全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 9期 2016年 5月 ·1531·
HPLC法同时测定心脑康片中 11种成分
闫 涛 1，周 慧 2*
1. 天津市环湖医院 药剂科，天津 300060
2. 天津市临床药物关键技术重点实验室，天津医科大学药学院，天津 300070
摘 要：目的 建立同时测定心脑康片中 11种成分（丹参酮 IIA、葛根素、β-蜕皮甾酮、甘草苷、芍药苷、斯皮诺素、阿魏
酸、山柰素、大黄素、细叶远志皂苷和 23-乙酰泽泻醇 B）的 HPLC分析方法。方法 采用 HPLC法测定心脑康片中丹参酮
IIA、葛根素、β-蜕皮甾酮、甘草苷、芍药苷、斯皮诺素、阿魏酸、山柰素、大黄素、细叶远志皂苷和 23-乙酰泽泻醇 B。色
谱柱为 InertSustain C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；甲醇-乙腈（1∶1，A）-0.1%磷酸水溶液（B）为流动相，梯度洗脱：
0～10.0 min，80% B；10.0～20.0 min，80%～70% B；20.0～35.0 min，70%～50% B；35.0～50.0 min，50%～30% B；体积
流量 0.9 mL/min；柱温 40 ℃；进样量 10 μL。结果 丹参酮 IIA、葛根素、β-蜕皮甾酮、甘草苷、芍药苷、斯皮诺素、阿魏
酸、山柰素、大黄素、细叶远志皂苷和 23-乙酰泽泻醇 B分离度良好，分别在 28.24～282.42、15.89～158.90、20.53～205.26、
4.09～40.94、12.08～120.76、40.03～404.30、4.08～40.75、2.13～21.25, 7.91～79.14、20.30～202.96、4.10～40.96 μg/mL线
性关系良好，r均大于 0.999 0，平均加样回收率为 98.15%～101.84%（RSD在 0.62%～1.71%）。6批样品中丹参酮 IIA、葛
根素、β-蜕皮甾酮、甘草苷、芍药苷、斯皮诺素、阿魏酸、山柰素、大黄素、细叶远志皂苷和 23-乙酰泽泻醇 B分别在 0.870～
0.887、6.321～6.329、0.857～0.866、0.171～0.179、0.369～0.377、2.128～2.136、0.088～0.099、0.148～0.155、0.113～0.121、
0.371～1.380、0.101～0.109 mg/g。结论 本法快速、灵敏度高、准确度高、专属性好，为心脑康片的质量控制提供依据。
关键词：心脑康片；丹参酮 IIA；葛根素；β-蜕皮甾酮；甘草苷；芍药苷；斯皮诺素；阿魏酸；山柰素；大黄素；细叶远志
皂苷；23-乙酰泽泻醇 B；HPLC
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2016)09 - 1531 - 04
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.09.014
Simultaneous determination of eleven ingredients in Xinnaokang Tablets by HPLC
YAN Tao1, ZHOU Hui2
1. Department of Pharmacy, Tianjin Huanhu Hospital, Tianjin 300060, China
2. Tianjin Key Laboratory of Clinical Medicine, School of Pharmacy, Tianjin Medical University, Tianjin 300070, China
Abstract: Objective To establish a method of HPLC for the simultaneous determination of eleven ingredients (tanshinone IIA,
puerarin, β-ecdysone, liquiritin, paeoniflorin, spinosin, ferulic acid, kaempferide, emodin, tenuifolin, and 23-acetate alisol B) in
Xinnaokang Tablets. Methods The contents of tanshinone IIA, puerarin, β-ecdysone, liquiritin, paeoniflorin, spinosin, ferulic acid,
kaempferide, emodin, tenuifolin, and 23-acetate alisol B were determined by HPLC. Separation was performed on an InertSustain C18
column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm); Mobile phase was methanol-acetonitrile (1∶1, A)-0.1% phosphoric acid (B), gradient elution:
0—10.0 min, 80% B; 10.0—20.0 min, 80%—70% B; 20.0—35.0 min, 70%—50% B; and 35.0—50.0 min, 50%—30% B; Flow rate
was 0.9 mL/min; Column temperature was 40 ℃; Injection volume was 10 μL. Results The separations of tanshinone IIA, puerarin,
β-ecdysone, liquiritin, paeoniflorin, spinosin, ferulic acid, kaempferide, emodin, tenuifolin, and 23-acetate alisol B were good. The
linear ranges were good, 28.24—282.42, 15.89—158.90, 20.53—205.26, 4.09—40.94, 12.08—120.76, 40.03—404.30, 4.08—40.75,
2.13—21.25, 7.91—79.14, 20.30—202.96, and 4.10—40.96 μg/mL for tanshinone IIA, puerarin, β-ecdysone, liquiritin, paeoniflorin,
spinosin, ferulic acid, kaempferide, emodin, tenuifolin, and 23-acetate alisol B, respectively, with the correlation r > 0.999 0. The
extraction recoveries varied from 98.15% to 101.84% (RSD varied from 0.62% to 1.71%). The contents of tanshinone IIA, puerarin,
β-ecdysone, liquiritin, paeoniflorin, spinosin, ferulic acid, kaempferide, emodin, tenuifolin, and 23-acetate alisol B were 0.870—0.887,

收稿日期：2015-12-26
作者简介：闫 涛，天津市环湖医院药剂科，硕士，主管药师。Tel: 13512086882 E-mail: v.maldini@163.com
*通信作者 周 慧 E-mail: zhouhui@tmu.edu.cn

中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 9期 2016年 5月 ·1532·
6.321—6.329, 0.857—0.866, 0.171—0.179, 0.369—0.377, 2.128—2.136, 0.088—0.099, 0.148—0.155, 0.113—0.121, 0.371—1.380,
and 0.101—0.109 mg/g in six batches of samples, respectively. Conclusion This method is rapid and has high sensitivity, high
accuracy, and good specificity, which can provide the basis for the quality control of Xinnaokang Tablets.
Key words: Xinnaokang Tablets; tanshinone IIA; puerarin; β-ecdysone; liquiritin; paeoniflorin; spinosin; ferulic acid; kaempferide;
emodin; tenuifolin; 23-acetate alisol B; HPLC

心脑康片是《中国药典》2015年版一部收载的
品种，由丹参、制何首乌、赤芍、枸杞子等 16味药
材制成，具活血化瘀、通窍止痛功效，用于瘀血阻
络所致的胸痹、眩晕，症见胸闷、心前区刺痛、眩
晕、头痛；扩张血管，增加冠状动脉血流量。用于
冠心病、心绞痛及脑动脉硬化症[1]。
组方药材丹参的指标成分为丹参酮 IIA，制何首
乌的主要指标成分为大黄素和大黄素甲醚，赤芍的
主要指标成分为芍药苷，葛根的主要指标成分为葛
根素，川芎的主要指标成分为阿魏酸，红花的主要
指标成分为山柰素，泽泻的主要指标成分为 23-乙
酰泽泻醇 B，牛膝的主要指标成分为 β-蜕皮甾酮，
酸枣仁的主要指标成分为斯皮诺素，甘草的主要指
标成分为甘草苷。目前，对于心脑康片中活性成分
测定的研究较少[2]。中成药的研究多基于多指标的
控制，更能全面反映中成药的质量[3-9]。《中国药典》
2015 年版中对于该中成药的定量测定方法以芍药
苷为指标进行测定。本研究首次采用 HPLC法同时
测定心脑康片中丹参酮 IIA、葛根素、β-蜕皮甾酮、
甘草苷、芍药苷、斯皮诺素、阿魏酸、山柰素、大
黄素、细叶远志皂苷和 23-乙酰泽泻醇 B 11种指标
成分，以期为更全面地控制心脑康片的质量提供参
考依据。
1 仪器与材料
Finnigan Surveyor 液相色谱仪，美国 Finnigan
公司；Mettler Toledo AB204-N电子天平，十万分之
一，梅特勒-托利多仪器公司；KQ5200型超声波清
洗器，昆山市超声仪器有限公司。
对照品丹参酮 IIA（批号 110766-201520，质量
分数 98.9%）、葛根素（批号 110752-201514，质量
分数 95.5%）、β-蜕皮甾酮（批号 111638-201505，
质量分数 95.0%）、甘草苷（批号 111610-201106，
质量分数 93.7%）、芍药苷（批号 110736-201438，
质量分数 96.4%）、斯皮诺素（批号 111869-201203，
质量分数 95.4%）、阿魏酸（批号 110773-201313，
质量分数 99.6%）、山柰素（批号 110861-201310，
质量分数 93.2%）、大黄素（批号 110756-201512，
质量分数 98.7%）、细叶远志皂苷（批号 111849-
201504，质量分数 95.6%）、23-乙酰泽泻醇 B（批
号 111846-201504，质量分数 99.0%），购于中国食
品药品检定研究院。心脑康片，规格为每片 0.25 g，
为长春海外制药集团有限公司产品，批号为
20150406、 20150407、 20150408、 20150602、
20150603、20150604。乙腈、甲醇、磷酸均为色谱
纯，购自美国 Sigma-Aldrich公司；水为超纯水，其
他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 混合对照品溶液的制备 精密称取丹参酮
IIA、葛根素、β-蜕皮甾酮、甘草苷、芍药苷、斯皮
诺素、阿魏酸、山柰素、大黄素、细叶远志皂苷、
23-乙酰泽泻醇 B 对照品适量，加 80%甲醇制成质
量浓度分别为 141.211、79.452、102.628、20.471、
60.381、202.014、20.374、10.627、39.572、101.478、
20.481 μg/mL的混合对照品溶液，摇匀，即得。
2.1.2 供试品溶液的制备 取质量差异下的本品，
研细，取 0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密
加入稀乙醇 25 mL，称定质量，超声处理（功率 250
W，频率 50 kHz）30 min，取出，放冷，再称定质
量，用稀乙醇（50%）补足减失的质量，摇匀，滤
过，取续滤液，即得供试品溶液。
2.1.3 阴性样品溶液的制备 按工艺方法制备缺少
丹参、制何首乌、赤芍、葛根、川芎、红花、泽泻、
牛膝、酸枣仁和甘草的阴性样品，按“2.1.2”项方
法制备阴性样品溶液。
2.2 色谱条件
色谱柱为 InertSustain C18柱（250 mm×4.6 mm，
5 μm）；流动相为甲醇-乙腈（1∶1，A）-0.1%磷酸
水溶液（B），体积流量 0.9 mL/min，梯度洗脱：0～
10.0 min，80% B；10.0～20.0 min，80%～70% B；
20.0～35.0 min，70%～50% B；35.0～50.0 min，
50%～30% B；分段变波长测定：0～10.0 min为 270
nm，10.0～20.0 min为 250 nm，20.0～28.0 min为
230 nm，28.0～37.0 min为 330 nm，37.0～40.0 min
为 254 nm，40.0～50.0 min为 210 nm；柱温 40 ℃；
进样量 10 μL。

中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 9期 2016年 5月 ·1533·
2.3 系统适用性试验
分别取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性样
品溶液，按“2.2”项条件进样测定，考察系统适用
性。在“2.2”项色谱条件下，各成分色谱峰与相邻
峰的分离度均大于 1.5，且阴性无干扰。色谱图见
图 1。





1-丹参酮 IIA 2-葛根素 3-β-蜕皮甾酮 4-甘草苷 5-芍药苷
6-斯皮诺素 7-阿魏酸 8-山柰素 9-大黄素 10-细叶远志皂苷
11-23-乙酰泽泻醇 B
1-tanshinone IIA 2-puerarin 3-β-ecdysone 4-liquiritin
5-paeoniflorin 6-spinosin 7-ferulic acid 8-kaempferide
9-emodin 10-tenuifolin 11-23-acetate alisol

图 1 混合对照品 (A)、供试品 (B) 与阴性样品 (C) 溶液
的 HPLC图
Fig. 1 HPLC of mixed reference substances (A), sample (B),
and negative sample (C)

2.4 方法学考察
2.4.1 线性关系考察 精密吸取“2.1.1”项下制备
的混合对照品溶液，制成 6个不同质量浓度的对照
品溶液，按“2.2”项下色谱条件进行测定。记录相
应的峰面积，以峰面积积分值为纵坐标（Y），质量
浓度为横坐标（X），绘制标准曲线并进行回归计算。
11 种成分的线性回归方程分别为丹参酮 IIA：Y＝
345.1 X－5.672 1，r＝0.999 6，线性范围 28.24～
282.42 μg/mL；葛根素：Y＝557.4 X＋58.23 8，r＝
0.999 4，线性范围 15.89～158.90 μg/mL；β-蜕皮甾
酮：Y＝81.27 X＋372.71，r＝0.999 4，线性范围
20.53～205.26 μg/mL；甘草苷：Y＝3.614 X＋72.513，
r＝0.999 5，线性范围 4.09～40.94 μg/mL；芍药苷：
Y＝11.284 X＋58.247，r＝0.999 8，线性范围 12.08～
120.76 μg/mL；斯皮诺素：Y＝44.667 X＋365.23，
r＝0.999 5，线性范围 40.03～404.30 μg/mL；阿魏
酸：Y＝384.2 X＋55.634，r＝0.999 6，线性范围
4.08～40.75 μg/mL；山柰素：Y＝32.11 X＋644.23，
r＝0.999 2，线性范围 2.13～21.25 μg/mL；大黄素：
Y＝59.28 X＋1.375，r＝0.999 3，线性范围 7.91～
79.14 μg/mL；细叶远志皂苷：Y＝582.1 X＋33.62，
r＝0.999 4，线性范围 20.3～202.96 μg/mL；23-乙酰
泽泻醇 B：Y＝73.27 X＋22.631，r＝0.999 7，线性
范围 4.10～40.96 μg/mL；结果表明 11种被测成分在
标准曲线范围内质量浓度与峰面积线性关系良好。
2.4.2 精密度试验 取批号 20150604 样品，按照
“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.2”项色
谱条件下连续进样 6次，记录峰面积。结果丹参酮
IIA、葛根素、β-蜕皮甾酮、甘草苷、芍药苷、斯皮
诺素、阿魏酸、山柰素、大黄素、细叶远志皂苷、
23-乙酰泽泻醇 B峰面积的 RSD 值分别为 0.87%、
0.81%、0.92%、0.56%、0.83%、0.95%、0.46%、0.58%、
0.64%、0.79%、0.48%，结果表明精密度良好。
2.4.3 重复性试验 取批号 20150604 样品，按照
“2.1.2”项下方法平行制备供试品溶液 6份，在“2.2”
项色谱条件下进样分析，计算丹参酮 IIA、葛根素、
β-蜕皮甾酮、甘草苷、芍药苷、斯皮诺素、阿魏酸、
山柰素、大黄素、细叶远志皂苷、23-乙酰泽泻醇 B
质量分数 RSD 值分别为 0.99%、1.11%、1.22%、
1.06%、0.85%、0.91%、1.32%、1.28%、1.14%、1.21%、
1.37%，结果表明重复性良好。
2.4.4 稳定性试验 取精密度试验下供试品溶液，
分别于 0、2、6、8、12、24 h在“2.2”项色谱条件
下进样分析，丹参酮 IIA、葛根素、β-蜕皮甾酮、甘
草苷、芍药苷、斯皮诺素、阿魏酸、山柰素、大黄
素、细叶远志皂苷、23-乙酰泽泻醇 B峰面积的 RSD
值分别为 0.65%、0.98%、0.71%、0.62%、0.77%、
0.63%、1.18%、1.62%、1.39%、1.11%、1.28%，表
明供试品溶液在 24 h内基本稳定。
2.4.5 加样回收率试验 取批号 20150604 样品 9
份，每份约 0.5 g，精密称定，分成 3组，分别按已
知质量分数的 50%、100%、150% 3个水平加入混
合对照品溶液，按照“2.1.2”项下方法平行制备供
试品溶液，进样分析，计算回收率。丹参酮 IIA、葛
1
2 3 4
5
6
7
8
9 10 11
A
B
C
1 2 3 4
5
7
6
9 8 11 10
0 10 20 30 40 50
t/min

中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 9期 2016年 5月 ·1534·
根素、β-蜕皮甾酮、甘草苷、芍药苷、斯皮诺素、
阿魏酸、山柰素、大黄素、细叶远志皂苷、23-乙酰
泽泻醇 B 的平均回收率分别为 98.15%、99.34%、
100.24%、98.93%、101.64%、99.22%、98.43%、
101.84%、101.27%、101.31%、99.81%，RSD值分
别为 1.11%、1.23%、1.47%、0.84%、0.75%、1.05%、
0.62%、1.37%、0.99%、0.77%、1.71%，表明本方
法准确度良好。
2.5 定量测定
取 6批样品，按“2.1.2”项下方法制备供试品
溶液，按“2.2”项下色谱条件进样测定，以外标法
计算各成分的质量分数，结果见表 1。

表 1 6批心脑康片中 11种成分定量测定结果
Table 1 Quantitative determination of eleven components in six batches of Xinnaokang Tablets
批号
质量分数/(mg·g−1)
丹参酮 IIA 葛根素 B 阿魏酸 β-蜕皮甾酮 甘草苷 芍药苷 斯皮诺素 山柰素 大黄素 细叶远志皂苷 23-乙酰泽泻醇
20150406 0.887 6.321 0.865 0.176 0.375 2.136 0.095 0.154 0.117 1.378 0.103
20150407 0.871 6.324 0.862 0.171 0.373 2.129 0.099 0.155 0.113 1.373 0.101
20150408 0.876 6.327 0.859 0.173 0.370 2.134 0.089 0.148 0.115 1.371 0.105
20150602 0.870 6.325 0.857 0.179 0.377 2.133 0.088 0.158 0.121 1.380 0.105
20150603 0.883 6.329 0.861 0.177 0.377 2.136 0.096 0.149 0.120 1.372 0.108
20150604 0.881 6.325 0.866 0.174 0.369 2.128 0.093 0.151 0.114 1.371 0.109

3 讨论
本实验首次建立了HPLC法同时测定心脑康片
中 11种成分的分析方法。通过二极管阵列检测器，
根据 11种成分不同的紫外吸收行为，分段波长检测
的方法对 11种成分进行测定，丹参酮 IIA的检测波
长为 270 nm，葛根素、β-蜕皮甾酮、甘草苷的检测
波长为 250 nm，芍药苷的检测波长为 230 nm，斯
皮诺素、阿魏酸、山柰素的检测波长为 330 nm，大
黄素的检测波长为 254 nm，细叶远志皂苷与 23-乙
酰泽泻醇 B的检测波长为 210 nm。由于各个化学成
分的极性差异比较大，本实验采用梯度洗脱的方式
来保证各个成分能得到有效分离，同时筛选了乙腈-
水、甲醇-水、甲醇-甲酸水、乙腈-甲酸水、甲醇-
磷酸水、乙腈-磷酸水、甲醇-乙腈-磷酸水等多个流
动相体系；多个型号的 C18色谱柱，最终确定了本
实验中的色谱条件。本法快速、灵敏度高、准确度
高、专属性好，为心脑康片的质量控制提供依据。
参考文献
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