全 文 ：Vol. 31 , No. 7
pp. 858 - 863 　July , 2005
作 　物 　学 　报
ACTA AGRONOMICA SINICA
第 31 卷 第 7 期
2005 年 7 月 　858～863 页
利用 SSR标记分析玉米群体遗传变异的取样方法
刘　雪 3 　李明顺 3 　李新海　田清震　白　丽　张世煌 3 3
(中国农业科学院作物科学研究所/ 农业部作物遗传育种重点开放实验室 , 北京 100081)
摘 　要 : 针对 4 种多株叶片混合 DNA 取样方法 ,利用 SSR 标记分析了 Pob69 和 Pob70 群体的遗传变异 ,探讨建立玉米群
体遗传多样性分析的技术体系。从 2 个群体中分别提取 50 个单株叶片DNA 和 5、10、15、20 个单株叶片混合样本DNA ,用
均匀分布在玉米染色体上的 17 对 SSR 引物对不同处理的混合 DNA 样本进行扩增 ,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,比较了采
用不同取样方法的叶片 DNA 扩增的等位基因数目、多态性信息量和遗传多样性指数 ,表明用 10 株叶片混合提取的 DNA
样本可以代替相同数目 (10 个)的单株 DNA 的混合样本。该技术策略可以进一步减少工作量 ,提高效率 ,已用于研究大
量玉米群体的遗传关系。
关键词 : 玉米群体 ;SSR标记 ;遗传多样性 ;DNA 样本
中图分类号 : S513
Sampling Method for Genetic Variation Survey in Maize Populations Detected by
SSR Markers
LIU Xue 3 , LI Ming2Shun 3 , LI Xin2Hai , TIAN Qing2Zhen , BAI Li , ZHANG Shi2Huang3 3
( Institute of Crop Sciences , Chinese Academy of Agricultural Sciences/ Key Laboratory of Crop Genetic &Breeding , Ministry of Agriculture , Beijing 100081 , China)
Abstract : Genetic diversity in maize ( Zea mays L1) plays a key role for future breeding efforts1 Diallel analysis was used
commonly to detect the genetic variation among or in maize populations , which makes great efforts to facilitate hybrid deve2
lopment1 In recent years , molecular markers are convinced as a powerful tool in detecting the genetic diversity among maize
inbred lines , while it remains under investigation and optimization in analyzing maize populations1 The objectives of the
current research were to use SSR to (1) compare the genetic information analyzed with different bulking DNA samples , and
(2) establish the technique procedure to detect genetic variation in maize populations1 The modified CTAB method was used
to extract DNA of 50 individuals of each population and DNA samples from leaf mixture of 5 , 10 , 15 and 20 individuals ,
respectively1 17 SSR primers selected from 10 chromosomes of maize were employed for PCR amplification of DNA samples
from leaf mixture1 PCR products were separated in denaturing polyacrylamide gels in 1 ×TBE buffer , 2μL of each PCR
product were pooled1 The results showed that the DNA from leaf mixture of 10 individuals was identified to be the best
choice to replace the DNA mixture from the same number of individuals through comparing the number of alleles , polymor2
phism information content value and diversity index (Table 2 , 3) , and allel number amplified with the DNA samples from
leaf mixture of 5 and 10 individuals was significantly correlated with that with DNA mixture from the same number of indi2
viduals in two populations (Pob69 : r = 01913 and 01913 ; Pob70 : r = 01909 and 01869 ; P < 0105 ; Table 4) 1 In addi2
tion , the results of PCR amplification among DNA samples from leaf mixture and the mixture sample of individual DNA were
compared and showed that the DNA samples from leaf mixture is the optimum substitute for the mixture sample of individual
DNA (Table 5) 1 Finally , the DNA extracted from leaf mixture of 10 individuals was confirmed as a labor saving and effi2
cient approach to analyze the maize population diversity1 Now the bulking fingerprinting method has been adopted to analyze
the genetic relationships among maize populations with polyacrylamide gel electrophoresis1
Key words : Maize population ; Simple sequence repeat marker ; Genetic diversity ; DNA sample
基金项目 : 农业部 948 重大国际合作 (Q200323) 、国家自然科学基金 (30300223)和亚洲玉米生物技术协作网项目资助。
作者简介 : 刘　雪 (1979 - ) ,女 ,河北人 ,硕士研究生 ,从事玉米种质改良与生物技术研究 ; 3并列第一作者 :李明顺 (1973 - ) ,男 ,河北昌
黎人 ,助理研究员 ,主要从事玉米遗传育种及种质改良研究。3 3通讯作者 (Corresponding author) :张世煌。Tel :010268918596 ;Fax :010268975212 ; E2mail :zhangshh @mail1caas1net1cn
Received(收稿日期) : 2004209203 , Accepted(接受日期) : 20042122131

　　形态标记、细胞学标记、生理或生化标记、系谱
分析以及数量遗传学方法等都被用于植物分类和进
化研究 ,而分子标记的发展为物种在 DNA 水平上的
遗传多样性研究提供了新的工具[1 ] 。RFLP、RAPD、
SSR 和 AFLP 等分子标记先后被用于玉米 ( Zea mays
L1)自交系的遗传变异研究 [2～5 ] 。近年来 ,分子标记
技术也被用于群体的遗传变异分析[1 , 6 , 7 ] 。
利用分子标记研究异质结合群体的遗传多样性
涉及到抽样策略。Marshall 等[8 ]认为在一个群体中
选取 59 个或者更多的不相关配子就足够有 95 %的
概率检测到群体中基因频率大于 5 %的等位基因。
利用分子标记检测大量单株的遗传变异 ,可以最大
程度地反映群体的遗传基础 ,但是采用分子标记大
规模地分析单株 ,进而检测群体的遗传多样性将花
费很多的人力和物力。Reif 等[1 ]分别从 7 个玉米群
体中提取 48 个单株的 DNA ,通过采用聚丙烯酰胺凝
胶电泳和 85 对 SSR 引物划分了群体的杂种优势群 ,
这相当于分析 336 个自交系的杂种优势群的工作
量。为降低费用、提高效率 ,混合取样方法是可供选
择的技术策略。Dubreuil 等[9 ]提出用多个单株叶片
DNA 的混合样本作为模板进行群体遗传多样性分
析 ,并通过自交系的遗传多样性分析从理论上评价
了混合取样的可行性。但是用群体来证明混合取样
的可行性至关重要 ,因为群体与自交系在遗传结构
上存在很大区别。本文的目的在于 : (1)通过聚丙烯
酰胺凝胶电泳和 SSR 标记对 2 个群体的单株 DNA
和多株叶片混合提取的 DNA 样本的遗传变异分析 ,
明确用多株叶片混合取样方法研究玉米群体遗传变
异的可行性 ; (2) 通过对多株叶片混合提取的 DNA
和单株 DNA 混合样本的比较分析 ,确定用多株叶片
混合提取的 DNA 样本研究群体遗传变异的可行性。
研究结果将用于确立玉米群体遗传多样性分析的技
术策略。
1 　材料与方法
111 　供试材料
　　以优质蛋白玉米群体 Pob69 和 Pob70 (表 1)为材
料。分别从 2 个群体中提取 50 个单株 DNA ,同时提
取 5、10、15 和 20 个单株叶片混合样本的 DNA。其
中 ,单株 DNA 样品 (共 50 个样本) 用 A 表示 ,5 株叶
片混合提取的 DNA(共 10 个混合样本)用B 表示 ,10
株叶片混合提取的 DNA (共 5 个混合样本) 用 C 表
示 ,15 株叶片混合提取的 DNA (共 3 个混合样本) 用
D表示 ,20 株叶片混合提取的 DNA (共 2 个混合样
本)用 E表示 ,每个群体共获得 70 个 DNA 样本。
在聚丙烯酰胺凝胶上第 1 泳道是分子量标准
(pBR322/ Msp Ⅰ) ,将接下来的 65 个泳道分成 5 组 ,
即每 13 个泳道为 1 组。其中 ,第 1 组的 2～11 泳道
是 1～10 号单株 DNA 样本 ,第 12 和 13 泳道分别是
1～5 号和 6～10 号单株叶片混合提取的 DNA 样本 ,
第 14 泳道是 1～10 号单株叶片混合提取的 DNA 样
本 ;第 2 组的 15～24 泳道是 11～20 号单株 DNA 样
本 ,第 25 和 26 泳道分别是 11～15 和 16～20 号单株
叶片混合提取的 DNA 样本 ,第 27 号泳道是 11～20
号单株叶片混合提取的 DNA 样本 ,依次类推。第
66、67 和 68 泳道分别是 1～15、16～30 和 31～45 号
单株叶片混合提取的 DNA 样本 ;第 69 和 70 泳道分
别是 1～20 和 21～40 号单株叶片混合提取的 DNA
样本。
表 1 2 个群体的来源和特征
Table 1 The sources and description of Pob69 and
Pob70 used in the study
群体 Population 来源 Origin 种质特征 Characteristic
Pob69 CIMMYT
亚热带中熟 ,黄色硬粒型
QPM Subtropical and intermediate ma2
turity QPM pool with yellow and hard
endosperm
Pob70 CIMMYT
亚热带中晚熟 ,黄色半马齿
QPM Subtropical and intermediate ma2
turity QPM pool with yellow and semi2
dent endosperm
112 　方法
11211 　DNA 提取 　　采用 Saghai2Maroof 等[10 ]提出
的 CTAB 法提取并纯化 DNA。用 Beckman DU265 型
分光光度计检测 DNA 的质量和浓度 ,把 DNA 的工
作浓度定为 10 ng/μL ,备用。
11212 　扩增反应和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测
　　PCR 扩增反应在 PTC2200 扩增仪上进行 ,反应
总体积为 10μL ,反应成分包括 1 ×PCR 缓冲液、150
μmol/L dNTP、015 U Taq 聚合酶、20 ng DNA 模板、
0125μmol/ L SSR 引物。扩增程序为 94 ℃模板 DNA
预变性 4 min ,1 个循环 ;94 ℃模板 DNA 变性 1 min ,
60 ℃引物与模板靶位点结合 1 min ,72 ℃引物沿模板
延伸 2 min ,共 35 个循环 ;最后 72 ℃延伸 5 min。以
pBR332/ Msp Ⅰ片段为分子量标准 ,在 415 %聚丙烯
酰胺凝胶上电泳 ,银染观察结果。
11213 　数据统计分析　　SSR 扩增带型以 0、1、9 统
计 ,建立数据库。在相同迁移率位置上 ,有带记为
1 ,无带记为 0 ,缺失记为 9。50 个单株的每一个 SSR
958　第 7 期 刘 　雪等 :利用 SSR 标记分析玉米群体遗传变异的取样方法 　　　

位点的多态性信息量 (polymorphism information con2
tent , PIC) 按 Smith 等[3 ]的方法计算 ,即 PIC = 1 -6 f 2i , 其中 f i 为 i 位点的基因频率。每一个群体的
遗传多样性指数根据 Weir[11]提出的公式计算 ,即 D =
1 - 1
m 6mi = 1 6aij =1 p2ij , 其中 pij是第 i 个标记位点的第 j
个等位基因的频率 , ai 是第 i 个标记位点的等位基
因数目 , m 为标记位点数目。以 Jaccard 系数[12 ]计
算单株间的遗传相似系数 (genetic similarity , GS) ,即
GS ( jk) = a/ ( a + b + c) ,其中 a 为 j 和 k 单株共有的
位点数 ; b 为 j 有而 k 无的位点数 ; c 为 k 有而 j 无的
位点数。
2 　结果与分析
211 　2 个群体遗传变异分析
　　通过单株分析法 ,用 17 对 SSR 引物分别研究了
Pob69 和 Pob70 群体的遗传变异。在 Pob69 群体中
共检测到 72 个等位基因 ,而在 Pob70 群体中检测到
73 个等位基因 ; Pob69 的平均等位基因数为 412 ,
Pob70 群体为 413 ,变化范围都为 2～7 ;Pob69 群体的
PIC 变幅为 01258～01800 ,而 Pob70 群体的 PIC 变 幅为 01388～01777。根据遗传多样性分析 , Pob69 群体的遗传多样性指数为 01569 , Pob70 群体为 01616 ,这与大多数CIMMYT群体的遗传多样性指数基本一致[13 ] 。从遗传相似系数来看 ,在 Pob69 群体内单株间的最大相似系数为 01667 ,最小为 01184 ,平均为 01445 ; 而Pob70 群体内单株间的最大相似系数为 01689 ,最小为 01069 ,平均为 01368。可以看出 ,2 个群体内单株间的遗传距离较大 ,反映出群体具有较丰富的遗传变异。因此 ,用这样的群体建立的技术体系可用于大多数玉米群体的遗传多样性研究。212 　2 个群体单株 DNA 样本与多株混合叶片提取的 DNA样本的 PCR扩增比较　　利用 17 个均匀分布在玉米 10 条染色体上的SSR 引物 ,对 Pob69 和 Pob70 群体中 50 个单株的DNA 和多株叶片混合提取的 DNA 样本进行扩增。图 1 显示 ,引物 phi072 对 Pob70 群体不同 DNA 样本的扩增结果。单株 DNA 的扩增带型比较清楚 ,而混合 DNA 样本的带型可以基本包含单株 DNA 的扩增带。混合 DNA 样本 (最后 5 个泳道) 包含的单株数目越多 ,扩增带型越显不清晰 ,分辨率也随之降低。
图 1 引物 phi072 对 Pob70 不同 DNA样本的扩增带型
Fig11 PCR product landing pattern of 50 individuals and 4 kinds of DNA samples from leaf mixture of Pob 70 amplified by phi072
　　从表 2 和表 3 可以看出 ,对单株 DNA 样本扩增
获得的等位基因数最多 ,其余依次为 5 株、10 株、15
株和 20 株叶片混合提取的 DNA 样本。但是对于 5
株和 10 株混合 DNA 样本 (此处的 DNA 混合样本是
指多株叶片混合提取的 DNA 样本) 未检测到的等位
基因多为稀有基因 ,其频率都小于 0105。而采用 15
株和 20 株混合 DNA 样本所未能检测到的等位基因
数目进一步减少 ,且某些较高频率的等位基因也被
漏检。如用引物 UMC1061 扩增 Pob69 群体时 ,未能
检测到频率为 0113 的等位基因 ;在扩增 Pob70 群体
时未能检测到频率为 0116 和 0118 的 2 个等位基因。 这表明多株混合叶片提取的 DNA 中包含的单株数目越多 ,漏检的等位基因数目也随之增加。相关分析 (表 4)表明 ,单株 DNA 与 5 株和 10 株混合叶片 DNA 样本扩增所获得的等位基因数目显著相关 ( Pob69 分别为 01913 3 和 01913 3 , Pob70 为01909 3 和 01869 3 ) ,而与 15 株和 20 株混合 DNA 样本扩增所获得的等位基因数目的相关性则明显下降(Pob69 分别为 01689 和 01698 ,Pob70 分别为 01816 3和 01863 3 ) 。为了减少工作量 ,可以用若干个 10 株叶片混合提取的 DNA 样本代替同等数目的单株DNA 进行群体遗传变异分析。
068 　　　　作 　　物 　　学 　　报 第 31 卷 　

表 2 Pob69 群体内单株 DNA样本和多株混合叶片提取的 DNA样本获得的等位基因数目比较
Table 2 The number of alleles detected among individual DNA and bulking DNA from leaf mixture in Pob69
编号
Code
引物
Primer
染色体位置
Chromosome A B
缺少的等位基因频率
Frequency
of the absent allele
C
缺少的等位基因频率
Frequency
of the absent allele
D
缺少的等位基因频率
Frequency
of the absent allele
E
缺少的等位基因频率
Frequency
of the absent allele
1 phi056 1101 4 4 3 0103 3 0103 3 0103
2 phi011 1109 3 3 2 0101 2 0101 2 0101
3 phi96100 2100 6 5 0101 5 0101 4 0101 4 0101
4 umc1555 2102 - 2103 6 6 4 0102 4 0102 5 0102
0102 0102
5 umc1026 2104 3 3 3 3 3
6 phi374188 3102 3 3 3 3 3
7 phi072 4100 6 6 5 0102 5 0102 5 0102
8 phi213984 4101 2 2 2 2 2
9 phi085 5107 6 4 0102 4 0102 4 0102 4 0102
0101 0101 0101 0101
10 phi078 6105 2 2 2 2 2
11 phi328175 7104 3 3 3 3 3
12 umc1161 8106 5 4 0101 5 3 4 0101
13 phi080 8108 - 8109 7 6 0105 6
14 phi065 9103 4 4 3 0103 3 0103 3 0103
15 phi041 10100 6 4 0102 6 2 0102 2 0102
0102 0102 0102
0105 0105
0105 0105
16 phi062 10104 2 2 2 2 2
17 umc1061 10106 4 4 3 0103 2 0113 2 0113
0103 0103
0101 0101
总数
Total 72 65 61 47 49
平均数
Mean 41235　31824 31588 21765 21882
表 3 Pob70 群体内单株 DNA样本和多株混合叶片提取的 DNA样本获得的等位基因数目比较　
Table 3 The number of alleles detected among individual DNA and bulking DNA from leaf mixture in Pob70
编号
Code
引物
Primer
染色体位置
Chromosome A B
缺少的等位基因频率
Frequency
of the absent allele
C
缺少的等位基因频率
Frequency
of the absent allele
D
缺少的等位基因频率
Frequency
of the absent allele
E
缺少的等位基因频率
Frequency
of the absent allele
1 phi056 1101 4 4 4 3 0105 3 0105
2 phi011 1109 3 2 0104 2 0104 2 0104 2 0104
3 phi96100 2100 5 4 0102 4 0102 4 0102 3 0102
0104
4 umc1555 2102 - 2103 5 5 5 5 5
5 phi374118
3102 4 4 4 3 0103 3 0104
6 nc030 3104 3 2 0104 2 0104 2 0104 2 0104
7 phi053 3105 6 6 6 6 4 0101
0101
8 umc1399 3107 5 4 0104 4 0104 3 0104 3 0104
9 phi072 4100 6 6 6 6 5 0118
10 umc1186 6102 2 2 2 2 2
11 phi031 6104 7 5 0106 5 0106 5 0106 5 0106
0101 0101 0101 0101
12 phi078 6105 4 4 3 0106 3 0106 3 0106
13 umc1161 8106 4 4 4 4 3
14 phi065 9103 4 4 4 3 0106 4
15 phi041 10100 6 6 4 0103 3 0109 4 0103
0103 0103 0103
0103
16 phi062 10104 2 2 2 2 2
0116 0116
17 umc1061 10106 3 3 3 2 0103 2 0103
总数
Total 73 67 64 58 55
平均数 319
Mean 41294 41 31765 31412 31235
168　第 7 期 刘 　雪等 :利用 SSR 标记分析玉米群体遗传变异的取样方法 　　　

表 4 应用单株 DNA与多株混合叶片提取的 DNA样本获得的等位基因数目的相关分析
Table 4 Correlation of alleles detected among individual DNA and 4 kinds of bulking DNA samples in two populations
A B C D E
Pob69
A - 01913 3 01913 3 01689 01698
B 01909 3 - 01777 01786 01778
C 01869 3 01924 3 3 - 01536 01578
D 01816 3 01832 3 01933 3 3 - 01917 3
E 01863 3 01874 3 01878 3 01849 3 -
Pob70
　　注 : 3 , 3 3分别表示在 0105 和 0101 水平下相关显著。
Note : 3 and 3 3 mean significant at 0105 and 0101 probability levels , respectively ( r0105 = 01811 , r0101 = 01917) 1
213 　多株叶片混合提取的 DNA 与单株 DNA 混合
样本的扩增结果比较
　　仅用 14 对 SSR 引物和群体 Pob69 来分析多株
叶片混合提取的 DNA 与单株 DNA 混合样本的扩增
结果。从表 5 可以看出 ,用 10 株叶片混合提取的
DNA 与用这 10 个单株 DNA 的混合样本 (用 C′表示)
扩增获得的等位基因数目相同 ,未发现差异。而采
用 5 株叶片混合提取的 DNA 与这 5 个单株 DNA 的
混合样本 (用 B′表示) 在 3 个引物上的扩增结果有
差异。用引物 umc1555 对多株叶片混合提取的 DNA
扩增得到 4 个等位基因 ,而单株 DNA 混合样本则获
得 6 个等位基因 ,未检测到的 2 个等位基因的频率
分别为 0102 和 0104。对于引物 phi374118 ,对单株
DNA 的混合样本漏检 1 个等位基因 , 其频率为
0108。用引物 phi085 对多株叶片混合提取的 DNA
少扩增出 2 个等位基因 ,其频率分别为 0105 和
0116。在 10 株叶片混合提取的 DNA 与这 10 个单株
DNA 的混合样本之间扩增结果未发现差异 ,可能与
引物较少有关。但总的来说 ,可以用多株叶片混合
提取 DNA 来代替单株 DNA 的混合样本 ,这样既可以
减少群体遗传多样性分析时提取 DNA 的工作量 ,又
减少了电泳量 ,因而能明显地降低成本 ,提高效率。
表 5 多株叶片混合提取 DNA与单株 DNA混合样本的扩增结果比较
Table 5 Gene frequency amplified between bulking DNA samples from leaf mixture and bulks of individual DNA
引物
Primer B
缺少的等位基因频率
Frequency of the absent allele B′
缺少的等位基因频率
Frequency of the absent allele C C′
phi056 3 3 3 3
phi011 2 2 2 2
umc1555 4 0102 6 5 5
0104
umc1026 3 3 2 2
phi374118 3 2 0108 3 3
phi072 6 6 6 6
phi213984 2 2 2 2
phi085 3 0105 5 3 3
0116
phi078 2 2 2 2
phi328175 3 3 3 3
umc1161 4 4 5 5
phi080 4 4 3 3
phi041 6 6 6 6
phi062 2 2 2 2
总数 Total 47 50 47 47
3 　讨论
311 　单株 DNA 样本与多株叶片混合提取的 DNA
样本在研究玉米群体遗传多样性中的应用
　　根据单株样本研究群体的遗传多样性 ,可以比
较全面地分析群体的等位基因数、等位基因频率及
遗传结构 ,还可以检测群体中的稀有基因 ,因此能全
面地反映群体的遗传变异。但是如果研究的群体数
目很多 ,采用单株提取 DNA 的方法将花费大量的人
力、物力和财力。为了降低成本、提高效率 ,提出了
混合取样的方法。分析表明 ,对 5 株和 10 株混合叶
片的 DNA 样本与单株 DNA 样本进行扩增 ,获得的
等位基因数的相关性最高。由于混合叶片 DNA 样
本的扩增带型不是很清楚 ,混合的单株数目越多导
致读带越困难 ,亦会产生不同的读带结果。
由于用多株混合叶片的 DNA 样本进行 SSR 标
268 　　　　作 　　物 　　学 　　报 第 31 卷 　

记分析不能计算等位基因频率 ,故不能分析群体内
的遗传变异 ,而仅能计算群体间的遗传距离。分析
表明 ,用多株混合叶片的 DNA 样本检测不出一些频
率很低的等位基因 ,这会使检测到的群体遗传信息
有所降低。Dubreuil 等[9 ]和 Rebourg 等[14 ]分别用混
合取样方法研究了 10 个和 65 个群体的遗传关系 ,
每个群体取 10 株为 1 个混合样本 ,他们的研究表
明 ,用混合取样策略可以有效地反映群体的等位基
因变异 ,可以对一些不知来源或者来源不确定的群
体划分杂种优势群。从本文结果也可看出 ,混合取
样虽然会使群体的遗传信息有所降低 ,但可以用来
分析群体间的遗传关系。
本文结果表明 ,用 10 株混合叶片提取的 DNA
样本所得到的等位基因数目与 5 株混合样本的差别
只是一些基因频率很低的基因。在 Pob70 群体中 ,
用 5 株和 10 株叶片混合提取的 DNA 样本获得的等
位基因数目达到极显著高度相关 ,在 Pob69 群体中
也近显著水平 ;因而可以用 10 株叶片混合提取的
DNA 样本代替 5 株样本用于群体的遗传变异分析。
一般在 DNA 扩增过程中引物会竞争靶位点 ,进而引
起扩增反应。如果混合样本中有一个单株的 DNA
量少 ,那么在扩增过程中该摸板 DNA 可能无法与引
物结合 ,不能被扩增。用 15 和 20 株叶片混合提取
的 DNA 样本也可以揭示群体的遗传变异 ,但是混合
样本中的单株数目越多 ,电泳效果则越不好 ,也就越
不容易区分带型。因此 ,在研究群体间的遗传变异
时建议用 10 株叶片混合提取 DNA 样本。
312 　多株叶片混合提取的 DNA 和单株 DNA 的混
合样之间的扩增效果比较
　　用单株 DNA 的混合样本进行群体遗传多样性
分析是可行的 ,提取单株 DNA 后再混合 ,可以减少
一部分工作量 ,但是如果采用多株叶片混合提取
DNA ,则会更大程度地降低工作量和减少费用。本
文结果证明 ,用多株叶片混合提取的 DNA 和用单株
DNA 混合样本的扩增结果基本一致。未能检测到
的基因频率大多小于 0105 ,这说明用多株叶片混合
提取的 DNA 可以代替单株 DNA 的混合样本。
采用多株混合叶片提取的 DNA 样本 ,基于聚丙
烯酰胺凝胶电泳和 PCR 扩增技术 ,本实验室建立了
玉米群体分析的技术策略 ,目前已大规模地用于分
析国内外玉米群体间的遗传关系。在研究群体遗传
多样性时 ,如果仅是分析许多群体间的遗传关系 ,则
可以采用此技术。这一技术策略对仪器设备和技术
流程的要求相对简单。如果既要研究群体间的遗传
关系 ,还要考察群体内的遗传变异 ,则宜采用单株进
行分析。
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