全 文 ：·1418· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 10 期 2014 年 5 月

• 药理与临床 •
不同比例甘草配伍祖师麻抗大鼠佐剂性关节炎的实验研究
张 雯 1, 2, 3，贡 磊 1, 2, 3，周玲玲 1，单进军 1, 2, 3，陈乐天 1，许惠琴 1，狄留庆 1, 2, 3*
1. 南京中医药大学，江苏 南京 210023
2. 江苏省中药高效给药系统工程技术研究中心，江苏 南京 210023
3. 南京市中药微丸产业化工程技术研究中心，江苏 南京 210023
摘 要：目的 观察不同比例甘草配伍祖师麻对大鼠佐剂性关节炎（AA）模型的治疗作用，筛选两者配伍比例，探讨其配
伍意义。方法 采用足跖皮内注射弗氏完全佐剂制备 AA 模型，将 140 只模型大鼠随机分成 14 组：模型组，雷公藤多苷片
组，祖师麻低、中、高剂量组，甘草低、中、高剂量组，祖师麻-甘草（3∶1）低、中、高剂量组，祖师麻-甘草（3∶2）低、
中、高剂量组，另取 10 只正常大鼠为对照组，给药组大鼠造模前 2 d 开始 ig 给药，连续给药 31 d，观察各组大鼠体质量变化，
计算足肿胀度、关节炎指数（AI），采用 ELISA 法检测大鼠血清炎症细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）
的水平，观察大鼠膝关节组织病理变化，通过免疫组化法测定大鼠膝关节滑膜组织中血管内皮生长因子（VEGF）、巨噬细
胞游走抑制因子（MIF）的表达。结果 与模型组比较，祖师麻组、祖师麻甘草配伍组能够明显抑制 AA 大鼠体质量减轻的
趋势，对抗 AA 大鼠足肿胀度及 AI 的增加，降低异常升高的血清 TNF-α、IL-1β水平，改善关节病理组织变化，减少滑膜组
织 VEGF、MIF 的表达，其中以祖师麻-甘草（3∶2）配伍组效果最优。结论 祖师麻甘草配伍后，对 AA 大鼠各项指标改
善作用显著，作用优于单用祖师麻，其最佳配伍比例为祖师麻-甘草（3∶2）。调节血清炎症细胞因子 TNF-α、IL-1β 及滑膜
组织 VEGF、MIF 的表达，可能是祖师麻甘草配伍治疗类风湿性关节炎机制之一。
关键词：类风湿性关节炎；祖师麻；甘草；细胞因子；足肿胀；配伍
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)10 - 1418 - 09
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.10.013
Effect of different compatibility of Daphnes Giraldii Cortex and Glycyrrhizae
Radix et Rhizoma on adjuvant-induced arthritis in rats
ZHANG Wen1, 2, 3, GONG Lei1, 2, 3, ZHOU Ling-ling1, SHAN Jin-jun1, 2, 3, CHEN Le-tian1, XU Hui-qin1, DI Liu-qing1, 2, 3
1. Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China
2. Jiangsu Engineering Research Center for Efficient Delivery System of TCM, Nanjing 210023, China
3. Nanjing Engineering and Technology Research Center of TCM Pellets, Nanjing 210023, China
Abstract: Objective To study the therapeutic effects of different compatibility of Daphnes Giraldii Cortex (DGC) and Glycyrrhizae
Radix et Rhizoma (GRR) on rat adjuvant-induced arthritis (AA) model, to screen the compatibility ratios, and to explore the possible
mechanism. Methods AA model in SD rats was established, then the arthritic rats were randomly divided into 14 groups such as model,
Tripterygium Glycosides Tablet (TGT), low-, mid-, high-dose DGC, low-, mid-, high-dose GRR, low-, mid-, high-dose DGC + GRR (3 : 1),
and low-, mid-, high-dose DGC + GRR (3 : 2) groups, and 10 normal rats were as control group. The rats in treatment groups were ig
administered 2 d before the model establishment, for 31 d. The body weight changes were observed, the paw edema and arthritis index
(AI) were calculated, and the contents of tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-1β (IL-1β) in AA rat serum were detected by
ELISA. The expression levels of VEGF and MIF were detected with immunohistochemistry. Results DGC + GRR, and DGC
significantly inhibited the decrease of body weight, also reduced paw swelling, AI, levels of TNF-α and IL-1β in AA rat serum, joint

收稿日期：2013-10-21
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81273655）；江苏省高校科技成果产业化推进项目（JHB2012-19）
作者简介：张 雯（1988—），女，硕士研究生，研究方向为中药新剂型、新技术应用与评价。
*通信作者 狄留庆，教授，博士生导师。Tel: (025)86798226 E-mail: diliuqing@hotmail.com
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damages of AA rats, and levels of VEGF and MIF in the synovial membrane of AA rats, and the DGC + GRR (3 : 2) group had the best
effect. The differences were significantly compared with the model group (P < 0.05, 0.01). Conclusion The combined use of DGC and
GRR can obviously relieve the arthritis syndrome in AA rats by reducing the expression of serum cytokines as well as inhibiting the joint
damage, and its therapeutic effect is better than used separately. Furthermore, the curative effect is the best when the compatibility ratio of
DGC and GRR reaches 3 : 2. Reducing TNF-α and IL-1β contents in serum and the levels of VEGF and MIF in synovial membrane may be
the mechanism of drug treatment of rheumatoid arthritis.
Key words: rheumatoid arthritis; Daphnes Giraldii Cortex; Glycyrrhizae Radix et Rhizoma; cytokine; paw edema; compatibility

祖师麻为瑞香科植物黄瑞香 Daphne giraldii
Nitsche 的根皮和茎皮，同属植物唐古特瑞香 D.
tangutica Maxim、凹叶瑞香 D. retusa Hemsl、长白
瑞香 D. koreana Nakai 和同科结香属植物结香
Edgeworthia chrysantha Lindl 均可同等入药，能祛
风湿、活血止痛，有小毒，用于治疗风湿痹痛、关
节炎、类风湿性关节痛，为西部地区民间用药。甘
草具有缓急止痛、调和诸药及解毒的功效，中医有
“十方九草”之说。现代科学研究表明，甘草可以
调节机体免疫功能，甘草皂苷类成分甘草酸具有类
糖皮质激素样作用，甘草黄酮也具有较强的抗炎作
用[1]。药理实验表明祖师麻提取物具有显著的抗炎
作用[2-3]。民间用药经验表明，甘草配伍祖师麻具有
良好的增效减毒作用。本课题组前期研究发现，甘
草能够显著提高祖师麻主要活性成分瑞香素的生
物利用度[4]，但其具体药效机制尚不清楚。
类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是
一种病因不明的慢性炎性自身免疫性疾病，表现为
释放自身抗体，产生滑膜炎症，形成血管翳并破坏
软骨，使得周围关节呈非特异性的对称性炎症[5]，发
病机制目前不甚清楚。本实验拟采用大鼠佐剂性关
节炎（adjuvant-induced arthritis，AA）模型，以 RA
发病机制中重要炎症细胞因子如肿瘤坏死因子-α
（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、血管内皮生长
因子（VEGF）以及巨噬细胞游走抑制因子（MIF）
为指标，结合足肿胀度、关节炎指数（arthritis index，
AI）和膝关节组织病理变化的检查，对祖师麻甘草
配伍比例进行筛选，并探讨其可能的作用机制，以
期开发成抗 RA 新药。
1 材料
1.1 药品与试剂
祖师麻（陕西省医药公司，批号 20120812），
甘草（安徽省万生中药饮片有限公司，批号
20120901），均经南京中医药大学陈建伟教授鉴定，
祖师麻为瑞香科植物黄瑞香 D. giraldii Nitsche 的
干燥茎皮，甘草为豆科植物光果甘草 Glycyrrhiza
glabra L. 的根茎；雷公藤多苷片（浙江得恩德制药
有限公司，批号 20111016）；卡介苗冻干粉（北京
生物制品研究所，批号 20110928）；大鼠 TNF-α
ELISA 试剂盒、大鼠 IL-1β ELISA 试剂盒（美国
eBioscience 公司）；兔抗大鼠 VEGF 抗体、兔抗大
鼠 MIF 抗体（美国 Abcam 公司）；即用型快速免疫
组化 MaxVisionT 试剂盒、DAB 显色试剂，福州迈
新生物公司。
1.2 实验动物
SD 雄性大鼠，清洁级，体质量 200～220 g，
由上海斯莱克实验动物责任有限公司提供，实验动
物合格证号：SCXK（沪）2012-0002。
1.3 主要仪器
YSL—7B 足趾容积测量仪，济南益延科技发展
有限公司；PMT49984 多功能酶标仪，美国 BioTek
公司；TP1020 自动脱水机，德国 LEICA 公司；
RM2235 石蜡切片机，德国 LEICA 公司；CS—VI
摊片烤片机，湖北孝感宏业医用仪器有限公司；
Tissue-Tek TEL 组织包埋中心，日本 SAKURA 公
司；LEICA DM—1000 光学显微镜，德国 LEICA
公司；隔水式电热恒温培养箱，上海市跃进医疗器
械一厂；微波炉，TCL 有限公司；MiniSee 图像采
集系统；康克新柏图文分析软件。
2 方法
2.1 给药样品液的制备
取祖师麻、甘草饮片及其不同比例配伍组合物
祖师麻-甘草（3∶1、3∶2），分别加水煎煮 2 次（10
倍量水，2 h；5 倍量水，1 h），合并滤液，浓缩，即
得各提取物；祖师麻提取物含瑞香素 296.38 µg/mL，
甘草提取物含甘草酸 1 190.84 µg/mL、甘草苷 621.98
µg/mL，祖师麻-甘草（3∶1）提取物含瑞香素 283.45
µg/mL、甘草酸 563.93 µg/mL、甘草苷 297.35 µg/mL，
祖师麻-甘草（3∶2）提取物含瑞香素 275.52 µg/mL、
甘草酸 1 094.04 µg/mL、甘草苷 564.17 µg/mL。另取
雷公藤多苷片适量，加蒸馏水溶解制备成 937.5 mg/L
溶液，于 4 ℃冰箱保存，备用。
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2.2 造模方法[6]
2.2.1 弗氏完全佐剂的制备 取卡介苗冻干粉，80
℃灭活 30 min 后，与液体石蜡、羊毛脂以 3∶2 比
例于研钵内研磨混匀，制备成 10 mg/mL 的混悬液，
高压灭菌。
2.2.2 AA 模型的制备 大鼠适应性饲养 3 d 后，
取 140 只，于左后足跖皮内注射弗氏完全佐剂 0.1
mL 制备 AA 模型。另取大鼠 10 只，于相同部位，
采用相同方法注射 0.1 mL 生理盐水，作为对照组。
2.3 分组及给药
造模大鼠随机分为 14 组，每组各 10 只，即模
型组、12 个给药组及阳性对照组，其中给药组分别
设祖师麻低、中、高剂量（生药 405、810、1 620
mg/kg）组，甘草低、中、高剂量（生药 270、540、
1 080 mg/kg）组，祖师麻-甘草（3∶1）配伍低、中、
高剂量 [生药（405＋135）、（810＋270）、（1 620＋
540）mg/kg] 组，祖师麻-甘草（3∶2）配伍低、中、
高剂量 [生药（405＋270）、（810＋540）、（1 620＋
1 080）mg/kg] 组，分别相当于临床拟用剂量的 1、
2、4 倍，阳性对照组给予雷公藤多苷片 7.5 mg/kg。
以上各组 ig 给予相应剂量药物，给药体积均为 8.0
mL/kg，于造模前 2 d 开始给药，每天给药 1 次，连
续给药 31 d。另取 10 只正常大鼠为对照组，模型
组与对照组 ig 给予同体积的蒸馏水。
2.4 观察与检测指标
2.4.1 大鼠一般情况观察 在给药前及给药后第
3、10、17、24、29 天，分别测量各组大鼠体质量。
每天观察大鼠体毛色泽的改变，神志及活动状态，
饮食变化及关节红肿情况。
2.4.2 大鼠足肿胀度的测量 在大鼠踝关节处作
标记，用大鼠足趾容积测量仪分别测量造模前大鼠
左右足跖体积，造模后第 1、2、3 天左后足跖体积，
造模后第 8、10、12、16、20、24 天右后足跖体积，
测量 3 次，取平均值，并计算关节肿胀度。
肿胀度＝造模后足跖体积 / 造模前足跖体积
2.4.3 AI 的计算[7] 造模后第 7 天开始观察并记录
全身关节病变程度，每 7 天记录 1 次。全身病变按
5 级评分法评价，根据未注射佐剂的其余 3 只肢体
的病变程度累计积分，计算出 AI。0 分：无红肿；
1 分：足小趾关节红肿；2 分：趾关节和足跖均肿
胀；3 分：踝关节以下的足爪均肿胀；4 分：包括
踝关节在内的全部足爪红肿。把各个关节的积分累
计起来，即为每只大鼠的 AI。
2.4.4 血清TNF-α和 IL-1β的检测 于末次给药2 h
后，大鼠麻醉颈总动脉取血，离心 10 min，转速为
3 000 r/min，采集血清并分装，ELISA 法检测血清
TNF-α 和 IL-1β 水平。
2.4.5 病理组织学观察 连续给药 31 d 后，颈动脉
取血，并处死大鼠，取其膝关节用 10%福尔马林固
定，经过脱钙、脱水、常规石蜡包埋，切片（厚度
4～5 μm）和常规 HE 染色后，检查阅片，具体观察
指标包括：炎细胞浸润、滑膜病变、骨质破坏、关
节肿胀等病理变化。
2.4.6 滑膜组织VEGF和MIF的测定 采用免疫组
化二步法测定大鼠膝关节滑膜组织中VEGF和 MIF
的表达。将病理组织学实验所得石蜡切片脱蜡水
化，PBS 冲洗，正常兔血清封闭，滴加 VEGF（1∶
200）、MIF（1∶200）抗体孵育，PBS 冲洗，滴加
即用型快速免疫组化 MaxVision 二抗，孵育后 PBS
冲洗，滴加显色剂 DAB，自来水冲洗，苏木素复染
细胞核，流水冲洗返蓝，梯度乙醇脱水，中性树胶
封片。应用免疫组化分析方法，使用康克新柏图文
分析软件分析切片，在每只大鼠滑膜组织切片中于
100 倍镜下随机采集 5 个视野图像，分别计算积分
吸光度平均值。
2.5 统计学方法
数据以 ±x s 表示，应用 SPSS 16.0 统计软件对
多样本均数间比较采用 One-way ANOVA 分析，组
间比较采用方差分析和两样本均数比较的 t 检验。
3 结果
3.1 不同比例甘草配伍祖师麻对 AA 大鼠一般情
况的影响
与对照组相比，大鼠造模 10 d 后，表现出精神
倦怠、活动减少、食欲下降、被毛失去光泽且体质
量减轻（P＜0.01），其余各组大鼠的活力、毛色、
状态均优于模型组。祖师麻组、祖师麻-甘草（3∶1）
及祖师麻-甘草（3∶2）配伍组在造模 17 d 后，均
可剂量依赖性地缓解 AA 大鼠体质量的减轻，与模
型组比较，差异显著（P＜0.05、0.01）。祖师麻-甘
草（3∶2）组抑制 AA 大鼠体质量减轻趋势优于祖
师麻组及祖师麻-甘草（3∶1）组。结果见表 1。
3.2 不同比例甘草配伍祖师麻对 AA 大鼠足肿胀
度的影响
AA 大鼠早期致炎局部发生炎症反应，注射后
数小时内足跖注射部位即出现红肿等炎症反应，持
续 2～3 d 后逐渐减轻，此为原发性病变，至造模 8
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d 后再度肿胀；继发性病变由迟发超敏反应所致，
一般出现于致炎后 10 d 左右，表现为造模足跖对侧
和前肢的肿胀，炎症呈进行性加重，少数大鼠耳、
尾部出现红斑和炎性结节。
与对照组比较，模型组大鼠足肿胀度显著增加
（P＜0.01）。祖师麻组、祖师麻-甘草（3∶1）组、祖
师麻-甘草（3∶2）组均能抑制 AA 大鼠足肿胀度的
增加，有一定的剂量依赖性。随着祖师麻、甘草剂
量增加，其对大鼠足肿胀度的抑制率逐渐增加（P＜
0.05、0.01）。祖师麻甘草合用后，降低足肿胀度趋
势大于单用祖师麻组，且祖师麻-甘草（3∶2）组药
效优于祖师麻-甘草（3∶1）组。结果见表 2 和 3。
表 1 不同比例甘草配伍祖师麻对 AA 大鼠体质量的影响 ( ± = 10x s , n )
Table 1 Effects of different compatibility of DGC and GRR on body weight of AA rats ( ± = 10x s , n )
体质量 / g 组别 剂量 /
(mg·kg−1) 造模前 给药后第 3 天 给药后第 10 天 给药后第 17 天 给药后第 24 天 给药后第 29 天
对照 — 222.90±21.75 255.90±18.32 302.60±27.22 332.90±21.84 370.10±22.15 371.50±23.41
模型 — 228.40±11.74 235.80±15.70 272.80±19.91## 292.80±26.42## 305.60±52.66## 287.40±36.73##
雷公藤多苷片 7.5 223.10±16.03 246.80± 8.60 288.20±21.22 324.40±25.52** 356.60±25.57** 368.10±68.36**
祖师麻 405 223.20±14.58 242.80±15.88 281.40±17.24 324.60±23.40* 344.50±20.75* 341.00±22.18**
810 222.90±17.27 237.60±22.91 284.40±25.18 327.50±24.51** 349.70±31.92** 347.60±31.22**
1 620 222.00±18.91 245.10±16.27 280.60±18.57 327.40±23.52** 344.20±32.90* 343.30±30.60**
甘草 270 223.00±13.32 249.80±12.60 279.00±11.20 326.00±31.33** 331.40±24.63 330.50±26.16*
540 219.10±15.63 248.70±16.36 279.00±20.06 320.20±30.28 336.70±37.96 332.40±38.40*
1 080 220.40±13.10 236.60±18.73 282.40±18.73 322.00±26.88* 344.10±34.22* 344.10±34.22*
祖师麻-甘草 405＋135 220.60±18.28 246.20±20.69 269.90±25.17 310.80±29.84 326.60±32.84 328.70±33.65*
（3∶1） 810＋270 218.20±14.26 242.80±17.66 285.10±20.62 325.50±33.14** 347.90±37.65** 344.60±36.09**
1 620＋540 222.30±17.49 245.70±14.55 279.10±26.49 325.60±38.20** 348.60±44.40** 349.70±42.23**
祖师麻-甘草 405＋270 219.80±17.35 239.40±18.69 275.70±23.17 326.60±27.60** 342.90±36.73** 344.40±34.99**
（3∶2） 810＋540 226.40±13.41 247.50±18.36 291.90±26.96 327.30±32.06** 365.10±41.31** 362.30±39.26**
1 620＋1 080 217.30±14.35 242.20±14.77 282.60±23.85 330.90±21.12** 351.40±24.92** 350.50±24.63**
与对照组比较：#P＜0.05 ##P＜0.01；与模型组比较：*P＜0.05 **P＜0.01，下表同
#P < 0.05 ##P < 0.01 vs control group; *P < 0.05 **P < 0.01 vs model group, same as below
表 2 不同比例甘草配伍祖师麻对 AA 大鼠原发性足肿胀的影响 ( ± = 10x s , n )
Table 2 Effects of different compatibility of DGC and GRR on primary swelling degree of joints in AA rats ( ± = 10x s , n )
足跖肿胀度 组别 剂量 /
(mg·kg−1) 造模后第 1 天 造模后第 2 天 造模后第 3 天
对照 — 1.05±0.08 1.09±0.08 1.07±0.06
模型 — 1.85±0.16## 1.80±0.17## 1.86±0.18##
雷公藤多苷片 7.5 1.70±0.10* 1.61±0.11* 1.61±0.14**
祖师麻 405 1.85±0.11 1.78±0.16 1.84±0.21
810 1.72±0.10* 1.65±0.12* 1.65±0.13**
1 620 1.78±0.24 1.71±0.19 1.75±0.21
甘草 270 1.78±0.14 1.74±0.22 1.79±0.20
540 1.73±0.09 1.70±0.11 1.74±0.12
1 080 1.71±0.10* 1.65±0.12* 1.71±0.14*
祖师麻-甘草（3∶1） 405＋135 1.77±0.13 1.70±0.13 1.70±0.16*
810＋270 1.71±0.19* 1.63±0.15** 1.60±0.26**
1 620＋540 1.83±0.14 1.77±0.14 1.81±0.17
祖师麻-甘草（3∶2） 405＋270 1.74±0.16 1.70±0.12 1.78±0.08
810＋540 1.65±0.11** 1.62±0.10** 1.61±0.13**
1 620＋1 080 1.69±0.12* 1.65±0.14* 1.80±0.22
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3.3 不同比例甘草配伍祖师麻对 AA 大鼠 AI 的影响
造模第 7 天开始，多发性 AI 升高，模型组与
对照组相比，AI 有显著性差异（P＜0.01）。祖师麻
组、祖师麻-甘草（3∶1）、（3∶2）组，随剂量增加，
均有降低 AI 作用（P＜0.05、0.01）。雷公藤多苷片
也能够抑制 AA 大鼠 AI 的增加（P＜0.01）。祖师麻
甘草配伍组优于祖师麻组，祖师麻-甘草（3∶2）组
降低 AI 的药效优于（3∶1）组。结果见表 4。
3.4 不同比例甘草配伍祖师麻对 AA 大鼠血清中
TNF-α 和 IL1-β 水平的影响
与对照组比较，模型组大鼠血清中 TNF-α 和
IL-1β 水平明显升高（P＜0.01）。祖师麻组、甘草组、
祖师麻-甘草（3∶1）和（3∶2）组及雷公藤多苷
片组均能明显降低 AA大鼠血清中 TNF-α和 IL-1β
表 3 不同比例甘草配伍祖师麻对 AA 大鼠继发性足肿胀的影响 ( ± = 10x s , n )
Table 3 Effects of different compatibility of DGC and GRR on secondary swelling degree of joints in AA rats ( ± = 10x s , n )
足肿胀度 组别 剂量 /
(mg·kg−1) 造模后第 8 天 造模后第 10 天 造模后第 12 天 造模后第 16 天 造模后第 20 天 造模后第 24 天
对照 — 1.05±0.05 1.01±0.05 1.03±0.03 1.04±0.04 1.12±0.09 1.11±0.05
模型 — 1.10±0.04# 1.09±0.04## 1.22±0.09## 1.43±0.25## 1.83±0.58## 1.94±0.58##
雷公藤多苷片 7.5 1.06±0.06* 1.02±0.08** 1.04±0.06** 1.04±0.06** 1.14±0.07** 1.14±0.09**
祖师麻 405 1.10±0.04 1.03±0.05* 1.13±0.04** 1.20±0.05** 1.30±0.14** 1.38±0.20**
810 1.08±0.03* 1.02±0.05** 1.12±0.05** 1.18±0.05** 1.25±0.09** 1.33±0.17**
1 620 1.08±0.04 1.00±0.04** 1.10±0.04** 1.17±0.06** 1.25±0.05** 1.27±0.07**
甘草 270 1.02±0.06** 1.03±0.05** 1.12±0.05** 1.19±0.10** 1.28±0.31** 1.32±0.22**
540 1.05±0.06* 1.03±0.06* 1.15±0.07** 1.28±0.23** 1.39±0.42** 1.40±0.40**
1 080 1.09±0.08 1.04±0.08* 1.20±0.09 1.22±0.10** 1.26±0.17** 1.32±0.14**
祖师麻-甘草 405＋135 1.05±0.03* 1.05±0.04 1.12±0.06** 1.15±0.12** 1.19±0.17** 1.25±0.17**
（3∶1） 810＋270 1.05±0.06* 1.02±0.03** 1.13±0.04** 1.17±0.07** 1.23±0.10** 1.26±0.08**
1 620＋540 1.03±0.04** 1.02±0.05** 1.12±0.08** 1.19±0.05** 1.19±0.05** 1.26±0.07**
祖师麻-甘草 405＋270 1.05±0.04* 1.01±0.04** 1.14±0.05** 1.17±0.05** 1.18±0.06** 1.26±0.04**
（3∶2） 810＋540 1.04±0.06** 1.00±0.05** 1.12±0.07** 1.17±0.15** 1.19±0.05** 1.23±0.08**
1 620＋1 080 1.06±0.02* 1.01±0.06** 1.10±0.07** 1.15±0.08** 1.20±0.08** 1.22±0.06**

表 4 不同比例甘草配伍祖师麻对 AA 大鼠 AI 的影响 ( ± = 10x s , n )
Table 4 Effects of different compatibility of DGC and GRR on AI of AA rats ( ± = 10x s , n )
AI 组别 剂量 /
(mg·kg−1) 造模后第 7 天 造模后第 14 天 造模后第 21 天 造模后第 28 天
对照 — 0 0 0 0
模型 — 2.20±0.63## 5.00±2.54## 9.00±2.16## 9.80±0.63##
雷公藤多苷片 7.5 1.20±0.42** 2.40±0.84** 3.80±1.48** 4.20±1.75**
祖师麻 405 1.60±0.52* 3.30±0.95 5.80±1.14** 6.00±1.33**
810 1.40±0.52** 3.20±1.40 5.20±1.40** 5.80±1.48**
1 620 1.20±0.42** 2.80±0.92* 4.90±0.88** 5.60±1.26**
甘草 270 1.20±0.42** 3.20±1.40 5.40±2.50** 6.20±2.39**
540 1.20±0.42** 3.60±1.58 5.80±2.57** 6.40±2.27**
1 080 1.50±0.71* 4.00±1.63 5.80±2.57** 6.90±2.03**
祖师麻-甘草（3∶1） 405＋135 1.50±0.53* 3.00±0.82* 4.90±2.77** 5.80±3.19**
810＋270 1.40±0.70* 3.00±1.41* 4.80±1.40** 5.20±1.93**
1 620＋540 1.20±0.42** 2.60±0.97* 4.60±1.07** 5.20±1.93**
祖师麻-甘草（3∶2） 405＋270 1.20±0.42** 2.90±0.74* 4.40±1.26** 5.60±1.33**
810＋540 1.10±0.32** 2.60±1.35* 4.20±1.03** 4.60±1.90**
1 620＋1 080 1.10±0.32** 2.50±0.97** 4.10±1.29** 4.40±1.58**
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 10 期 2014 年 5 月 ·1423·

的量，与模型组比较，差异显著（P＜0.01）；且
祖师麻-甘草（3∶2）中、高剂量组分别与祖师麻
中、高剂量组比较，TNF-α、IL-1β 水平均明显降
低（P＜0.01）。提示祖师麻甘草合用能显著降低
AA 大鼠血清中 TNF-α 和 IL-1β 的水平，具有显著
的抗炎效果，效果明显优于单用祖师麻，且祖师
麻-甘草（3∶2）配伍比例效果优于（3∶1）。结果
见表 5。
表 5 不同比例甘草配伍祖师麻对 AA 大鼠血清 TNF-α 和 IL-1β 水平的影响 ( ± = 10x s , n )
Table 5 Effects of different compatibility of DGC and GRR on levels of TNF-α and IL-1β in serum of AA rats ( ± = 10x s , n )
组别 剂量 / (mg·kg−1) TNF-α / (pg·mL−1) IL-1β / (pg·mL−1)
对照 — 12.06±1.26 19.08±1.32
模型 — 54.43±2.99## 106.80±2.89##
雷公藤多苷片 7.5 15.82±1.02** 34.05±2.34**
祖师麻 405 30.67±1.63** 84.75±2.35**
810 25.49±0.93** 75.72±2.02**
1 620 21.51±0.76** 66.76±1.36**
甘草 270 23.66±1.40** 71.09±2.21**
540 21.84±2.10** 64.94±1.79**
1 080 17.79±1.74** 58.65±2.10**
祖师麻-甘草（3∶1） 405＋135 21.78±1.05** 67.27±2.41**
810＋270 20.69±1.56** 60.16±1.28**
1 620＋540 17.97±2.12** 47.18±1.55**
祖师麻-甘草（3∶2） 405＋270 20.87±0.46** 62.32±1.83**
810＋540 17.88±2.32**●● 51.21±1.51**●●
1 620＋1 080 13.73±1.30**○○ 43.57±1.69**○○
与祖师麻中剂量组比较：●●P＜0.01；与祖师麻高剂量组比较：○○P＜0.01
●●P < 0.01 vs DGC mid-dose group; ○○P < 0.01 vs DGC high-dose group
3.5 不同比例甘草配伍祖师麻对 AA 大鼠关节组
织病理改变的影响
大鼠膝关节经固定、脱钙、石蜡包埋、切片后
HE 染色，光镜下观察发现：对照组关节滑膜细胞
结构完整，排列整齐，细胞下为疏松结缔组织，无
炎症细胞浸润，关节软骨完整、光滑、软骨下骨组
织结构清晰；模型组关节滑膜细胞增生严重，滑膜
细胞下的结缔组织因胶原纤维增生而变得致密，滑
膜内多量淋巴细胞浸润，成纤维细胞增生，关节肿
胀，腔内见蛋白性液体渗出、局部关节软骨细胞肿
胀，脱落；雷公藤多苷片组滑膜表面光滑，有较少
炎细胞覆盖，浅层偶见少量淋巴细胞浸润和胶原纤
维增生，关节腔软骨光滑平坦；祖师麻组关节滑膜
中度增生，间质可见炎细胞浸润，局部间皮细胞脱
落；甘草组，间质可见较多炎细胞浸润，血管增生，
关节腔软骨局部细胞肿胀；祖师麻-甘草（3∶1）组
关节滑膜上皮增生，滑膜间皮轻度增多，间皮增生
呈上皮样，间质可见个别炎细胞浸润；祖师麻-甘草
（3∶2）组关节表面及关节腔软骨表面光滑，未见
明显炎细胞浸润，表面间皮 1～2 层。见图 1。
与祖师麻组比较，祖师麻甘草配伍组大鼠关节
组织病理得到明显改善，只有轻度结缔组织增生，
及少量淋巴细胞浸润。且祖师麻-甘草（3∶2）组药
效优于祖师麻-甘草（3∶1）组。
3.6 不同比例甘草配伍祖师麻对 AA 大鼠滑膜组
织 VEGF 和 MIF 表达的影响
3.6.1 光镜下免疫组织学观察 对照组关节滑膜组
织未见炎细胞浸润，滑膜表面间皮完整，血管轻度增
生，VEGF 弱表达，MIF 中度表达；模型组关节滑膜
有多量炎细胞浸润，血管及间皮显著增生，间皮水肿，
局部间皮脱落，VEGF 呈高度表达，MIF 重度表达；
雷公藤多苷片组滑膜组织未见明显炎细胞浸润，血管
轻度增生，滑膜表面间皮完整，VEGF 轻度表达，
MIF 中度表达；祖师麻中剂量组滑膜少量炎细胞浸
润，血管中度增生，表面间皮完整，VEGF 呈中度表
达，MIF 高度表达；甘草中剂量组滑膜表面较多炎细
胞浸润，血管显著增生，表面间皮增生，VEGF 呈中
等偏高表达，MIF 高度表达；祖师麻-甘草（3∶1）
组滑膜组织少量炎细胞浸润，血管轻度增生，VEGF
中度表达，MIF 高表达；祖师麻-甘草（3∶2）组偶
见炎细胞浸润，血管轻度增生，滑膜表面间皮完整，
VEGF 轻度表达，MIF 中度表达。见图 2、3。
·1424· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 10 期 2014 年 5 月



对照 模型 雷公藤多苷片 祖师麻中剂量

甘草中剂量 祖师麻-甘草（3∶1）中剂量 祖师麻-甘草（3∶2）中剂量
图 1 各组 AA 大鼠滑膜组织病理组织学观察结果
Fig. 1 Pathological observation of synovial membraneof AA rats in each group

对照 模型 雷公藤多苷片 祖师麻中剂量

甘草中剂量 祖师麻-甘草（3∶1）中剂量 祖师麻-甘草（3∶2）中剂量
图 2 各组 AA 大鼠滑膜组织 VEGF 免疫组化染色结果
Fig. 2 Immunohistochemical straining detection of VEGF in synovial membrane of AA rats in each group
3.6.2 不同比例甘草配伍祖师麻对 AA 大鼠滑膜组
织 VEGF、MIF 表达的影响 与对照组比较，模型
组大鼠滑膜组织中 VEGF、MIF 积分吸光度值显著
增高（P＜0.01）；与模型组比较，祖师麻甘草（3∶
1）、（3∶2）配伍组中 VEGF、MIF 积分吸光度值显
著降低（P＜0.01），降低程度优于祖师麻单味药组，
且祖师麻甘草（3∶2）配伍组与祖师麻组比较，
VEGF 明显降低（P＜0.05），提示甘草配伍祖师麻
后，能明显增强祖师麻降低炎症滑膜组织总 VEGF、
MIF 表达的药效。结果见表 6。
4 讨论
RA 是一种发病机制未明、以关节炎症为主的慢
性自身免疫性疾病，其主要病变是滑膜炎、软骨破坏、
血管增生及血管翳形成，其中细胞因子的异常产生在
RA 关节软骨和骨破坏中起至关重要的作用[8]。
研究表明，TNF-α、IL-1β 能够启动与维持 RA
炎症免疫反应，在RA发病中起着关键作用。TNF-α、
IL-1β 通过刺激滑膜细胞与软骨细胞中胶原酶、白
细胞介素 6（IL-6）、前列腺素 E2（PGE2）和基质
金属蛋白酶（MMPs）的合成及释放[9]，参与多种
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 10 期 2014 年 5 月 ·1425·


对照 模型 雷公藤多苷片 祖师麻中剂量

甘草中剂量 祖师麻-甘草（3∶1）中剂量 祖师麻-甘草（3∶2）中剂量
图 3 各组 AA 大鼠滑膜组织 MIF 免疫组化染色结果
Fig. 3 Immunohistochemical straining detection of MIF in synovial membrane of AA rats in each group
表 6 不同比例甘草配伍祖师麻对 AA 大鼠滑膜组织 VEGF、MIF 积分吸光度值的影响 ( ± = 10x s , n )
Table 6 Effects of different compatibility of DGC and GR on VEGF and MIF in synovial membrane of AA rats ( ± = 10x s , n )
组别 剂量 / (mg·kg−1) VEGF / (×109) MIF / (×109)
对照 — 2.14±0.39 2.91±0.81
模型 — 4.63±0.11## 4.22±0.19##
雷公藤多苷片 7.5 3.41±0.50** 3.32±0.73**
祖师麻中剂量 810 4.24±0.15** 3.91±0.23*
甘草中剂量 540 4.48±0.19 4.10±0.30
祖师麻-甘草（3∶1）中剂量 810＋270 4.13±0.36 ** 3.85±0.21**
祖师麻-甘草（3∶2）中剂量 810＋540 3.89±0.33**● 3.62±0.30**
与祖师麻中剂量组比较：●P＜0.05
●P < 0.05 vs DGC mid-dose group
病理过程，引起 RA 患者局部炎症反应加剧，免疫
功能紊乱，造成骨与软骨不可逆性破坏，以及血管
翳的形成[10-11]。因此，降低 TNF-α、IL-1β 异常增
高的水平，可以缓解 RA 病情的发展。
血管新生是 RA 慢性增生性滑膜炎和血管翳形
成不可或缺的一部分，其中，VEGF 是 RA 血管新
生的主要因子，能够促进新血管分化和生成，并且
可以促使血管内物质的外渗，加重滑膜组织炎症和
血管翳的形成，对关节炎的发生和发展起着重要作
用。因此可以通过抑制 VEGF 的表达，达到缓解滑
膜炎症、减轻关节肿胀、延缓骨破坏的目的[12]。近
来研究发现，MIF 是 RA 发病过程中的始动因素[13]，
能够活化巨噬细胞，抑制其游走移动，增强其在炎
症局部的浸润、聚集，并诱导巨噬细胞和活化的 T
细胞分泌大量细胞因子，如 TNF-α、IL-1β、IL-6、
NO 等，诱导产生环氧化酶途径的中间产物如花生
四烯酸、PGE2，上调 MMPs 的表达，极大地促进
炎症和免疫反应。故 MIF 可以作为评估 RA 疾病活
动情况和治疗效果的指标。
本实验结果显示，祖师麻组、甘草组及祖师麻
甘草配伍组可明显抑制 AA 大鼠血清中 TNF-α、
IL-1β 水平异常升高，并且降低滑膜组织中 VEGF、
MIF 的表达，祖师麻甘草配伍组药效优于祖师麻组
和甘草组。由此推测祖师麻与甘草，在治疗 RA 时
所表现的抗炎作用，可能是通过调节 TNF-α、IL-1β、
VEGF及MIF等细胞因子的产生而抑制炎性细胞浸
润、滑膜组织增生和血管翳的形成，减轻软骨和骨
破坏，从而发挥疗效。因此，将祖师麻与甘草配伍
使用治疗 RA，可以发挥协同增效作用，且祖师麻-
甘草（3∶2）是其最佳配伍比例，这体现了祖师麻
·1426· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 10 期 2014 年 5 月

与甘草配伍即中医药配伍理论的意义，为临床两者
的配伍应用提供了可靠的实验依据，同时也为中药
复方的研究和新药的开发提供了新的思路与方法。
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