全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 20 期 2014 年 10 月

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双波长 HPLC 法测定虎柏烧伤酊中 3 种有效成分
侯林中，郭丛娟，张熙洁，刘晓红*
唐山市工人医院，河北 唐山 063000
摘 要：目的 建立虎柏烧伤酊中大黄素、虎杖苷和盐酸小檗碱定量测定方法。方法 采用 Eclipse XDB-C18（150 mm×4.6
mm，5 μm）色谱柱，流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱，体积流量 1.0 mL/min，检测波长 265 nm（盐酸小檗碱）、
306 nm（大黄素和虎杖苷），柱温 30 ℃。结果 大黄素在 6.3～200.0 ng、虎杖苷在 9.6～308.0 ng、盐酸小檗碱在 5.0～160.0
ng 有良好的线性关系，样品中大黄素、虎杖苷和盐酸小檗碱的平均加样回收率分别为 99.91%、99.51%和 99.16%，RSD 分
别为 1.12%、0.84%和 1.17%。结论 本法结果准确，精密度及重复性较好，可作为虎柏烧伤酊的质量控制方法。
关键词：虎柏烧伤酊；HPLC；大黄素；虎杖苷；盐酸小檗碱
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)20 - 2932 - 03
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.20.012
Determination of three components in Hubai Burn Tincture by HPLC under
double UV wavelengths
HOU Lin-zhong, GUO Cong-juan, ZHANG Xi-jie, LIU Xiao-hong
Tangshan Gongren Hospital, Tangshan 063000, China
Abstract: Objective To establish a method for determining the contents of emodin, polydatin, and berberine hydrochloride in Hubai
Burrn Tincture. Methods The samples were separated on an Eclipse XDB-C18 (150 mm × 4.6 mm, 5 μm) column by a gradient
elution using acetonitrile and 0.1% phosphoric acid aqueous solution as mobile phase at a flow rate of 1 mL/min. The eluate was
detected by double wavelengths: 265 nm for berberine hydrochloride and 306 nm for emodin and polydatin. Column teperature was set
at 30 ℃. Results The linear ranges of emodin, polydatin, and berberine hydrochloride were 6.3—200.0, 9.6—308.0, and 5.0—160.0
ng. The average recovery rates of emodin, polydatin, and berberine hydrochloride were 99.91% (RSD = 1.12%), 99.51 % (RSD =
0.84%), and 99.16% (RSD = 1.17%). Conclusion This method is accurate, specific, and reliable for the quality control of Hubai
Burrn Tincture.
Key words: Hubai Burn Tincture; HPLC; emodin; polydatin; berberine hydrochloride

虎柏烧伤酊为唐山市工人医院自制中药制剂，
由虎杖、黄柏、松香和冰片组成，具有清热解毒、
活血定痛、收敛生肌的功效，临床用于 I、II 度烧烫
伤。为了保证制剂质量，便于质量控制，本研究建
立了双波长同时测定虎柏烧伤酊中大黄素、虎杖苷
和盐酸小檗碱 3 种有效成分的 HPLC 定量方法。
1 仪器与材料
美国安捷伦公司 1200 系列高效液相色谱仪，
G1311A-四元泵，G1322A-脱气机，G1316A-柱温箱，
G1329A 自动进样器，G1315D DAD 检测器，
HPRev.B.0302 化学工作站；摩尔纯水机；德国
Sartorius CP225D 分析天平；80—2 离心沉淀机，上
海手术器械厂。
对照品大黄素（批号 110756-200110）、盐酸小
檗碱（批号 110713-200208 ）、虎杖苷（批号
111575-200502）均购自中国食品药品检定研究院；
虎柏烧伤酊样品（批号 20131018、20131022、
20131111 、 20131216 、 20131209 、 20131216 、
20131221、20140301）由本院制剂室生产；色谱纯
乙腈，美国天地公司（Tedia，Ohio，America）；磷
酸，天津市北方天医化学试剂厂；超纯水为摩尔纯
水机所制。

收稿日期：2014-05-10
作者简介：侯林中（1970—），男，主任中药师，研究方向为中药制备工艺和质量标准研究。Tel: 15176712662 E-mail: 915580685@qq.com
*通信作者 刘晓红，女，博士，主任药师，硕士生导师，主要从事医院药学研究。Tel: 13930520000 E-mail: 13930520000@163.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 20 期 2014 年 10 月

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2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱为 Eclipse XDB-C18 柱（150 mm×4.6
mm，5 μm，安捷伦公司）；流动相为乙腈-0.1%磷
酸水溶液，梯度洗脱：0～5 min，15%～30%乙腈；
5～16 min，30%～85%乙腈；16～18 min，85%～
15%乙腈；体积流量 1.0 mL/min；检测波长 265 nm
（盐酸小檗碱）、306 nm（大黄素和虎杖苷）；柱温
30 ℃；进样量 5 μL；理论塔板数按大黄素、虎杖
苷和盐酸小檗碱峰计算应均不低于 3 000。色谱图
见图 1。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取 4.0 mg
大黄素和 6.16 mg 虎杖苷置于 10 mL 量瓶中，用甲




1-虎杖苷 2-盐酸小檗碱 3-大黄素
1-polydatin 2-berberine hydrochloride 3-emodin

图 1 混合对照品 (A)、虎柏烧伤酊样品 (B) 及阴性对照 (缺虎杖，C；缺黄柏，D) 分别在 306 nm (I) 和 265 nm (II) 处
的 HPLC 图
Fig. 1 HPLC of mixture reference substances (A), Hubai Burn Tincture sample (B), negative control without Polygonum
cuspidatum (C), and negative control without Golden cypress (D) at 306 nm (I) and 265 nm (II)
醇定容，制成大黄素和虎杖苷贮备液；精密称取盐
酸小檗碱 3.2 mg 置于 10 mL 量瓶中，用甲醇定容，
制成盐酸小檗碱贮备液。
2.2.2 供试品溶液的制备 精密量取虎柏烧伤酊 1
mL，置于 50 mL 量瓶中，用甲醇定容，用 0.45 μm
针筒式微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方量分别称取不
含虎杖和黄柏的其他药味，按制剂工艺制成制剂后，
同供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。
2.3 线性关系考察
精密量取上述贮备液适量，用甲醇倍比稀释成
系列混合标准溶液，大黄素质量浓度为 1.25、2.50、
5.00、10.00、20.00、40.00 μg/mL；虎杖苷质量浓度
为 1.93、3.85、7.70、15.40、30.80、61.60 μg/mL；
盐酸小檗碱质量浓度为 1.00、2.00、4.00、8.00、16.00、
32.00 μg/mL。设定进样量为 5 μL，以大黄素、虎杖
苷和盐酸小檗碱峰面积为纵坐标（Y），大黄素、虎
杖苷和盐酸小檗碱质量浓度为横坐标（X）。大黄素
标准曲线 Y＝15.949 X＋2.102，r＝0.999 9，线性范
围为 6.3～200.0 ng；虎杖苷标准曲线 Y＝20.15 X＋
11.124，r＝0.999 8，线性范围为 9.6～308.0 ng；盐
酸小檗碱标准曲线Y＝15.239 X＋1.189 6，r＝0.999 7，
线性范围为 5.0～160.0 ng。
2.4 干扰试验
分别取缺虎杖和黄柏的阴性对照溶液，取“2.3”
项下混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，
设定进样序列。按“2.1”项下色谱条件操作，记录
色谱图，供试品色谱图中，分别与对照品色谱相应
的位置上具有相同保留时间的色谱峰，阴性样品在
相应位置上无色谱峰，表明阴性样品无干扰。
2.5 精密度试验
分别取大黄素、虎杖苷和盐酸小檗碱对照品溶
液，各重复进样 5 次，测得大黄素、虎杖苷和盐酸
小檗碱峰面积的 RSD 分别为 0.87%、0.95%、1.26%，
表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验
取虎柏烧伤酊（批号 20131221），分别放置 2、
4、6、8、14、24 h 测定峰面积 1 次，大黄素、虎杖
苷和盐酸小檗碱的 RSD 分别为 1.84%、2.06%和
1.89%，说明供试品溶液在 24 h 内是稳定的。
2.7 重复性试验
取虎柏烧伤酊（批号 20131221）适量，按“2.2.2”
1
3
2
3A-I 1 3A-II B-I B-II
C-I C-II D-I2 1
3
3
32
0 6 12 18 0 6 12 18 0 6 12 18 0 6 12 18
t / min
D-II
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项下方法分别制备供试品溶液 6 份，在上述色谱条
件下设定进样量为 5 μL，根据峰面积按外标法计算
质量浓度，结果大黄素、虎杖苷和盐酸小檗碱质量
浓度的 RSD 分别为 1.05%、1.10%和 0.93%，表明
方法重复性较好。
2.8 回收率试验
精密称取已测定大黄素、虎杖苷和盐酸小檗碱
的样品（批号 20131221）6 份，每份 0.5 mL，分别
加入大黄素、虎杖苷和盐酸小檗碱对照品储备液适
量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进样测
定，计算回收率。结果平均回收率分别为 99.91%、
99.51%、99.16%，RSD 分别为 1.12%、0.84%、1.17%。
2.9 样品测定
取 8 批样品按“2.2.2”项下方法制备供试品溶
液，测定虎柏烧伤酊中大黄素、虎杖苷和盐酸小檗
碱的量。结果见表 1。
3 讨论
本品为中药复方制剂，主要由虎杖、黄柏、松
香、冰片等组成。虎杖活血通络、清热利湿；黄柏
清热燥湿、泻火解毒，二者为方中主药。大黄素、
虎杖苷是虎杖中主要有效成分，盐酸小檗碱是黄柏
有效成分成分之一，故本法选定大黄素、虎杖苷和
盐酸小檗碱为其测定的指标，用多组分的定量更有
效地控制制剂质量，最大程度确保制剂疗效。
由于大黄素脂溶性强，参照文献方法[1-4]时，洗
脱时间较长，本法采用梯度洗脱，加快洗脱速度，
节省了实验时间。
目前大多文献报道[1-5]和《中国药典》2010 年
版定量制剂中 2 个以上成分时，多分别测定，操作
复杂，测定时间长。本研究采用双波长 HPLC 法同
表 1 样品定量测定结果 (n＝3)
Table 1 Results of sample determination (n＝3)
质量浓度 / (μg·mL−1) 样品批号
大黄素 虎杖苷 盐酸小檗碱
20131018 218.8±3.5 464.5±0.2 762.4±2.7
20131022 225.4±4.1 470.8±0.7 813.1±3.4
20131111 212.5±3.8 432.1±0.7 788.6±3.1
20131116 238.0±1.9 488.1±0.3 803.2±1.8
20131209 239.1±2.9 478.1±0.6 842.4±2.4
20131216 240.7±2.6 488.3±0.4 845.1±2.1
20131221 239.4±2.2 487.9±0.7 840.5±2.6
20140301 234.4±2.1 480.1±0.3 790.4±2.4

时测定虎柏烧伤酊中大黄素、虎杖苷和盐酸小檗碱
的量，节省测定时间，方便快捷。在双波长下无其
他成分干扰，结果准确，精密度及重复性较好，可
作为虎柏烧伤酊的质量控制方法。
参考文献
[1] 蒋 晔, 郝晓花, 刘红菊. 非水反相液相色谱法测定三
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188-190.
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黄酚及大黄素含量 [J]. 实用药物与临床, 2013, 16(1):
45-47.