全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 7 期 2012 年 7 月

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• 药理与临床 •
藿香正气水抑菌作用药效物质基础及质量控制方法研究
张洪坤，黄 洋，李 康*，吴韶辉
广东药学院药科学院，广东 广州 510006
摘 要：目的 探讨藿香正气水 ig 大鼠后肠道内容物指纹图谱特征峰所代表的化学成分与抑菌药效的相关性，为建立“代
谢物指纹图谱与药效关联”的中药质量控制模式提供理论依据和数据支持。方法 自制 11 批藿香正气水，ig 给予大鼠后 40
min 处死动物，制备肠道内容物样品，检测藿香正气水抑菌效果，建立 HPLC 指纹图谱，并用化学计量学方法将抑菌圈直径
与指纹图谱数据进行相关分析，以期寻找控制藿香正气水质量的药效成分群。结果 以强迫引入法进行多元线性回归分析，
有 10 个与抑菌活性密切相关的色谱峰被引入回归方程，其中呈正相关的色谱峰有 4 个（6、13、26、30 号），且 26 号峰（和
厚朴酚）经实验证明具有抑菌作用。结论 运用所建立的数学模型找到可控制藿香正气水质量的体内药效成分群，且证明相
关成分具有抑菌作用，这些成分群对藿香正气水质量控制具有参考价值，该法切实可行。
关键词：藿香正气水；抑菌作用；药效成分群；质量控制；物质基础；谱效关系
中图分类号：R285.5；R927.11 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)07 - 1349 - 06
Antibacterial material basis and quality control of Huoxiang Zhengqi Tincture
ZHANG Hong-kun, HUANG Yang, LI Kang, WU Shao-hui
Department of Pharmacy, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China
Abstract: Objective After ig administration of Huoxiang Zhengqi Tincture (HZT) to rats, the correlation between the homologous
chemical composition from intestinal contents represented by fingerprint characteristic peaks and antibacterial efficacy was
investigated to provide the theoretical basis and data for the model of quality control in Chinese materia medica by establishing “the
fingerprint of metabolites association with efficacy”. Methods Eleven batches of HZT were self-designed and rats were killed in 40
min after ig administration. The intestinal contents samples were obtained, the antibacterial effect was determined, the HPLC
fingerprint was established, and simultaneously the correlation analysis between the inhibition zone diameter and fingerprint data was
conducted by chemometric methods, so as to find the effictive component group that could control the quality of HZT. Results
Multiple linear regression analysis was carried out. Ten peaks related to the antibacterial activity were closely inducted to the regression
equation, among which peaks 6, 13, 26, and 30 were positively correlated, and peak 26 showed the antibacterial effect proved by the
experiments. Conclusion The component groups with curative effect in vivo which could control the quality of HZT are basically
achieved by applying mathematical model. In addition, the relevant components prove to have antibacterial effect and the method is feasible.
Key words: Huoxiang Zhengqi Tincture (HZT); antibacterial effect; component groups with curative effect; quality control; material
basis; spectral-activity relationship

藿香正气水出自宋代的《太平惠民和剂局方》，
由紫苏叶油、广藿香油、厚朴、苍术、白芷、半夏、
茯苓、甘草、陈皮、大腹皮 10 味药组成[1]。该药在
临床上常用于治疗由于食入生冷腐馊、秽浊不洁食
物导致的急性胃肠炎[2-5]，其中以金黄色葡萄球菌、
沙门菌属和嗜盐菌（副溶血弧菌）感染最为常见[6]，
药效机制与其抑菌作用有关。作为治疗急性胃肠炎
的常用药物之一，藿香正气水有广阔的市场前景和
巨大的经济效益，然而目前对其尚无较完善的质量
控制方法，导致市售藿香正气水制剂质量良莠不齐。
本实验以抑菌作用为药效指标[7]，将作用于靶器官
的药效与 HPLC 指纹图谱相关联，构建谱-效结合的

收稿日期：2011-12-15
基金项目：国家自然科学基金青年基金资助项目（30801515）
作者简介：张洪坤（1986—），男，硕士研究生，研究方向为中药药效物质基础及其质量评价方法。E-mail: hennanji@yeah.net
*通讯作者 李 康 Tel: (020)39352136 E-mail: likang229@yahoo.com.cn
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中药质量控制模式。与以往谱-效研究采用体外指纹
图谱与药效相关性分析不同，本实验将肠道代谢物
作为药效相关实验样品，排除了体内对药物代谢的影
响，通过谱-效研究直接获得药物在体内的活性物质，
提供了一种寻找体内活性物质的谱效研究的新思路。
1 材料
1.1 药品与试剂
藿香正气水，北京同仁堂科技发展股份有限公
司，批号 9111203；厚朴、白芷、陈皮、甘草、苍术、
白芷、大腹皮，广州市采芝林药业有限公司；广藿香
油、紫苏叶油、半夏，广州市清平药材市场，经北京
大学深圳医院药剂科曾向总主任药师鉴定均为正品。
对照品橙皮苷、甘草苷、甘草素、水合氧化前胡素、
白当归素、异甘草素、5, 7, 8, 3′, 4′-五甲氧基黄酮、
5, 7, 8, 4′-四甲氧基黄酮、川陈皮素、3, 5, 6, 7, 8, 3′,
4′-七甲氧基黄酮、橘皮素、欧前胡素、和厚朴酚、
异欧前胡素、厚朴酚自制，经 IR、1H-NMR、13C-NMR
等方法鉴定，液相归一化法测定质量分数≥98%；
甲醇、乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为
分析纯。营养琼脂培养基，青岛高科园海博生物技
术有限公司。
1.2 仪器
Agilent 1200 高效液相色谱仪（包括 G1322A 在
线真空脱气装置、G1311A 四元泵、G1314B 检测器、
Agilent 化学色谱工作站），美国安捷伦科技有限公
司；1545—2 型恒温箱，美国 Shellab 公司；MOV—
212S 型干热灭菌仪，日本三洋公司；Autolnoculator
比浊仪，英国 Sensititre 公司；HVE—50 高压蒸气
灭菌仪，日本 Hirayama 公司；Allegra—64R 高速冷
冻离心机，美国 Beckman Coulter 公司；80—2 型离心
沉淀机，巩义市予华仪器有限公司；AUW220D 型十
万分之一电子天平，日本岛津公司。
1.3 菌种
金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌、副
溶血弧菌、鼠伤寒沙门氏菌、痢疾杆菌，广州市福
田区疾病预防控制中心提供。
1.4 动物
雄性 SD 大鼠，体质量 200～250 g，广州中医
药大学动物饲养中心提供，许可证号：SCXK（粤）
2008-0020。
2 方法
2.1 菌种选择及药效模型的建立
2.1.1 菌种选择 采用纸片扩散法。以 5 张滤纸的
厚度，用纸片打孔器（直径为 5 mm）打出空白的
抑菌纸片，121 ℃高压灭菌 15 min 后，于 120 ℃干
热灭菌仪中烘 2 h，即为备用空白抑菌纸片。移取藿
香正气水 20 μL，滴加到空白抑菌纸片上，于 37 ℃
烘干，即为抑菌纸片。阴性对照样片的制备：取无
菌干燥空白抑菌纸片，每片滴加无菌 45%乙醇 20
μL。上述抑菌纸片干燥后备用。用无菌棉拭子蘸取
浓度为 5×105～5×106 cfu/mL 6 种实验菌悬液，在
营养琼脂培养基平板表面均匀涂抹 3 次，每涂抹 1
次，转动平板 60°，最后将棉拭子绕平板边缘涂抹
一周。盖好平皿，置室温干燥 5 min，每次实验贴
放 1 个染菌平板，每个平板贴放 4 片抑菌纸片，1
片阴性对照样片，共 5 片。平板置 37 ℃温箱培养
16～18 h。用游标卡尺测量抑菌圈直径（包括贴片）。
实验重复 3 次。
2.1.2 最佳抑菌作用时间点确定 按《中国药典》
2010 年版方法自制 11 批无醇藿香正气水，取其中
一批作为最佳抑菌作用时间点试验样品。取 6 只大
鼠，每只大鼠 ig 给予自制藿香正气水 5 mL，大鼠
给药前禁食不禁水 16～18 h，适应给药 3 d，分别于
末次给药后 5、10、20、30、40、50、60 min 处死
大鼠，取小肠，外翻剪碎，用甲醇冷浸提取，氮气
吹干，用 45%乙醇定容至 1 mL 得肠道内容物样品。
另取 6 只大鼠 ig 5 mL 无菌蒸馏水，同法处理所得
样品作为阴性对照；以北京同仁堂科技发展股份有
限公司产藿香正气水为体外抑菌实验阳性对照。按
照“2.1.1”项方法进行体外抑菌实验，确定最佳抑
菌时间。
2.1.3 抑菌活性成分筛选 将前期实验所得藿香正
气水中量较大的化合物（自制）[8]甘草苷、甘草素、
异甘草素、川陈皮素、和厚朴酚、厚朴酚、异欧前
胡素和欧前胡素等均配制成质量浓度为 10 mg/mL
的溶液，进行体外抑菌试验。
2.1.4 大鼠肠道内容物的抑菌作用 分别取按《中
国药典》2010 年版方法自制的 11 批无醇藿香正气
水，按“2.1.2”项方法处理，按“2.1.1”项方法进
行体外抑菌试验，重复 6 次。
2.2 色谱条件
藿香正气水中化学成分较复杂，一个色谱图很
难完全表现出样品的信息和准确地进行谱-效相关性
分析。因此本实验以白当归素为分界线点，将肠道
内容物样品的色谱图用高、低极性部位两部分表示。
2.2.1 肠道内容物样品高极性部位色谱条件
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Diamonsil C18 色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），
流动相为 0.05%甲酸水溶液-乙腈-甲醇，梯度洗脱
（表 1），体积流量 1.0 mL/min，检测波长 270 nm，
柱温 35 ℃，进样量 20 μL。
2.2.2 肠道内容物样品低极性部位色谱条件
GraceSmart RP18 色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），
流动相为水-乙腈，梯度洗脱（表 2），体积流量 1.0
mL/min，检测波长 280 nm，柱温 30 ℃，进样量 20 μL。
表 1 高极性部位梯度洗脱条件
Table 1 Gradient elution condition on high-polar fraction
t / min 甲醇 / % 0.05%甲酸-水 / % 乙腈 / %
0.01 2 81 17
9 2 79 19
18 2 75 23
26 5 70 25
45 4 67 32
表 2 低极性部位梯度洗脱条件
Table 2 Gradient elution condition on low-polar fraction
t / min 水 / % 乙腈 / %
0.01 72 26
20 68 32
30 66 34
40 61 39
60 57 43
70 45 55
80 42 58
90 38 62

2.3 肠道内容物供试品溶液制备
取肠道内容物样品 50 μL，用水定容至 1 mL，醋
酸乙酯（2 mL）萃取 3 次，合并萃取液，挥尽醋酸乙
酯，用甲醇定容至 10 mL，摇匀，即为供试品溶液。
2.4 混合对照品溶液制备
取 ig 无菌蒸馏水的大鼠（空白）肠道内容物样
品 1 mL 两份，一份加入含橙皮苷、甘草苷、甘草
素、水合氧化前胡素、白当归素对照品储备液，即
为高极性部位混合对照品溶液。另一份加入含 5, 7,
8, 3′, 4′-五甲氧基黄酮、5, 7, 8, 4′-四甲氧基黄酮、川
陈皮素、3, 5, 6, 7, 8, 3′, 4′-七甲氧基黄酮、橘皮素、
欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚对照品
储备液，即为低极性部位混合对照品溶液。各对照
品溶液的终质量浓度为甘草苷 8.66 μg/mL、橙皮苷
73.40 μg/mL、甘草素 6.92 μg/mL、水合氧化前胡素
11.02 μg/mL、白当归素 5.28 μg/mL、5, 7, 8, 3′, 4′-五
甲氧基黄酮 25.42 μg/mL、5, 7, 8, 4′-四甲氧基黄酮
9.52 μg/mL、川陈皮素 22.41 μg/mL、3, 5, 6, 7, 8, 3′, 4′-
七甲氧基黄酮 27.40 μg/mL、橘皮素 14.13 μg/mL、欧
前胡素 11.77 μg/mL、和厚朴酚 20.40 μg/mL、异欧前
胡素 43.00 μg/mL、厚朴酚 58.89 μg/mL。分别按
“2.2.1”和“2.2.2”项下条件进样、检测。
2.5 统计学方法
采用 SPSS 13.0 双变量相关分析方法处理，计
算各共有峰与抑菌圈药效作用的Pearson相关系数。
3 结果
3.1 菌种确定及抑菌作用
3.1.1 菌种确定 实验选取几种常见的诱发急性胃
肠炎的病原菌，包括革兰阴性菌、革兰阳性菌和真
菌。结果显示，除大肠杆菌外，藿香正气水对其他
菌种均有不同程度的抑制作用。由于金黄色葡萄球
菌为较常见的食源性致病菌和试药对其具有较大的
抑菌圈和较小的最低抑菌浓度（MIC），故选定金黄
色葡萄球菌为实验菌种。
3.1.2 最佳抑菌作用时间点确定 藿香正气水 ig
给予大鼠后，大鼠肠道内容物抑菌作用最强时间点
在给药后 40 min。
3.1.3 抑菌活性成分筛选 对甘草苷、甘草素、异
甘草素、川陈皮素、和厚朴酚、厚朴酚、异欧前胡
素、欧前胡素等进行抑菌试验，发现异甘草素与和
厚朴酚具有抑菌作用，且和厚朴酚作用最强烈。
3.1.4 大鼠肠道内容物的抑菌作用 大鼠 ig 给予
自制 11 批藿香正气水后 40 min 处死，建立各批肠
内容物样品药效指标，结果 11 批自制藿香正气水 ig
给予大鼠后，肠道内容物对金黄色葡萄球菌的抑菌
圈直径分别为（ 10.08±0.78）、（ 10.45±1.06）、
（ 11.56±1.10 ）、（ 9.98±0.59 ）、（ 9.18±0.47 ）、
（ 9.47±0.61 ）、（ 10.59±0.76 ）、（ 9.15±0.35 ）、
（10.58±0.98）、（12.40±1.35）、（9.61±1.27）mm，
阳性对照抑菌圈直径为（14.26±0.48）mm。
3.2 肠道内容物样品的指纹图谱
根据色谱条件，建立大鼠 ig 给予自制 11 批藿
香正气水后，肠道内容物样品高极性部位和低极性
部位的指纹图谱，并得到 32 个共有色谱峰的峰面
积。结果见表 3 和图 1。
3.3 混和对照品的液相色谱图
将混合对照品溶液，按相应的色谱条件分离，并
进行色谱峰归属和在样品中各峰的归属。结果见图2。
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表 3 自制藿香正气水 11 批次样品给药后大鼠肠道内容物液相色谱共有峰峰面积
Table 3 HPLC common peak areas of intestinal contents in rats after administrated
with 11 batches of self-designed HZT
峰面积 样品（批）
峰 1 峰 2 峰 3 峰 4 峰 5 峰 6 峰 7 峰 8 峰 9 峰 10 峰 11
1 2.8 35.6 6.8 132.4 45.0 178.7 29.1 55.8 127.7 130.6 61.4
2 4.4 33.1 4.5 145.4 29.7 64.6 39.8 59.7 138.5 201.0 86.3
3 4.5 41.5 4.2 149.9 29.6 133.6 386.0 87.7 274.0 109.5 78.3
4 2.8 24.3 2.8 111.1 29.7 136.3 26.5 63.1 161.2 113.5 67.4
5 4.2 21.6 6.7 120.4 59.2 55.1 38.1 40.4 115.7 125.1 62.8
6 2.3 26.6 4.0 99.3 31.4 150.7 57.8 104.2 236.9 59.7 57.8
7 3.0 25.4 2.7 81.7 20.0 85.3 28.2 61.8 187.9 70.3 81.6
8 4.2 30.6 10.1 92.7 46.0 112.5 24.4 33.3 50.6 112.3 49.4
9 3.3 26.9 12.0 120.7 39.7 166.8 35.4 43.3 96.1 88.4 45.4
10 4.5 31.1 6.2 114.2 42.2 179.2 42.0 75.3 158.6 79.5 64.6
11 1.7 18.9 2.1 73.9 24.8 96.5 12.1 42.3 78.3 65.3 35.3
峰面积 样品（批）
峰 12 峰 13 峰 14 峰 15 峰 16 峰 17 峰 18 峰 19 峰 20 峰 21 峰 22
1 46.0 149.1 10.2 104.3 30.2 68.2 30.6 70.5 351.7 10.7 16.9
2 42.7 234.5 19.1 60.5 25.3 72.7 43.0 45.6 567.2 17.0 31.4
3 51.9 131.9 21.4 15.2 34.2 74.3 57.7 53.4 728.8 24.8 32.9
4 40.7 136.5 16.7 38.8 28.6 62.2 53.6 44.8 665.5 23.3 29.3
5 32.2 145.3 14.4 24.6 19.4 24.4 32.9 3.3 486.1 15.8 21.6
6 26.0 72.1 8.5 50.6 28.9 60.8 56.5 32.0 891.0 24.1 43.6
7 49.9 92.3 21.7 8.9 24.2 57.3 38.6 41.9 513.9 18.5 28.8
8 26.8 130.2 13.9 12.5 20.3 38.5 36.0 23.8 489.3 16.0 22.8
9 34.1 112.7 14.6 24.1 21.3 52.3 47.0 34.8 624.4 21.1 28.8
10 28.3 95.5 11.4 34.9 24.4 70.2 57.0 62.0 790.3 25.1 37.5
11 14.6 80.3 7.2 11.2 22.5 34.0 24.0 31.6 240.3 8.2 12.4
峰面积 样品（批）
峰 23 峰 24 峰 25 峰 26 峰 27 峰 28 峰 29 峰 30 峰 31 峰 32
1 364.1 52.1 69.9 351.7 24.2 364.6 87.0 487.7 44.9 42.6
2 552.2 85.3 103.6 370.1 42.4 467.4 70.8 468.4 32.7 36.1
3 751.2 84.7 119.7 513.4 42.6 620.2 103.5 463.3 21.0 33.4
4 711.1 76.9 102.5 348.4 37.0 403.7 75.0 430.0 34.4 30.2
5 494.4 47.9 64.1 296.6 28.4 471.1 11.4 427.8 25.8 34.0
6 977.8 57.7 74.6 338.7 31.0 431.3 72.9 524.6 33.9 29.5
7 572.8 119.9 164.8 393.5 73.5 524.5 88.4 521.6 38.1 37.8
8 535.3 59.8 85.6 236.9 36.2 278.2 52.8 524.5 22.7 32.2
9 589.9 50.5 69.2 380.9 24.2 451.8 60.9 491.0 22.2 60.0
10 892.2 85.1 116.0 545.0 45.9 556.4 105.0 579.8 33.7 34.3
11 267.9 34.3 53.4 199.7 16.8 274.9 34.2 401.6 27.2 43.2
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图 1 自制藿香正气水 11 批次样品给药后大鼠肠道内容物高极性部位 (A) 和低极性部位 (B) 的 HPLC 指纹图谱
Fig. 1 HPLC fingerprint of high-polar fraction (A) and low-polar fraction (B) of intestinal contents
in rats after administrated with 11 batches of self-designed HZT


6-甘草苷 9-橙皮苷 10-甘草素 11-水合氧化前胡素 12-白当归素 16-5, 7, 8, 3′, 4′-五甲氧基黄酮 18-5, 7, 8, 4′-四甲氧基黄酮
20-川陈皮素 22-3, 5, 6, 7, 8, 3′, 4′-七甲氧基黄酮 23-橘皮素 24-欧前胡素 26-和厚朴酚 27-异欧前胡素 28-厚朴酚
6-liquiritin 9-hesperidin 10-liquiritigenin 11-oxypeucedanin hydrate 12-byak-angelicin 16-5, 7, 8, 3′, 4′-pentamethoxy flavone
18-5, 7, 8, 4′-tetramethoxy flavone 20-nobiletin 22-3, 5, 6, 7, 8, 3′, 4′-heptamethoxy flavone 23-tangeretin 24-imperatorin
26-honokiol 27-isoimperatorin 28-magnolol
图 2 高极性部位混合对照品 (A)、自制藿香正气水给药后大鼠肠道内容物高极性部位 (B)、低极性部位混合
对照品 (C)、自制藿香正气水给药后大鼠肠道内容物低极性部位 (D)的 HPLC 图
Fig. 2 HPLC chromatograms of mixed reference substances of high-polar fraction (A), high-polar fraction of intestinal
contents in rats after administrated with self-designed HZT (B), mixed reference substances of low-polar fraction
(C), and low-polar fraction of intestinal contents in rats after adminnistrated with self-designed HZT (D)
3.4 肠道内容物谱-效分析
以 32 个共有色谱峰的峰面积（X）为自变量，
11 批自制样品 6 次实验抑菌圈直径的均值（Y）为
因变量进行相关分析和逐步回归分析，得到 Pearson
相关系数和回归标准系数。结果见表 4。
以强迫引入法进行多元线性回归分析，结果见
表 5，有 10 个与抑菌活性密切相关的色谱峰被引入
回归方程，其中呈正相关的色谱峰为 6、13、26、
30 号色谱峰，表明肠道内容物抑菌作用随指纹图谱
的 6、13、26、30 峰强度增大而增强，其中 26 号峰

0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 10 20 30 40 50 60 70 80
13
14 15 16 171819
20
21
22
23
24 25
26
27
28
29
30
31
32
28
27
26
24
23 22
20
18 16
t / min
C D

0 5 10 15 20 25 30 35 40 0 5 10 15 20 25 30 35 40
6 9 10
11
12
6
9
10 11 121
2
3
4 5
7 8
A B

0 6.38 12.75 9.13 25.51 31.88 38.26 44.64 0 13.19 26.38 39.57 52.75 65.94 79.13 92.32
样品 11
↑
样品 1
A B
样品 11
↑
样品 1
t / min
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 7 期 2012 年 7 月

• 1354 •
表 4 共有色谱峰峰面积与抑菌圈直径的 Pearson 相关系数
Table 4 Pearson correlation coefficients of common peak areas and inhibition zone diameter
抑菌圈直径 峰面积
X1 X2 X3 X4 X5 X6 X7 X8
0.436 0.528 −0.055 0.394 −0.223 0.431 0.441 0.420
X9 X10 X11 X12 X13 X14 X15 X16
0.448 −0.056 0.414 0.367 −0.028 0.324 −0.026 0.369
X17 X18 X19 X20 X21 X22 X23 X24
0.692* 0.575 0.684* 0.434 0.538 0.444 0.431 0.550
X25 X26 X27 X28 X29 X30 X31 X32
Y
0.564 0.920** 0.430 0.745** 0.773** 0.459 0.057 0.095
*P＜0.05 **P＜0.01
表 5 有效色谱峰的标准回归系数
Table 5 Standard regression coefficients of effective peaks
峰号 标准回归系数
5 −0.218
6 0.191
7 −0.051
12 −0.344
13 0.223
15 −0.189
20 −0.416
26 1.291
30 0.029
32 −0.014

为和厚朴酚，经实验证明具有抑菌作用。而 6 号色
谱峰为甘草苷，无抑菌作用，但可能与其他成分具
有协同作用。13、30 号色谱峰未知。
4 讨论
肠道菌群对口服中药成分的转化是中药发挥疗
效的重要因素。肠道菌群对药物转化作用的研究方
法通常有两种，一种是体外实验方法，即动物粪便
温孵法和消化道内容物温孵法[9]，另一种是体内方
法，即动物给药后，在一定时间内将动物处死，取
消化道各部分内容物进行分析。胃肠道是藿香正气
水消化、吸收、代谢的主要器官之一。本实验采用
体内实验方法，建立了藿香正气水肠道内容物的
HPLC 指纹图谱，并将大鼠肠内藿香正气水代谢物
的药效与指纹图谱进行谱-效相关分析，寻找藿香正
气水在大鼠体内的抑菌成分群，并进行了部分体外
实验，还对藿香正气水中 14 个峰进行了归属，并对
归属的部分峰进行了抑菌作用筛选，为确定可控制
药品质量的药效物质基础，建立完善的质量标准提
供参考。
参考文献
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