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Techniques and Methods for the Practical Use of Xylem Pressure Probes

植物木质部压力探针测定技术与方法



全 文 :植物科学学报  2013ꎬ 31(6): 603~ 608
Plant Science Journal
    DOI:10􀆰 3724 / SP􀆰 J􀆰 1142􀆰 2013􀆰 60603
植物木质部压力探针测定技术与方法
柏新富ꎬ 朱建军
(鲁东大学生命科学学院ꎬ 山东烟台 264025)
摘  要: 木质部压力探针技术是目前直接测定植物木质部导管负压的唯一手段ꎮ 在结构上ꎬ 木质部压力探针测定
系统由精密操作装置、 压力探针系统和信号采集-传输-显示系统三大部分组成ꎮ 其测定原理是将毛细管探针刺
入木质部导管ꎬ 通过传导介质将木质部导管负压传至压力传感器ꎬ 压力传感器感应压力并将压力信号输出ꎮ 本
文从玻璃毛细管探针的制作、 去气泡水的制备以及压力探针的校准、 安装、 测定等方面详细介绍了木质部压力
探针的使用方法和注意事项ꎮ
关键词: 木质部ꎻ 压力探针ꎻ 结构组成ꎻ 测定方法
中图分类号: Q945          文献标识码: A          文章编号: 2095 ̄0837(2013)06 ̄0603 ̄06
      收稿日期: 2013 ̄08 ̄08ꎬ 修回日期: 2013 ̄10 ̄16ꎮ
  基金项目: 山东省高等学校科技计划项目(J09LC06)ꎮ
  作者简介: 柏新富(1964-)ꎬ 男ꎬ 教授ꎬ 主要研究方向为植物生理生态学(E ̄mail: bxf64@163􀆰 com)ꎮ
Techniques and Methods for the Practical Use of Xylem Pressure Probes
BAI Xin ̄Fuꎬ ZHU Jian ̄Jun
(College of Life Sciencesꎬ Ludong Universityꎬ Yantaiꎬ Shandong 264025ꎬ China)
Abstract: Xylem pressure probes are the only technique used currently to measure plant
xylem pressure directly. This technique includes devices for accurate positioningꎬ pressure
probe systems and signal acquisition. Negative pressure of the xylem vessels is transmitted to
the pressure sensor by conduction medium when the capillary probe punctures the xylem
vesselsꎬ with the pressure then detected and transmitted to the data acquisition system. In this
paperꎬ the use and precautions of xylem pressure probes are described in detailꎬ including
the preparation of glass capillary probesꎬ degassed waterꎬ pressure calibrationꎬ installationꎬ
and measurement of pressure probes.
Key words: Xylemꎻ Pressure probeꎻ Structure and compositionꎻ Measurement methods
    水分是植物生命活动所必需的ꎬ 轻度的水分缺
乏就能引起植物的剧烈生理变化ꎬ 从而降低植物的
光合作用和生产力ꎮ 因此准确测定植物的水分状况
一直是植物学和农林科学的一个重要研究方向ꎮ 目
前ꎬ 科学研究中测定植物组织水势主要有三种设备
和方法: 一是压力室ꎬ 应用较多ꎬ 但必须要将待测
植物一次性切断ꎬ 因而不能连续测定植物在各种条
件下的水势变化[1ꎬ2]ꎻ 二是以热电偶测温为基础的
蒸汽压或冰点渗透压计ꎬ 具有很高的灵敏度[3ꎬ4]ꎬ
与特殊的探头连接后可以进行活体连续测定ꎬ 但无
法进行实时测定ꎻ 三是植物木质部压力探针(Xy ̄
lem pressure probe)ꎬ 能够连续准确地测定活体
植物体内水分输导组织中的压力ꎬ 是目前世界上最
先进的植物水分状况测定技术和唯一可以直接、 实
时测定木质部负压的方法[5ꎬ6]ꎮ 但由于植物木质部
导管中的水溶液经常处在大大低于真空的负压力状
态下(可达-4MPa 或更低[7ꎬ8]ꎬ 这也是植物吸收水
分的最主要动力)ꎬ 处于容易空化的亚稳态ꎬ 常常
会造成压力探针系统的空化而无法测定ꎬ 因此木质
部压力探针测定的难度很高且需要精细的操
作[9ꎬ10]ꎮ 目前ꎬ 在国内已有压力探针技术的相关综
述性介绍[11-13]ꎬ 本实验室也使用木质部压力探针
技术进行了成功的测定[14-16]ꎮ 本文结合我们自制
的木质部压力探针系统和使用经验就其结构组成、
测定原理、 测定技术以及注意事项进行介绍ꎬ 以促
使该项技术在植物学和农林科学研究中得到更广泛
的应用ꎮ
1  木质部压力探针的测定原理
木质部压力探针技术是目前直接、 实时测定木
质部导管负压的唯一手段[5ꎬ13]ꎮ 其基本原理和方法
是将尖端直径 10~20 μm的毛细管探针刺入木质部
导管ꎬ 木质部导管的负压(低于大气压)通过水介
质传至与毛细管探针相连的压力传感器ꎬ 压力传感
器感应压力并将压力信号转换成电信号输出ꎬ 再经
过信号放大、 转换即可测得木质部导管中负压力的
大小ꎮ
2  木质部压力探针测定系统的结构组成
植物木质部压力探针测定系统由精密操作装置
(显微操作器)、 压力探针系统和信号采集-传输-
显示系统三大部分组成ꎮ
2􀆰 1  精密操作装置(显微操作器)
精密操作装置是植物压力探针系统的关键部
件ꎬ 由体视显微镜和精密操作器两部分构成ꎬ 其定
位准确性和推进精度决定了测定的难易程度ꎮ 精密
操作器由升降台、 角位台、 精密推进器等部件构成
(图 1)ꎬ 其推进精度最小可达 0􀆰 5 μmꎮ
2􀆰 2  压力探针系统
由玻璃毛细管探针、 压力传感器和各种密封、
紧固件组成的压力探针(图 2)是植物木质部压力探
针系统的核心ꎬ 它的灵敏度和抗空化能力是该系统
能否应用的关键ꎮ 本文介绍的木质部压力探针系统
以美国 Honeywell公司生产的高灵敏度压力传感器
(灵敏度可达 10-6MPa)为基础ꎬ 选用亲水材料替
代压力传感器与传导介质接触的塑料和橡胶部件ꎬ
同时对外部密封、 紧固件进行亲水化处理ꎬ 以提高
其抗空化能力ꎮ
2􀆰 3  信号采集、 传输与显示系统
数据采集、 传输和显示系统结构框图如图 3所
示ꎮ 整个模块分测量单元、 单片机、 电源转换器、
USB接口和计算机等 5 个部分ꎬ 实现了压力传感
图 1  精密操作器结构示意图
Fig􀆰 1  Schematic diagram of the precision operator
图 2  压力探针结构示意图
Fig􀆰 2  Schematic diagram of the pressure probe system
406 植 物 科 学 学 报 第 31卷 
1. 测量单元ꎬ 包括环境监测单元 11、 测温单元 12、 测压单元 13和信号放大单元 14ꎬ 为数据采集、 记录和放大的核
心部分ꎻ 2. 单片机ꎬ 接受、 转换、 暂存和传输信号ꎻ 3. DC ̄DC 电源转换器ꎬ 为测量单元提供稳定的电源供应ꎻ 4.
USB接口单元ꎬ 包括双向数据连接的 USB接口 42和 USB接口转换电路 41ꎬ 用于操作控制、 信号采集与显示之间的
连接ꎻ 5. 计算机ꎬ 操作控制、 调节与信号显示ꎮ
1. Measurement setupꎬ including environmental monitoring unit 11ꎬ temperature measuring unit 12ꎬ pressure mea
suring unit 13 and signal magnifying unit 14 for data acquisitionꎬ recording and signal magnification. 2. Single chipꎬ
for signal receivingꎬ transformationꎬ temporary storage and transduction. 3. DC ̄DC converter to power measurement
setup. 4. USB interfaceꎬ including bidirectional USB data connection interface 42 and interface transform circuit 41ꎬ
for connections between the monitorꎬ signal acquisition and display. 5. Computer monitorꎬ regulation and signal dis ̄
play.
图 3  信号采集、 传输系统结构框图
Fig􀆰 3  Block diagram of the signal acquisition
器供电以及植物木质部压力和环境温湿度等的同步
测定、 记录、 转换与传输ꎮ
具体工作流程为: USB接口 42与计算机 5 双
向连接ꎬ USB 接口 42 将计算机提供的电源通过
DC ̄DC电源转换器 3 分别传输至测量单元 1 中的
每个部件和单片机 2(DC ̄DC电源转换器 3可以将
固定的电压转换成为测量单元 1中的每个部件和单
片机 2所需的不同电压)ꎬ 测量单元 1 中的每个部
件将检测到的信号传输至单片机 2(测温单元 12和
测压单元 13分别将检测到的信号通过一个仪表放
大器 14放大后传输至单片机 2ꎬ 环境检测单元 11
检测环境中的温度和湿度并将检测到的信号传输至
单片机 2ꎻ 测压单元 13 测量植物体内水的压力ꎬ
将压力转换为电压信号ꎬ 并将电压信号通过仪表放
大器 14 传输至单片机 2)ꎬ 单片机 2 与 USB 接口
单元 4中的 USB接口转换电路 41 双向数据连接ꎮ
测量单元 1的各个部件检测被测植物体木质部导管
内水的压力、 被测植物体的自身温度、 环境温度、
环境湿度等信号并放大ꎬ 继而将放大后的信号传输
至单片机 2ꎬ 单片机 2接收测量单元 1传输过来的
信号ꎬ 将信号转换为数字数据并存储ꎬ 进一步将数
字数据依次通过 USB接口单元 4中的 USB接口转
换电路 41和 USB 接口 42 传输至计算机 5 中ꎬ 计
算机 5将数据显示出来ꎮ
3  测定步骤及注意事项
3􀆰 1  玻璃毛细管探针的制作
取外径 1 mm、 内径 0􀆰 4~0􀆰 5 mmꎬ 长约 35 cm
的玻璃管ꎬ 用玻璃毛细管拉拔器制作尖端密封的玻
璃毛细管探针ꎮ 注意: ①玻璃毛细管探针尖端须是
密封的ꎬ 否则即为废品ꎻ ②玻璃管和制作完成的玻
璃毛细管探针必须防尘存放ꎬ 且在玻璃毛细管探针
存放、 拿取过程中绝对不能触碰尖端部分ꎬ 否则会
造成尖端的折断而失去使用价值ꎮ
3􀆰 2  去气泡水的制备
用去针头注射器吸取蒸馏水至注射器容积的三
分之二ꎬ 然后与真空泵相连ꎬ 开启真空泵抽气至水
中无气泡冒出为止ꎮ 注意: ①注射器必须用洗涤剂
506  第 6期                          柏新富等: 植物木质部压力探针测定技术与方法
清洗ꎬ 不能带有任何油渍ꎻ ②抽真空时注意不断敲
击注射器壁ꎬ 以促使水中的气泡排出ꎮ ③抽真空去
气泡的水需尽可能减少与空气的接触面ꎬ 最好现制
现用ꎬ 不能存放超过半天ꎬ 以防止空气的溶入ꎮ
3􀆰 3  测试材料的固定
木质部压力探针可以用于幼根和幼茎木质部压
力的测定ꎮ 不管是幼根还是幼茎均需将拟扎针部位
用橡皮筋固定ꎬ 使之保持不动ꎮ 如果测定对象是根
还应使整个根系浸没在营养液中ꎮ 需要注意的是ꎬ
固定材料时应柔缓ꎬ 不能造成测定对象的损伤或
折断ꎮ
3􀆰 4  信号采集、 传输和显示系统的启动
将压力传感器的输出端与信号采集、 传输和显
示模块相连ꎬ 并通过 USB 接口与电脑连接ꎬ 启动
信号采集、 传输和显示软件ꎬ 显示器上即出现实时
压力信号ꎮ
3􀆰 5  压力探针的校准
长时间没有使用或新更换压力传感器的探针均
需校准ꎮ 校准时先将压力传感器的开放端与大气连
通ꎬ 调节此时的平衡压力为 0 Paꎬ 再在压力传感
器的开放端加 100 kPa压力ꎬ 调节此时的平衡压力
为 100 kPaꎬ 至此压力探针的校准完成ꎮ
3􀆰 6  探针的安装
取一根尖端密封的玻璃毛细管探针ꎬ 在装有
去气泡水的注射器上安装外径小于玻璃毛细管内
径的细长不锈钢针头ꎬ 推压注射器使针头尖端出
水ꎬ 然后将针头伸入玻璃毛细管探针最前端ꎬ 一
边推压注射器一边将针头向外抽ꎬ 使玻璃毛细管
探针内部充满去气泡水ꎮ 再在装有去气泡水的注
射器上安装外径小于玻璃毛细管内径的细长软质
针头(可用移液器枪头拉制)ꎬ 将软质针头伸入压
力传感器的开放端ꎬ 推压注射器使压力传感器的
开放端注满去气泡水ꎬ 然后用紧固件将充满去气
泡水的玻璃毛细管探针与压力传感器的开放端相
连ꎬ 并用力拧紧ꎬ 并将安装好的压力探针固定在
精密定位推进器的探针架上ꎮ 注意: ①玻璃毛细
管探针和压力传感器内部及开放端均不能留有气
泡ꎻ ②玻璃毛细管探针和压力传感器开放端相连
接时要保持两个连接面均有水层ꎬ 以防止空气进
入探针系统ꎻ ③玻璃毛细管探针与压力传感器连
接后拧紧ꎬ 此时压力传感器传输出的压力需达到
700 kPa以上(在显示器上显示)ꎬ 且能够保持不
降低ꎬ 如果压力逐渐降低ꎬ 则说明整个压力探针
系统漏气ꎬ 不能使用ꎮ
3􀆰 7  探针尖端的破除与测定
调节精密操作器和体视显微镜使探针的尖端在
体视显微镜的视野内清晰可见ꎬ 用精密操作器调节
探针使其尖端轻触视野中的任何硬物ꎬ 探针尖端即
折断ꎬ 此时压力探针系统内部与大气连通ꎬ 显示的
平衡压力为 0ꎮ 再调节精密操作器和体视显微镜使
探针的尖端对准幼根或幼茎的测定部位ꎬ 然后改用
细调将探针尖端刺入幼根或幼茎ꎬ 并缓慢向前推
进ꎬ 直至刺入木质部导管ꎮ 一旦探针刺入木质部导
管ꎬ 输出的压力会迅速下降ꎬ 这是是否刺入木质部
导管的标志ꎮ 如果一次操作没有刺入木质部导管ꎬ
可将探针退出ꎬ 更换部位、 再重新操作ꎮ 注意: ①
破除探针尖端时须轻触硬物ꎬ 如果用力过大ꎬ 会使
探针尖端折断太长ꎬ 导致探针的尖端开口过大ꎬ 从
而无法刺入木质部导管ꎻ ②探针尖端刺入幼根或幼
茎时ꎬ 必须缓慢推进ꎬ 每次推进距离应控制在
20 μm以内ꎬ 否则容易直接刺穿导管而无法测定导
管内的压力ꎻ ③如果探针尖端刺入幼根或幼茎内部
时出现折断现象ꎬ 导致探针的尖端开口过大ꎬ 应退
出并更换探针ꎻ ④如果测定对象是幼根ꎬ 应将整个
根系浸入溶液中ꎮ
3􀆰 8  测定结果的记录与作图
系统软件能够自动记录压力变化的数据和图
像ꎬ 并将结果实时呈现在显示器上ꎬ 同时能够根据
设定要求自动将数据以 Excel格式保存ꎮ 将保存的
数据在 Excel、 Origin等软件中打开即可作出相应
的压力变化曲线(图 4)ꎮ 图 4中 a点以前为压力探
针尖端破除后的平衡压力ꎻ a点为探针刺入木质部
导管ꎬ 压力迅速下降ꎬ 并很快稳定不变ꎬ 此时的压
力即为玉米根系处于营养液中的木质部压力ꎻ b 点
是将根环境营养液更换为 100 mmol / L NaCl溶液ꎬ
压力又一次降低并很快稳定ꎬ 此时的压力即为玉米
根系处于 100 mmol / L NaCl溶液中的木质部压力ꎻ
c 点是根环境 100 mmol / L NaCl 溶液更换为
250 mmol / L NaCl溶液ꎬ 压力再次降低并很快稳
定ꎬ此时的压力即为玉米根系处于250mmol / L
606 植 物 科 学 学 报 第 31卷 
a. 压力探针在营养液中扎入根部木质部ꎻ b. 将根环境溶液更换为 100 mmol / L NaCl 溶液ꎻ c. 将根环境溶液更换为 250 mmol / L
NaCl溶液ꎻ d. 将根环境溶液替换为营养液ꎻ e. 将根环境溶液更换为 400 mmol / L NaCl溶液ꎮ
a. Point when pressure probe was inserted into xylem vessel of rootꎻ b. Root bathing solution was 100 mmol / L NaClꎻ c. Root
bathing solution was 250 mmol / L NaClꎻ d. Root bathing solution was nutrient solutionꎻ e. Root bathing solution was 400 mmol / L
NaCl.
图 4  玉米根木质部压力随盐浓度和处理时间的变化
Fig􀆰 4  Xylem pressure profile in maize root in response to different levels of salt stress
NaCl 溶液中的木质部压力ꎻ d 点是将根环境
250 mmol / L NaCl溶液更换为营养液ꎬ 压力迅速恢
复到接近 b点以前的水平ꎻ e点是将根环境营养液
更换为 400 mmol / L NaCl 溶液ꎬ 压力再一次大幅
降低并很快稳定ꎬ 此时的压力即为玉米根系处于
400 mmol / L NaCl 溶液中的木质部压力ꎻ 最后部
分为探针从根内退出ꎬ 平衡压力又回到 0点ꎮ 由图
4可见ꎬ 木质部压力探针测定技术可以准确、 实时
监测植物木质部压力的变化ꎬ 这是目前已知的其它
测定方法无法实现的ꎮ
3􀆰 9  特别提醒
木质部压力探针测定难度较大ꎬ 一是需要精细
操作ꎻ 二是对测定环境的要求很高ꎬ 操作台或测试
对象的轻微移动、 晃动就可能导致测定失败ꎬ 所以
一般只在室内实验中使用ꎮ 如需在室外使用必须搭
建防风防振操作台ꎮ
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(责任编辑: 王豫鄂 )
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