全 文 ：作物学报 ACTA AGRONOMICA SINICA 2012, 38(10): 1791−1801 http://www.chinacrops.org/zwxb/
ISSN 0496-3490; CODEN TSHPA9 E-mail: xbzw@chinajournal.net.cn

本研究由国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2011AA100102)资助。
* 通讯作者(Corresponding authors): 高爱农, E-mail: gaoainong@caas.net.cn, Tel: 010-62176077; 张锦鹏, E-mail: zhangjp@caas.net.cn,
Tel: 010-62152938
第一作者联系方式: E-mail: lianxiang1987@yahoo.cn, Tel: 18208731610
Received(收稿日期): 2012-04-13; Accepted(接受日期): 2012-06-06; Published online(网络出版日期): 2012-07-03.
URL: http://www.cnki.net/kcms/detail/11.1809.S.20120703.0858.201209.0_002.html
DOI: 10.3724/SP.J.1006.2012.01791
小麦背景下冰草 6P染色体特异 EST标记的开发
代 程 张锦鹏* 武晓阳 杨欣明 李秀全 刘伟华 高爱农* 李立会
中国农业科学院作物科学研究所 / 农作物基因资源与遗传改良国家重大科学工程, 北京 100081
摘 要: 小麦-冰草[Agropyron cristatum (L. ) Gaertn.] 6P附加系普冰 4844-12具有多粒等可用于小麦改良的优异基因。
为高效率检测由小麦-冰草 6P附加系衍生的易位系和渐渗系, 以普冰 4844-12及其亲本普通小麦 Fukuhokomugi和冰
草 Z559 (2n=4x=28, PPPP)为材料, 通过对冰草转录组测序获得的 EST序列设计的 P基因组 EST分子标记引物, 筛选
在普通小麦背景下的 6P染色体特异分子标记。结果从 1 453对 P基因组 EST引物中筛选出 130对小麦-冰草 6P附加
系特异标记引物。进而将这些特异标记与 NCBI nr蛋白质数据库及小麦 EST序列进行了比对, 发现 4条冰草 EST序
列的功能注释与抗病、抗逆相关; 36条冰草 EST与已经定位的小麦 EST具有较高的相似性, 其中 33条(91.67%)位于
小麦第 6部分同源群染色体。为了进一步验证这些标记的特异性, 分别对其中 4个具有功能注释的 EST 标记在中国
春等 7 个普通小麦背景下和随机选择的 5 个标记在小麦-冰草 6P 易位系背景下进行了检测, 结果证明其确实可用于
检测 6P染色体。这些冰草 6P染色体特异标记的开发为大规模地鉴定小麦-冰草衍生后代中 P染色质成分奠定了基础。
关键词: 小麦; 冰草; P基因组; 小麦-冰草 6P附加系; EST特异分子标记
Development of EST Markers Specific to Agropyron cristatum Chromosome 6P
in Common Wheat Background
DAI Cheng, ZHANG Jin-Peng*, WU Xiao-Yang, YANG Xin-Ming, LI Xiu-Quan, LIU Wei-Hua, GAO
Ai-Nong*, and LI Li-Hui
National Key Facility for Crop Gene Resources and Genetic Improvement / Institute of Crop Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences,
Beijing 100081, China
Abstract: Wheat-Agropyron cristatum (L.) Gaertn. 6P addition line has the characteristics of superior numbers of florets and ker-
nels per spike, which can be used in the improvement of wheat varieties. In this study, we developed EST markers specific to the
A. cristatum 6P chromosome using the wheat-A. cristatum 6P disomic addition line 4844-12 (2n=44) and its common wheat par-
ent “Fukuhokomugi” as well as A. cristatum accession Z559 (2n=4x=28, PPPP). PCR primers were designed according to the
sequences of ESTs gained by the transcriptome sequencing of A. cristatum. A total of 130 6P-specific molecular markers were
developed from 1 453 PCR primers. These specific markers were matched with protein database from NCBI and wheat EST se-
quence to understand the potential function genes on chromosome 6P and the gene synteny between A. cristatum and common
wheat. The results showed that functions of four A. cristatum EST sequences are related to disease and stress resistance. Thirty six
A. cristatum EST sequences could be matched with the located wheat EST bin map, in which 33 (91.67%) sequences were located
in the sixth homoeologous group. To validate the specificity of these markers, we detected four EST specific markers with func-
tional annotation under different backgrounds of other seven wheat varieties. Five specific markers were selected randomly to
detect wheat-A. cristatum 6P translocation lines. The results showed that these specific markers can be used to detect chromosome
6P of A. cristatum in common wheat background.
Keywords: Wheat; Agropyron cristatum; P genome; Wheat-A. cristatum 6P addition line; EST specific molecular markers
冰草[Agropyron cristatum (L.) Gaertn.]是小麦族 冰草属(Agropyron Gaertn.)的模式种, 具有多种优良
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性状, 如抗小麦白粉病、锈病等主要病害, 抗寒、抗
旱、耐盐, 多小穗、多花、多分蘖, 可用于小麦品种
的改良育种[1-2]。国内外已开展了大量的小麦与冰草
的杂交工作[3-13], 并获得一系列附加系、代换系、易
位系等种质材料[14-17]。
对于冰草与小麦杂交后代中冰草染色体或染色
体片段的鉴定常用 GISH 方法[15]。但是由于 GISH
技术步骤复杂、实验环节多, 不适合作大规模检测。
因此, 有必要开发冰草基因组特异的分子标记, 以
提高检测效率。本实验室前期已经进行了一些探索
性的开发冰草特异标记的工作。王文泉等[18]从小麦
的 SSR引物中筛选出一批冰草 P基因组特异的分子
标记; Wu等[19]从 520个 RAPD随机引物中筛选出 2
个 P基因组特异的 RAPD分子标记; Luan等[15]利用
本实验室开发的 6P附加系特异引物对 6P易位系进
行了筛选, 获得 4个定位在 6P长臂上和 3个定位在
6P短臂上的分子标记。但是随着小麦-冰草杂交后代
材料的不断丰富, 特别是小片段易位材料的不断获
得, 现有的冰草特异标记已不能满足研究需要。本
研究利用四倍体冰草 Z559的转录组序列, 开发了一
批冰草 P基因组特异的 EST标记, 并对特异 EST标
记可能的功能信息进行了分析, 旨在提高小麦遗传
背景下冰草基因组成分的检测效率, 为冰草优良性
状/基因的进一步开发利用奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料及其 DNA的提取
选用具有多粒特性的小麦 -冰草 6P 附加系
“4844-12” (2n=44)[14], 其亲本为普通小麦品种 Fuku-
hokomugi和冰草 Z559。小麦-冰草 6P易位系以及 7
个普通小麦品种(中国春、小偃 6号、藁城 8901、京
4839、CHM83.605、McGuire和 Hi-Line)用于验证冰
草 6P特异分子标记。所有材料均由中国农业科学院
作物科学研究所提供。
参照 Rogers等[20]的方法略作改动, 提取基因组
DNA。取幼嫩叶片在液氮中研磨, 加入 750~800 μL
SDS提取缓冲液, 65℃温浴 1 h, 酚-氯仿抽提后醇沉
溶解, 经 RNA酶处理, 酚-氯仿抽提纯化, 异丙醇沉
淀后用 70%乙醇洗涤, 干燥后 1×TE溶解备用。
1.2 引物设计
将冰草转录组测序获得的 EST (expressed se-
quence tag)序列与 NCBI 数据库 (http://www.ncbi.
lm.nih.gov/dbEST/index.html)中的小麦 dbEST 序列
进行 Blastn 比对, 去除高相似度序列, 保留核苷酸
相似度低于 85%的冰草 P 基因组 EST 序列, 按照
Rozen等[21]的方法设计引物。
1.3 引物筛选及 PCR扩增
共使用 1 453对 P基因组 EST引物 , 由生工生
物工程(上海)有限公司合成。参照 Luan等[15]描述的
PCR 体系和程序, 用 ABI 公司 9700 型 PCR 仪进行
扩增反应, PCR扩增体系为 20 μL, 含 10×PCR buffer 2
μL, dNTP 0.2 mmol L–1, 引物0.25 μmol L–1, 模板DNA
60 ng, Taq DNA聚合酶 1 U (鼎国生物技术公司)。反应
程序为 94℃预变性 5 min; 94 1 min, 55~60 1 min, ℃ ℃
72 1 min, 35℃ 个循环; 72℃延伸 10 min。扩增产物经
8%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离, 银染显带。
1.4 EST序列比对
将筛选出的冰草 6P 特异分子标记所对应的
EST序列在 GenBank的 nr库(http://blast.ncbi.nlm.nih.
ov/Blast.cgi?)中进行 Blastx 比对和功能注释。冰草
EST标记与已经定位的小麦 bin map EST序列进行
tBlastx比对, E值小于 1e–10则被认为具有同线性并
确定其部分同源群归属[37], 其位置信息参照 Qi 等[22]
发布的小麦 EST图谱。
2 结果与分析
2.1 冰草 P基因组特异标记的筛选
利用 1 453对 P基因组引物对冰草 Z559和普通
小麦 Fukuhokomugi基因组 DNA进行 PCR扩增, 并
进一步对筛选出的具有特异扩增的引物进行重复扩
增, 以确保扩增结果的稳定性。其中有 1 014对引物
扩增出冰草 P 基因组特有条带(图 1), 多在 150~250
bp之间, 特异引物筛选率为 69.79%。由于引物在设
计的时候避开了冰草与小麦序列相同的区域, 大大
提高了所设计引物的特异性。
2.2 受体小麦 Fukuhokomugi 背景下冰草 6P 染
色体 EST标记的筛选
利用筛选出的 1 014 对冰草 P 基因组特异引物
对冰草 Z559、 6P 附加系 4844-12 和普通小麦
Fukuhokomugi 的基因组 DNA 进一步筛选, 结果显
示, 其中的 130 对引物能够在冰草 Z559 和附加系
4844-12 中扩增出相同样的 P 基因组特有条带(如图
2 中 Agc5298 和 Agc5651), 说明这些扩增片段来源
于冰草的 6P染色体, 可作为在小麦背景下追踪冰草
第 10期 代 程等: 小麦背景下冰草 6P染色体特异 EST标记的开发 1793


6P染色体的特异标记。这 130对特异引物的相关信
息见附表, 表中的产物大小是根据设计引物使用的
EST 序列进行估测的, 可能与实际扩增产物的大小
有所差异。

图 1 冰草 P基因组特异引物在冰草和小麦中的扩增
Fig. 1 Electrophoresis patterns of P genome-specific EST primers amplified in the genomes of common wheat and A. cristatum
M: pUC19 DNA/Msp I (Hpa II); 1: 冰草 Z559; 2: 普通小麦品种 Fukuhokomugi。
M: pUC19 DNA/Msp I (Hpa II); 1: A. cristatum accession Z559; 2: common wheat parent “Fukuhokomugi”.


图 2 利用小麦-冰草 6P附加系 4844-12筛选冰草 6P染色体特异引物
Fig. 2 Electrophoresis patterns of screening 6P-specific EST primers amplified in the genomes of wheat, 4844-12 and A. cristatum
M: pUC19 DNA/Msp I (Hpa II); 1: 冰草 Z559; 2: 普冰 4844-1; 3: 普通小麦品种 Fukuhokomugi。
M: pUC19 DNA/Msp I (Hpa II); 1: A. cristatum accession Z559; 2: Pubing 4844-12; 3: common wheat parent “Fukuhokomugi”.

2.3 冰草 6P染色体特异 EST标记的功能注释
将筛选出的 130对冰草 6P特异标记与 NCBI nr
蛋白质数据库进行 Blastx比对, 发现 62个标记序列
在蛋白质数据库中有功能注释 , 其中 4个标记序列
编码的蛋白质与小麦族植物的抗病、抗逆性相关(表
1), 而其余的 58 个标记序列编码的为假定蛋白或功
能未知的蛋白。引物 Agc5878相应的 EST序列编码
的蛋白质与抗逆相关的 WRKY 转录因子同源 [23],
Agc6216相应的 EST序列编码的蛋白质与 GAMYB
结合蛋白同源, 与小麦开花相关[24]; Agc24652 相应

表 1 冰草 6P染色体特异 EST标记的功能注释
Table 1 Functional annotation of specific EST markers for the 6P chromosome of A. cristatum
标记编号
Code of marker
Nr E值
Nr E-value
蛋白登录号
Bd-protein ID
Nr库中的功能注释
Nr-annotation
Unigene5878_All 4.00e–82 BRADI3G06070.1 WRKY transcription factor [Hordeum vulgare]
Unigene6216_All 4.00e–62 BRADI3G58310.4 GAMYB-binding protein [Hordeum vulgare subsp. vulgare]
Unigene24652_All 5.00e–14 BRADI3G60340.1 NBS-LRR disease resistance protein homologue [Hordeum vulgare]
Unigene46632_All 6.00e–11 BRADI3G60160.1 Saccharopin dehydrogenase-like protein [Hordeum vulgare subsp. vulgare]

1794 作 物 学 报 第 38卷

的 EST 序列编码的蛋白质与 NBS-LRR 类抗病基因
保守结构域同源[25]; Agc46632相应的 EST序列编码
的蛋白质与酵母氨酸脱氢酶类蛋白同源, 与旗叶衰
老有关(Barth和 Humbeck, 未发表)。
2.4 冰草 6P 染色体特异 EST 标记与小麦 EST
序列 Bin map的同源群关系
将筛选出的 130 个冰草 6P 特异 EST 标记与已
经定位的小麦 bin map EST 序列进行 tBlastx 比对,
结果有 36 个标记符合条件并有相关的位置信息(表
2)。这 36 个冰草特异 EST 标记对应的小麦 EST 标
记中有 33个定位于小麦第 6同源群, 占有位置信息
标记数的 91.67%, 其余 3 个标记分别定位于小麦第
1、第 3和第 4同源群。此结果既体现出近缘物种之
间基因的共线性, 也证明所筛选出的冰草特异标记

表 2 冰草 EST标记与已经定位的小麦 bin map EST序列的 tBlastx比对
Table 2 tBlastx comparison between A. cristatum EST markers and located wheat bin map EST sequences
冰草 EST
Agropyron cristatum
EST
小麦 EST
Wheat EST
冰草与小麦 EST序 列相似度
Identity between A. cristatum and wheat
EST sequence (%)
E值
E-value
对应的小麦 EST位置
Position of corresponding wheat EST
Unigene10030_All BQ171629 95.09 3.70e–99 6AL4-0.55-0.90
Unigene10562_All CD453564 93.70 0 C-6BL3-0.36
Unigene10775_All BE422822 94.10 3.00e–148 C-6DS2-0.45
Unigene11261_All BF474277 100.00 6.20e–41 6BL5-0.40-1.00
Unigene11888_All CD454024 92.88 6.00e–106 1AS3-0.86-1.00
Unigene12196_All BE490715 95.14 3.50e–61 6BS-Sat
Unigene13375_All BQ162579 95.12 2.30e–90 6DS2-0.45-0.79
Unigene147_All BE499309 100.00 3.00e–12 3AS4-0.45-1.00
Unigene16979_All BG607214 91.10 1.00e–169 6AS1-0.35-0.65
Unigene20149_All BE442576 96.26 0 6DS2-0.45-0.79
Unigene20211_All BE591367 98.22 0 C-6AL4-0.55
Unigene20746_All BE493794 98.19 0 6BL
Unigene20838_All BQ160733 92.65 5.00e–150 6AL8-0.90-1.00
Unigene33878_All BF474812 90.61 9.60e–81 6DL
Unigene34162_All BQ172153 80.45 2.00e–26 6DS4-0.79-0.99
Unigene34292_All BE404465 92.36 1.00e–160 6AS5-0.65-1.00
Unigene34445_All BE426310 96.94 1.00e–111 6DL11-0.74-0.80
Unigene34838_All BG313559 91.92 1.00e–123 6AL8-0.90-1.00
Unigene42814_All BE403550 93.51 4.10e–26 6AS5-0.65-1.00
Unigene4399_All BE518089 97.40 0 C-6AL4-0.55
Unigene44824_All BM136696 86.49 2.20e–12 4BL5-0.86-1.00
Unigene4497_All CD452366 94.31 8.00e–146 6DL6-0.29-0.47
Unigene47569_All BG312780 97.69 1.10e–60 C-6AS1-0.35
Unigene4979_All CD454713 91.16 3.00e–161 6DS2-0.45-0.79
Unigene5093_All BE636841 91.29 1.00e–148 C-6AL4-0.55
Unigene5878_All BF145253 94.79 4.00e–127 6DS4-0.79-0.99
Unigene59354_All BE490152 50.00 1.20e–11 6DL12-0.68-0.74
Unigene6216_All CD452744 94.22 0 6AL4-0.55-0.90
Unigene62417_All BF200530 97.33 1.70e–29 6DS4-0.79-0.99
Unigene6900_All BQ161233 95.51 5.00e–144 C-6DL6-0.29
Unigene6950_All BG313802 97.48 7.00e–162 6DL10-0.80-1.00
Unigene70446_All BG604504 95.63 1.90e–70 6BL5-0.40-1.00
Unigene7155_All BE423843 97.76 0 C-6BL3-0.36
Unigene72604_All BM138455 90.78 2.00e–145 6DS2-0.45-0.79
Unigene8340_All BQ172305 93.83 5.00e–153 C-6AL4-0.55
Unigene8937_All BM138382 95.82 1.00e–121 6DL12-0.68-0.74
第 10期 代 程等: 小麦背景下冰草 6P染色体特异 EST标记的开发 1795


在 P基因组上定位的准确性。利用已知小麦 EST序
列的位置信息 , 还可以推断这 33个冰草 6P染色体
的特异标记在冰草第 6同源群上的相对位置。
2.5 冰草 6P 染色体特异标记在不同小麦背景中
的验证
选择 4 个冰草 6P 特异标记 (Agc6216、Agc
46632、Agc5878和 Agc24652)在 8个不同来源的小
麦品种(Fukuhokomugi、CHM83.605、藁城 8901、
Hi-Line、小偃 6 号、McGuire、京 4839 和中国春)
背景下进行验证, 结果 4 个标记均在冰草和小麦-冰
草 6P附加系中扩增出目标带, 而在不含有冰草染色
体的 8个普通小麦品种中无扩增产物(图 3), 说明标
记具有很好的特异性。
2.6 冰草 6P染色体特异 EST标记对易位系的检
测
小麦-冰草 6P附加系 4844-12与藁城 8901的杂
交后代经GISH检测, 发现一个小麦-冰草 6P易位系
27-9, 染色体数为 43 (图 4)。
从 130 对冰草 6P 特异引物中随机取 5 对引物对
6P易位系 27-9进行检测, 有 4个标记能够扩增出目的
片段(图 5), 进一步说明本研究开发的 EST 标记能够
有效检测小麦-冰草 6P易位系中的冰草染色体片段。

图 3 冰草引物 Agc24652、Agc46632、Agc5878和 Agc6216在不同小麦背景中的扩增
Fig. 3 Electrophoresis patterns of markers Agc24652, Agc46632, Agc5878, and Agc6216 amplified in different common wheat
backgrounds
M: pUC19 DNA/Msp I (Hpa II); 1: 冰草 Z559; 2: 普冰 4844-12; 3: Fukuhokomugi; 4: CHM83.605; 5: 藁城 8901; 6: Hi-Line; 7: 小偃 6号;
8: McGuire; 9: 京 4839; 10: 中国春。
M: pUC19 DNA/Msp I (Hpa II); 1: A. cristatum accession Z559; 2: Pubing 4844-12; 3: Fukuhokomugi; 4: CHM83.605; 5: Gaocheng 8901;
6: Hi-Line; 7: Xiaoyan 6; 8: McGuire; 9: Jing 4839; 10: Chinese Spring.
1796 作 物 学 报 第 38卷


图 4 小麦-冰草 6P易位系 27-9的 GISH检测
Fig. 4 GISH detection of Wheat-A. cristatum 6P translocation
line 27-9
3 讨论
远缘杂交是拓宽小麦遗传背景、导入外源优异
基因的重要手段。目前已经有多种小麦近缘植物与
小麦杂交成功[26-30], 其中以中间偃麦草、黑麦等最
为成功, 应用也最为广泛[31-32]。利用特异分子标记
可以快速、准确地检测导入的外源片段, 目前已经
开发出很多小麦近缘物种, 如黑麦、簇毛麦、中间
偃麦草等的特异分子标记[33-34], 在分子标记辅助选
择(MAS)育种、外源优质基因的定位与克隆等方面
发挥了重要作用[35-36]。
本实验室曾利用不同方法开发了一些冰草的特
异标记, 但由于数量较少, 还不能满足大量小麦-冰
草杂交后代的检测及冰草优异基因的追踪、定位的
需要。本研究利用冰草转录组序列, 筛选出 1 014对

图 5 冰草 6P特异引物对小麦-冰草 6P易位系 27-9的检测
Fig. 5 Amplification profile of A. cristatum 6P-specific markers in Wheat-A. cristatum 6P translocation line 27-9
M: pUC19 DNA/Msp I (Hpa II); 1: 冰草 Z559; 2: 普冰 4844-12; 3: 藁城 8901; 4: Fukuhokomugi; 5: 小麦-冰草 6P易位系 27-9。
M: pUC19 DNA/Msp I (Hpa II); 1: A. cristatum accession Z559; 2: Pubing 4844-12; 3: Gaocheng 8901; 4: Fukuhokomugi; 5: Wheat-A.
cristatum 6P translocation 27-9.

冰草 P 基因组特异的标记引物, 大大增加了标记数
量。它们是由 EST 序列开发而成, 代表着冰草基因
组上可以转录的基因信息, 并可能广泛分布于整个
冰草 P基因组, 将为冰草应用于小麦的MAS育种提
供重要的技术支持。
小麦-冰草 6P 附加系 4844-12 具有多花多粒特
性[14], 开发 6P 染色体上多粒基因的功能标记有助
于在小麦育种中更好地利用 6P 染色体上的优质基
因。我们从 1 014 对冰草 P 基因组特异标记中进一
步筛选出 130对 6P染色体的特异标记, 这些标记可
以用于研究冰草的第 6 同源群。这些标记的功能注
释和与小麦同源群归属关系的确认进一步证实 6P
染色体附加系的鉴定结果[14]。这些标记可能也分布
在冰草的其他染色体组中, 在小麦-冰草杂交后代的
研究中也具有利用价值。
小麦 EST序列数据近年来迅速增加。作为表达
基因部分序列的 EST 序列反映了基因的编码部分,
可以直接获得基因表达的信息, 为功能基因提供完
全连锁的标记, 使我们可以直接鉴定决定重要表型
性状的等位基因。同时由于 EST序列本身的保守性,
在近缘物种之间校正基因组连锁图谱和比较作图等
方面有很高的利用价值。因此本研究筛选出的基于
EST 序列的冰草 P 基因组特异标记不但可以揭示冰
草中功能基因的分布, 判定小麦-冰草异源附加系等
材料中外源染色体同源群, 还可应用于冰草染色体
重排和基因进化等研究工作。
4 结论
基于 EST序列开发了 130个冰草 6P特异标记,
这些标记扩增稳定、重复性好, 可以在小麦背景下
有效检测冰草 6P 染色体, 还可用于冰草 6P 染色体
上功能基因的挖掘以及冰草染色体重排等研究。
第 10期 代 程等: 小麦背景下冰草 6P染色体特异 EST标记的开发 1797


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附表 冰草 6P染色体特异引物序列
Appendix Sequences of primers specific for the 6P chromosome of Agropyron cristatum
引物号
Primer ID
正向引物序列
Forward sequence (5→3)
引物号
Primer ID
反向引物序列
Reverse sequence (5→3)
退火温度
Annealing
temp. ( )℃
产物大小
Product size
(bp)
AgC139F CATTAGGCATGGACCTGTCA AgC139R CACCCCAGAAATCAATGGTC 59.52 189
AgC147F GAACAAGATCCTCAAGGTCATCC AgC147R CAGCTATTTGTCCTCCGCAT 57.90 157
AgC657F ATCAGAAAGAGGTGCGGAAA AgC657R GAGGTAAAACCAACGCCAAA 59.81 173
AgC795F CACAGCAAAGATCAGCCAAA AgC795R GCGTTTGCACCAGATCACTA 59.87 172
AgC913F TTCGATGCATCCATATGTGTC AgC913R TGGAGTCTCCCATCCAGTTC 59.37 180
AgC1121F TTTATATCCATCCGGGGTGA AgC1121R GCTGGGAAGACAGACGTTTC 59.85 196
AgC1127F CGTGCTTCGTTTTCACGATA AgC1127R CAGGGAATTGATTTCGGAGA 59.87 162
AgC1442F TTCACCGGGATCACGCAG AgC1442R GCAACCAAGCAACACTGACC 58.60 155
AgC1456F AAGGGGCAGCTTAGTGATTG AgC1456R ATGGAGATGGTTCCCTTGG 59.34 190
AgC2023F TATCGAAGCAAGCAATGTGG AgC2023R GCTTCCATAGCAGTTGTGTCC 59.75 155
AgC2051F GTCACAAAGCAGTTGATTGCC AgC2051R GGTGAATGGACCTCAGCTGAT 59.32 183
AgC2637F GGTGCTCGATCTGGAGCAACT AgC2637R TGCCCTTGGATTCAGGAATC 59.70 195
AgC2861F AGTCATATCAGCACTACTACTGCCA AgC2861R GGCGTCGTTTTTTGTTTGTTG 58.20 217
AgC2947F TGAACTGAGGCCATGTTGTC AgC2947R CTTGCACATGCATCTCGTTT 59.68 209
AgC3413F GACAAGCAAGGGTTTTTGCTAC AgC3413R GATCTCCCCTGTCATGCATGT 58.80 159
AgC3466F CGAAGCTTGGTATTGTCCAAAA AgC3466R TCCAGCACGTGGAATTTGTC 59.00 152
第 10期 代 程等: 小麦背景下冰草 6P染色体特异 EST标记的开发 1799


(续附表)
引物号
Primer ID
正向引物序列
Forward sequence (5→3)
引物号
Primer ID
反向引物序列
Reverse sequence (5→3)
退火温度
Annealing
temp. ( )℃
产物大小
Product size
(bp)
AgC3986F ACACCTCAGCAGCATCAAAT AgC3986R TTCTGGAAACCAAAGCAACC 58.32 150
AgC4356F TACCCACAAGCACAACCAAA AgC4356R ATGCCTGCAGACGGAGAG 60.00 222
AgC4399F AATGTCTCGTCCTTTGCGGT AgC4399R TGGAGGGGTGCCAAATGAG 59.50 153
AgC4497F TGGTAGATTAGCAAGCCACCGT AgC4497R CTATCTTTGGCGACCGCAG 59.20 118
AgC4527F CGTGCTACCTCACAGGACAA AgC4527R CCATCCCAAGTCAGGCTAGA 59.90 181
AgC4537F CAACCAAACATGCTGGTCAC AgC4537R GTGCATGGAATGGGAAAAGT 59.80 240
AgC4543F TGGAACTGGGAGGAAAACTG AgC4543R GGAGCAACCAAAATTCCAGA 60.05 159
AgC4979F AGAGGCTCACAGAAGCTGAGTG AgC4979R AAGGCTCGGCGACCACTG 58.00 —
AgC5093F CCACCAACTTACCCACATTAAAG AgC5093R GGAAGAATATGTTGGGTGTGTG 58.00 —
AgC5298F ATGCATCCACGATCAAGGCT AgC5298R GCACACCGGAAAAATGCTCT 60.10 173
AgC5385F CTGACTTCCCATCACCGACT AgC5385R TGGCCTTTCTTGAAGCATTT 59.82 193
AgC5651F AAAGGGTGACCCCATGGAT AgC5651R GCAAGTCACTCCCGATCTCA 58.00 168
AgC5878F GATGCCAGCGGCATAGTG AgC5878R CGGCCACAACAACTACAACA 57.60 136
AgC5894F ACCACATCATCCATCAACCA AgC5894R GGTTCATGAAGAAGCGCAAT 59.61 187
AgC6090F CACCCCGTTTTGATCTTGTT AgC6090R AGGCACAGAAGGTCAAGTGG 59.83 208
AgC6216F GAAGGCAAGTGGTGGGTCC AgC6216R GGATCATATTTTGGAAGGAAGTC 56.80 182
AgC6359F CGCTAAGTAGGCGGCTATACA AgC6359R CGCGCTAGACATGTTTCACA 58.00 195
AgC6505F GGGGAGTCAAGTGCTGAAAG AgC6505R AGTGTATGTCGGCATGGTCA 59.84 186
AgC6900F TTGGGTGATAAGAAGATGCCTC AgC6900R AGTTGAGTGTGCTGCGATGC 58.60 173
AgC6950F ATTATTCTTTACCCCCAAAACACT AgC6950R ACCAAGCCTGTCGCCGTC 58.10 175
AgC7155F CCTCTTTATATTTTCGGTGGTGA AgC7155R CTGTTCCTGTGCCCCCG 58.40 202
AgC7336F CAGTGAGTGCGCACGTAGAT AgC7336R CCACTACTCGCTAGCACACG 59.68 221
AgC7503F ACATCTATCATTACATCACCTCCC AgC7503R GGAGAAGGTTCTTGATACGTCAG 56.90 150
AgC7806F AGCCGGTCAATCTAAATATGGTC AgC7806R CCGACCGCTGTTCAGATTT 58.30 158
AgC8139F CGGGAACCTACAGAGGATCA AgC8139R TGGTGGTCAGGTCAATGAGA 60.07 161
AgC8340F GAGGAAAGGCATGGTCGCT AgC8340R TTATATCTGCGTTGCTTGCTTG 58.90 175
AgC8736F CAGCTGCAGGTGCTGAATAAAC AgC8736R TCTGGCCGTGCTCCAGAAT 60.30 241
AgC8884F AGACCCGAGGAGGGTTGATT AgC8884R AAGCTACCCTGGCGGAAGA 59.70 131
AgC8937F TCTGCTGCTCCTTGTTCATCTTT AgC8937R CCCTGGTCTCCAATGCTAGAG 58.90 283
AgC8950F CAGATGAACAAGGTTCTGCCAT AgC8950R TTCTCGCAAGGCATTTCAGA 59.20 181
AgC9322F CGTCGCAGCATGTGTAGAAT AgC9322R GGTCGTGTGCACGGTAATTT 59.89 203
AgC9592F CCAATGAATTATCCAATTGAGC AgC9592R TGCCTAATCCCTGAGGAGAA 58.45 178
AgC9612F CGGCCGAATAAATGTATGTGT AgC9612R TGCTCTCAAAAATTGGTTCTCA 59.73 166
AgC9707F ACATGCAAAATGGGTGGAGT AgC9707R AGCCCCTTCCTTCCTTACAG 59.71 215
AgC9745F AATGTCCCATCATGATGGAGG AgC9745R TGATTCAGCTAGCCACTTGGAC 59.20 158
AgC9814F ATCGGCGTCCTCCTCCTC AgC9814R TGTCAATACTGAGCGGAAGC 59.03 167
AgC9835F CAGCAGCAACACACTCACAA AgC9835R CCAGAACAACCCCAATCTTC 59.38 188
AgC10030F GTGCCCAGTTGCTCTTTGCT AgC10030R ATCCAGCCACGATAGAGGTTC 58.30 216
AgC10086F GTTGAGGCATGCCGTCTTAG AgC10086R CCTAGGCGCAGCTAATTCAC 60.00 151
AgC10119F TCCTGCAAACCAGCATCATA AgC10119R TGCTACAAAAGAGCCCTTGG 60.22 154
AgC10188F GAGAAGAGCACCGCATTTGT AgC10188R TTTTGGAGCATGAGGAAAGG 60.18 235
AgC10417F CTACCACGGGCAAGGAAGAT AgC10417R AAAACTGGATGGTTCCAGCA 60.50 127
AgC10562F CATTCACTCCAATTGTAGCACG AgC10562R TGGTCGGTGAATCTTTGATTTC 58.00 —
AgC10741F GTTATACCCGTAGGCGACGA AgC10741R CGTTCGGACGGAGAAATATG 59.98 161
1800 作 物 学 报 第 38卷

(续附表)
引物号
Primer ID
正向引物序列
Forward sequence (5→3)
引物号
Primer ID
反向引物序列
Reverse sequence (5→3)
退火温度
Annealing
temp. ( )℃
产物大小
Product size
(bp)
AgC10775F AAGATCCTGACAACATGAAACC AgC10775R ATGTAAAAACAAACCAAGGGG 55.80 128
AgC11170F GCACACGCACCACTTTTCTA AgC11170R ACTGCAGGATGGTCCTAACG 59.91 164
AgC11261F GGAACCACCTTTTCGGTCATAC AgC11261R AAGGGGTCACTCAAGAGATAGAAG 58.20 139
AgC11564F CACTTCCGCACGTAGAGGTT AgC11564R CGTTAGCGACGACAACAACA 60.31 150
AgC11888F TGGAAGTTTGTGCATAGATAACAAA AgC11888R GGGAAAATCGGTCCAGTCAC 59.00 167
AgC11930F AAGGAAACTTCGGTGCTACG AgC11930R TGTGTCCATGCCACTCAACT 59.38 199
AgC11981F TCTTCCCCATCGCTACTGTC AgC11981R ATCCATCCGCTGAAAATGAT 59.35 226
AgC12196F TGTTCAGAGGGGACAGCACAC AgC12196R ACGCAGGACCTGTCGAAGTA 58.00 163
AgC12567F TTTGGGGCAAACACGATATT AgC12567R CGACTCCACACCCAGTCTGT 60.19 246
AgC12799F AGCTAGCCCGTACACCAGTC AgC12799R TATCCTATCCATCCGCAAGC 59.38 249
AgC13167F ACTCCATCACCTGGTGCTTC AgC13167R CTGCCTGTGTAGAGGGTGGT 60.12 172
AgC13186F TGGGGTACAACTTGCAGTGA AgC13186R TATTTTCCAGTGGCCCATTC 59.76 198
AgC13190F TGAAGGGCACATAAACACCA AgC13190R TCTCCCCTGGATAGATTCTGA 58.68 201
AgC13191F TGCACGTGGTTACAGGCTTA AgC13191R CCCCAACATCCAATTATCCA 60.32 154
AgC13375F TGCATGCTGGCATACCAATC AgC13375R CTGCATTTGCCATGTTATGTAAA 58.60 200
AgC13478F CATCTGCAAACTCGATCACG AgC13478R CCGAAACCTGTGTCTCCCTA 60.10 175
AgC13521F GCGTACGTGGTTGTTTTCCT AgC13521R CAATTGGATAAGGAGCATGTGA 59.96 203
AgC14153F TGCCTTGTCTAGCTCCCTACA AgC14153R CTGTCAACCGTTTCCCTGAG 60.02 158
AgC14460F CCTTGTTGCCTGTCCTGTTT AgC14460R GGCAACGAGATGAAACCAAT 59.94 158
AgC14585F GCAAGGCGCTGCTCTCCT AgC14585R CGCGACATTGGAGTGCA 56.90 179
AgC14720F GCAGCAGGTGAAGTGATTGA AgC14720R GAGGAGATCCCCTGGTAAGC 59.99 177
AgC14951F AAGATGGATGGAGCAGTTGG AgC14951R TCTTTAATTCCACGCGGTTC 60.07 154
AgC14996F GGTGAAACCTGAACCCCTTT AgC14996R TTACCGGCTACCTTGATTGG 59.95 194
AgC15870F CACATCCACCTGCAAGTCAG AgC15870R CGGGGTCAGATGAAGTGAAT 59.93 157
AgC15911F GCCGTACCCTTCAGTCATGT AgC15911R GCATCCCTTGATGAGCAGAT 60.00 155
AgC16241F AGGCTTCCAAGCAGAAACAA AgC16241R GCATTGAGGGCTTCAGAGTC 59.96 248
AgC16270F AGCATATCCACGAGCCTGAT AgC16270R TTCAATGTCGGTTCACATGC 59.68 155
AgC16468F GTAGAGATCATAAGACTTCCAAGTG AgC16468R GACAACGTGCTCGGTAGCTG 54.50 144
AgC16979F ACATCCACAAGGGATTCCTGT AgC16979R TCTGCTACATGGCTAGGATGTGT 58.10 165
AgC17105F CGCTCAAAACCTCAAAAAGC AgC17105R ACCTGATCATTTTGCCAAGC 60.00 192
AgC17235F ACGGCTCATGGTGGTAAAAC AgC17235R GCGCTCTGCTAGATTGCTCT 59.86 226
AgC17825F TGCGGAAGAGGAGAGAAAAA AgC17825R GGTTTTGTGACGAGCAGGAT 60.07 152
AgC20149F GCTATTTTTCCTCCTGTTGCTT AgC20149R CCGGTACAAATCCGTGTTGT 57.80 175
AgC20211F AACATTATTCATGCTGAACAATTTC AgC20211R CTTGTTAGAATCAGTTGAGAGTGGT 56.90 184
AgC20746F GAATCAAGTATCCAAGAGTTTAGCC AgC20746R TGCAGTAGCTAGCAAGGAATCTG 58.30 171
AgC20838F GATACACTAGACCTCCAAGAAAAGT AgC20838R CTTGTGAGGATGTCTCTGAGGTAT 55.70 218
AgC21241F TGCACGGATCTTCACAAAAG AgC21241R GCTGCTTGTTCAAAACGTGA 59.84 152
AgC21670F CCCTCTCCTCTATTGCTACTGAT AgC21670R TTTGAGCCACAAATCAATTAGG 58.09 160
AgC21762F TGCCTCAACTTTAGATTCCTGA AgC21762R CCCTGATCTTTAATATCCTCTGG 58.19 150
AgC21892F TTGGATTAGAATTGGGCTCTG AgC21892R AGTGGCGCAGCATCTCTAAG 59.17 114
AgC22123F TTCAGTTGGCAGATAGCCTGA AgC22123R GATGCCGGTACCTCTCCAA 60.92 150
AgC22127F TTCAATCACACTGCCTGCAAT AgC22127R CAGCATCACCAAAGACCCAG 58.50 186
AgC23168F TGCACGAATATAACAAACAAGAGC AgC23168R TAGCATGCTCTGTTCATCTTGG 58.20 169
AgC23309F TAAAACGGTCTGTTGGCTGC AgC23309R GGATGACGTCAGTTCCATTCTC 58.40 141
第 10期 代 程等: 小麦背景下冰草 6P染色体特异 EST标记的开发 1801


(续附表)
引物号
Primer ID
正向引物序列
Forward sequence (5→3)
引物号
Primer ID
反向引物序列
Reverse sequence (5→3)
退火温度
Annealing
temp. ( )℃
产物大小
Product size
(bp)
AgC23520F TATTCGGAATGGCCCTATGG AgC23520R ATGCCAATTATCTGCTTGAACTAT 57.60 148
AgC23708F TTTCGATTCTCTCTCGATCTCT AgC23708R GCATTCTGGCCTGTTTTCTC 57.37 164
AgC24472F TTGCCGCCCTATAAAATCAA AgC24472R CGGTGGTAAGTGTCCATGTG 59.87 165
AgC24535F TTTGGTTGCGTTTGAGTTTG AgC24535R GGGTCCAAGGAGAGAATGGT 59.75 192
AgC24652F AATGCTAGCTATTCTTGGTTCATG AgC24652R TGACATCCCACGTTCTGTTCA 58.10 160
AgC24924F GGTGGAACGGACTCAAACAT AgC24924R GCCGCATATTTCGTGGTCTA 59.83 187
Agc25563F TTGTTGCAGGTAGCAACTGG Agc25563R AGCACAACCGTAGCAGCAG 58.00 —
AgC26658F TCGACATGGAGAGAGTGCTG AgC26658R AACCACACATCTCAGCAGACC 58.00 —
AgC33878F CCTGCAGGAGATGAACGACA AgC33878R TGTAGTTGTGCTTCCTCCTAACA 58.00 —
AgC34162F TGCTACACGTGCATGACCTT AgC34162R ATCGGGGCGTCTCTTAACTT 60.10 162
AgC34292F GGATACTTACACAATGCCGTGG AgC34292R AACTAGCTGCGAACTCCTCTTC 57.70 196
AgC34445F AGTCAAGGGCCACATCCTT AgC34445R GCGTCGTCCCTTGTTCCA 56.50 166
AgC34838F CGGGGCTTGTTGAGCATTATAC AgC34838R TTTCGTCGAAGGCTCTGCTG 58.00 —
AgC42814F CAGGCAATCGATCGACATTCTA AgC42814R GCTTGACGAGATTGGAGATGAC 58.80 146
AgC44824F GCCAAGAATGGACCAGACG AgC44824R GGTTGCGGATGTCCTTGAAC 58.30 151
AgC46632F TGGATGTGCCATTCTTGGTA AgC46632R GGCTTGCTCGGACAGTTATT 59.34 172
AgC47569F CGGAGTGACCTATAGCAGAGTACC AgC47569R ATAATCGCCAACACACGCAC 58.00 —
AgC50132F CCACGTGTCGTCGAAGCT AgC50132R ACCAACGCCTCCGTCCAA 58.00 —
AgC59354F ACGGCCCCTTTCTCCTGTC AgC59354R GCTCGTGAGGTGGAGGTGAG 60.10 117
AgC62112F GTCATTTGGCAGCAATATGAAC AgC62112R ACACCACTAATCTCAGATTCAACC 58.00 —
AgC62417F CACATACCGGCTGTATTTCTTTCTA AgC62417R ACCAGAAGGAATATCAAGGTATGG 58.80 150
AgC66596F CAATCTCCACTATCAGGTGACGT AgC66596R TGACTATGAAAGATAGCGCAACAC 58.00 —
AgC67663F GGACAAGGCCGGGAATCTT AgC67663R AGCTCTTGATGAGACACAGCG 57.80 134
AgC68025F TTATGTTTGCCCTGCTTTCC AgC68025R GTAGAAGCCTGCCAGTTTGG 59.88 194
AgC70446F TCTCCTGCAGGATCAGCATG AgC70446R GGTGTTTGCCTTCGTCCG 59.00 173
AgC72604F GACACTGATGAAGCTGCTGATC AgC72604R TCAGGACGGGGTAGACGAAC 58.00 —