全 文 ：武汉植物学研究 2001, 19( 3) : 259～261
Journal of Wuhan Botanical Research
优质油菜籽粕蛋白质分类研究

熊志勇1　夏伏建2　陆师国2
(1. 华中科技大学生命科学与技术学院, 武汉　430074; 2. 中国农科院油料作物研究所, 武汉　430071)
The Protein Classification of Fine Rapeseed Seed Drags
XIONG Zhi-Yong
1, XIA Fu-Jian
2 , LU Shi-Guo
2
( 1. C oll eg e of L if e S ci ences and T echnology , H uazh ong Univ er si ty of S ciences and
T echnology , Wuhan　430074, China;
2. Inst itut e of Oil Crop s, Chine se A cademy of A gri cultural S ci ences, Wuhan　430071; China)
关键词: 油菜; 蛋白分类; 氨基酸; SDS-PAGE
Key words: Rapeseed; P r otein classification; Amino acid; SDS-PAGE
　　中图分类号: S 565. 4; Q517　文献标识码: A　文章编号: 1000-470X ( 2001) 03-0259-03
油菜是我国大面积种植的油料作物,油菜籽富含油脂和蛋白质。其含硫氨基酸含量高
于大豆蛋白, 必需氨基酸含量平衡[ 1] , 因此菜籽蛋白有良好的营养特性。但常规油菜籽饼
粕含较高的硫代葡萄糖甙和酚类物质, 长期以来籽粕蛋白没有被利用作饲料或食品添加
剂。
我们用双低[ 2] (低芥酸、低硫甙)优质油菜饼粕为材料,根据其蛋白在不同溶剂的溶解
性分离 [ 3] ,测定了不同组分蛋白及其含量,并对各组分蛋白氨基酸含量也进行了测定, 为
说明优质油菜饼粕蛋白富含各种必需氨基酸和其良好的开发前景提供了依据。
1　实验材料及方法
1. 1　材料
中双 119(甘蓝型油菜双低品种) , 脱壳脱脂风干菜籽粕; 所用蛋白质分子量标准为
10～100 kD, 主要试剂为国产试剂。
1. 2　方法及其操作步骤
( 1) 称取 5 g 中双 119脱壳脱脂风干菜籽粕 3份, 在研钵磨匀,加水15 mL,研磨后转
移至 150 mL 的离心管中,用水稀释至 75 mL。
( 2) 4 000 r / min 离心8 m in, 转移上清液, 沉淀加 15 mL 水洗涤, 4 000 r / min 离心
8 min,重复 4次。混合上清液,取 2 mL 上清液 4℃保存以备 SDS-PAGE电泳。


收稿日期: 2000-09-11,修回日期: 2000-10-10。
作者简介: 熊治勇( 1970- ) ,男,硕士,从事小麦基因工程研究。
( 3) 上清液中加 10滴冰醋酸, 37℃水浴至出现沉淀, 4 000 r/ m in 离心 8 m in。沉淀用
1%冰醋酸洗涤,用已知重量的经烘干过的滤纸过滤,烘干,分析天平称重,计算蛋白含量。
( 4) 依次用 15 mL 的10% NaCl, 10 mL 的 70%乙醇, 15 mL 的0. 2% NaOH 作抽提
液代替水抽提上步沉淀,重复步骤( 2)、( 3)。
( 5) SDS-PA GE 电泳按分子克隆指南操作[ 4]。
( 6) 含蛋白质沉淀的滤纸经酸水解后衍生物用氨基酸分析仪进行组分分析。
2　结果及讨论
2. 1　结果
样品各组份蛋白质含量,蛋白质的总含量及各组份蛋白质的比例见表 1。
表 1　样品各组份蛋白质的比例
Table 1　P ro tein percentag e of the com ponents in tested samples
重复数
Replicate
样品总量( g )
Sample
w eight
总蛋白/样品总量( % )
T otal
protein / sample
水溶蛋白/总蛋白( % )
Soluble protein /
Total protein
盐溶蛋白/总蛋白( % )
Salt solub le
protein/ T otal
protein
醇溶蛋白/总蛋白( % )
Ethanol soluble
p rotein/ T otal
protein
碱溶蛋白/总蛋白( % )
Alkali solu ble
protein/ Total
protein
No. 1 5. 088 17. 5 41. 0 34. 3 2. 0 22. 7
No. 2 5. 082 17. 9 39. 0 35. 2 2. 2 23. 5
No. 3 5. 090 17. 0 40. 0 35. 1 1. 6 23. 1
平均 Averag e 5. 087 17. 5 40. 0 34. 9 1. 9 23. 1
　　各组份蛋白进行 SDS-PAGE 电泳,所用 Marker 分子量分别为 97. 4 kD, 66. 2 kD,
42. 7 kD, 31. 0 kD, 14. 4 kD, 根据迁移率 R f 计算各组份蛋白分子量(表 2) ,氨基酸分析
各组份蛋白氨基酸相对百分含量结果(表 3)。
表 2　各组份蛋白分子量
T able 2　Molecular weight o f pro tein components
分子量( kD)　　M olecular weight
水溶蛋白
S oluble protein
盐溶蛋白
S al t soluble pr otein
醇溶蛋白
Eth anol s oluble protein
碱溶蛋白
Alkali solu ble protein
19. 95, 21. 37, 22. 91, 23. 44,
24. 55, 26. 30, 64. 57
19. 05, 21. 38, 21. 88
23. 99, 26. 30, 64. 57
14. 4 14. 4, 19. 95, 25. 70
表 3　各组份蛋白氨基酸相对百分含量(归一化计算法)
T able 3　Percentag e of amino-acid in pro tein components ( % )
氨基酸
Amino-acid
水溶蛋白
S oluble
protein
盐溶蛋白
Salt
solub le
protein
醇溶蛋白
Ethanol
s oluble
protein
碱溶蛋白
Alkali
s oluble
protein
氨基酸
Amino-acid
水溶蛋白
S oluble
protein
盐溶蛋白
Salt
soluble
protein
醇溶蛋白
Ethanol
s oluble
p rotein
碱溶蛋白
Alkali
s oluble
protein
Asp 4. 15 3. 87 3. 11 7. 88 T yr* 2. 89 3. 12 6. 98 5. 29
Glu 15. 56 10. 36 15. 85 16. 39 Val* 5. 84 5. 07 4. 51 6. 16
S er 5. 33 5. 63 4. 89 5. 07 Met* 2. 73 2. 19 2. 09 2. 24
Gly 6. 59 6. 75 6. 47 7. 53 Cys　 0. 34 0. 70 2. 95 1. 61
His 2. 80 2. 57 2. 67 2. 59 Ile* 2. 87 8. 73 2. 55 2. 36
　T ry* 6. 64 6. 46 7. 80 4. 86 Leu* 11. 48 15. 09 8. 98 10. 14
　T hr* 4. 81 5. 94 3. 36 4. 34 Ph e* 5. 15 4. 63 4. 77 5. 44
Ala 9. 96 7. 79 2. 03 7. 10 Lys　 5. 54 4. 75 4. 32 3. 37
Pro 7. 33 6. 34 16. 68 7. 65
　　注: * 为必需氨基酸。
Note: * Es sent ial amino-acid.
260 武汉 植 物学 研究　　　　　　　　　　　　　　　　第 19卷　　
从表 1可知, 脱壳脱脂风干菜籽粕中水溶性蛋白含量最高( 40. 0%) ,其次为盐溶蛋白
( 34. 9%)、碱溶蛋白( 23. 1% ) ,醇溶蛋白含量较少( 1. 9%)。SDS-PAGE 电泳测得各组份
蛋白结果(表 2)表明,水溶蛋白、盐溶蛋白含蛋白条带较多,分别为 7条和 6条主带,且蛋
白条带分子量分布较广。碱溶蛋白有 3条主带,醇溶蛋白只有 1条分子量较小的主带。
由表 3可以看出各组份蛋白氨基酸含量较平衡,无限制性氨基酸,且各组份蛋白必需
氨基酸含量均较高,说明了饼粕蛋白中 8种必需氨基酸的含量较高。
2. 2　讨论
常规油菜籽饼粕含较高的硫代葡萄糖甙,不适合用作饲料或食品添加剂。中双 119是
低芥酸、低硫甙优质油菜品种,克服了常规油菜的缺点。其籽粕蛋白分析中蛋白质含量高,
富含各种必需氨基酸, 因此优质油菜饼粕是一种亟待开发的理想的蛋白源。
参考文献:
[ 1 ]　吴新镛,黄凤洪,夏伏建.油料种质资源生化品质性状的研究,中国作物学会油料作物专业委员会第二届会员代
表大会暨讨论会油菜科学论文集.北京:中国作物学会, 1996. 96 98.
[ 2 ]　刘后利.油菜的遗传和育种.上海:上海科技出版社, 1985. 19 36.
[ 3 ]　Werner G, Her mannp M . S eed Proteins. 1983.
[ 4 ]　萨姆布鲁克 J, 弗里奇 E F,曼尼阿蒂斯 T 著.分子克隆指南.金冬雁,黎孟枫等译.北京:科学出版社, 1993.
261　第 3期　　　　　　　　　　　　　熊志勇等:优质油菜籽粕蛋白质分类研究