作 者 ：王钧
期 刊 ：云南植物研究 1981年 3卷 01期 页码：1-3
关键词：分离；根癌；土壤；杆菌；质粒；
Keywords:simple, method, isolating, plasmids,
摘 要 ：土壤杆菌属的一些菌含有分子量达100兆道尔顿的大质粒。根癌土壤杆菌的Ti质粒是潜在的植物遗传工程载体。目前制备这类大质粒主要用Currier＆Nester[1]和van Larebeke ＆ Schell[2]的方法。一般认为土壤杆菌破壁困难，需用溶菌酶、蛋白酶。虽然Currier＆Nester[1]把DNA变性后以酚和氯仿-异戊醇清除了一些染色质，但残存染色质仍多。两法最后都靠密度梯度离心法获得纯质粒。这样，就限制了制备Ti质粒的规模。我们采用Hensen＆Olsen[3]4 ％SDS和热冲击方法破壁，在控制温菌量和破壁液比例的条件下，不用酶也能破壁。然后，用酚和氯仿-异戊醇抽提去蛋白；不经 DNA变性，用Zasloff等人的酸酚法去染色质DNA； 再用Humphreys等人的方法，以PGA6000沉淀浓缩质粒DNA.经琼脂糖电泳鉴定，得单一DNA带，无染色质扩散带。这就为大规模制备根癌土壤杆菌Ti质粒提供了可能。目前正在进一步工作。