＹＢ１５和 ＣｌＭＹＢ１５ 聚集在同一分
支ꎬ 且与拟南芥 ＭＹＢ１５(ＮＰ＿１８８９６６􀆰１)亲缘关系
最近ꎬ 与拟南芥 ＭＹＢ１３(ＮＰ＿１７２１０８􀆰１)和 Ｒ２Ｒ３￣
ＭＹＢ(ＣＡＡ７４６０３􀆰１)亲缘关系次之ꎮ 另外ꎬ 三者均
与陆地棉 ＧｈＭＹＢ１１(ＡＩＲ０７３９８􀆰１)、 苜蓿 ＭＹＢ５０
(ＡＢＲ２８３３８􀆰１)、 小麦 ＭＹＢ７３ (ＡＥＷ２３１８６􀆰１)以
及玉米 Ｍｙｂ４(ＸＰ＿００８６４５９５０􀆰１)的亲缘关系较远
(图 ３)ꎮ
CmMYB15
PtMYB15
ClMYB15
KP222309
KP222310
KP222311
Consensus
CmMYB15
PtMYB15
ClMYB15
KP222309
KP222310
KP222311
Consensus
CmMYB15
PtMYB15
ClMYB15
KP222309
KP222310
KP222311
Consensus
CmMYB15
PtMYB15
ClMYB15
KP222309
KP222310
KP222311
Consensus
CmMYB15
PtMYB15
ClMYB15
KP222309
KP222310
KP222311
Consensus
CmMYB15
PtMYB15
ClMYB15
KP222309
KP222310
KP222311
Consensus
CmMYB15
PtMYB15
ClMYB15
KP222309
KP222310
KP222311
Consensus
CmMYB15
PtMYB15
ClMYB15
KP222309
KP222310
KP222311
Consensus
CmMYB15
PtMYB15
ClMYB15
KP222309
KP222310
KP222311
Consensus
CmMYB15
PtMYB15
ClMYB15
KP222309
KP222310
KP222311
Consensus
CmMYB15
PtMYB15
ClMYB15
KP222309
KP222310
KP222311
Consensus
CmMYB15
PtMYB15
ClMYB15
KP222309
KP222310
KP222311
Consensus
83
84
83
167
168
167
251
252
251
335
336
335
419
420
419
503
498
500
584
582
578
668
666
662
752
750
746
836
834
830
920
918
914
993
991
987
图 １　 ＣｍＭＹＢ１５、 ＰｔＭＹＢ１５和 ＣｌＭＹＢ１５碱基序列比对
Ｆｉｇ􀆰 １　 Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｂａｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ＣｍＭＹＢ１５ꎬ ＰｔＭＹＢ１５ ａｎｄ ＣｌＭＹＢ１５
１１８　 第 ６期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 郭文芳等: 柑橘 ＭＹＢ１５基因的克隆与表达分析
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62
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62
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62
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124
124
124
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121
124
124
124
182
180
180
176
167
166
180
184
177
233
232
231
231
210
218
230
246
227
266
265
264
263
244
253
267
284
264
Citrus maxima
Poncirus trifoliata
Citrus limon
Glycine max
Salvia miltiorrhiza
Vitis amurensis
Solanum tuberosum
Arabidopsis thaliana
Solanum lycopersicum
CmMYB15
PtMYB15
ClMYB15
GmMYB29A2
MYB33
MYB1
Myb4-like
AtMYB15
MYB
Consensus
Citrus maxima
Poncirus trifoliata
Citrus limon
Glycine max
Salvia miltiorrhiza
Vitis amurensis
Solanum tuberosum
Arabidopsis thaliana
Solanum lycopersicum
CmMYB15
PtMYB15
ClMYB15
GmMYB29A2
MYB33
MYB1
Myb4-like
AtMYB15
MYB
Consensus
Citrus maxima
Poncirus trifoliata
Citrus limon
Glycine max
Salvia miltiorrhiza
Vitis amurensis
Solanum tuberosum
Arabidopsis thaliana
Solanum lycopersicum
CmMYB15
PtMYB15
ClMYB15
GmMYB29A2
MYB33
MYB1
Myb4-like
AtMYB15
MYB
Consensus
Citrus maxima
Poncirus trifoliata
Citrus limon
Glycine max
Salvia miltiorrhiza
Vitis amurensis
Solanum tuberosum
Arabidopsis thaliana
Solanum lycopersicum
CmMYB15
PtMYB15
ClMYB15
GmMYB29A2
MYB33
MYB1
Myb4-like
AtMYB15
MYB
Consensus
Citrus maxima
Poncirus trifoliata
Citrus limon
Glycine max
Salvia miltiorrhiza
Vitis amurensis
Solanum tuberosum
Arabidopsis thaliana
Solanum lycopersicum
CmMYB15
PtMYB15
ClMYB15
GmMYB29A2
MYB33
MYB1
Myb4-like
AtMYB15
MYB
Consensus
R2
R3
w
m fw g l
“▲”表示 ＣｍＭＹＢ１５、 ＰｔＭＹＢ１５和 ＣｌＭＹＢ１５蛋白序列的色氨酸(Ｗ)位点ꎮ
“▲” ｉｎｄｉｃａｔｅ ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ (Ｗ) ｏｆ ｔｈｅ ｓｉｔｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ＣｍＭＹＢ１５ꎬ ＰｔＭＹＢ１５ ａｎｄ ＣｌＭＹＢ１５.
图 ２　 多种植物的 ＭＹＢ蛋白氨基酸序列比对
Ｆｉｇ􀆰 ２　 Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ ＭＹＢ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｌａｎｔ ｓｐｅｃｉｅｓ
２１８ 植 物 科 学 学 报 第 ３３卷　
!" Glycine max Myb4-like XP_003518022.1
!" Glycine max GmMYB29A2 BAA81732.1
#$ Medicago truncatula MYB50 ABR28338.1
%% Theobroma cacao MYB13 XP_007035114.1
& Salvia miltiorrhiza MYB33 AGN52057.1
( Nelumbo nucifera Myb4 XP_010262320.1
)*+ Vitis amurensis MYB1 AIT13037.1
,- Solanum lycopersicum MYB NP_001234262.1
. Panax ginseng MYB ACK43221.1
/01 Solanum tuberosum Myb4-like XP_006354484.1
23 Capsicum annuum MYB ACB30359.1
▲5 Poncirus trifoliata PtMYB15 KP222310
▲67 Citrus limon ClMYB15 KP222311
▲8 Citrus maxima CmMYB15 KP222309
9:; Arabidopsis thaliana MYB13 NP_172108.1
9:; Arabidopsis thaliana AtMYB15 NP_188966.1
9:; Arabidopsis thaliana R2R3-MYB CAA74603.1
<= Rosa rugosa MYB17 CCA29106.1
>?@ Gossypium hirsutum GhMYB11 AIR07398.1
AB Oryza sativa Japonica Group MYB AAP92750.1
CD Zea mays Myb4 XP_008645950.1
EF Triticum aestivum MYB73 AEW23186.1
0.05
图 ３　 ＣｍＭＹＢ１５、 ＰｔＭＹＢ１５和 ＣｌＭＹＢ１５与其他植物 ＭＹＢ蛋白的系统进化树
Ｆｉｇ􀆰 ３　 Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ ｃｌｏｓｅ ｈｏｍｏｌｏｇｕｅｓ ｏｆ ＣｍＭＹＢ１５ꎬ ＰｔＭＹＢ１５ꎬ ＣｌＭＹＢ１５ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ＭＹＢ ｐｒｏｔｅｉｎｓ
２􀆰 ３　 ＣｍＭＹＢ１５、 ＰｔＭＹＢ１５ 和 ＣｌＭＹＢ１５ 蛋白序
列分析及三维结构预测
Ｐｒｏｔｐａｒａｍ在线分析显示ꎬ 柚 ＣｍＭＹＢ１５ 蛋白
由 ２０种基本的氨基酸组成ꎬ 其分子式为 Ｃ１２９０Ｈ１９９５
Ｎ３８５Ｏ４１６Ｓ１１ꎬ 其中含量最高的氨基酸是丝氨酸 Ｓｅｒ
(９􀆰４％)和天冬酰胺 Ａｓｎ(９􀆰４％)ꎬ 含量最低的氨基
酸是半胱氨酸 Ｃｙｓ(１􀆰９％)和酪氨酸 Ｔｙｒ(１􀆰９％)ꎬ 酸
性氨基酸(天冬氨酸 Ａｓｐ ＋谷氨酸 Ｇｌｕ)总数为 ３５
个ꎬ 碱性氨基酸(精氨酸 Ａｒｇ ＋赖氨酸 Ｌｙｓ)总数为
３１个ꎬ 预测相对分子量约为 ２９􀆰９０ ｋＤꎬ 理论等电
点为 ６􀆰３０ꎬ 总平均亲水性(ＧＲＡＶＹ)为－０􀆰８７８ꎬ 不
稳定指数为 ４３􀆰６４ꎬ 推测其属于不稳定亲水性蛋
白ꎮ 枳 ＰｔＭＹＢ１５ 蛋白由 ２０ 种基本的氨基酸组成ꎬ
其分子式为 Ｃ１２９５Ｈ２０００Ｎ３８４Ｏ４１３Ｓ１１ꎬ 其中含量最高
的氨基酸是天冬酰胺 Ａｓｎ(９􀆰８％)ꎬ 含量最低的氨
基酸是半胱氨酸 Ｃｙｓ(１􀆰９％)ꎬ 酸性氨基酸(Ａｓｐ ＋
Ｇｌｕ)总数为 ３４ 个ꎬ 碱性氨基酸(Ａｒｇ ＋ Ｌｙｓ)总数
为 ３１个ꎬ 预测相对分子量约为 ２９􀆰９０ ｋＤꎬ 理论等
电点为 ６􀆰４５ꎬ 总平均亲水性(ＧＲＡＶＹ)为－０􀆰８６３ꎬ
不稳定指数为 ４６􀆰２２ꎬ 推测其属于不稳定亲水性蛋
白ꎮ 柠檬 ＣｌＭＹＢ１５ 蛋白由 ２０ 种基本的氨基酸组
成ꎬ 其分子式为 Ｃ１２８６Ｈ１９９５Ｎ３８５Ｏ４１０Ｓ１２ꎬ 其中含量
最高的氨基酸是丝氨酸 Ｓｅｒ(９􀆰４％)ꎬ 含量最低的
氨基酸是半胱氨酸 Ｃｙｓ ( １􀆰９％) 和酪氨酸 Ｔｙｒ
(１􀆰９％)ꎬ 酸性氨基酸(Ａｓｐ ＋ Ｇｌｕ)总数为 ３４ 个ꎬ
碱性氨基酸(Ａｒｇ ＋ Ｌｙｓ)总数为 ３３个ꎬ 预测相对分
子量约为 ２９􀆰７９ ｋＤꎬ 理论等电点为 ６􀆰８６ꎬ 总平均
亲水性(ＧＲＡＶＹ)为－０􀆰８９２ꎬ 不稳定指数 ４２􀆰９６ꎬ
３１８　 第 ６期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 郭文芳等: 柑橘 ＭＹＢ１５基因的克隆与表达分析
推测其属于不稳定亲水性蛋白ꎮ
通过 ＰＲＯＦｓｅｃ 软件预测 ＣｍＭＹＢ１５、 Ｐｔ￣
ＭＹＢ１５和 ＣｌＭＹＢ１５ 蛋白的二级结构ꎬ 结果显示ꎬ
ＣｍＭＹＢ１５蛋白含 ２７􀆰０％螺旋结构和 ７３􀆰０％环状
结构ꎻ ＰｔＭＹＢ１５蛋白含 ２８􀆰６％螺旋结构和 ７１􀆰４％
环状结构ꎻ ＣｌＭＹＢ１５ 蛋白含 ２８􀆰７％螺旋结构和
７１􀆰３％环状结构ꎮ 预测结果表明 ３个蛋白的二级结
构极为相似ꎬ 因此以 ＣｍＭＹＢ１５ 蛋白为例ꎬ 利用
在线软件(ｈｔｔｐ: / / ｓｗｉｓｓｍｏｄｅｌ. ｅｘｐａｓｙ􀆰 ｏｒｇ / ) Ｅｘ￣
ｐａｓｙ 中的 Ｓｗｉｓｓ Ｍｏｄｅｌ 程序搜索其同源模型
１ ｈ８ａ􀆰１􀆰 Ｃ (ＭＹＢ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ) 蛋白并建
模ꎬ 推测出该蛋白的三维结构模型(图 ４)ꎮ
运用 ＴＭＨＭＭ Ｓｅｒｖｅｒ ｖ. ２􀆰０ 预测 ＣｍＭＹＢ１５、
ＰｔＭＹＢ１５和 ＣｌＭＹＢ１５蛋白均无跨膜区域ꎮ 用 Ｓｉｇ￣
ｎａｌＰ ３􀆰０ Ｓｅｒｖｅｒ分析出该 ３个蛋白均不含信号肽ꎮ
α-!"
α-helix
#$%&
Coil
图 ４　 ＣｍＭＹＢ１５蛋白三维结构预测模型
Ｆｉｇ􀆰 ４　 Ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ３Ｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ
ｐｒｏｔｅｉｎ ＣｍＭＹＢ１５
利用 ＰＳＯＲＴ ＷＷＷ Ｓｅｒｖｅｒ 程序中的 ＰＳＯＲＴⅡＰｒｅ￣
ｄｉｃｔｉｏｎ工具进行细胞定位ꎬ 结果显示ꎬ ＣｍＭＹＢ１５
蛋白在细胞核中的可能性为 ９５􀆰７％ꎬ 在线粒体中
的可能性为 ４􀆰３％ꎻ ＰｔＭＹＢ１５ 和 ＣｌＭＹＢ１５ 蛋白在
细胞核中可能性为 ９１􀆰３％ꎬ 在线粒体中可能性为
８􀆰７％ꎮ 这 ３个蛋白均不含跨膜区域和信号肽ꎬ 不
能穿过膜结构ꎬ 所以该蛋白在线粒体中的可能性为
零ꎮ 由此推测这 ３个蛋白存在于细胞核中的可能性
极大ꎬ 很可能是一种转录因子ꎮ
通过 ＮｅｔＰｈｏｓ ２􀆰０ Ｓｅｒｖｅ 预测 ＣｍＭＹＢ１５(图
５)、 ＰｔＭＹＢ１５和 ＣｌＭＹＢ１５ 蛋白磷酸化位点表明ꎬ
ＣｍＭＹＢ１５和 ＣｌＭＹＢ１５ 蛋白均含有 １５ 个丝氨酸
(Ｓｅｒ)、 ３ 个苏氨酸(Ｔｈｒ)和 ２ 个酪氨酸(Ｔｙｒ)位
点ꎻ ＰｔＭＹＢ１５蛋白含有 １４ 个丝氨酸(Ｓｅｒ)、 ２ 个
苏氨酸(Ｔｈｒ)和 ３ 个酪氨酸(Ｔｙｒ)位点ꎮ 由此推测
磷酸化作用可能与这 ３个蛋白的活性调控有关ꎮ
２􀆰 ４　 ＣｍＭＹＢ１５、 ＰｔＭＹＢ１５ 和 ＣｌＭＹＢ１５ 的荧光
定量表达分析
在 １００ μｍｏｌ / Ｌ ＡＢＡ 胁迫下ꎬ 柚 ＣｍＭＹＢ１５、
枳 ＰｔＭＹＢ１５ 和柠檬 ＣｌＭＹＢ１５ 在叶片中均有表达
(图 ６: Ａ)ꎮ 处理 １ ｈ时柚 ＣｍＭＹＢ１５ 相对表达量
急剧上升并达到最大值ꎬ 可见 ＡＢＡ 可以诱导 Ｃｍ￣
ＭＹＢ１５在柚叶片中迅速表达ꎬ 整体呈先迅速上升
后急剧下降的趋势ꎻ 枳 ＰｔＭＹＢ１５ 表达量呈先逐渐
升高后平缓下降的趋势ꎬ 在 ３ ｈ时表达量达到最大
值ꎬ 相对变化幅度较小ꎻ 柠檬 ＣｌＭＹＢ１５ 表达量随
时间推移变化幅度均较平缓ꎮ
!"# Serine
Threonine
Tyrosine
Threshold
$"#
%"#
&(
NetPhos 2.0: predicted phosphorylation sites in sequence
0
1
0 50 100 150 200 250
Sequence position
Ph
os
ph
or
yl
at
io
n
po
te
nt
ia
l
图 ５　 ＣｍＭＹＢ１５蛋白磷酸化位点预测
Ｆｉｇ􀆰 ５　 Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｓｉｔｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣｍＭＹＢ１５ ｐｒｏｔｅｉｎ
４１８ 植 物 科 学 学 报 第 ３３卷　
　 　 在 ２０％ ＰＥＧ６０００ 干旱胁迫下ꎬ ３ 个基因在
叶片中均有表达(图 ６: Ｂ)ꎮ 柚 ＣｍＭＹＢ１５ 表达
量整体呈先迅速上升后急剧下降的趋势ꎬ 在 １ ｈ
时迅速达到最大峰值ꎬ 为对照的 １３ 倍左右ꎬ 可
见柚叶片中 ＣｍＭＹＢ１５ 在干旱胁迫时能迅速表
达ꎻ 枳 ＰｔＭＹＢ１５ 在 １ ｈ时表达量达到最大值ꎬ 之
后整体呈逐渐下降趋势ꎬ 变化幅度较平缓ꎻ 柠檬
ＣｌＭＹＢ１５ 在胁迫 ３ ｈ时表达量达到最大值ꎬ 为对
照的 １８ 倍左右ꎬ 整体呈先大幅上升后大幅下降
的趋势ꎬ 在 ２４ ｈ时表达又有明显增强ꎬ 整体变化
幅度较大ꎮ
４℃低温胁迫下ꎬ ３ 个基因在叶片中均有表达
(图 ６: Ｃ)ꎮ 在 ２４ ｈ内柚 ＣｍＭＹＢ１５ 表达量均高
于对照ꎬ 呈相对上调趋势ꎬ 在 １ ｈ 时表达量达到
最大值ꎻ 枳 ＰｔＭＹＢ１５ 基因表达随时间推移整体
无明显变化趋势ꎬ 其表达量与对照相比变化不大ꎻ
柠檬 ＣｌＭＹＢ１５基因在 ６ ｈ 前表达不明显ꎬ １２ ｈ 时
表达量急剧上升并达到最大值ꎬ 为对照的 ２８ 倍左
右ꎮ
２５０ ｍｍｏｌ / Ｌ ＮａＣｌ 胁迫时ꎬ 柚 ＣｍＭＹＢ１５ 在
１ ｈ 时表达量达到最大值ꎬ 随后呈逐渐下降的趋
势ꎻ 枳 ＰｔＭＹＢ１５ 表达量呈先升高后下降的趋势ꎬ
３ ｈ时表达量达到最大值ꎬ １２ ｈ时降至最低值ꎻ 柠
檬 ＣｌＭＹＢ１５ 表达量的变化趋势较明显ꎬ ６ ｈ 和
２４ ｈ 时分别达到最大值和最小值ꎬ 整体呈先升高
后下降的趋势ꎬ 相对变化幅度较大(图 ６: Ｄ)ꎮ
胁迫实验结果表明ꎬ 在 ＡＢＡ、 干旱、 低温和
高盐处理下ꎬ ＣｍＭＹＢ１５、 ＰｔＭＹＢ１５ 和 ＣｌＭＹＢ１５
表达量均发生了改变ꎻ 且 ４ 种胁迫均能诱导柚
ＣｍＭＹＢ１５在叶片中迅速表达ꎬ 枳 ＰｔＭＹＢ１５ 在逆
境诱导下表达量变化相对较平缓ꎬ 柠檬 ＣｌＭＹＢ１５
在干旱、 低温和高盐胁迫下能被强烈诱导表达ꎬ 但
A 100 μmol / L ABA
0
2
4
6
8
10
12
14
16
0 1 3 6 12 24
*+,-( )h
Stress time
.
/
0
1
2
R
el
at
iv
e
ex
pr
es
si
on
le
ve
l
! " #$
B %& ( )Drought 20% PEG6000
0
5
10
15
20
25
0 1 3 6 12 24
*+,- ( )h
Stress time
.
/
0
1
2
R
el
at
iv
e
ex
pr
es
si
on
le
ve
l
! " #$
C ( ( ℃)Cold 4
0
5
10
15
20
25
30
35
0 1 3 6 12 24
*+,- ( )h
Stress time
.
/
0
1
2
R
el
at
iv
e
ex
pr
es
si
on
le
ve
l
! " #$
D 250 mmol / L NaCl
0
1
2
3
4
5
6
7
0 1 3 6 12 24
*+,-( )h
Stress time
.
/
0
1
2
R
el
at
iv
e
ex
pr
es
si
on
le
ve
l
! " #$
图 ６　 胁迫处理后 ＭＹＢ１５在柚、 枳、 柠檬叶中的表达
Ｆｉｇ􀆰 ６　 Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ＭＹＢ１５ ｉｎ Ｃｉｔｒｕｓ ｍａｘｉｍａꎬ Ｐｏｎｃｉｒｕｓ ｔｒｉｆｏｌｉａｔａ ａｎｄ
Ｃｉｔｒｕｓ ｌｉｍｏｎ ｌｅａｖｅｓ ａｆｔｅｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｔｒｅｓｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ
５１８　 第 ６期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 郭文芳等: 柑橘 ＭＹＢ１５基因的克隆与表达分析
响应的速度较迟缓ꎮ 此结果初步验证了这 ３个基因
是可被逆境胁迫诱导表达的转录因子ꎬ 且在柑橘类
植物柚、 枳和柠檬的发育过程中所起作用存在一定
差异ꎮ
３　 讨论
研究表明ꎬ ＭＹＢ 转录因子具有高度保守的
ＭＹＢ ＤＮＡ￣ｂｉｎｄｉｎｇ 结构域ꎬ 这个结构域一般由
１ ~ ３ 个串联的、 不完全重复区域 (Ｒ１、 Ｒ２ 和
Ｒ３)组成ꎬ 因此ꎬ 植物中 ＭＹＢ 转录因子可简单地
分为 Ｒ１、 Ｒ２Ｒ３ 和 Ｒ１Ｒ２Ｒ３ 三个亚类ꎬ 且大多数
植物的 ＭＹＢ 蛋白属 Ｒ２Ｒ３ 类型[６]ꎮ 每个不完全重
复单元由 ５１ ~ ５５ 个氨基酸组成ꎬ 形成 ３ 个 α￣螺
旋结构ꎻ 在不完全重叠区中第 ２、 第 ３个 α￣螺旋结
构折叠成螺旋￣转角￣螺旋(ＨＴＨ)的形式参与 ＤＮＡ
大沟的结合[１９ꎬ２０]ꎮ 每个 ＭＹＢ 亚结构域中一般都含
有 ３个保守的色氨酸残基ꎬ 且相互之间间隔 １８ 或
１９个氨基酸ꎬ 它们参与空间结构中疏水核心的形
成ꎬ 对维持 ＨＴＨ 的构型有着特别重要的意义ꎻ 但
是 Ｒ３ 亚结构域的第一个色氨酸通常被芳香族氨基
酸或疏水氨基酸所取代[６]ꎮ 本研究从抗逆性不同
的柑橘类植物柚、 枳和柠檬中分离出 ３ 个新的
ＭＹＢ 转录因子基因ꎬ 分别命名为 ＣｍＭＹＢ１５、
ＰｔＭＹＢ１５和 ＣｌＭＹＢ１５ꎻ 氨基酸序列分析表明ꎬ 这
３个基因分别编码 ２６７、 ２６６ 和 ２６５ 个氨基酸的完
整开放阅读框ꎬ 且编码的 ３ 个蛋白均具有 ＭＹＢ 家
族基因典型的结构特点ꎬ 即在 Ｎ 端存在两个串联
的不完全重复的 ＭＹＢ ＤＮＡ￣ｂｉｎｄｉｎｇ 结构域ꎬ 分别
由 ５３ 和 ５５ 个氨基酸残基组成ꎬ 因此推测本研究
克隆的这 ３ 个基因属于 ＭＹＢ 转录因子家族成员ꎬ
且均属于 Ｒ２Ｒ３￣ＭＹＢ 亚类ꎮ 对其蛋白分析表明ꎬ
该 ３ 个蛋白的保守区域主要集中在 Ｎ 端ꎬ 而非保
守序列主要集中于 Ｃ 端ꎬ 且 Ｃ 端富含酸性氨基酸
的转录激活区ꎻ 在 Ｒ２亚结构域中含有 ３ 个保守的
色氨酸(Ｗ)残基ꎬ 分别间隔 １９ 个氨基酸ꎬ 在 Ｒ３
亚结构域中也含有 ３ 个保守的色氨酸(Ｗ)残基ꎬ
分别间隔 １８ 个氨基酸ꎬ 但在 Ｒ３ 亚结构域中第一
个色氨酸(Ｗ)被芳香族氨基酸中的苯丙氨酸(Ｆ)所
取代ꎬ 这与前人的研究结果一致ꎬ 说明这一结构形
成了该 ３个蛋白的 ＨＴＨ 构型和疏水核心ꎬ 且具有
结合的专一性和激活功能上的多样性ꎮ 另外ꎬ 对蛋
白磷酸化位点的预测发现ꎬ 柚 ＣｍＭＹＢ１５ 和柠檬
ＣｌＭＹＢ１５磷酸化位点基本一致ꎬ 与枳ＰｔＭＹＢ１５相
比存在少量差异ꎻ 三者的氨基酸序列比对有 １８ 处
位点存在差异ꎬ 是否由于这些氨基酸的差异而导致
蛋白磷酸化位点的变化ꎬ 进而影响蛋白的调控ꎬ 需
要进一步的研究来证实ꎮ
已有研究表明ꎬ 植物的 ＭＹＢ 转录因子基因参
与了植物对多种逆境胁迫的适应性反应ꎮ 例如:
ＧｈＭＹＢ１１３ 基因在干旱处理初期表达量无明显变
化ꎬ 但在处理 １２ ｈ 后表达量随胁迫时间延长迅速
上升且显著高于对照ꎬ 表明干旱胁迫对 Ｇｈ￣
ＭＹＢ１１３ 的表达为正调控ꎬ 在高盐胁迫下 Ｇｈ￣
ＭＹＢ１１３基因表达量随胁迫时间的延长迅速下降ꎬ
处理 ２４ ｈ 时达到最低值ꎬ 表明高盐胁迫对该基因
的表达为负调控[２１]ꎻ ＺｍＭＹＢ００２ 基因在玉米种
子、 根和叶子中表达量较高ꎬ 且干旱和盐胁迫均能
够诱导 ＺｍＭＹＢ００２基因的显著表达[２２]ꎻ 从小麦品
种“茶淀红”中克隆的抗盐基因 ＴａＭＹＢ３２在高盐胁
迫下能迅速诱导表达ꎬ 且 １ ｈ 时表达量达到最高ꎬ
为处理前的 ６ 倍以上[２３]ꎻ 从葡萄砧木“１１０３Ｐ”筛
选获得的 ４ 个受高盐强烈诱导的 Ｒ２Ｒ３￣ＭＹＢ 基因
中ꎬ ＶｖＭＹＢ１１２和 ＶｖＭＹＢ１５也能被干旱和低温诱
导ꎬ 而 ＶｖＭＹＢ１０７和 ＶｖＭＹＢ８７对干旱和低温不敏
感或受其抑制[２４]ꎻ 从甜橙中分离鉴定出的 １０１ 个
Ｒ２Ｒ３￣ＭＹＢ基因中ꎬ 有 ９５ 个在多个组织部位存在
并高量表达ꎬ 另外大部分 Ｒ２Ｒ３￣ＭＹＢ基因对干旱、
高盐、 ＡＢＡ、 茉莉酸和低温等 ５种逆境胁迫中的一
种或多种具有响应作用[２５]ꎮ 本研究使用实时定量
ＰＣＲ的方法检测到柚、 枳和柠檬在受到低温、 干
旱、 高盐和 ＡＢＡ ４种胁迫时 ＭＹＢ１５基因在叶片中
均有表达ꎬ 但其表达模式存在差异ꎮ 其中ꎬ 柚
ＣｍＭＹＢ１５对 ４种逆境胁迫均敏感ꎬ 响应速度较为
迅速ꎬ 表达量随胁迫时间的延长又迅速下降ꎬ 变化
幅度较大ꎻ 柠檬 ＣｌＭＹＢ１５ 对低温、 干旱和高盐 ３
种胁迫较敏感ꎬ 虽然响应的速度迟缓ꎬ 但随时间推
移能强烈诱导表达(尤其是低温和干旱胁迫)ꎻ 枳
ＰｔＭＹＢ１５ 对 ＡＢＡ、 低温和干旱 ３ 种胁迫响应都不
敏感ꎬ 表达量均无明显变化(特别是低温诱导)ꎮ
我们认为这可能与植物自身对环境的耐受性差异有
６１８ 植 物 科 学 学 报 第 ３３卷　
关ꎮ 枳属于抗逆性较强的品种ꎬ 抗性强于柚和柠
檬ꎬ 因此枳中 ＭＹＢ１５基因对 ４℃低温诱导不敏感ꎬ
对其它逆境胁迫的响应也不如柚和柠檬敏感ꎮ
综上所述ꎬ ＣｍＭＹＢ１５、 ＰｔＭＹＢ１５ 和 ＣｌＭＹＢ１５
基因是植物 ＭＹＢ转录因子家族的成员ꎬ 且在柑橘
抵御非生物胁迫过程中能被诱导表达ꎮ 由于本实验
中使用的是特异引物ꎬ 结果只代表 ３个基因的等位
基因的表达情况ꎬ 并不能直接说明该 ３个基因的总
体表达水平ꎬ 因此还有待从 ３个基因的蛋白功能和
上游启动子方面进行深入研究ꎬ 以获得 ＭＹＢ１５ 基
因在柑橘中表达调控的更多信息ꎮ
参考文献:
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[ ４ ] 　 Ｃｈｅｎ ＹＨꎬ Ｙａｎｇ ＸＹꎬ Ｈｅ Ｋꎬ Ｌｉｕ ＭＨ. Ｔｈｅ ＭＹＢ ｔｒａｎ￣
ｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ ｏｆ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ: ｅｘ￣
ｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ
ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｉｃｅ ＭＹＢ ｆａｍｉｌｙ[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌꎬ ２００６ꎬ
６０(１): １０７－１２４.
[ ５ ] 　 Ｍａｒｔｉｎ Ｃꎬ Ｐａｚ￣Ａｒｅｓ Ｊ. ＭＹＢ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ
ｐｌａｎｔｓ[Ｊ] . Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔꎬ １９９７ꎬ １３(２): ６７－７３.
[ ６ ] 　 Ｄｕｂｏｓ Ｃꎬ Ｓｔｒａｃｋｅ Ｒꎬ Ｇｒｏｔｅｗｏｌｄ Ｅꎬ Ｗｅｉｓｓｈａａｒ Ｂꎬ
Ｍａｒｔｉｎ Ｃꎬ Ｌｅｐｉｎｉｅｃ Ｌ. ＭＹＢ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ
Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ[Ｊ] . Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉꎬ ２０１０ꎬ １５(１０):
５７３－５８１.
[ ７ ] 　 Ｍａｔｕｓ ＪＴꎬ Ａｑｕｅａ Ｆꎬ Ａｒｃｅ￣Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｐ. Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ
ｔｈｅ ｇｒａｐｅ ＭＹＢ Ｒ２Ｒ３ ｓｕｂｆａｍｉｌｙ ｒｅｖｅａｌｓ ｅｘｐａｎｄｅｄ
ｗｉｎｅ ｑｕａｌｉｔｙ￣ｒｅｌａｔｅｄ ｃｌａｄｅｓ ａｎｄ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｇｅｎｅ
ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ａｃｒｏｓｓ Ｖｉｔｉｓ ａｎｄ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
ｇｅｎｏｍｅｓ[Ｊ] . ＢＭＣ Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌꎬ ２００８ꎬ ８(１): ８３－
９８.
[ ８ ] 　 Ｓｕｏ ＪＦꎬ Ｌｉａｎｇ ＸＥꎬ Ｌｉ Ｐꎬ Ｚｈａｎｇ ＹＳꎬ Ｘｕｅ ＹＢ. Ｉｄｅｎ￣
ｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＧｈＭＹＢ１０９ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ａ Ｒ２Ｒ３ ＭＹＢ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｔｈａｔ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｉｎ ｆｉ￣
ｂｅｒ ｉｎｉｔｉａｌｓ ａｎｄ ｅｌｏｎｇａｔｉｎｇ ｆｉｂｅｒｓ ｏｆ ｃｏｔｔｏｎ (Ｇｏｓ￣
ｓｙｐｉｕｍ ｈｉｒｓｕｔｕｍ Ｌ.)[Ｊ] . ＢＢＡ￣Ｇｅｎｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎꎬ ２００３ꎬ １６３０(１): ２５－３４.
[ ９ ] 　 曹忠慧. 苹果 ＭＹＢ转录因子家族的生物信息学分析
及 ＭｄＭＹＢ１２１和 ＭｄＳＩＭＹＢ１ 在非生物胁迫响应中
的作用[Ｄ] . 泰安: 山东农业大学ꎬ ２０１３: ２６.
[１０] 　 胡雪虹ꎬ 陈天子ꎬ 杨郁文ꎬ 张保龙ꎬ 王荣富. 棉花
ＭＹＢ 转录因子基因 ＧｂＭＹＢ５ 的克隆及表达分析
[Ｊ] . 江苏农业学报ꎬ ２０１２ꎬ ２８(１): １２－１７.
[１１] 　 Ｌｉａｏ Ｙꎬ Ｚｏｕ ＨＦꎬ Ｗａｎｇ ＨＷꎬ Ｚｈａｎｇ ＷＫꎬ Ｍａ Ｂꎬ
Ｚｈａｎｇ ＪＳꎬ Ｃｈｅｎ ＳＹ. Ｓｏｙｂｅａｎ ＧｍＭＹＢ７６ꎬ Ｇｍ￣
ＭＹＢ９２ꎬ ａｎｄ ＧｍＭＹＢ１７７ ｇｅｎｅｓ ｃｏｎｆｅｒ ｓｔｒｅｓｓ ｔｏｌ￣
ｅｒａｎｃｅ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｐｌａｎｔｓ[ Ｊ] . Ｃｅｌｌ
Ｒｅｓꎬ ２００８ꎬ １８(１０): １０４７－１０６０.
[１２] 　 Ｌｅｅ ＴＧꎬ Ｊａｎｇ ＣＳꎬ Ｋｉｍ ＪＹꎬ Ｋｉｍ ＤＳꎬ Ｐａｒｋ ＪＨꎬ
Ｋｉｍ ＤＹꎬ Ｓｅｏ ＹＷ. Ａ ＭＹＢ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ
(ＴａＭｙｂ１) ｆｒｏｍ ｗｈｅａｔ ｒｏｏｔｓ ｉｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｄｕｒｉｎｇ
ｈｙｐｏｘｉａ: ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｔｈｅ ｏｘｙｇｅｎ ｃｏｎｃｅｎ￣
ｔｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｒｏｏｔ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ａｎｄ ａｂｉｏｔｉｃ ｓｔｒｅｓｓｅｓ[Ｊ] .
Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｐｌａｎｔａｒｕｍꎬ ２００７ꎬ １２９(２): ３７５－３８５.
[１３] 　 Ｄｉｎｇ ＺＨꎬ Ｌｉ ＳＭꎬ Ａｎ ＸＬꎬ Ｌｉｕ Ｘꎬ Ｑｉｎ ＨＪꎬ Ｗａｎｇ
ＤＷ. Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＹＢ１５ ｃｏｎｆｅｒｓ ｅｎ￣
ｈａｎｃｅｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ａｂｓｃｉｓｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｄ
ｄｒｏｕｇｈｔ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ [ Ｊ] . Ｊ
Ｇｅｎｅｔ Ｇｅｎｏｍｉｃｓꎬ ２００９ꎬ ３６(１): １７－２９.
[１４] 　 Ｃｕｌｔｒｏｎｅ Ａꎬ Ｃｏｔｒｏｎｅｏ ＰＳꎬ Ｒｅｃｕｐｅｒｏ ＧＲ. Ｃｌｏｎｉｎｇ
ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒ２Ｒ３￣ＭＹＢ ａｎｄ
ｂＨＬＨ￣ＭＹＣ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｆｒｏｍ Ｃｉｔｒｕｓ ｓｉｎｅｎ￣
ｓｉｓ[Ｊ] . Ｔｒｅｅ Ｇｅｎｅｔ Ｇｅｎｏｍｅｓꎬ ２０１０ꎬ ６(１): １０１－
１１２.
[１５] 　 Ｌｉ ＺＴꎬ Ｇｍｉｔｔｅｒ ＦＧꎬ Ｇｒｏｓｓｅｒ ＪＷꎬ Ｃｈｅｎ ＣＸꎬ Ｄｅｎｎｉｓ
ＪＧ. Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ａｎｔｈｏ￣
ｃｙａｎｉｎ￣ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ＭＹＢＡ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ ｉｎ Ｃｉｔｒｕｓ[Ｊ] .
Ｔｒｅｅ Ｇｅｎｅｔ Ｇｅｎｏｍｅｓꎬ ２０１２ꎬ ８(４): ６７５－６８５.
[１６] 　 Ｈｏｕ ＸＪꎬ Ｌｉ ＳＢꎬ Ｌｉｕ ＳＲꎬ Ｈｕ ＣＪꎬ Ｚｈａｎｇ ＪＺ. Ｇｅ￣
ｎｏｍｅ￣ｗｉｄｅ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ａｎｄ ｅｘ￣
ｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ ｃｉｔｒｕｓ ＭＹＢ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ
ｆａｍｉｌｉｅｓ ｉｎ ｓｗｅｅｔ ｏｒａｎｇｅ[ Ｊ] . ＰｌｏＳ Ｏｎｅꎬ ２０１４ꎬ ９
(１１): ｅ１１２３７５.
[１７] 　 黄小三. 枳抗逆基因的克隆及功能鉴定[Ｄ] . 武汉:
华中农业大学ꎬ ２０１１: ２７.
[１８] 　 朱丽丽. 柑橘应答低温胁迫的生理生化变化[Ｄ] . 武
汉: 华中农业大学ꎬ ２００８.
[１９] 　 Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ＪＬꎬ Ｈｅａｒｄ Ｊꎬ Ｍａｒｔｉｎ Ｇꎬ Ｒｅｕｂｅｒ Ｌꎬ
７１８　 第 ６期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 郭文芳等: 柑橘 ＭＹＢ１５基因的克隆与表达分析
Ｊｉａｎｇ Ｃꎬ Ｋｅｄｄｉｅ Ｊꎬ Ａｄａｍ Ｌꎬ Ｐｉｎｅｄａ Ｏꎬ Ｒａｔｃｌｉｆｆｅ
ＯＪꎬ Ｓａｍａｈａ ＲＲꎬ Ｃｒｅｅｌｍａｎ Ｒꎬ Ｐｉｌｇｒｉｍ Ｍꎬ Ｂｒｏｕｎ
Ｐꎬ Ｚｈａｎｇ ＪＺꎬ Ｇｈａｎｄｅｈａｒｉ Ｄꎬ Ｓｈｅｒｍａｎ ＢＫꎬ Ｙｕ Ｇ.
Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ: ｇｅｎｏｍｅ￣ｗｉｄｅ
ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｍｏｎｇ ｅｕｋａｒｙｏｔｅｓ [ Ｊ ] .
Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ ２０００ꎬ ２９０(５４９９): ２１０５－２１１０.
[２０] 　 刘蕾ꎬ 杜海ꎬ 唐晓凤ꎬ 吴燕民ꎬ 黄玉碧ꎬ 唐益雄.
ＭＹＢ转录因子在植物抗逆胁迫中的作用及其分子机
理[Ｊ] . 遗传ꎬ ２００８ꎬ ３０(１０): １２６５－１２７１.
[２１] 　 王雅琴ꎬ 石淼ꎬ 张新宇ꎬ 刘永昌ꎬ 薛飞ꎬ 孙杰ꎬ 李艳
军. 棉花 ＧｈＭＹＢ１１３基因的克隆与表达分析[Ｊ] . 西
北植物学报ꎬ ２０１３ꎬ ３３(５): ８７８－８８４.
[２２] 　 戴毅ꎬ 陆怡ꎬ 陈云ꎬ 高勇. 玉米 ＭＹＢ 家族转录因子
基因 ＺｍＭＹＢ００２的克隆及表达分析[Ｊ] . 扬州大学
学报: 农业与生命科学版ꎬ ２０１３ꎬ ３４(１): ６０－６３.
[２３] 　 张立超ꎬ 赵光耀ꎬ 贾继增ꎬ 孔秀英. 小麦盐胁迫相关
基因 ＴａＭＹＢ３２的克隆与分析[Ｊ] . 作物学报ꎬ ２００９ꎬ
３５(７): １１８１－１１８７.
[２４] 　 王春荣ꎬ 王庆杰ꎬ 李晓玲ꎬ 姚玉新ꎬ 郝玉金. 葡萄中
盐诱导的 Ｒ２Ｒ３￣ＭＹＢ 基因的筛选与表达分析[ Ｊ] .
园艺学报ꎬ ２０１４ꎬ ４３(３): ５２９－５３５.
[２５] 　 Ｘｉｅ Ｒꎬ Ｌｉ Ｙꎬ Ｈｅ Ｓꎬ Ｚｈｅｎｇ Ｙꎬ Ｌｖ Ｑ. Ｇｅｎｏｍｅ￣ｗｉｄｅ
ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃｉｔｒｕｓ Ｒ２Ｒ３ ＭＹＢ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｓｐａｔｉ￣
ｏｔｅｍｐｏｒａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｕｎｄｅｒ ｓｔｒｅｓｓｅｓ ａｎｄ ｈｏｒｍｏｎｅ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ[Ｊ] . ＰｌｏＳ Ｏｎｅꎬ ２０１４ꎬ ９(１２): ｅ１１３９７１.
(责任编辑: 张 平)
８１８ 植 物 科 学 学 报 第 ３３卷