全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 7 期 2013 年 4 月

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强肝胶囊 HPLC 指纹图谱研究
韦 辉 1，刘素香 2, 3, 4，刘 毅 2, 3, 4，张铁军 2, 3, 4*，陈常青 2*
1. 天津中医药大学，天津 300193
2. 天津药物研究院，天津 300193
3. 天津市中药质量控制技术工程实验室，天津 300193
4. 中药现代制剂与质量控制技术国家地方联合工程实验室（天津），天津 300193
摘 要：目的 建立强肝胶囊 HPLC 指纹图谱并对其进行化学模式识别。方法 采用 Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，
5 μm），在 230 nm 波长下，以乙腈-0.05%磷酸水溶液进行梯度洗脱，测定了 44 批强肝胶囊样品；应用相似度分析软件建立
强肝胶囊指纹图谱的共有模式，并对色谱峰进行了指认。结果 建立强肝胶囊 HPLC 指纹图谱，在确定的方法下，得到 44
批强肝胶囊的色谱图，并获得了 44 批样品的相似度；确定共有峰 14 个，其中 13 个归属到各药材，11 个已确认成分。结论
强肝胶囊的 HPLC 指纹图谱的构建和共有色谱峰成分的确定为强肝胶囊药品质量控制提供参考。
关键词：强肝胶囊；HPLC；指纹图谱；化学模式识别；共有模式
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2013)07 - 0845 - 06
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2013.07.014
HPLC fingerprint of Qianggan Capsule
WEI Hui1, LIU Su-xiang2, 3, 4, LIU Yi2, 3, 4, ZHANG Tie-jun2, 3, 4, CHEN Chang-qing2
1. Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China
2. Tianjin Institute of Pharmaceutical Research, Tianjin 300193, China
3. Tianjin Engineering Laboratory of Quality Control Technology of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China
4. National & Local United Engineering Laboratory of Modern Preparation and Quality Control Technology of Traditional Chinese
Medicine (Tianjin), Tianjin 300193, China
Abstract: Objective To establish HPLC fingerprint for Qianggan Capsule and identify the chemical pattern recognition. Methods
The HPLC method was used with Diamonsil-C18 column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm), under the 230 nm detection wavelength, gradient
eluted by acetonitrile-0.05% H3PO4. The common mode of HPLC fingerprint for 44 batches of Qianggan Capsule was established with
similarity analyses and the peaks were identified. Results Under the selected spectrum condition, the HPLC fingerprint for 44 batches
of Qianggan Capsule and similarities for 44 batches of samples were obtained. Fourteen peaks were found, 13 belong to herbs and 11
were assigned. Conclusion The establishment of HPLC fingerprint of Qianggan Capsule and the identification of peaks provide more
reference for the quality control of Qianggan Capsule.
Key words: Qianggan Capsule; HPLC; fingerprint; chemical pattern recognition; common mode

强肝胶囊收载于国家药典委员会编《国家药品
标准》，由茵陈、板蓝根、丹参、白芍、秦艽等 16
味药组成，具有清热利湿、补脾养血、益气解郁之
功效[1]。研究证明，强肝胶囊有较强的抗肝纤维化
作用，具有保护肝细胞、促进肝细胞再生、恢复肝
功能和抑制纤维化作用[2]，其中多种中药成分对肝
损伤均有明显抑制作用。陈理等[3]采用 HPLC 法同
时测定强肝胶囊中丹参酮 IIA 和甘草酸的量，罗晨
曲等[4]利用 HPLC 法对强肝胶囊中龙胆苦苷进行测
定。现行的用 1～2 种化学成分表征中药质量的质控
方法，无法全面表征中药制剂的物质基础和化学成
分群的整体性和复杂性，难以全面控制强肝胶囊的

收稿日期：2012-08-16
作者简介：韦 辉（1986—），女，天津中医药大学硕士研究生。Tel: (022)23006840 E-mail: weihui0100@126.com
*通信作者 张铁军 Tel: (022)23006848 E-mail: tiejunzh2000@yahoo.com.cn
陈常青 Tel: (022)23006829 E-mail: chencq@tjipr.com
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内在质量。本研究采用 HPLC 法建立了强肝胶囊的
指纹图谱，并对所得图谱进行分析，建立了强肝胶
囊指纹图谱的指标参数评判标准，为全面控制强肝
胶囊的质量提供了参考。
1 仪器与材料
安捷伦液相色谱仪 1100 系列，包括 G1310A 四
元液相梯度泵、G1313A 自动进样器、G1314A VWD
检测器、CO—201 柱温箱、安捷伦色谱工作站。
AB204—N 电子天平（Mettler Toledo）；Autoscience
As3120 超声仪；Seastae R501B 旋转蒸发仪。
乙腈为色谱纯，甲醇、乙醇、磷酸均为分析纯，
水为天磁纯净水。龙胆苦苷（批号 110770-200712）、
芍药苷（批号 0736-9710）、甘草苷（批号 111610-
200503）、没食子酸（批号 110831-200302）、丹参
素（批号 110855-200507）均购自中国药品生物制
品检定所，质量分数均≥98%；丹酚酸 B（质量分
数≥98%）购自天津一方科技有限公司；芍药内酯
苷（质量分数≥98%）购自深圳市美和生物科技有
限公司；甘草酸单铵盐（质量分数≥98%）购自天
津一方科技有限公司；茵陈、板蓝根、丹参、白芍、
秦艽等 16 味药材（均由天津药物研究院张铁军研究
员鉴定符合《中国药典》2010 年版及相关法定标准
规定）和 44 批强肝胶囊成品均由石家庄东方药业有
限公司提供，批号见表 1。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5
μm）；检测波长 230 nm；柱温 30 ℃；体积流量 1.0
mL/min；进样量 10 μL；流动相为乙腈-0.05%磷酸
水溶液，梯度洗脱：0～15 min，0～10%乙腈；15～
50 min，10%～30%乙腈；50～65 min，30%～60%
乙腈；65～70 min，60%～100%乙腈。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液 取芍药苷、龙胆苦苷、丹参素、
甘草苷、丹酚酸 B、芍药内酯苷、没食子酸、甘草
酸单铵盐对照品适量，精密称定，用 70%甲醇制成
各对照品溶液。
2.2.2 强肝胶囊供试品溶液 取本品内容物，混匀，
取胶囊粉末约 1.0 g，精密称定，置烧瓶中，加入 70%
甲醇 100 mL，超声处理 1 h，取下，放至室温，离
心 5 min，取上清液浓缩至约 10 mL，用约 20 mL
水溶解转移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇萃取 3
次，每次用量分别为 30、20、20 mL，合并 3 次萃
表 1 强肝胶囊样品
Table 1 Samples of Qianggan Capsule
编号 批 号 编号 批 号
S1 20100651 S23 20100537
S2 20100652 S24 20100542
S3 20100316 S25 20100427
S4 20100215 S26 20100429
S5 20091250 S37 20100541
S6 20091146 S28 20100434
S7 20090934 S29 20100539
S8 20090522 S30 20100322
S9 20090203 S31 20100540
S10 20081037 S32 20100432
S11 20071035 S33 20100428
S12 20070205 S34 20100325
S13 20100320 S35 20100536
S14 20100426 S36 20091038
S15 20100433 S37 20100214
S16 20100538 S38 20091143
S17 20100543 S39 20070925
S18 20100430 S40 20071245
S19 20100317 S41 20070415
S20 20100431 S42 20081244
S21 20100319 S43 20090310
S22 20110435 S44 20090416

取液，减压浓缩至干，用甲醇溶解定容至 10 mL 量
瓶中，摇匀，0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，
即得。
2.2.3 各药材供试品溶液 取茵陈、板蓝根、丹参、
白芍、秦艽等药材粉末，各约 1.0 g，精密称定，置
具塞锥形瓶中，精密加入 50%甲醇 20 mL，称定质
量，超声提取 30 min，放冷，再称定质量，用甲醇
补足减失的质量，摇匀，0.45 μm 微孔滤膜滤过，取
续滤液，作为药材对照溶液。
2.2.4 各阴性对照溶液 取按强肝胶囊处方比例分
别制备的缺各味药材的阴性样品，按“2.2.2”项下
方法制备，即得阴性对照溶液。
2.3 方法学考察
2.3.1 精密度试验 取批号为 20100316 的胶囊样
品 1 份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，精
密量取同一供试品溶液，连续进样 5 次，考察色谱
峰相对保留时间和相对峰面积的一致性。8 号峰芍
药苷峰形好，分离度较好，且为强肝胶囊原质控指
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标，为主要有效成分，因此选为参照峰，计算其中
14 个色谱峰相对保留时间的 RSD 均小于 0.6%，相
对峰面积的 RSD 均小于 4.0%。
2.3.2 重复性试验 取批号为 20100316 的胶囊样
品 5 份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，考
察色谱峰相对保留时间和相对峰面积的一致性。以
芍药苷为参照峰，计算其中 14 个色谱峰相对保留时
间的 RSD 均小于 0.1%，相对峰面积的 RSD 均小
于 5.0%。
2.3.3 稳定性试验 取批号为 20100316 的胶囊样
品 1 份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分
别在 0、3、6、9、12、24 h 进样分析，考察色谱峰
相对保留时间和相对峰面积的一致性。以芍药苷为
参照峰，计算其中 14个色谱峰相对保留时间的RSD
均小于 0.2%，相对峰面积的 RSD 均小于 4.0%。表
明供试品溶液在 24 h 内基本稳定。
2.4 指纹图谱的测定及共有峰的确定
按照确定的指纹图谱检测方法测定了 44 批强
肝胶囊指纹图谱，对 44 批样品指纹图谱进行数据分
析，结果确定有 14 个色谱峰为强肝胶囊所共有，因
此，确定其为共有指纹峰，且共有峰的总面积占总
峰面积的 90%以上。
2.5 指纹图谱分析
采用国家药典委员会编的“中药色谱指纹图谱
相似度评价系统 2004A 版”。参数设置：（1）参照
图谱：采用批号为 20100651 样品的色谱图（S1）
作为相似度计算时校正的参照图谱。（2）时间窗宽
度：0.10。（3）校正方式：多点校正。校正色谱峰
的确定：实验记录了保留时间 2 h 的色谱图，结果
表明特征峰在 0～65 min 收集完全，因此，在指纹
图谱检测方法中规定仅记录 0～65 min 中的特征
峰。（4）指纹图谱的生成：从 44 批中选择 10 批样
品色谱图生成指纹图谱见图 1-A，生成的对照指纹
图谱见图 1-B，相似度计算结果见表 2，10 批样品相
似度均在 0.9 以上，符合要求。将测定获得的 44 批
样品数据采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统
（2004 B）》与生成的对照指纹图谱进行了相似度评
价，结果见表 3。







图 1 10 批强肝胶囊样品指纹图谱 (A) 和对照指纹图谱 (B)
Fig. 1 HPLC fingerprints of 10 batches of Qianggan Capsule samples (A) and reference fingerprint (B)
0 13.04 26.08 39.12 52.16 65.20
t / min
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1
1
2
3
4 5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
0 13.04 26.08 39.12 52.16 65.20
t / min
A
B
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表 2 10 批样品相似度评价结果
Table 2 Similarities for 10 batches of samples
相似度 批 号
参照图谱 对照图谱
20100651 1.000 0.988
20100319 0.992 0.980
20100435 0.994 0.987
20100537 0.973 0.981
20100542 0.978 0.991
20100427 0.995 0.993
20100429 0.980 0.971
20100541 0.945 0.965
20100325 0.938 0.961
20100316 0.955 0.984

表 3 44 批样品相似度评价结果
Table 3 Similarities for 44 batches of samples
编号 相似度 编号 相似度
S1 0.988 S23 0.981
S2 0.984 S24 0.991
S3 0.984 S25 0.993
S4 0.988 S26 0.971
S5 0.991 S27 0.965
S6 0.990 S28 0.991
S7 0.914 S29 0.983
S8 0.979 S30 0.990
S9 0.957 S31 0.982
S10 0.924 S32 0.992
S11 0.753 S33 0.992
S12 0.858 S34 0.961
S13 0.913 S35 0.993
S14 0.990 S36 0.995
S15 0.994 S37 0.988
S16 0.969 S38 0.968
S17 0.987 S39 0.898
S18 0.988 S40 0.839
S19 0.977 S41 0.904
S20 0.983 S42 0.813
S21 0.980 S43 0.971
S22 0.987 S44 0.949

上述数据表明，44 批样品中仅有 5 批样品相似
度低于 0.9，其余 39 批强肝胶囊的指纹图谱的相似
度均大于 0.9。说明本品的质量稳定性较好。相似度
低于 0.9 的样品批号分别为 20071035、20070205、
20070925、20071245、20081244，均为 2007、2008
年生产，可能与当年原料药材有关。
2.6 色谱峰指认
2.6.1 对照药材归属 分别精密吸取供试品溶液，
16 味药材及各阴性样品溶液 10 μL，注入高效液相
色谱仪，记录 65 min 色谱图。对保留时间一致且阴
性样品图谱中未出现的色谱峰进行分析比较，根据
紫外光谱信息，对全方与药材指纹谱中的相关峰进
行指认，确定特征峰的药材归属。通过强肝胶囊复
方与全方药材相关性研究，确认强肝胶囊复方
HPLC 指纹图谱的 14 个共有特征峰的来源，其中 1
个峰不能得到归属，其余指纹峰来自白芍（4 个）、
丹参（3 个）、甘草（2 个）、秦艽（2 个）、茵陈（1
个）、黄芪（1 个），5 号峰可能来自秦艽或/和茵陈。
2.6.2 对照品法指认复方中各成分 利用对照品对
各峰的成分进行指认，分别精密吸取供试品溶液、
对照品溶液各 10 μL，注入高效液相色谱仪，记录
65 min 色谱图，通过各峰保留时间和色谱行为的比
较，对各峰进行指认。共指认了 8 个色谱峰，分别
为 2 号峰（没食子酸）、4 号峰（丹参素）、6 号峰（龙
胆苦苷）、7 号峰（芍药内酯苷）、8 号峰（芍药苷）、
10 号峰（甘草苷）、12 号峰（丹酚酸 B）、14 号峰
（甘草酸）。
2.6.3 HPLC-MS 指认复方中各成分
（1）HPLC 色谱条件：乙腈-0.05%甲酸溶液作为
流动相，梯度洗脱条件：0～15 min，0%～10% A；
15～50 min，11%～30% A；50～65 min，30%～60%
A；65～70 min，60%～100% A；70～75 min，100%～
0% A；体积流量 0.4 mL/min；检测波长 230 nm。
（2）MS 分析条件：仪器为 Agilent Technologies
Device List：1290-ALS G4226A，1290-Bin pump
G4220A，1290-Column，1290-DAD G4212A，MS
Q-TOF。采用 ESI 法。气体温度：350.00 ℃；气体
体积流量 8 L/min；喷雾器压力 241.325 kPa；Scan
Segments Scan Seg# Ion Polarity 1 Negative Scan
Segment 1；TOF/Q-MS 质谱仪离子捕获方式：MSI，
范围 m/z 100～1 700，扫描速度 m/z 1.4；扫描源参数：
VCap 3 500，碰撞诱导解离 150，Skimmer 1 65，
OctopoleRFPeak 750。
（3）测定结果：实验同时比较了在 ESI“＋”离
子和“－”离子条件下的信息情况，结果在“－”离子
条件下离子信息较多；而在“＋”离子条件下，噪
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音的水平相对较高，ESI“＋”离子和“－”离子条
件测定结果见图 2。
通过对各化合物的质谱裂解信息的分析，并结
合现有对照品和文献报道进行比对，对强肝胶囊中
化学成分进行了结构推测。结果指认出 7 个主要成
分，见表 4。经过质谱指认，可以确定 9 号峰黄芪
成分为毛瑞异黄酮苷，11 号峰白芍成分为没食子酰
芍药苷，13 号峰丹参成分为丹酚酸 A，5 号峰仍未







图 2 强肝胶囊样品液质图谱
Fig. 2 LC-MS chromatogram of Qianggan Capsule

表 4 强肝胶囊 HPLC-MS 分析结果
Table 4 HPLC-MS analytic results of Qianggan Capsule
峰号 保留时间 / min [M－H]− (m/z) 化合物
6 40.159～40.951 356 龙胆苦苷
7 43.138～43.988 481 芍药内酯苷
9 48.574～49.283 447 毛蕊异黄酮苷
10 50.739～51.602 417 甘草苷
11 51.980～52.477 631 没食子酰芍药苷
12 61.624～61.919 717 丹酚酸 B
13 64.755～65.027 494 丹酚酸 A
知。结合上述对照品指认结果，14 个峰中 11 个峰
已确定了成分。
3 讨论
分别对提取溶剂、提取方式、提取时间、萃取
溶剂和萃取次数进行考察，实验结果表明，70%甲
醇超声 1 h，正丁醇萃取 3 次所得色谱峰总数多，且
峰面积相对较大，分离度好。
初始采用甲醇-0.05%磷酸水溶液进行梯度洗
脱，龙胆苦苷、芍药苷等成分未能很好地洗脱出来，
基线漂移严重，把有机相改成乙腈，基线基本平稳，
6
7
9
0 10 20 30 40 50 60 70 80
t / min
ESI (−)
10
11
12
13
ESI (+)
0 10 20 30 40 50 60 70 80
t / min
1
2
3
4 5
6
7
8
9
10
11
12 13
14
UV
0 10 20 30 40 50 60 70 80
t / min
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各峰分离度有所改善，且峰形较好。
使用二极管阵列检测器对样品进行 200～400
nm 的全波长扫描，并对各波长下的色谱图进行分
析比较。结果表明，在 230 nm 下检测到峰的数目
较多，各峰分离良好，特征峰明显且峰形较好，从
图谱中可以尽可能地获取色谱组分信息以反映体系
组成的全貌，且 230 nm 为原指标成分芍药苷的最
大吸收，因此选定 230 nm 为测定波长。
本品提取工艺为水煎煮，其中化学成分多为水
溶性成分，因此选用了 HPLC 法建立其指纹图谱主
要针对水溶性成分。在选定的色谱条件下，测定了
44 批强肝胶囊样品指纹图谱，得到 44 批强肝胶囊
与对照图谱的相似度，其中 5 批相似度在 0.9 以下。
经过分析，2007、2008 年产胶囊样品的指纹图谱中，
一些峰相对峰面积减小，一些峰相对峰面积增大，
其原因可能与不同年限所投料药材的品种、质量、
产地、来源不同有关；或是生产过程中操作步骤不
同引起，也可能是放置年限导致的某些峰相对峰面
积减小。所以，对于强肝胶囊的质量应该从源头和
生产全过程进行监测，严格控制原药材的质量及其
投放量，对生产过程中提取、浓缩、干燥的温度和
时间予以严格控制，如有必要，可检测各提取液的
指标成分量，从而保证强肝胶囊成分中有效成分的
量相对稳定。
实验研究过程中发现，在强肝胶囊指纹图谱中，
丹参酚酸B的色谱峰降低而丹参素和丹酚酸A的色
谱峰在增加，在同批的丹参药材图谱中丹参素峰很
小，而且未检测到丹酚酸 A 峰，因此，推测丹酚酸
B 在提取过程中可能部分转化为丹参素和丹酚酸
A，具体原因有待于进一步研究。
参考文献
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