全 文 ：武汉植物学研究 2006，24(4)：344—345
Journal of Wuhan Bomnwal Research
应用正交设计法优化长柄双花木不定芽生长条件
曾建军，肖宜安，赵 燕，李晓红
(井冈山学院生命科学院，江西吉安 343009)
摘 要：通过正交设计方法 (3 )研究了培养基中的植物生长调节剂 6-BA、NAA、GA对长柄双花木(Di,amh~
cercidifola ver．1ongipes H．T．Chang)不定芽生长速率的影响。实验结果表明：最优水平组合为 6-BA 0．5 mg·L +
GA 1．0 mg·L～。BA对实验结果的影响达到极显著水平(P≤O．O1)，该因素不同水平间差异达到极显著水平
(P <0．01)。
关键词 ：长柄双花木；正交设计；不定芽；生长
中图分类号：Q945 文献标识码：A 文章编号：1000-470X(2006)04-034．02
Optimization for Shoot Growth of Disanthus cercidifolius
var．1ongipes、 th Orthogonal Design
ZENG Jian—Jun，XIAO Yi-An，ZHAO Yan，LI Xiao—Hong
(School of Sciences Jinggangshan Colege，Ji’an，Jiangxi 343009，China)
Abstract：By applying orthogonal designed experiment (3 )in tisue culture of Disanthus cercidifola
var．1ongipes H．T．Chang，efects of 6一BA，NAA，GA on its shoot growth rate were studied in this papper．
The results indicate that the best combination of the plant regulators for shoot growth was 6．BA 0．5 mg·
L +GA 1．0 mg·L～．Factor BA influenced the shoot growth signifcantly(P≤0．01)，and difer-
ences among the three concentration levels were remarkable significant(P <0．0 1)．
Key words：Diaanthua cercidifola var．1ongipes H．T，Chang；Orthogonal design；Shoot；Growth
长柄双花木(Disanthus cercidifola var．1ongipes
H．T．Chang)为双花木属(Disanthus)，系金缕梅科孑
遗的单种属，仅零星分布于江西、湖南和浙江等省的
部分县，分布区局限，且个体数量稀少 工¨J，目前已
处于濒危状态，被列为国家二级重点保护的濒危物
种。长柄双花木树形优美，很具观赏价值，是园林绿
化理想品种。但因其繁殖困难，限制了它的大量发
展 。因此开展对长柄双花木繁殖生物学研究，寻
找一条高效繁殖方法对该种质资源保护和开发利用
十分有意义。
通过离体培养技术我们已建立了长柄双花木快
繁体系 ，但存在培养周期长(6～7个月)的不足。
其中主要的制约因素是不定芽生长缓慢，由愈伤组织
分化出的不定芽要经过3个月生长，其平均生长高度
才能达到适于生根诱导的1．5 cm以上。正交设计法
是一种高效，快速的多因素实验方法 J，笔者以长柄
双花木愈伤组织刚分化的不定芽丛为试材，采用正交
设计法，以期获得促使长柄双花木不定芽快速生长的
培养基，缩短整个离体培养周期，为长柄双花木资源
保护和开发利用提供一条更经济高效的方法。
1 材料与方法
实验材料为本实验室培养的刚从长柄双花木
(Disanthus cercidifola var．1ongipes H．T．Chang)愈伤
组织分化的生长一致的不定芽丛，接种在含不同激
素浓度的 MS琼脂培养基中。所有培养基都含8 g·
L 琼脂，30 g·L 蔗糖，pH 5．8，于(25±1)oC
每天光照 12 h，光照强度 1 500 Ix，30 d后测定不定
芽高度。采用3因素3水平实验，3个因素分别是6．
BA、NAA和 GA三种激素，3水平指每种激素 3个浓
度，正交表选用 (3 ) (表 1)。根据正交设计
表 1 正交实验 L，(3。)
Table 1 Design form of orthogonal test k(3 )
收稿 日期：2006-03—10，修回日期：2006-05·10。
基金项目：国家 自然科学基金资助项 目(30560025)；江西省教育厅科技项目(赣教[2005]232)。
作者简介：曾建军(1973一)，女，硕士研究生 ，讲师，研究方向为植物生理学(E—mail．~j66@vip．00172．com)。
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第 4期 曾建军等：应用正交设计法优化长柄双花木不定芽生长条件 345
表，一共 9个处理，每个处理重复 3次。
2 结果分析
2．1 实验结果
通过 (3 )实验，各处理组对长柄双花木不定
芽生长速率影响见表2。通过对表 2数据直观和方
差分析，可以得出长柄双花木不定芽生长最适培
养基。
表 z 长柄 双 木不足牙 生长正交买验 结果
Table 2 Orthogonal test in shoot growth of
Disanthus cercidifola vat．1ongipes H．T．Chang
l 2 3 4 5 6 7 8 9
Nu
接
m ．
种
of
数buds 33 35 30 31 31 32 30 33 30
孺 1．47 1．57 1．74 1．15 1．28 1．2 1．06 o．9 o．8
2．2 实验结果的直观分析
因素内水平极差(R)的大小，说明该因素对实
验结果的影响程度(表 3)。参试的3因素对长柄双
花木不定芽生长速率影响的主次关系是 A>C>B，
即依次是 6-BA，GA，NAA，根据各因素水平的大小，
可得到最优水平组合为：A，B C 。
表 3 长柄双花木不定芽生长的直观分析
Table 3 Audio—visual analysis of shot growth of
Disanthus cercidifola vat．1ongipes H．T．Chang
·因素 内l司一水平之和 ；··极差。
· Sum of soJ~le lever in factor； ·· Extreme deviation．
2．3 实验结果的方差分析
用 SPSS 11．5统计软件对实验结果进行方差分
析和多重比较(表4)，结果分析表明，因素A对实验
结果的影响达极显著水平(P≤0．01)。经多重比
较(LSD法)表明，因素 A之间差异极显著。通过
方差分析结果可知，在长柄双花木不定芽培育阶段，
应当选用 6一BA，而 NAA，GA对长柄双花木不定芽
生长速率影响未达到显著水平。在长柄双花木不定
芽生根培养实验中我们发现，当不定芽高度小于
I．5 cm时，不定芽生根困难。为了获得长柄双花木
不定芽快速生长的最佳培养基，综合直观分析和正
交实验结果，选用 A，C两因素，其最佳水平组合为：
A1 C ，即6一BA 0．5 mg·L’ + GA 1．0 mg·L一 。
表 4 长柄双花木不定芽生长的方差分析
Tab le 4 Varian ce analysis of shot growth of
Disanthus cercidifola vat．／ong／pes H．T．Chang
·误差；··极显著水平。
· Sum of squares of experimental variance：·· Significantly
diferent atP ≤O．01．
3 讨论
在长柄双花木离体培养研究中，我们发现只要
在培养基中添加合适比例的激素，其离体器官脱分
化和再分化比较容易。建立长柄双花木高效再生体
系的难点是培养周期较长，主要原因在不定芽生长
缓慢，这可能和长柄双花木属木本植物有关。我们
的实验表明，激素 6一BA对长柄双花木不定芽生长
速率影响最大，而 NAA无促进作用。在添加 NAA
的培养基中，不定芽基部极易分化愈伤组织，影响不
定芽的生长，所以在不定芽壮苗培养基中应避免添
加 NAA。许多研究表明，GA对植株节问生长有明
显的促进作用。在我们的研究中，通过方差分析方
法比较了培养基中添加不同浓度的 GA对长柄双花
木不定芽生长的效应，结果表明 GA对不定芽生长
影响未达到显著性水平。但根据直观分析，与其它
培养基比较，添加 GA可以促进长柄双花木不定芽
生长。根据实验结果，选用 MS+6一BA 0．5 mg·L +
GA 1．0 mg·L 作为壮苗培养基，长柄双花木整个离
体再生时问可以缩短 1—2个月，为今后长柄双花木
种质资源保护和开发利用提供了一条很好的途径。
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