全 文 ：作物学报 ACTA AGRONOMICA SINICA 2009, 35(8): 1432−1438 http://www.chinacrops.org/zwxb/
ISSN 0496-3490; CODEN TSHPA9 E-mail: xbzw@chinajournal.net.cn

本研究由山东省农业科学院创新基金(200711)和山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(2007BS06023)资助。
* 通讯作者(Corresponding author): 孙红炜, E-mail: hongweisun@126.com
Received(收稿日期): 2008-12-08; Accepted(接受日期): 2009-03-20.
DOI: 10.3724/SP.J.1006.2009.01432
转基因玉米转化体特异性寡核苷酸芯片检测方法的研制
路兴波 1 武海斌 1,2 王 敏 2 李宝笃 2 杨崇良 1 孙红炜 1,*
1 山东省农业科学院植物保护研究所, 山东济南 250100; 2 青岛农业大学植物保护学院, 山东青岛 266109
摘 要: 根据 7种转基因玉米 Bt11、Bt176、Mon810、Mon863、TC1507、GA21和 NK603 的重组 DNA结构, 利用
Primer premier 5.0引物设计软件分别设计转化体特异性引物, 优化 PCR反应条件, 对引物特异性及灵敏度进行验证。
结果表明, 所设计引物特异性强, 灵敏度达 0.1%。在植物基因组与外源基因的连接区域, 利用 Primer Premier 5.0和
Oligo 6.0软件分别设计和筛选 7种转基因玉米 40mer Oligo转化体特异性探针, 制备转基因玉米的寡核苷酸芯片, 并
对芯片检测的特异性、重复性及检测灵敏度进行检验。证明所设计探针特异性强, 灵敏度达 0.01%。与 PCR 检测方
法相比, 基因芯片检测法灵敏度高、特异性强, 可有效检测及鉴定多种转基因玉米, 大大提高检测的准确率和效率。
关键词: 转基因玉米; 转化体特异性; 寡核苷酸芯片; Oligo探针; 灵敏度
Developing a Method of Oligonucleotide Microarray for Event Specific Detec-
tion of Transgenic Maize (Zea mays)
LU Xing-Bo1, WU Hai-Bin1,2, WANG Min2, LI Bao-Du2, YANG Chong-Liang1, and SUN Hong-Wei1,*
1 Plant Protection Research Institute, Shandong Academy of Agricultural Sciences, Jinan 250100, China; 2 College of Plant Protection, Qingdao
Agricultural University, Qingdao 266109, China
Abstract: With the spread of genetically modified organism (GMO), the food and environment securities related to GMO has
attracted great attention to the public. Genetically modified maize (Zea mays L.) is one of the most popular GMO varieties, which
accounts for 22.5% of total planting area of transgenic crops. Currently, more than 40 countries and regions govern GMO food
products with a compulsory tagging policy. Thus, techniques for testing transgenic plants is of great importance, such as screening,
gene specific, construct specific, event specific detection method, which have become a mainstay of GMOs detection. Event spe-
cific microarray shows a prosperous application due to its advantages of high specificity, high sensitivity, automation, and high
efficiency. In this study, on the base of integrated DNA constructs of seven genetically modified maize varieties, Bt11, Bt176,
Mon810, Mon863, TC1507, GA21, and NK603, event specific primers were designed for polymerase chain reaction (PCR) using
Primer Premier 5.0, and the PCR system and program were optimized. The results indicated that the sensitivity of PCR detection
was 0.1%. In addition, based on unique and specific integration junction sequences between the host plant genome DNA and the in-
tegrated gene, a 40mer event specific Oligo probe with high specificity was designed for each variety using Primer Premier 5.0 and
Oligo 6.0. All the event specific probes were developed in one microarray. To ensure the reliability of microarray detection, we used
different kinds of positive and negative controls in oligonucleotide microarray. The results indicate that the sensitivity of microar-
ray detection (0.01%) and the event specific oligonucleotide probes meet the requirements of sensitivity and specificity for de-
tecting and identifying genetically modified maize so as to enhance the testing accuracy and efficiency.
Keywords: Transgenic maize; Event specific; Oligonucletide microarray; Oligo probe; Sensitivity
随着转基因技术的日渐成熟, 转基因作物产业
化已呈现出较好的发展势头。转基因作物在给人类
带来巨大经济效益和社会效益的同时, 也引发了有
关转基因作物环境和食品安全性的激烈争论。迄今
为止, 全球已有 40余个国家和地区要求对转基因食
品实施标识管理。
第 8期 路兴波等: 转基因玉米转化体特异性寡核苷酸芯片检测方法的研制

1433


目前全球转基因农作物种植面积已达到 1.028
亿公顷以上, 转基因玉米是目前全世界种植最多的
4种转基因作物之一[1]。2006年, 全球转基因玉米种
植面积仅次于转基因大豆, 达到 2 300万公顷, 占转
基因作物总面积的 22.5%。现已有多种国外转基因
玉米申请向我国出口。因此针对转基因玉米及其加
工产品的检测迫在眉睫。
在转基因品种及其产品的检测中, PCR 检测技
术已成为一种主流 , 并经历了筛选基因 (screening
gene)、目的基因(specific gene)[2]、不同基因间的交
联结构基因(construct specific gene)[3]和转入基因与
受体植物间的转化体特异结构基因 (event specific
gene)[4] 4个阶段检测过程。PCR检测极易出现假阳
性、假阴性且灵敏度相对较低[5], 而基因芯片技术在
此展示了更大的优势, Oligo基因芯片可根据任何已
知基因组序列设计特异性探针, 以人工合成的方法
快速制备芯片, 且具高度并行性、高通量、微型化、
自动化、高准确度和灵敏度等优点及广泛的应用前
景。
本研究根据转基因玉米中外源基因与玉米基因
组之间连接区域序列, 设计转化体特异性引物和探
针, 建立了 Bt11、Bt176、Mon810、Mon863、TC1507、
GA21和 NK603共 7种转基因玉米转化体特异性基
因芯片检测方法, 灵敏度的检测显示达到理想的检
测结果。
1 材料与方法
1.1 植物材料及其 DNA提取
选用 7种转基因玉米(Zea mays) Bt11、Bt176、
Mon810、Mon863、TC1507、GA21和 NK603, 以转
基因玉米 T25、转基因大豆(Glycine max) GTS40-3-2、
转基因棉花(Gossypium hirsutum) Mon531为阳性对
照, 以非转基因玉米郑单 958、非转基因大豆 1138-
2、非转基因棉花中 49为阴性对照。
采用Biospin植物基因组DNA提取试剂盒(杭州
博日公司), 从植物种子中提取基因组DNA, 并用紫
外分光光度计测定 DNA纯度和浓度。
1.2 引物设计
根据外源基因与玉米基因组之间的连接区域序
列, 利用 Primer Premier 5.0软件对 7种转基因玉米
分别设计多对转化体特异性检测引物, 并对引物进
行筛选和优化。其中 GA21引物参考 Yang等[9]的报
道; 阳性质控(18S rRNA)引物来源于许小丹等[5]的
报道(表 1)。所有引物均在 5端用 Cy3-Amidite进行
荧光标记。所有引物由上海博亚生物公司合成, 引
物稀释至 10 μmol L−1备用。

表 1 转基因玉米 PCR扩增引物
Table 1 Primers for PCR detection of genetically modified maize
转基因玉米
Transgenic maize
序列
Sequence (5′–3′)
特异性
Specificity
长度
Amplicon (bp)
文献
Reference
Bt11 F: GCGGAACCCCTATTTGTTTAT
R: CTAACACCTACAGATTTTAGACCAA
tNOS/ maize genome 115 GenBank acc.
No. AY123624
Bt176 F: TTCAAGCACGGGAACTGG
R: AAGGGAGAAACGGTCGG
P35S/ maize genome 161 GenBank acc.
No. AJ878607
Mon810 F: CCCACCACAGCCACCACT
R: TGTAAAGCCAAACTCAGATGAATCA
Cry1A(b)/ maize genome 140 Hernandez et al.[8]
Mon863 F: TGACTCTACTTGTTCGGATGGGT
R: CTTGAATGATAGCCTTTCCTTTA
Maize genome/ P35S 145 Yang et al.[9]
GA21 F: CTTATCGTTATGCTATTTGCAACTT
R: TGGCTCGCGATCCTCCTCGCGTTTC
Maize genome/ r-actin1 112 Yang et al.[10]
NK603 F: GCCAGCAAGCCTTGTAGCG
R: ATTTTGGACTATCCCGACTCTCTTC
Maize genome/ p-actin1 122 GenBank acc.
No. AX342368
TC1507 F: TGGTGTTTGTGGCTCTGTCCTA
R: GCGGCTTCTGCAGCTATCCTTT
Pat / maize genome 172 Yang et al.[10]
18S rRNA F: TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA
R: AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT
137 Xu et al.[5]

1.3 探针设计
应用 Primer Premier 5.0和 Oligo 6.0软件, 按张
海燕等[6]的方法, 参照 GenBank 注册序列或文献序
列在外源基因与玉米基因组之间的连接点分别对 7
种转基因玉米设计多对 40mer Oligo 转化体特异性
探针。设计原则包括: (1) 具有较相近的 Tm值, 上下
波动范围为 5 ; (2)℃ GC含量为 45%~55%; (3) 重复
的单一碱基连续不超过 4个; (4) 探针分子最稳定二
级结构配对碱基长度不大于 4 bp[7]。探针在 5端以
氨基己烷修饰 , 氨基和探针序列之间以间隔臂
1434 作 物 学 报 第 35卷

poly(dT15)相连, 使最终探针长度为 55 bp。其中阳
性质控(18S rRNA)和阴性质控(SHDC人类表达特异
蛋白基因)探针信息来自许小丹等[5]的报道(表 2)。所
有探针在上海博亚生物公司合成。

表 2 转基因玉米寡核苷酸探针序列
Table 2 Probe sequences of genetically modified maize
转基因玉米
Transgenic maize
序列
Sequence (5–3)
特异性
Specificity
文献
Reference
Bt11 TGTATCCGCTCATGGAGGGATTCTTGGATTTTTGGTGGAG tNOS/ maize genome GenBank acc. No. AY123624
Bt176 TGCCCGTCACCGAGATCTGATGTTCTCTCCTCCATTGATG P35S/ maize genome GenBank acc. No. AJ878607
Mon810 ACCTGA ACGAGGACTTTCGGTAGCCTTCTTTCATTTCCGA Cry1A(b)/ maize genome Hernandez et al.[8]
Mon863 GGTGTTCACCCCAAAGTGTACCAAACTTTCCGATCCTACC Maize genome/ P35S Yang et al.[9]
GA21 ATACTA ACTCATATCTCTTTCTCA ACAGCAGGTGGGTCCG Maize genome/ r-actin1 Yang et al.[10]
NK603 GGCCGCGTTAACAAGCTTACTCGAGGTCATTCATATGCTT Maize genome/ p-actin1 GenBank acc. No. AX342368
TC1507 GCGGAACACAAGAACGAA AGCACCTTTTCATTCTTTCATA Pat/ maize genome Yang et al.[10]
18S rRNA ATGGTGGTGACGGGTGACGGAGAATTAGGGTTCGATTCCG Xu et al.[5]
SHDC ATTGCCAGAAGACATCCTTACTTTTATGCCCCGGAACTCC Xu et al.[5]

1.4 芯片制备
将探针溶解在芯片点样液中, 稀释成 25 μmol
L−1, 取 20 μL转移到 384孔板, 用芯片点样仪(晶芯
SmartArrayerTM-16, 北京博奥生物芯片有限公司)先
预点 40 点后再点至醛基化玻片上, 点间距为 350
μm, 点样后的芯片进行处理备用。每种样品点样 5
次重复, 并同时点以核酸固定的阳性对照(HEX)、杂
交阳性对照(PC)、阳性质控探针(18S rRNA)、阴性
质控探针(SHDC-人类表达特异蛋白基因)和空白对
照(点样液), 以保证信号的重复性及稳定性。图 1为
本研究所制备芯片阵列示意图。
1.5 PCR扩增及产物鉴定
单重 PCR反应体系为 20 μL, 含 10 μmol L−1正、
反向引物各 1 μL, 2×PCR MasterMix (0.05 U Taq
DNA聚合酶, 10 mmol L−1 Tris-HCl, pH 8.3, 50 mmol
L−1 KCl, 1.5 mmol L−1 MgCl2, 250 μmol L−1 dNTPs)
10 μL, 模板 DNA 100 ng, 以去离子水补充至总体
积 20 μL。Taq DNA聚合酶及 dNTPs、DNA分子量
标记(100 bp DNA maker)购自北京天根生化公司。
PCR 反应程序为: 预变性 95 5 min; 95 30℃ ℃ s,
60 30℃ s, 72 30 s℃ , 35次循环; 72℃延伸 3 min。取
6 μL扩增产物于 2%琼脂糖凝胶上电泳, 观察结果。
二重 PCR 反应体系为 30 μL, 含 2×PCR Mas-
terMix 15 μL, 模板 DNA 100 ng, 0.4 μmol L−1上下
游引物, 0.04 µmol L−1 18S rRNA上下游引物, 以去
离子水补充至总体积 30 μL。PCR反应程序为: 预变
性 95 5 min; 95℃ ℃ 30 s, 60 30℃ s, 72 30 s℃ , 40次
循环; 72℃延伸 5 min。取 7 μL扩增产物与 8 μL杂
交液(3×SSC, 0.2% SDS, 25%甲酰胺, 5×Denhart’s, 33

图 1 芯片阵列设计示意图
Fig. 1 Schematic chart of the oligonuclecide microarrays
A1~A5, G6~G10: 核酸固定的阳性对照(HEX); A6~A10, G1~G5:
空白对照(点样液); B1~B5: 杂交阳性对照(PC); B6~B10: GA21;
C1~C5: Bt11; C6~C10: NK603; D1~D5: Bt176; D6~D10: Mon863;
E1~E5: TC1507; E6~E10: Mon810; F1~F5: 阳性质控探针(18S
rRNA); F6~F10: 阴性质控探针(SHDC-人类表达特异蛋白基因)。
A1–A5, G6–G10: HEX; A6–A10, G1–G5: blank control; B1–B5:
PC; B6–B10: GA21; C1–C5: Bt11; C6–C10, NK603; D1–D5:
Bt176; D6–D10: Mon863; E1–E5: TC1507; E6–E10: Mon810;
F1–F5: Positive control (18S rRNA); F6–F10: negative control
(SHDC).

nmol L−1 PC杂交阳性对照样品)混匀后, 于 PCR仪
中 95℃热变性 10 min, 冰浴骤冷后加样于芯片上的
点样区, 盖玻片封片。42℃水浴杂交 2 h。杂交后, 分
别在 42℃的洗液 I (2×SSC, 0.1×SDS)和洗液 II
(0.2×SSC)中各清洗芯片 4 min, 离心甩干, 用晶芯
LuxScan 10K激光共聚焦扫描仪(北京博奥生物芯片
有限公司)进行扫描(波长 532 nm)。PMT 为 850 V,
Power为 90 V, 产生分析精度为 10 μm的 16位 TIFF
图像。用 LuxScan3.0软件进行数据采集和图像分析。
以转基因玉米 TC1507 为试验材料, 将其 DNA
与非转基因玉米郑单 958的DNA按体积比配制成转
第 8期 路兴波等: 转基因玉米转化体特异性寡核苷酸芯片检测方法的研制

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基因玉米 DNA含量分别为 100%、5%、2%、1%、0.5%、
0.1%、0.05%和 0.01%的样品, 以此为模板进行 PCR
扩增, 扩增结果分别用凝胶电泳和芯片杂交分析。
2 结果与分析
2.1 特异性引物的 PCR检测结果
分光光度计测定结果显示 A260/A280 为 1.8~2.0,
表明用 DNA提取试剂盒进行基因组 DNA提取和纯
化的结果达到纯度要求。特异性引物扩增结果显示,
仅在 7个转基因玉米品种中分别扩增出 115、161、
140、145、172、112和 122 bp的目标片段, 扩增片
段大小与预期结果一致(图 2)。
2.2 探针的特异性和灵敏度检测
2.2.1 探针特异性验证 针对转化体特异性基因
所设计的探针符合预期设计的目的, 核酸固定的阳
性对照(HEX), 杂交阳性对照(PC), 阳性质控探针(18S
rRNA)和每种转基因玉米相应探针点样位置均出现预
计的杂交斑点, 而阴性质控探针(SHDC-人类表达特
异蛋白基因), 空白对照(点样液)及其他转基因玉米探
针均未出现杂交斑点(图3), 说明产生的检测信号具有
很好的重复性, 所建立的芯片检测平台是可靠的, 达
到了对 7种转基因玉米芯片检测的目的。

图 2 转基因玉米转化体特异性 PCR检测
Fig. 2 Event specific PCR detection of genetically modified maize
M: 100 bp DNA ladder; 1–7: genetically modified (GM) maize varieties Bt11, Bt176, Mon810, Mon863, GA21, NK603, and TC1507, re-
spectively; 8: GM maize T25 (positive control); 9: non-GM maize; 10: GM soybean GTS 40-3-2; 11: GM cotton Mon531; 12: non-GM soy-
bean 1138-2; 13: non-GM cotton; 14: blank control.
1436 作 物 学 报 第 35卷


图 3 转基因玉米杂交信号图
Fig. 3 Hybridization results of genetically modified maize
1–7: genetically modified (GM) maize varieties Bt11, Bt176, Mon810, Mon863, GA21, NK603, and TC1507, respectively;
Control: non-GM maize.

2.2.2 探针灵敏度验证 转基因与非转基因玉米混
合DNA PCR检测结果表明, 该法灵敏度为0.1% (图4)。
而基因芯片检测结果显示, 随着转基因玉米 DNA的稀
释比例增加, 杂交基片上的杂交斑点逐渐减弱, 但仍明
显可见, 检测灵敏度可达 0.01%(图 5)。由此可见, 芯片
检测的灵敏度大大优于凝胶电泳检测方法。

图 4 转基因与非转基因玉米 DNA不同混合比例的 PCR扩增结果
Fig. 4 PCR detection of different concentration ratios of transgenic to non-transgenic DNA
M: 100 bp DNA ladder; 1: blank control; 2: non-transgenic Zhengdan 958; 3–10: TC1507 DNA concentration ratios of 100%, 5%, 2%, 1%,
0.5%, 0.1%, 0.05%, and 0.01%, respectively.

图 5 转基因与非转基因玉米 DNA不同混合比例的芯片扫描结果
Fig. 5 Microarray hybridization with different concentration ratios of transgenic to non-transgenic DNA
Zhengdan 958 was used as the non-transgenic maize. 1–8: TC1507 DNA concentration ratios of 100%, 5%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, and
0.01%, respectively.

第 8期 路兴波等: 转基因玉米转化体特异性寡核苷酸芯片检测方法的研制

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3 讨论
随着各国转基因标识制度的相继建立, 对转基
因检测技术的灵敏度和准确性提出了严格的要求 ,
转基因检测技术也成为研究热点。然而基因芯片技
术应用于转基因检测仅仅处于探索阶段[11], 并没有
转化成商品进行大量的使用, 筛选检测芯片通常是
检测转基因植物中 CaMV35S启动子和NOS终止子,
黄迎春等[12]利用基因芯片检测转基因植物选用了 2
种启动子序列和两种终止子序列为探针, 对转基因
水稻、木瓜、大豆、玉米进行检测。但是这两种 DNA
元件在植物的新鲜叶片或周围环境中都天然存在 ,
在检测时很容易出现假阳性[2]。基因特异性检测芯
片是检测转入转基因植物中的外源目的基因。由于
大量的转基因载体使用了相同的外源基因, 因此基
因特异性检测芯片并不适合当前转基因产品不断涌
现的现实。构建特异性检测芯片是利用基因元件之
间的边界序列特征, 能够有效鉴定使用类似基因元
件的不同构建体, 而且具有序列信息容易获得的特
点, 因此被广泛使用。 烜刘 等[13]根据转基因大豆中
所转入的外源基因, 筛选了包括构建体基因在内的
基因芯片。但是由同一个构建体可能获得不止一个
不同特性的转化株, 甚至可能被转化到不同的物种
中, 而这些转化株未必全部经过安全评估。因此构
建特异性检测芯片检测方法不能识别不同的转基因
品系, 检测结果也很容易出现假阳性, 也不能判断
该转基因品系是否经过了安全评估。
转化体特异性检测芯片的基础是转基因构建体
在基因组 DNA 序列上的整合位点具有高度特异性,
即使是相同的载体多次转化, 整合的位置和整合位
点特征也是不可能重复的。因此根据不可重复的整
合位点特征序列 , 开发出了转化体特异性检测芯
片。与前 3 种方法相比, 转化体特异性芯片检测具
有最高的特异性, 因此建立一种快速、灵敏、特异
的检测技术是当务之急。
芯片制备是基因芯片研究中最为关键的因素之
一, 在芯片制备中需严格的质量检验措施对基因芯
片制作的每一步骤进行严格质控, 并设立对照探针
对芯片杂交过程进行质控 , 以制备合格的基因芯
片。本研究中, 芯片制备时同时点有核酸固定的阳
性对照(HEX)、杂交阳性对照(PC)、阳性质控探针
(18S rRNA)和阴性质控探针(SHDC-人类表达特异
蛋白基因), 同时空白对照(点样液)也为杂交结果的
分析提供参考, 确保分析结果的可靠性。
设计和筛选稳定灵敏度高的特异性探针是建立
基因芯片检测技术的关键。本研究芯片检测具有较
高的灵敏度 , 除在探针设计中遵守一定的原则外 ,
在探针连接基质表面的一端加上间隔臂 poly(dT15)
使最终探针长度为 55 bp, 解决了由于空间位阻效应
距离基质表面越近碱基越不易被靶标分子所接近的
问题。在进行荧光标记时采用 5端标记引物法使每
次扩增片段的反链上都带有一个荧光分子, 杂交扫
描理想。在试验过程中 18S rRNA 在降低其引物浓
度的前提下较少地抑制其他引物的扩增, 且其灵敏
度大大高于被检测基因的灵敏度, 作为阳性质控探
针, 从而降低假阴性判断的概率。另外, 长的 PCR
产物由于其分子内碱基配对而产生折叠, 也将对杂
交信号产生较大的影响, 长度越长对杂交结果的影
响也将越大。本研究设计的 PCR产物都在 100~200
bp, 从而提高了基因芯片检测的灵敏度[14]。
4 结论
利用转化体特异性引物片段对 7 种转基因玉米
进行基因芯片检测, 能准确鉴定转基因作物的具体
身份, 提高了常规 PCR 检测的灵敏度, 为开展转基
因棉花、油菜、小麦、大豆和水稻等作物的检测, 建
立芯片技术体系奠定了基础。
References
[1] James C. Global status of commercialized biotech: GM crop.
ISAAA Brief, 2006, 35: 192−193
[2] Vaïtilingom M, Pijnenburg H, Gendre F, Brignon P. Real-time
quantitative PCR detection of genetically modified maize and
roundup ready soybean in some representative foods. J Agric
Food Chem, 1999, 5: 55−64
[3] Matsuoka T, Kuribara H, Akiyama H, Godu Y, Kusakabe Y, Is-
shiki K, Toyoda M, Hino A. A multiplex PCR method of detect-
ing recombinant DNAs from five lines of genetically modified
maize. J Food Hygiene Soc Jpn, 2001, 42: 24−32
[4] Zimmermann A, Lüthy J, Pauli U. Event specific transgene de-
tection in BT11 corn by quantitative PCR at the integration site.
2000, 33: 210−216
[5] Xu X-D(许小丹), Wen S-Y(文思远), Wang S-Q(王升启),
Huang K-L(黄昆仑), Luo Y-B(罗云波). Preparation of oligonu-
cleotide microarray for detecting and identifying roundup ready
soybean. J Agric Biotechnol (农业生物技术学报), 2005, 13(4):
429−434 (in Chinese with English abstract)
[6] Zhang H-Y(张海燕), Ma W-L(马文丽), Li L(李凌), Wu Q-H(吴
清华), Xu Q-L(徐秋林), Wen Y(温颖), Zheng W-L(郑文岭).
1438 作 物 学 报 第 35卷

Study on oligonucleotide microarray for detecting encephalitis B
virus. J Practical Med (实用医学杂志 ), 2005, 21(12):
1244−1247 (in Chinese with English abstract)
[7] Wang Y(王艳), Ma W-L(马文丽), Mao X-M(毛向明), Wu
Q-H(吴清华), Li L(李凌), Wang H-M(王洪敏), Xiao W-W(肖
维威 ), Zheng W-L(郑文岭 ). Design and preparation of
oligonucleotide microarray for vaccinia virus detection. J First
Military Med Univ (第一军医大学学报), 2004, 24(2): 180−183
(in Chinese with English abstract)
[8] Hernández M, Pla M, Esteve T, Prat S, Puigdomènech P,
Ferrando A. A specific real-time quantitative PCR detection sys-
tem for event MON810 in maize YieldGard based on the
3′-transgene integration sequence. Transgenic Res, 2003, 12:
179−189
[9] Yang L T, Xu S C, Pan A H, Yin C S, Zhang K W, Wang Z Y,
Zhou Z G, Zhang D B. Event specific qualitative and quantitative
polymerase chain reaction detection of genetically modified
MON863 maize based on the 5′-transgene integration sequence. J
Agric Food Chem, 2005, 53: 9312−9318
[10] Yang L T, Guo J C, Pan A H, Zhang H B, Zhang K W, Wang Z M,
Zhang D B. Event-specific quantitative detection of nine geneti-
cally modified maizes using one novel standard reference mole-
cule. J Agric Food Chem, 2007, 55: 15−24
[11] Kok E J, Aarts H J, Van Hoef A M, Kuiper H A. DNA methods:
Critical review of innovative approaches. J AOAC Intl, 2002, 85:
797−800
[12] Huang Y-C(黄迎春), Sun C-J(孙春昀), Feng H(冯红), Hu
X-D(胡晓东), Yin H-B(尹海滨). Detection of transgenic crop
with gene chip. Hereditas (遗传), 2003, 25(3): 307−310 (in Chi-
nese with English abstract)
[13] Liu X( 烜刘 ), Zheng W-J(郑文杰), Zhao W-D(赵卫东), He Y(贺
艳), Tang D-Z(唐丹舟), Liu H(刘辉). Research of gene chip for
detection of genetically modified soybean. Chin J Food Hygiene
(中国食品卫生杂志), 2005, 17(2): 85−89 (in Chinese with Eng-
lish abstract)
[14] Call D R, Brockman F J, Chandler D P. Detecting and genotyping
Escherichia coli 0157: H7 using multiplexed PCR and nucleic
acid microarrays. Intl J Food Microbiol, 2001, 67: 71−80