全 文 ：武汉植物学研究 2008，26(2)：183～185
Journa／of Wuhan Bo衄ntc越 Research
三叶木通(Akebia trifoliata)果实乙醇提取物
对酪氨酸酶体外活性的影响
彭涤非 ，钟彩虹 ，周海燕 ，曾斌 ，王中炎
(1．湖南省园艺研究所，长沙 410125；2．中国科学院武汉植物园，武汉 43074；
3．湖南农业大学生化与发酵工程实验室，长沙 410128)
摘 要 ：以人工栽培条件下三叶木通(Akebia trifoliata)果实为试材，用 80％乙醇分别提取果皮、果肉、种子中的有
效成分 ，经离心过滤后，于旋转蒸发仪上减压蒸馏浓缩，再经真空干燥处理得到三叶木通乙醇提取物。以 L．DOPA
为底物 ，熊果苷作阳性对照，分析测定了该提取物对酪氨酸酶活性的抑制百分率。结果表明：不同部位的三叶木通
果实乙醇提取物对酪氨酸酶活性均有一定的抑制作用 ，其中果肉对酪氨酸酶活性的抑制作用最佳，中等浓度的果
肉乙醇提取物(200 g／mL)与 270 i~,／mL的熊果苷对酪氨酸酶活性的抑制率相当。
关键词：三叶木通；酪氨酸酶；美容
中图分类号：Q949．746．6；Q946 文献标识码：A 文章编号：1000．470X(2008)02．0183．03
The Inhibitory Efects in vitro of Ethanol Extracts from the Fruit
of Akebia trifoliata on the Tyrosinase Activity
PENG Di—Fei ，ZHONG Cai-Hong ，ZHOU Hai-Yan ，ZEN Bin ，WANG Zhong-Yan
(1． ，lⅡnHorticulturalResearchInstitute，Changsha 410125，China；2．WuhanBotanical Garden，The ChineseAcademy of＆ ， ，
Wuhan 43074，China；3．Biochemistry andFermenting Engineering Laboratory， M，lAgricultural University，Changsha 410128，China)
Abstract：Fruits of cultivated Akebia trifoliata were used as experimental materials and the active compo．
nents were extracted with 8O％ ethanol from periearp．flesh and seeds respectively．The ethanol extracts
were obtained by centrifuging and filtering，distilling and concentrating on revolving evaporation apparatus
at reduced pressure．and then vacuum drying．The inhibitory activities of these extracts on tyrosinase were
examined with L—DOPA as substrate and arbutin as positive contro1．The results showed that the extracts
from diferent parts of akebia fruit all had obvious inhibitory activity on tyrosinase，the strongest efects oe-
curred with flesh extract．Flesh extract at 200 g／mL had similar level of efects to arbutin at 270 g／mL
concentration．
Key words：Akebia trifoliata；Tyrosinase；Whitening
酪氨酸酶是黑色素生物合成途径中的主要限速
酶，其活性与某些色素障碍性皮肤病及面部黄褐斑
的产生有关，酪氨酸酶活性增高会产生黄褐斑等色
素沉着性疾病⋯。目前的皮肤美 白剂就是通过抑
制酪氨酸酶活性或者阻断酪氨酸生成黑色素的氧化
途径，从而减少黑色素的生成达到美白皮肤的效果。
它不仅要求美白效果好，而且要求安全无毒副作用，
一 般源自天然植物提取物，如原花色素、熊果苷、曲
酸及其衍生物、维生素 c及其衍生物，以及中草药
提取物如甘草黄酮等 ]。研究天然植物源酪氨酸
酶抑制剂，对于色素型皮肤病的治疗，增白美容化妆
品的研发及野生植物的综合利用有重要意义。
三叶木通[Akebia trifoliata(Thunb)Koidz]是木
通科木通属的一种野生果树，其植株为缠绕木质藤
本，在我国南部、长江流域和西北地区均有分布。其
果实浓甜，果肉白色晶莹，风味独特，具有保健作用。
其种子、茎、叶、根亦可人药，在公元 8世纪左右陈土
良所著的《食性草本》中就有记载，民间多用其治疗
小便赤涩、妇女经闭、乳汁不通等疾病 。木通属
植物化学成分的研究报道多集中在三萜及其皂苷类
化合物，药理活性多集中在其利尿、抗肿瘤、抗菌和
毒性研究方面 J，尚未见三叶木通果实美白祛斑
功能的研究报道。由于三叶木通果实具有 良好的
食用品质和丰富的营养，近年来，国内相关单位正
收稿 13期：2007—08—14，修回13期 ：207·ll·l3。
基金项 目：湖南省自然科学基金资助项目(05JJ3030)；湖南省农业科学院重点学科建设项目资助。
作者简介：彭涤非(1966一)，男，汉族，湖南宁乡人，硕士，副研究员，主要从事果树生理生态和新水果研究。
维普资讯 http://www.cqvip.com
武 汉 植 物 学 研 究 第 26卷
在对三叶木通进行系统的驯化利用研究，以期开发
成新型水果 J。研究中，我们意外发现，食用其果
实 3年后，面部皮肤明显变白，其果实具有明显的祛
斑作用，但还缺乏科学论证，本研究以人工栽培条件
下三叶木通果实为试材，较系统地研究了其对酪氨
酸酶活性的抑制作用，以期为其美白、祛斑功效及开
发利用提供理论依据。
酪氨酸酶活性抑制率计算公式为：
抑制率： 旦 二 ×100％
。
式中，A为未加提取物但加酪氨酸酶时的吸光
值，B为未加提取物且未加酪氨酸酶的吸光值，C为
加提取物并加酪氨酸酶的吸光值，D为加提取物而
未加酪氨酸酶的吸光值。
1 材料和方法 2 结果与分析
1．1 材料
供试材料采自湖南省园艺研究所木通试验园，
为人工驯化第三代三叶木通 (Akebia trifoliata)优株
所结果实。
试剂：L—DOPA、蘑菇酪氨酸酶为 Sigma公司产
品。磷酸二氢钾、磷酸氢二钠为市售分析纯。
仪器：UV1600紫外可见光分光光度计，北京瑞
丽分析仪器公司生产。
1．2 方法
1．2．1 提取物的制备
(1)果皮提取物：三叶木通果实称重后，分离果
皮，称其重量并切碎，匀浆，加入 80％的乙醇浸泡两
次，每次浸泡过夜，用纱布粗滤，然后在4~C、3000 r／
min的条件下离心10 min，取上清液。合并提取液，
备用。
(2)果肉提取物：将果实剥去种子，果肉称重后
匀浆，加入80％的乙醇浸泡两次，每次浸泡过夜，用
纱布粗滤，然后在 4~C，3000 r／min的条件下离心
10 min，取上清液。合并提取液，备用。
(3)种子提取物：种子吹干，粉碎，加入80％的
乙醇浸泡两次，每次浸泡过夜，用纱布粗滤，然后在
4~C，3000 r／min的条件下离心 10 min，取上清液。
合并提取液，备用。
取上述(1)、(2)、(3)3种提取液，分别在旋转
蒸发仪上减压蒸馏(30～50~C)至稠膏状，真空干燥
处理(60～70~C)，得到的产物置于冰箱冷藏。
1．2．2 酪氨酸酶活性抑制率的测定
主要参照文献[7，8]的方法并略作修改：分别
取果皮、果肉和种子的提取物样品各 5、2、0．5 mg
加入0．067 mol／L，pH 6．8的磷酸盐缓冲液溶解，定
容至 10 mL，在25~C下温育 10 min。取不同浓度的
样品溶液 0．5 mL，然后加入 135 U／mL的蘑菇酪氨
酸酶 0．5 mL和0．03％ L—DOPA溶液 0．5 mL，25oC
下温育 5 min，立即在475 nm处测吸光值。熊果苷
作阳性对照，浓度为 0．1、0．5、1．0、5．0 mmol／L。
2．1 活性成分提取率
用上述方法提取三叶木通果实不同部位的活性
成分，其提取率以果肉为最高，达到30．7％，其次为
果皮 5．2％，种子最低 3．0％(见表 1)。
表 1 样品活性成分提取率
Table 1 The crude extracting rates of active components
from Akebia trifoliata fruit
2．2 对酪氨酸酶活性的抑制作用
三叶木通果实不同部位的乙醇提取物对酪氨酸
酶活性均有一定的抑制作用(见表 2)，其中尤以果
肉对酪氨酸酶活性有极佳的抑制效果，200 g／mL
的果 肉提取 物对 酪 氨 酸 酶 活 性 的抑 制 率 达
54．60％，500 g／mL的果肉提取物的抑制效果达
77．64％ 。
熊果苷(对苯二酚葡萄糖苷)，是一种从砂梨
[Pyrus pyrifolia(Burm．f．)Nakai]、虎耳草(Saxifra—
ga stolonifem Curt．)等植物中提取的化学成分，它在
不影响细胞增殖的情况下可以有效减少黑色素的形
成，是一种被认为副作用很低的美白祛斑剂，有 21
世纪最佳美白剂之称，本研究中用作阳性对照。在
本实验条件下，不同浓度熊果苷对酪氨酸酶活性的
抑制率分别是 0．1 mmol／L为 21．4％，0．5 mmol／L
为49．57％，1．0 mmol／L(270 g／mL)为 59．70％，
5．0 mmol／L为89．5％。
三叶木通果实对酪氨酸酶活性的抑制率与熊果
苷对酪氨酸酶活性的抑制率虽然没有绝对意义上的
维普资讯 http://www.cqvip.com
第 2期 彭涤非等：三叶木通(Ak6 trifoliata)果实乙醇提取物对酪氨酸酶体外活性的影响 185
注：A、B、C、D分别代表不同反应混合液在475 nm处的吸光值。其中，A为未加提取物但加酪氨酸酶时的吸光值；B为未加提取物且未加
酪氨酸酶的吸光值 ；C为加提取物并加酪氨酸酶的吸光值；D为加提取物而未加酪氨酸酶的吸光值。
表3 熊果苷和三叶木通果肉提取物对酪氨酸酶活性的抑制率比较
Table 3 The comparison of inhibitory rates on tyrosinase activity between arbutin and the extract
fromflesh ofAkebia trifoliata
可比性，但从上述结果仍可大致推断，三叶木通果肉
对酪氨酸酶的抑制效果与熊果苷相当：以中等浓度
(200 g／mL)为例，三叶木通果肉提取物的抑制率
为54．60％，而 1．0 mmol／L(270 ．¨g／mL)熊果苷的
抑制率为59．7O％。
根据成组数据(两样本容量不等)的t检验 ，计
算两样本的均数差异标准差：
l2
= 22．79，
自由度 df=／7,1+／7,2—2=4+3—2=5，查 t表，
￡0_05=2．57，现 t=O．12远小于 t0．05=2．57，说明三叶
木通果肉提取物对酪氨酸酶活性的抑制率与熊果苷
对酪氨酸酶活性的抑制率无显著差异，进一步验证
了上述结果(见表 3)。
3 结论
无论从活性成分提取率还是抑制效果来看，三
叶木通果实中抑制酪氨酸酶的活性成分都主要存在
于果肉当中，而果肉正是三叶木通作为新水果开发
的可食部分，三叶木通具有开发出美白保健产品的
潜力，可望开发成一种新型美容水果。
三叶木通果实对皮肤黑素细胞增殖的抑制效果
及活性成分的鉴定尚需进一步研究。
参考文献：
[1] 邹先伟，蒋志胜．植物源酪氨酸酶抑制剂研究进展[J]．中草
药，2004，35(6)：702—705．
[2] 王白强，曾晓军．酪氨酸酶活性的抑制研究及皮肤美白化妆品
的研制[J]．福建轻纺，2002(7)：l一6．
【3] 高黎明，何仰清，魏小梅，同海燕．木通属植物化学成分及药理
活性研究进展[J]．西北师范大学学报(自然科学版)，2004，
40(1)：108—114．
[4] 高慧敏，王智民．木通属药用植物研究进展[J]．中国中药杂
志，2006，31(1)：10一l4．
[5] 梁永红．三叶木通资源和质量分析研究[D]．北京：北京中医
药大学，2006．5．
[6] Wang Z Y，Zhong C H，Bu F W，Peng D F，Peng J C，Yuan F R．
A 一 a valuable wild fruit under domestication[J]．Agricultu-
ral Science and Technology，2005，6(2)：12—17．
[7] 任冰如，吴菊兰，汪洪江，梁呈元，李维林，张涵庆．测定24种
植物的提取物对酪氨酸酶活性的影响[J]．中国美容医学，
2004，13(3)：287—289．
『8] Lee K T，Kim B J，Kim J H，Heo M Y，Kim H P．Biological
screening of 100 plant extracts f0r cosmetic use(I)：inhibitory
activities of tyrosinase and DOPA auto-．oxidation[J]．International
Journal ofCosmetic Science，1997，19(6)：291—298．
维普资讯 http://www.cqvip.com