全 文 ：第 30卷 第 3期
2016年 6月
齐 鲁 工 业 大 学 学 报
JOUＲNAL OF QILU UNIVEＲSITY OF TECHNOLOGY
Vol．30 No．3
Jun． 2016
收稿日期:2016－04－11 网络出版时间:2016－06－29
基金项目:国家自然科学基金(32160250)
作者简介:李响(1994—)，男，安徽淮南人，本科，研究方向:临床医学．
* 通讯作者:李耀东(1964—)，男，湖南人，教授，硕导，硕士，liyaodong6401@ 126．com．
文章编号:1004－4280(2016)03－0020－04 DOI:10．16442 / j．cnki．qlgydxxb．2016．03．005
余甘子对类风湿性关节炎的影响
李 响，张晴晴，李耀东*
(青海大学 医学院，青海 西宁 810000)
摘 要:建立模型后各组大鼠给予相应灌胃给药，以大鼠体重变化、足爪肿胀体积、关节炎指数(AI)、关节软
骨和滑膜组织的病理变化以及血清中 TNF-α含量变化，研究余甘子抗 ＲA的作用效果。与模型组比较，余甘子高、
低剂量组与西药组均可见足爪肿胀体积小、AI 值低、关节病理变化轻以及血清中 TNF-α 含量少，其中余甘子高剂
量组效果最明显。余甘子对大鼠佐剂性关节炎具有治疗作用。
关键词:余甘子;类风湿性关节炎;弗氏完全佐剂
中图分类号:Ｒ285．5 文献标识码:A
The in fluence of Phyllanthi Fructus on Ｒheumatoid Arthritis
LI xiang，ZHANG qing-qing，LI yao-dong *
(School of medicine，Qinghai University，Xining 810000，China)
Abstract:Methods:Each group of rats were given the appropriate gavage after the establishment of
the model．With measuring the changes in rats’weight，paw swelling volume，arthritis index (AI)，
pathological changes in articular cartilage and synovial tissue and the levels of serum TNF-α，the
Phyllanthi Fructus effects of anti-ＲA were studied．Ｒesults:Compared with model group，the Phyllanthi
Fructus high and low dose group and western medicine group were seen that paw swelling volume was
small，AI value was low，the joint pathological changes were light and the content of serum TNF-αwas
less，Wherein the effect of the high dose group was most obvious．Conclusion:The Phyllanthi Fructus has a
therapeutic effect on adjuvant arthritis of rats．
Key words:Phyllanthi Fructus;rheumatoid arthritis;Freund＇s complete adjuvant
类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，ＲA)是一
种常见的以慢性多关节炎症为主要表现的全身性自
身免疫性疾病。其基本病理改变是滑膜炎，继而引
起骨破坏和骨侵蚀，晚期可导致关节畸形和功能严
重受损，以致不能正常学习、工作和生活，甚至危及
生命给病人带来巨大的生理和心理痛苦，给家庭和
社会带来沉重的经济负担［1］。30 岁以后的人群中，
超过 80%的人都有风湿骨痛病史，而且随着年龄的
增长，发生率会逐渐增加［2］。目前临床上尚缺乏根
治 ＲA的方案和预防的措施，仅仅是对症治疗，寻找
新的安全有效的抗 ＲA 药物，成为国内外医药工作
者们的重大任务和难题。1990 年“余甘子”被载入
《中国药典》。余甘子又名山油柑、油甘子、余甘果
等，为大戟科叶下珠属植物余甘子的干燥成熟果
实［3］。余甘子具有多种作用:清除自由基和抗氧化
作用，抗肝损伤作用，抗病原微生物和抗炎作用，抗
肿瘤作用等［4－5］，有关其在抗类风湿性关节炎的相
关研究却少有报道。本次实验旨在通过建立大鼠佐
剂性关节炎模型，研究余甘子的抗 ＲA作用，为临床
用药提供科学依据。
第 3期 李 响，等:余甘子对类风湿性关节炎的影响
1 材料与仪器
1．1 药材
余甘子(西宁中藏药材批发市场)
1．2 仪器
高速多功能粉碎机(ＲHP－200A，浙江永康市荣
浩工贸有限公司);电子天平(BT224S，赛多利斯科
学仪器有限公司);旋转蒸发仪(ＲE－52A，上海亚荣
生化仪器厂);电热恒温水浴锅(DK－2000ⅢL，天津
市泰斯特仪器有限公司);恒温振荡器(SHZ－82 国
华企业)。
1．3 试剂
乙醇;Freund＇s完全佐剂;大鼠 TNF-α 定量酶联
检测试剂盒
1．4 动物
SD大鼠 50只(由西宁市地方病研究所提供)，
清洁级，雄性，体重(180±20)g。
2 方 法
2．1 余甘子浸膏制备
取余甘子粉末，以料液比 1 ∶ 10加入 70%乙醇，
于室温下超声提取 30 min，抽滤后在旋转蒸发仪上
浓缩，水浴干燥至浸膏状。
2．2 模型建立
50只大鼠适应性饲养 1 周后随机分为 5 组，即
余甘子高剂量组(6 g /kg)、低剂量组(1．5 g /kg)、西
药组(地塞米松 0．1 mg /kg)、模型组和空白对照组
各 10只。空白对照组大鼠右后足趾皮内注射生理
盐水，其余各组于每只大鼠右后足跖皮内注射弗氏
完全佐剂 0．1 ml致炎，共 1周。
2．3 实验动物给药
建模成功后，模型组、空白组以 1 ml /100 g体重
生理盐水给大鼠灌胃，其他组按对应组别给予相应
的药物浓度剂量灌胃，连续 21 d。
2．4 检测指标
2．4．1 体重的测量
从实验第 1天起称重，以后每隔 6天称重 1次。
2．4．2 足肿胀的测量方法
第 9 d起，隔 4 d测量右后足肿胀足爪容积，并
根据给予 FCA 前后的容积之差计算肿胀度(ml)。
2．4．3 AI的计算
致炎后第 12 天开始观察并记录全身关节病变
程度，1次 /3 d。全身病变按 5 级评分法评价，根据
未注射佐剂的其余 3 个肢体的病变程度累计积分，
计算出多发性关节炎指数(AI)。无红肿为 0 分;小
趾关节红肿为 1分;趾关节和足跖肿胀为 2分;踝关
节以下的足爪肿胀为 3 分;包括踝关节在内的全部
足爪肿胀为 4 分。把各个关节的积分累计起来，即
为每只大鼠的 AI。
2．4．4 观察关节软骨及滑膜组织的病理变化
肉眼观察:将动物处死后，解剖其右后踝关节，
肉眼观察其关节软骨有无缺损和软化灶，关节腔有
无积液，关节局部有无骨赘形成等表现。并按关节
软骨面的大体评分标准和滑膜组织的大体评分
rydell-balazes标准进行标准评分(见表 3)。
光镜观察:软骨标本经常规 HE 染色后，在光镜
下观察膝关节的软骨结构、软骨细胞数的变化、基质
染色及潮线的完整性。
2．4．5 血清 TNF-α检测
采用 ELISA双抗体夹心法，操作步骤按试剂盒
说明书进行测定。
2．5 统计学方法
所得数据都用均数±标准差(x±s)的形式表示，
采用统计学软件 SPSS 18． 0 进行相关的统计学分
析，组间数据采用单因素方差分析。P＜0．05 表示结
果差异有统计学意义。
3 实验结果
3．1 体重
造模过程中，大鼠体重呈下降趋势，但 P＞0．05，
不具有统计学意义;给药过程中，体重有所上升，但
P＞0．05，不具有统计学意义。
3．2 足肿胀的测量
由表 1 可见余甘子高、低剂量组与西药组相较
于模型组可明显抑制大鼠右足趾关节肿胀程度，且
余甘子高剂量组抑制效果最为明显，余甘子低剂量
组及西药组抑制效果相似。
表 1 AA大鼠继发侧关节肿胀度的变化(n=10，x±s)
组别
足爪肿胀体积(ml)
Day9 Day13 Day1 7Day21
空白对照组 0．08±0．03 0．13±0．07 0．19±0．11 0．20±0．10
高剂量组 0．31±0．19＆＆ 0．39±0．18## 0．42±0．20## 0．35±0．14#
低剂量组 0．28±0．11＆＆ 0．52±0．13# 0．55±0．17# 0．51±0．16
西药组 0．28±0．10＆＆ 0．51±0．17# 0．58±0．21# 0．50±0．13
模型组 0．32±0．17＆＆ 0．68±0．18＆＆ 0．79±0．23＆＆ 0．65±0．10＆＆
注:＆P＜0．05，＆＆P＜0．01 与空白对照组比较;#P＜ 0．05，##P＜
0．01与模型组相比较
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3．3 AI的计算
空白对照组无明显病变，AI值为 0，故未行统计
学分析。由表 2 可见余甘子高、低剂量组与西药组
相较于模型组可明显抑制 AA 大鼠多发性关节炎评
分分值，且余甘子高剂量组效果最明显，余甘子低剂
量组及西药组抑制效果相似。
表 2 AA大鼠 AI的变化(n=10，x±s)
组别
关节炎评分
Day12 Day15 Day18 Day21
高剂量组 6．28±2．24 7．22±1．86# 8．17±0．98# 7．14±1．32#
低剂量组 6．32±3．11 7．64±1．13 8．55±1．17 8．51±1．16
西药组 6．50±3．67 8．25±1．81 8．53±1．19 8．89±1．30
模型组 6．32±1．70 9．54±1．50 11．86±1．54 10．13±2．13
注:#P＜0．05具有显著差异性，与模型组相比较
3．4 关节软骨及滑膜组织的病理变化
3．4．1 肉眼观察
空白对照组无明显病变，关节软骨及滑膜组织
大体评分为 0，故未行统计学分析。由表 3 可知，与
模型组比较，余甘子高剂量组大体评分明显降低，有
显著性差异(P＜0．01)，说明余甘子对大鼠关节组织
有明显的保护作用。
表 3 软骨和滑膜大体评分和统计结果
组别 例数 软骨大体评分 滑膜大体评分
高剂量组 10 1．17±0．01## 1．18±0．04##
低剂量组 10 1．73±0．03## 2．10±0．01#
西药组 10 1．77±0．03## 2．09±0．01#
模型组 10 2．78±0．01 2．75±0．04
注:#P＜0．05具有显著差异性;##P＜0．01与模型组相比较
3．4．2 光镜观察
由图 1 可观察到，模型组右踝关节滑膜组织呈
现广泛的间质纤维化表现，细胞增生明显;西药组滑
膜呈现慢性炎症修复性表现，以淋巴细胞浸润为主;
余甘子低剂量组血管增生明显，有炎性细胞浸润;余
甘子高剂量组没有明显的血管增生，且充血不明显，
纤维化不明显。由此可知，余甘子可有效缓解大鼠
的局部炎症反应，对大鼠佐剂性关节炎有治疗作用。
a:空白对照组 b:模型组 c:西药组 d:低剂量组 e:高剂量组
图 1 关节软骨和滑膜 HE染色结果(×100)
3．5 血清 TNF-α检测
如表 4所示，模型组右踝关节软骨内，TNF-α 的
表达水平有所增加，与空白对照组相比，P＜0．05，差
异有显著性。与模型组比较，余甘子高剂量组 TNF-
α的表达水平降低，P＜0．05，具有统计学意义。
表 4 血清 TNF-α水平检测结果
组别 例数 TNF-α
空白对照组 10 0．16±0．01
高剂量组 10 0．29±0．04#
低剂量组 10 0．34±0．02
西药组 10 0．32±0．02
模型组 10 0．34±0．04＊＊
注:#P＜0．05具有显著差异性，与模型组相比较;＊＊P＜0．01 与
空白组相比较
4 讨 论
类风湿性关节炎是一种慢性全身自身免疫性疾
病，主要以关节病变为主，可反复发作，致残率较高。
近年来，许多学者认为细胞炎症因子分泌过多是导
致关节炎病理改变的主要机制。余甘子果实富含鞣
质及有关多元酚类化合物，其量高达 11．4%［6］。余
甘子多酚是余甘子最主要的抗氧化成分，其可以通
过抑制诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2
(COX-2)表达以及抑制核转录因子-κB(NF-κB)信
号通路而降低氧化应激的损伤［7］。此外，余甘子果
实还含有黄酮、多糖、三萜、甾醇、脂肪酸、蒽醌、维生
素、氨基酸、蛋白质等成分［8］。本实验采用 Freund’
s完全佐剂建立大鼠关节炎模型，结果显示，余甘子
可减轻大鼠足爪肿胀程度，降低关节炎指数。由病
理切片和血清 TNF-α水平检测分析，余甘子对关节
的保护作用机制可能与其减少炎性细胞的浸润，降
低炎性介质 TNF-α 的水平有关。模型组中 TNF-α
的含量与空白对照组相比显著增加(P＜0．01)，说明
佐剂性关节炎大鼠血清中确实有分泌过量 TNF-α，
TNF-α体外可以促进 IL-17 的产生，并驱动 T 细胞
分化成 Th17 细胞亚型［9］，过量的 TNF-α 不仅可以
使其信号通路发生异常，还可以和其他促炎性细胞
因子刺激破骨细胞分化和活化，而引起骨丢失，刺激
滑膜成纤维细胞和软骨细胞产生降解软骨的蛋白
酶［10］。与模型组相比，余甘子高剂量组可显著降低
血清中 TNF-α的含量，从而降低炎性介质对关节细
胞的刺激，起到抗类风湿性关节炎的作用，此次试验
将为未来临床治疗类风湿性关节炎提供重要的理论
依据。
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第 3期 李 响，等:余甘子对类风湿性关节炎的影响
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(责任编辑:刘 青，校 对:张云瑞)
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