全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 7 期 2015 年 4 月

·970·
葛根枳椇软胶囊中黄酮类化合物的 UPLC/Q-TOF-MS 快速分析
孙冬梅 1，董玉娟 2，胥爱丽 1，罗文汇 1，江洁怡 1
1. 广东省中医药工程技术研究院，广东 广州 510095
2. 广州中医药大学，广东 广州 510405
摘 要：目的 采用 UPLC/Q-TOF-MS 技术对葛根枳椇软胶囊中的黄酮类成分进行定性分析。方法 采用 Agilent Poroshell
120 SB-C18色谱柱（100 mm×2.1 mm，2.7 μm），以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相梯度洗脱，体积流量 0.4 mL/min；质谱定性
采用飞行时间质谱，电喷雾离子源，负离子模式下采集数据；质谱的相关参数：干燥气温度 300 ℃，干燥气体积流量 10 L/min，
雾化气压力 276 kPa，鞘流气温度 350 ℃，鞘流气流量 11 L/min，毛细管电压 3 500 V，碎片电压 175 V。结果 结合质谱数
据及文献数据分析，鉴定出 20 个黄酮类化合物，相对分子质量集中于 250～650。结论 借助 UPLC 的快速分离和 Q-TOF-MS
测定的精确相对分子质量，可以有效地对葛根枳椇软胶囊中黄酮类成分进行分析鉴定。该方法准确、快速、灵敏，为其质量
控制提供了实用可靠的技术手段。
关键词：UPLC/Q-TOF-MS；葛根枳椇软胶囊；野葛；枳椇；黄酮类化合物
中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2015)07 - 0970 - 07
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.07.007
Rapid analysis on flavonoids in Gegen Zhiju Soft Capsule by UPLC/Q-TOF-MS
SUN Dong-mei1, DONG Yu-juan2, XU Ai-li1, LUO Wen-hui1, JIANG Jie-yi1
1. Guangdong Province Engineering Technology Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou 510095, China
2. Guangzhou Universisty of Chinese Medicine, Guangzhou 510405, China
Abstract: Objective To identify the flavonoids in Gegen Zhiju Soft Capsule (a soft capsule prepared with Puerariae Radix and
Hoveniae Dulcis Fructus seu Semen and so on) using ultra performance liquid chromatography coupled with quadrupole-time-of-
flight mass spectrometry (UPLC/Q-TOF-MS). Methods The analysis was performed on Agilent Poroshell 120 SB-C18 column (100
mm × 2.1 mm, 2.7 μm) gradient elution with a mobile phase of 0.1% formic acid aqueous solution and acetonitrile. The flow rate was
at 0.4 mL/min. TOFMS was applied for qualitative analysis, and the data were collected by the negative ion mode using ESI ion source.
The parameters of ion source were as follows: drying gas temperature, 300 ℃; drying gas flow rate, 10 L/min; nebulizer gas pressure,
276 kPa, sheath gas temperature, 350 ℃; sheath gas flow rate, 11 L/min; capillary voltage, 3 500 V; fragmentor voltage, 175 V.
Results Twenty flavonoid compounds were identified by TOF-MS and literature data. Relative molecular weight was concentrated
within 250—650. Conclusion The rapid separation with UPLC and Q-TOF-MS determination of the precise molecular weight
information could effectively analyze and identify the flavonoid compounds in Gegen Zhiju Soft Capsule. The method is accurate,
rapid, and sensitive, and could provide a reliable and effective technique for the quality control.
Key words: ultra performance liquid chromatography coupled with quadrupole-time-of-flight mass; Gegen Zhiju Soft Capsule;
Puerariae Radix; Hoveniae Dulcis Fructus seu Semen; flavonoids

葛根为豆科（Leguminosae）植物野葛 Pueraria
lobata (Willd.) Ohwi 的干燥根，是《中国药典》2010
年版收录的常用中药之一，其性凉，味甘、辛，归
脾、胃、肺经，具有解肌退热、生津止渴、透疹、
升阳止泻、通经活络、解酒毒之功效。临床上多用
于外感发热头痛、项背强痛、口渴、消渴、麻疹不
透、热痢、泄泻、眩晕头痛、中风偏瘫、胸痹心痛、
酒毒伤中等症[1]。枳椇子为鼠李科（Rhamnaceae）
拐枣属 Hovenia Thunb. 植物枳椇 Hovenia acerba
Lindl. 的干燥成熟种子，属养阴、生津、润燥、止
渴、凉血类药物。其主要为清热利尿、止渴除烦、
解酒毒，用于热病烦渴、呃逆、小便不利[2]。葛根

收稿日期：2014-09-28
基金项目：广州市科技计划项目（201300000062）
作者简介：孙冬梅（1969—），硕士，主任中药师，主要从事中药质量评价研究。Tel: (020)83482683 E-mail: dyjhua@163.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 7 期 2015 年 4 月

·971·
枳椇软胶囊是以葛根提取物与枳椇子提取物为主要
原料，经国家食品药品监督管理局批准的保健食品，
对化学性肝损伤有辅助保护功能。目前，采用
HPLC-MS 方法对葛根成分的定性与定量的相关研
究已有不少报道[3-5]，耗时多为 1 h 以上；枳椇子成
分的相关研究[6-7]较少，未见对葛根枳椇软胶囊制剂
的相关报道。以天然植物为原料开发的保健食品，
每一味中药都是一个复杂体系，包含着丰富的化学
成分。而这类保健食品以测定总黄酮、粗多糖、总
皂苷等或只测定 1～2 个化学成分的量作为质量控
制指标[8]，针对性不强，测定结果不稳定。
本实验拟采用 UPLC/Q-TOF-MS 技术建立同时
测定葛根枳椇软胶囊中多种黄酮类功效成分的快速
分析方法，为阐明其功效物质基础及质量控制提供
一定的研究思路和方法。
1 仪器和试药
Agilent 1290 型液相色谱仪（在线脱气机，二元
泵，高性能自动进样器和 DAD 检测器）；Agilent
Technologies 6540 UHD Accurate-Mass Q-TOF
LC/MS 质 谱 仪 （ MassHunter workstation Data
Acquisition 工 作 站 和 MassHunter Qualitative
Analysis software 质谱分析软件）；KQ5200DE 型数
控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；
Mettler XS205DU 电子天平（瑞士梅特勒托利多公
司）；MilliPore Advantage A10 自动纯水机（美国默
克密理博公司）。
芦丁（批号 0080-9504）、葛根素（批号 110752-
200912）、大豆苷（批号 111738-201302）、染料木
苷（批号 111709-200501）、大豆苷元（批号 100502-
200402）、鹰嘴豆芽素 A（批号 111708-200501）、槲
皮素（批号 10081-200907）、异鼠李素（批号 110860-
200406）对照品均购于中国食品药品检定研究院；
芒柄花苷（批号 486-62-4，质量分数≥98%，购于
成都瑞芬思生物科技有限公司）；3′-甲氧基葛根素
（批号 117047-07-1，质量分数≥98%，购于上海纯优
生物）；鸢尾黄素-7-O-木糖葡萄糖苷（批号 117047-
1205，质量分数≥98%，购于上海古朵生物科技有
限公司）；甲醇、乙腈为色谱纯试剂（默克），水为
超纯水；葛根枳椇软胶囊（总黄酮 5.10 mg/g；批号
14010201）购于威海紫光生物科技开发有限公司。
2 实验方法
2.1 色谱条件
色谱柱为 Agilent Poroshell 120 SB-C18（100
mm×2.1 mm，2.7 μm）；流动相为乙腈（A）-0.1%
甲酸水溶液（B），梯度洗脱：0～2 min，10%～15%
A；2～3 min，15%～17% A；3～5 min，17%～27%
A；5～6 min，27%～35% A；6～8 min，35% A。
柱温 25 ℃；体积流量 0.4 mL/min；进样体积 1 μL；
紫外检测波长 254 nm。
2.2 质谱条件
电喷雾负离子模式；质量扫描范围 m/z 50～
1 000；离子源参数：干燥气温度 300 ℃，干燥气
体积流量 10 L/min，雾化气压力 276 kPa，鞘流气温
度 350 ℃，鞘流气流量 11 L/min，毛细管电压 3 500
V，碎片电压 175 V，碰撞电压 15～40 V，离子能
量 1 eV，每 0.2 秒采集 1 次图谱；选择参比校准液
甲酸盐加合物（商品名 HP0921，相对分子质量 966，
C19H19O8N3P3F24）作实时质量数校正。
2.3 供试品溶液制备
取 10 粒软胶囊的内容物，搅拌均匀，取内容物
0.5 g，加 25 mL 甲醇，超声 30 min，冷却，冰箱保持
冷却 2 h，待油脂类物质析出后，定性滤纸趁冷滤过，
滤液再过微孔滤膜（0.22 μm），作为供试品溶液。
2.4 对照品溶液制备
取芦丁、葛根素、大豆苷、染料木苷、芒柄花苷、
大豆苷元、鹰嘴豆芽素 A、槲皮素、异鼠李素、3′-甲
氧基葛根素、鸢尾黄素-7-O-木糖葡萄糖苷对照品适
量，精密称定，加甲醇分别制成含芦丁 51.0 μg/mL、
葛根素 48.6 μg/mL、大豆苷 40.4 μg/mL、染料木苷 41.2
μg/mL、芒柄花苷 51.3 μg/mL、大豆苷元 10.4 μg/mL、
鹰嘴豆芽素 A 36.4 μg/mL、槲皮素 30.1 μg/mL、异鼠
李素 20.4 μg/mL、3′-甲氧基葛根素 45.2 μg/mL、鸢尾
黄素-7-O-木糖葡萄糖苷 39.7 μg/mL 的溶液，过 0.22
μm 微孔滤膜，即得，备用。
3 结果与分析
3.1 葛根枳椇软胶囊中黄酮类化合物的鉴别
葛根枳椇软胶囊中的黄酮类化合物极性较大且
热不稳定，分子中的羟基容易形成稳定的氧负离子，
使用 ESI 离子源，负离子模式检测所得总离子流图
（图 1）有较好的信噪比，且与 254 nm 波长下紫外
检测色谱图基本吻合。通过对色谱峰进行二级质谱
研究，20 个化合物的准确相对分子质量和离子碎片
信息数据见表 1。
对总离子流图中主要的 20 个色谱峰进行鉴别。
首先，根据 TOF-MS 上所得到的精确化合物相对分
子质量信息，通过 MassHunter Qualitative Analysis
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 7 期 2015 年 4 月

·972·

图 1 葛根枳椇软胶囊提取液的总离子流图
Fig. 1 Total ion current chromatograms of extract from
Gegen Zhiju Soft Capsule
Software 质谱分析软件在质量偏差为 5 的范围内计
算其可能的元素组成，将可能的元素组成与高分辨
相对分子质量输入 Agilent MassHunter Molecular
Structure Correlator 数据库中查找有关的化学成分结
构，与文献报道[9-15]的化学成分进行比对，结合保留
时间及裂解碎片信息进行综合分析，初步推断葛根
枳椇软胶囊提取液中的黄酮类成分的结构。
3.2 葛根枳椇软胶囊中黄酮类化合物的结构解析
峰 1：葛根素-4′-O-β-D-葡萄糖苷。通过该峰的相
表 1 葛根枳椇软胶囊提取物中黄酮类化合物的 UPLC-PDA-TOF/MS 分析
Table 1 Analysis on flavonoids in extract from Gegen Zhiju Soft Capsule by UPLC-Q-TOF-MS/MS
负离子模式 (m/z) 峰号 tR/min 化合物名称 分子式 测量值 理论值 偏差 MS/MS 碎片离子信息
1 1.371 葛根素-4′-O-β-D-葡萄糖苷 C27H30O14 577.156 2 [M－H]− 577.155 2 −1.77 457
2 1.761 大豆素-4′,7-O-葡萄糖苷 C27H30O14 623.161 8 [M＋HCOO－H]− 623.160 7 −1.83 415
3 1.935 3′-氢化葛根素 C21H20O10 431.098 9 [M－H]− 431.097 3 −3.78 283, 311
4 2.251 3′-氢化葛根素木糖苷 C26H28O14 563.140 6 [M－H]− 563.139 5 −1.90 283, 311
5 2.683 葛根素 C21H20O9 415.103 5 [M－H]− 415.102 4 −2.76 267, 295
6 2.890 3′-甲氧基葛根素 C22H22O10 445.115 1 [M－H]− 445.112 9 −4.90 325, 310, 297, 282
7 2.940 葛根素-7-木糖苷 C26H28O13 547.146 8 [M－H]− 547.144 6 −4.00 295, 267
8 3.114 3′-甲氧基葛根素木糖苷 C27H30O14 577.155 8 [M－H]− 577.155 2 −1.07 325, 310, 297, 282
9 3.584 大豆苷 C21H20O9 461.109 1 [M＋HCOO－H]− 461.107 8 −2.74 415, 253
10 3.895 3′-甲氧基大豆苷 C22H22O10 491.119 4 [M＋HCOO－H]− 491.118 4 −2.04 445, 283
11 4.069 染料木素-8-C-芹菜葡萄糖苷 C26H28O1 563.140 2 [M－H]− 563.139 5 −1.19 283, 311
12 4.567 芦丁 C27H28O16 609.148 0 [M－H]− 609.145 0 −4.91 301, 300
13 4.907 染料木苷 C21H20O10 477.103 6 [M＋HCOO－H]− 477.102 8 −1.78 431, 269
14 5.115 鸢尾黄素-7-O-木糖葡萄糖苷 C27H30O15 593.152 0 [M－H]− 593.150 1 −3.21 284
15 5.204 6-羟基鹰嘴豆芽素 A-6,7-二葡萄糖苷 C28H30O16 623.163 2 [M－H]− 623.160 7 −4.08 315, 314
16 6.061 芒柄花苷 C22H22O9 475.124 8 [M＋HCOO－H]− 475.123 5 −2.77 267
17 6.402 大豆苷元 C15H10O4 253.050 8 [M－H]− 253.049 5 −5.02 223, 208, 195, 133, 132
18 6.543 鹰嘴豆芽素 A C16H12O5 283.061 7 [M－H]− 283.060 1 −4.96 268
19 6.579 槲皮素 C15H8O7 301.034 8 [M－H]− 301.034 3 −1.66 178, 151, 121, 107
20 7.846 异鼠李素 C16H12O7 315.050 6 [M－H]− 315.049 9 −2.22 300, 151, 107

对分子质量理论值为 577.155 2，实测值为 577.156 2，
可推断其分子式为 C27H30O14，以 m/z 577.156 2 为
母离子，进行二级质谱分析，所得二级质谱图中有
明显的 457 [M－H－C4H8O4]− 碎片离子信息，是其
母分子离子失去 C4H8O4（Mv 120）分子产生的，推
测其裂解途径见图 2。
峰 2：大豆素-4′,7-O-葡萄糖苷。质谱给出分子
离子峰 m/z 623.161 8 [M＋HCOO－H]−，推断其分
子式为 C27H30O14，以 m/z 623.161 8 为母离子进行
二级质谱分析，所得谱图中有明显的 415 [M－H－
O
O
O
HO
HO
OH
CH2OH
HO
Om/z 577
O
O
HO
O
m/z 457
HO
glc
glc
-H
-H

图 2 葛根素-4′-O-β-D-葡萄糖苷可能的裂解途径
Fig. 2 Possible fragmentation mechanism of puerarin-4′-O-β-
D-glucoside
0 1 2 3 4 5 6 7 8
t/min
1 2
3
4
5
6
7
8
9
10 11
12
13
14
15
16
17
18
19 20
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 7 期 2015 年 4 月

·973·
Glc]− 碎片离子信息，推测是其母分子离子失去葡萄
糖分子（Mv 162）产生的。
峰 3：3′-氢化葛根素。质谱给出分子离子峰 m/z
431.098 9 [M－H]−，推断其分子式为 C21H20O10，以
m/z 431.098 9 作为母离子进行二级质谱分析，所得
谱图中有明显的 311、283 碎片离子信息，311 [M－
H－120]−为糖环的交叉环切除裂解，丢失 C4H8O4
（Mv 120）分子形成的碎片离子，283 [M－H－120－
28]− 是继而丢失 1 个 CO 分子形成的碎片离子。
峰 4：3′-氢化葛根素木糖苷。质谱给出分子离
子峰 m/z 563.140 6 [M－H]−，推断其分子式为
C26H28O14，以 m/z 563.140 6 作为母离子进行二级质
谱分析，所得谱图中有明显的 311、283 碎片离子信
息，311 [M－H－Xyl－120]−为其母分子离子失去木
糖分子（Mv 132），再丢失 C4H8O4（Mv 120）分子
形成的碎片离子，283 [M－H－Xyl－120－28]− 是继
而丢失 1 个 CO 分子形成的碎片离子。
峰 5：葛根素。质谱给出分子离子峰 415.103 5
[M－H]−，推断其分子式为 C21H20O9，以 m/z 415.103 5
为母离子进行二级质谱分析，所得谱图中有明显的
295、267 碎片离子信息，295 [M－H－120]－为糖环
的交叉环切除裂解，丢失 C4H8O4（Mv 120）分子
形成的碎片离子，267 [M－H－120－28]－是继而丢
失 1 个 CO 分子形成的碎片离子，裂解途径同峰 3。
峰 6：3′-甲氧基葛根素。质谱给出分子离子峰
m/z 445.115 1 [M－H]−，推断其分子式为 C22H22O10，
以 m/z 445.115 1 作为母离子进行二级质谱分析，所
得二级质谱图中有明显的 325、310、297、282 碎片
离子信息。325 [M－H－120]− 为糖环的交叉环切除
裂解，丢失 C4H8O4（Mv 120）分子形成的碎片离
子，310 [M－H－120－15]− 是继而丢失 1 个 CH3
分子形成的碎片离子，297 [M－H－120－28]− 是
继 325 碎片丢失 1 个 CO 分子形成的碎片离子，
282 [M－H－163]−是其母离子失去葡萄糖分子产
生的碎片离子。推测其裂解途径见图 3。
峰 7：葛根素-7-木糖苷。质谱给出分子离子峰
547.146 8 [M－H]−，可推断其元素组成为 C26H28O13，
以 m/z 547.146 8 为母离子，进行二级质谱分析，所得
谱图中有明显的 295、267 碎片离子信息。295 [M－
H－Xyl－120]−为其母分子离子失去木糖分子（Mv
132），再丢失 C4H8O4（Mv 120）分子形成的碎片
离子，267 [M－H－Xyl－120－28]− 是其继而丢失 1
个 CO 分子形成的碎片离子。
O
O
HO
OH
OCH3
O
HO
HO
OH
CH2OH
HO
HO
O
O
OCH3
OH
m/z 445 m/z 325
HO
HO
O
O
O
OH
-CH3
-CO
HO
HO
O
OCH3
OH
-glc
m/z 297
m/z 310
O
O
HO
OH
OCH3
-H
-H
-H -H
-H
m/z 282

图 3 3′-甲氧基葛根素可能的裂解途径
Fig. 3 Possible fragmentation mechanism of 3′-methoxy-
puerarin
峰 8：3′-甲氧基葛根素木糖苷。质谱给出分子
离子峰 m/z 577.155 8 [M－H]−，推断其分子式为
C27H30O14，以 m/z 577.155 8 作为母离子进行二级质
谱分析，所得谱图中有明显的 325、310、297、282
碎片离子信息。325 [M－H－Xyl－120]− 为其母分
子离子失去木糖分子（Mv 132），继而丢失 C4H8O4
（Mv 120）分子形成的碎片离子，310 [M－H－Xyl－
120－15]− 是继而丢失 1 个 CH3 分子形成的碎片离
子，297 [M－H－Xyl－120－28]− 是继 325 碎片丢
失 1 个 CO 分子形成的碎片离子，282 [M－H－
Xyl－Glc]− 是其母分子离子失去木糖和葡萄糖分
子产生的碎片离子。
峰 9：大豆苷。质谱给出分子离子峰 461.109 1
[M＋HCOO－H]−，推断其分子式为 C21H20O9，以
m/z 461.109 1 作为母离子，对其进行二级质谱分析，
所得二级质谱图中有明显的 253 [M－H－Glc]− 碎
片离子信息，是其母分子离子失去葡萄糖分子（Mv
162）产生的。
峰 10：3′-甲氧基大豆苷。质谱给出分子离子峰
491.119 4 [M＋HCOO－H]−，推断其分子式为
C22H22O10，以 m/z 491.119 4 为母离子，进行二级质
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 7 期 2015 年 4 月

·974·
谱分析，所得谱图中有明显的 283 [M－H－Glc]− 碎
片离子信息，是其母分子离子失去葡萄糖分子（Mv
162）产生的。
峰 11：染料木素-8-C-芹菜葡萄糖苷。质谱给出分
子离子峰 563.140 2 [M－H]−，推断其分子式为
C26H28O14，以 m/z 563.140 2 作为母离子，对其进行二
级质谱分析，所得谱图中有明显的 311、283 碎片离
子信息。311 [M－H－Api－120]− 为其母分子离子失
去芹糖分子（Mv 132）分子，接而丢失 C4H8O4（Mv 120）
分子形成的碎片离子，283 [M－H－Api－120－28]−
是其继而丢失 1 个 CO 分子形成的碎片离子。
峰 12：芦丁。质谱给出分子离子峰 609.148 0
[M－H]−，可推断其分子式为 C27H28O16，以 m/z
609.148 0 作为母离子，对其进行二级质谱分析，所
得谱图中有明显的 300、301 [M－H－Rha－Glc]−
碎片离子信息，是其母分子离子依次失去鼠李糖
（Mv 146）和葡萄糖分子（Mv 162）分子产生的。
峰 13：染料木苷。质谱给出分子离子峰 477.103 6
[M＋HCOO－H]−，推断其分子式为 C21H20O10，以
m/z 477.103 6 作为母离子，对其进行二级质谱分析，
所得谱图中有明显的 269 [M－H－Glc]− 碎片离子
信息，是其母分子离子失去葡萄糖分子（Mv 162）
分子产生的。
峰 14：鸢尾黄素-7-O-木糖葡萄糖苷。质谱给出
分子离子峰 593.152 0 [M－H]−，推断其分子式为
C27H30O15，以 m/z 593.152 0 作为母离子，对其进行
二级质谱分析，所得谱图中有明显的 284 [M－H－
Xyl－Glc－15]− 碎片离子信息，是其母分子离子失
去木糖分子（Mv 132）和葡萄糖分子（Mv 162）后
继而丢失 1 个 CH3 分子形成的碎片离子。
峰 15：6-羟基鹰嘴豆芽素 A-6,7-二葡萄糖苷。
质谱中给出分子离子峰 623.163 2 [M－H]−，推断其
分子式为 C28H30O16，以 m/z 623.163 2 作为母离子，
对其进行二级质谱分析，所得二级质谱图中有明显
的 314、315 碎片离子信息，315 [M－H－120－120－
C3O2]−为糖环的交叉环切除裂解和丢失 1个C3O2分
子形成的碎片离子。推测其裂解途径见图 4。
峰 16：芒柄花苷。质谱给出分子离子峰 475.124 8
[M＋HCOO－H]−，推断其分子式为 C22H22O9，以 m/z
475.124 8 作为母离子，对其进行二级质谱分析，所得
谱图中有明显的 267 [M－H－Glc]−碎片离子信息，是
其母分子离子失去葡萄糖分子（Mv 162）产生的。
峰 17：大豆苷元。质谱给出分子离子峰 253.050 8
OO
O
OH O
O
OH
OH
HO
HO
O
HO
HO
OH
OH
OCH3
m/z 623
-O=C=C=C=O
-H
m/z 315
Diels-Alder
OH
OCH3
O
OH
-H
O
OH
O
OOH
OCH3
O
OH
-H
O
OH
O
OOH
OCH3
O
OH
-H
O
OH
图 4 6-羟基鹰嘴豆芽素 A-6,7-二葡萄糖苷可能的裂解途径
Fig. 4 Possible fragmentation mechanism of 6-hydroxy-
biochanin A-6,7-di-O-glucoside
[M－H]−，推断其分子式为 C15H10O4，以 m/z 253.050 8
作为母离子，对其进行二级质谱分析，所得谱图中
有明显的 224、223、209、208、196、195、133、
132 碎片离子信息，224 [M－H－29]− 是其丢失 1
个 CHO 分子形成的碎片离子，196 [M－H－29－
28]− 是继而丢失 1 个 CO 分子形成的碎片离子。209
[M－H－44]−是母离子丢失 1 个 CO2 分子形成的碎
片离子，133 是母离子 C 环上发生 RDA 裂解形成
的 0,3B-碎片离子。推测其裂解途径见图 5。
峰 18：鹰嘴豆芽素 A。质谱给出分子离子峰
283.061 7 [M－H]−，推断其分子式为 C16H12O5，以
m/z 283.061 7 作为母离子，对其进行二级质谱分析，
所得谱图中有明显的 268 [M－H－15]−碎片离子信
息，是其丢失 1 个 CH3分子产生的。
峰 19：槲皮素。质谱给出分子离子峰 301.034 7
[M－H]−，推断其分子式为 C15H8O7，以 m/z 301.034 8
作为母离子，对其进行二级质谱分析，所得谱图中
有明显的 179、151、121、107 碎片离子信息。C 环
1/2 位上 C-C 键断裂，得碎片 1,2A-(m/z 179) 和
1,2B-(m/z 121)，m/z 151 和 m/z 107 特征离子产生的
断裂途径为 RDA 反应，裂解途径见图 6。
峰 20：异鼠李素。质谱给出分子离子峰 m/z
315.051 0 [M－H]−，推断其分子式为 C16H12O7，以
m/z 315.051 0 作为母离子，对其进行二级质谱分析，
所得谱图中有明显的 300、151、107 碎片离子信息。
m/z 300 [M－H]−为丢失1个CH3分子产生的，m/z 151
和 m/z 107 特征离子产生的断裂途径为 RDA 反应。
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 7 期 2015 年 4 月

·975·
O
O
HO
OH
m/z 253
-H
O
O
HO
OH
-H OHO
-H
C
O
H
HO
HO O
CH
O
HO
-H
-CHO
HO O
HO
-H
m/z 224
OHO
O
OH
O
O
OH
HO
HO
OH
m/z 209
-CO2
HO O
m/z 196
-CO
-H
-H -H -H
O
O
HO
OH
-H
Retro-Diels-Alder
OH
HO -H
m/z 253 m/z 133
图 5 大豆苷元可能的裂解途径
Fig. 5 Possible fragmentation mechanism of daidzein
OHO
OH O
OH
OH
OH
retroc
yclisa
tion
retrocyclisation
HO
OH
O
O
O
O
OH
-H
-H
m/z 179
m/z 121
HO
OH
O
O
OH
OH
-H
Retro-
Diels-A
lderⅡ Ⅳ
m/z 301
Ⅱ
Ⅳ
-H
HO
OH
O
C O
OH
HO
m/z 107
m/z 151
-HRetro-Diels-Alder
OH
m/z 301

图 6 槲皮素可能的裂解途径
Fig. 6 Possible fragmentation mechanism of quercetin
4 讨论
4.1 测定方法的选择
UPLC/Q-TOF-MS 分析具有高分离度、高速度、
高灵敏度、可测定精确相对分子质量等特点[16-18]，
尤其适用于中药多组分、复杂成分的分离和定性鉴
别。本实验运用 UPLC-MS 技术可以在 8 min 内完
成化合物的分离，将其用于成分鉴定和指认，避免
了采用对照品核对成分峰的局限性，体现了 Q-TOF
在化合物鉴定工作中的优势，为葛根枳椇胶囊的化
学物质基础研究提供了更为快速有效的手段。
4.2 色谱和质谱条件的选择
乙腈洗脱能力较甲醇强，且溶剂黏度较低，故
选择乙腈作为有机溶剂，达到了快速分离色谱峰的
目的。考察了乙腈与水及不同种类的挥发性缓冲液
（甲酸溶液、乙酸铵溶液）组成的流动相体系对化合
物的色谱行为及离子化程度的影响。结果表明，以
乙腈-甲酸作为流动相可获得最优的色谱峰形、分离
效果和质谱信号响应。黄酮易于失去 1 个质子，以
（0,3B-）
（1,2A-）
（1,2B-）
II
IV
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 7 期 2015 年 4 月

·976·
[M－H]−的准分子离子峰形式存在，故选择负离子
模式采集数据。
4.3 样品前处理方法的选择
由于样品辅料中含有大豆油、明胶、甘油等，
待有机溶剂提取完后，样品放置于保持低温（4 ℃）
的进样器中容易析出油脂，如果直接进样易对色谱
柱有一定的损坏，故样品提取完后，先置于冰箱待
油脂析出后，趁冷过滤备用，进而减少杂质对仪器
和色谱柱的影响。
本实验运用 UPLC-Q-TOF-MS 法对葛根枳椇软
胶囊中的黄酮类成分进行了分离及结构鉴定。根据
各个色谱峰在质谱中的精确相对分子质量、质谱碎
片结构信息和色谱保留规律，参考相关文献，成功
鉴定了葛根枳椇软胶囊中 20 个化合物，其中 17 个
化合物为异黄酮，3 个化合物为黄酮，并总结了黄
酮化合物质谱裂解的途径。其中芦丁、葛根素、大
豆苷、染料木苷、大豆苷元、鹰嘴豆芽素 A、槲皮
素、异鼠李素、芒柄花苷、3′-甲氧基葛根素、鸢尾
黄素-7-O-木糖葡萄糖苷与对照品对照后进行确认，
其他成分则通过二级质谱扫描 MS2，并根据特征碎
片离子峰加以确认。本实验建立的快速筛查方法，
为其质量控制提供了新的方法和途径。
参考文献
[1] 中国药典 [S]. 一部. 2010.
[2] 彭 玲, 李坤平, 高英枳, 等. 枳椇子中黄酮类化合物
的 HPLC-ESI-MS 分析 [J]. 中药新药与临床药理 ,
2009, 4(20): 341-343.
[3] Yan Y, Chai C Z, Wang D W, et al. HPLC-DAD-
Q-TOF-MS/MS analysis and HPLC quantitation of
chemical constituents in traditional Chinese medicinal
formula Ge-Gen Decoction [J]. J Pharm Biomed Anal,
2013, 80: 192-202.
[4] Chang Q, Sun L, Zhao R H, et al. Simultaneous
determination of ten active components in traditional
Chinese medicinal products containing both Gegen
(Pueraria lobata) and Danshen (Salvia miltiorrhiza) by
high-performance liquid chromatography [J]. Phytochem
Anal, 2008, 19(4): 368-375.
[5] Chen L, Tang Y P, Chen M J, et al. Chemical correlation
between Gegen Qinlian dispensing granule and its four
raw herbs by LC fingerprint [J]. Phytomedicine, 2010,
17(2): 100-107.
[6] 丁林生, 梁侨丽, 腾艳芬. 枳子黄酮类成分研究 [J].
药学学报, 1997, 32(8): 600-602.
[7] Hyun T K, Eom S H, Yu C Y, et al. Hovenia dulcis-an
asian traditional herb [J]. Planta Med, 2010, 76(10):
943-949.
[8] 王竹天, 杨大进. 保健食品功效成分测定方法现状及
发展趋势 [J]. 中国食品卫生杂志, 2000, 12(6): 13-15.
[9] Lu J, Xie Y Y, Tan Y, et al. Simultaneous determination of
isoflavones, saponins and flavones in Flos Puerariae by
ultra performance liquid chromatography coupled with
quadrupole time-of-flight mass spectrometry [J]. Chem
Pharm Bull, 2013, 61(9): 941-951.
[10] Zhang C L, Ding X P, Hu Z F, et al. Comparative study of
Puerariae lobatae and Puerariae thomsonii by
HPLC-diode array detection-flow injection chemilu-
minescence coupled with HPLC-electrospray ionization-
MS [J]. Chem Pharm Bull, 2011, 59(5): 541-545.
[11] Zhou Q L, Wang Y F, Yang D H, et al. Identification of
the absorptive constituents and their metabolites in vivo of
Puerariae Lobatae Radix decoction orally administered in
WZS-miniature pigs by HPLC-ESI-Q-TOFMS [J]. Biomed
Chromatogr, 2013, 27(9): 1208-1218.
[12] Chen L, Tang Y P, Chen M J, et al. Chemical correlation
between Gegen Qinlian dispensing granule and its four
raw herbs by LC fingerprint [J]. Phytomedicine, 2010,
17(2): 100-107.
[13] Zhang Y, Xu Q, Zhang X Z, et al. High-performance
liquid chromatography-tandem mass spectrometry for
identification of isoflavones and description of the
biotransformation of kudzu root [J]. Anal Bioanal Chem,
2005, 383(1): 787-796.
[14] Du G, Zhao H Y, Zhang Q W, et al. A rapid method for
simultaneous determination of 14 phenolic compounds in
Radix Puerariae using microwave-assisted extraction and
ultra high performance liquid chromatography coupled with
diode array detection and time-of-flight mass spectrometry
[J]. J Chromatogr A, 2010, 1217(5): 705-714.
[15] 周永刚, 吴 思, 毛 飞. 葛根中黄酮类化学成分的
UHPLC-Q-TOFMS 分析 [J]. 药学实践杂志 , 2013,
31(2): 116-119.
[16] Wu H X, Yang C Y, Wang Z H, et al. Metabolism profile
of quinocetone in swine by ultra-performance liquid
chromatography quadrupole time-of-flight mass
spectrometry [J]. Eur J Drug Metab Pharmacokinet,
2012, 37(2): 141-154.
[17] Aznar M, Rodriguez-Lafuente A, Alfaro P, et al.
UPLC-Q-TOF-MS analysis of non-volatile migrants from
new active packaging materials [J]. Anal Bioanal Chem,
2012, 404(6/7): 1945-1957.
[18] Wong M C Y, Lee W T K, Wong J S Y, et al. An approach
towards method development for untargeted urinary
metabolite profiling in metabonomic research using
UPLC/Q TOF MS [J]. J Chromatogr B, 2008, 871(2):
341-348.