全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 7 期 2012 年 7 月

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桂枝茯苓胶囊 HPLC 指纹图谱研究
李家春，孙 兰，李红娟，肖 伟，毕宇安，王振中*
江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222001
摘 要：目的 建立桂枝茯苓胶囊指纹图谱质量控制方法。方法 采用 HPLC 法测定，色谱柱为 Waters Symmetry C18（250
mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.02%三氟乙酸溶液梯度洗脱；检测波长 230 nm；体积流量 1.0 mL/min；柱温 30 ℃；
结果 10 批桂枝茯苓胶囊指纹图谱中标示出 13 个共有峰，各峰分离度大于 1.5，峰形良好。结论 该方法稳定可靠，可以
用于桂枝茯苓胶囊生产过程的质量控制与产品质量控制。
关键词：桂枝茯苓胶囊；指纹图谱；质量控制；HPLC；相似度
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)07 - 1333 - 03
HPLC fingerprint of Guizhi Fuling Capsule
LI Jia-chun, SUN Lan, LI Hong-juan, XIAO Wei, BI Yu-an, WANG Zhen-zhong
Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co., Ltd., Lianyungang 222001, China
Key words: Guizhi Fuling Capsule; fingerprint; quality control; HPLC; similarity

桂枝茯苓胶囊处方源于经典名方汉代张仲景的
《金匮要略》，全方由桂枝、茯苓、白芍、牡丹皮、
桃仁等组成，具有活血化瘀、缓消癥块的功效，临
床上主要用于治疗妇科痛经、子宫肌瘤、子宫内膜
异位症、卵巢囊肿、乳腺增生等症[1-2]。鉴于桂枝茯
苓胶囊在化学组成上是一个复杂体系[3-4]，各成分构
成不明确，有效成分和杂质没有明确的划分，化学
成分间共存的相互作用不明确，而中药指纹图谱能
够部分反映中药中所含化学成分的组成、数量及其
适当的比例关系。为了更好地反映桂枝茯苓胶囊的
内在质量，本实验对桂枝茯苓胶囊指纹图谱进行了
应用研究。
1 仪器与材料
Agilent 1200 型高效液相色谱仪（包含两元泵、
柱温箱、在线脱气机、自动进样器、MWD 检测器），
BP211D 型电子分析天平（德国 Sartorius 公司），
Centrifuge 5415D 高速离心机（德国 Eppendorf 公
司）；Milli—Q Academic 纯水机（法国 Millipore）；
KQ—250DB 型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有
限公司）。
芍药苷对照品（批号 110736-200732，中国药
品生物制品检定所），桂枝茯苓胶囊试生产样品（批
号分别为 080401、090601、090701、090901、091001、
091201、100101、100201、100301、100401，江苏
康缘药业股份有限公司提供）。乙腈、三氟乙酸（色
谱纯，Tidia 公司），甲醇（分析纯，南京化学试剂
公司），超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 Waters Symmetry C18 柱（250 mm×
4.6 mm，5 μm）；流动相为 0.02%三氟乙酸（A）-
乙腈（B），梯度洗脱：0～5 min，5% B；5～20 min，
5%～17% B；20～30 min，17%～19% B；30～40
min，19%～26% B；40～60 min，26%～88% B；检
测波长 230 nm；进样量 10 μL；柱温 30 ℃；体积
流量 1.0 mL/min；理论塔板数按芍药苷峰计算不低
于 4 000。
2.2 对照品溶液的制备
取芍药苷对照品适量，精密称定，加 50%甲醇
制成 0.25 mg/mL 对照品溶液。

收稿日期：2011-12-31
基金项目：科技部 “重大新药创制”科技重大专项（2009ZX09504-004）
作者简介：李家春（1977—），男，硕士，主要从事药品质量标准研究。Tel: (0518)85521949 E-mail: ljclyg2010@163.com
*通讯作者 王振中 Tel: (0518)85521956 E-mail: wzhzh-nj@163.net
网络出版时间：2012-06-19 网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/12.1108.R.20120619.1732.003.html
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2.3 供试品溶液的制备
取本品内容物适量，混匀，研细，取约 0.25 g，
精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 50%甲醇 25
mL，超声处理（250 W，40 kHz）30 min，放冷，
离心（12 000 r/min，10 min），取上清液作为供试品
溶液。
2.4 指纹图谱的生成及共有蜂的确定
吸取 10 个不同批号的桂枝茯苓胶囊供试品溶
液各 10 μL，依据“2.1”项下色谱条件，进样测定，
生成指纹图谱及对照指纹图谱（R）。比较各批色谱
图，均有稳定的 13 个色谱峰，且分离度良好，因此
确定此 13 个峰为共有峰。色谱图见图 1。




图 1 10 批桂枝茯苓胶囊 HPLC 指纹图谱及对照指纹图谱
Fig. 1 HPLC fingerprint for ten batches of Guizhi Fuling Capsule and their reference fingerprint

2.5 溶剂峰与滞后峰的考察
测试结果表明溶剂无干扰，延长至 2 倍保留时
间，未见有滞后峰。
2.6 精密度试验
取批号为 080401 的桂枝茯苓胶囊试生产样品，
按“2.2”项下方法制备，依据“2.1”项下色谱条件，
连续进样 6 次，以相对保留时间和相对峰面积的值
为指标，计算其 RSD，考察进样精密度，结果显示
共有峰的相对保留时间 RSD 均小于 1.41%，相对峰
面积 RSD 均小于 3.52%。
2.7 稳定性试验
取批号为 080401 的桂枝茯苓胶囊试生产样品，
按“2.2”项下方法制备，依据“2.1”项下色谱条件，
在 0、4、8、12、18、24 h 分别进样测定，以相对
保留时间和相对峰面积的值为指标，计算其 RSD，
考察供试品溶液稳定性，结果显示共有峰的相对保
留时间 RSD 均小于 0.69%，相对峰面积 RSD 均小
于 3.78%。表明供试品溶液在 24 h 内稳定。
2.8 重复性试验
取批号为 080401 的桂枝茯苓胶囊试生产样品，
按“2.2”项下方法制备，平行制备 6 份，依据“2.1”
项下色谱条件，分别进样测定，以相对保留时间和
相对峰面积的值为指标，计算其 RSD，考察供试品
处理方法的重复性，结果显示共有峰相对保留时间
RSD 均小于 0.21%，共有峰的相对峰面积 RSD 均小
于 4.34%。
2.9 指纹图谱技术参数及相似度计算
13个共有峰的峰面积占总峰面积的90%以上，
其中 1、4（S 峰）、7、13 号峰的峰面积大于总峰面
积的 10%，占总峰面积的 66.3%，2、3 号峰的峰面
100401
100301
100201
100101
091201
091001
090901
090701
090601
080401
R
0 10.05 20.29 30.44 40.58 50.73 60.88 71.02
t / min
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积大于总峰面积的 5%，占总峰面积的 10.5%。依据
LC-MS 对指纹图谱中特征峰的定性分析[3]，各指纹
峰所对应的化学成分分别是：没食子酸（1 号峰），
芍药内酯苷（3 号峰）、芍药苷（4 号峰）、1, 2, 3, 4, 6-
β-五没食子酰葡萄糖（7 号峰）、肉桂酸（9 号峰）、
苯甲酰芍药苷（10 号峰）、桂皮醛（12 号峰）、丹皮
酚（13 号峰）。采用中药色谱指纹图谱相似度评价
系统（A 版，国家药典委员会）进行评价，得 10
批桂枝茯苓胶囊指纹图谱的相似度结果分别为
0.993、0.994、0.994、0.990、0.993、0.994、0.990、
0.999、0.997、0.998。
2.10 指纹图谱共有蜂的归属及相关性分析
对指纹图谱中的部分共有峰进行了归属，见图
2，其中 1、2、4、6、7、10 号峰来自白芍与牡丹皮，
3、11 号峰来自白芍，5、8、13 号峰来自牡丹皮，9、
12 号峰分别为肉桂酸和桂皮醛来自桂枝[5]。桃仁与
茯苓在指纹图谱中的相关性没有得到体现，其原因
主要为两药材中主要成分的紫外最大吸收波长靠近
末端吸收，在 230 nm 波长下吸收系数较小，如茯
苓中的三萜类成分与桃仁中的氰苷类成分。指纹图
谱中体现这两种药材共有峰的表达，尚有待在高灵
敏度的质量型检测器中进一步研究。




4-芍药苷
4-paeoniflorin

图 2 桂枝茯苓胶囊部分特征峰的归属
Fig. 2 Some characteristic peak assignments in fingerprint of Guizhi Fuling Capsule

3 讨论
3.1 检测波长与色谱条件的确定
根据全波长（200～400 nm）扫描的三维图谱
可以看出，在 230 nm 处各成分响应值较高，表达
的信息最为丰富，且在此波长的梯度洗脱条件下基
线较为平稳，故确定检测波长为 230 nm。
实验过程中分别对甲醇-0.02%三氟乙酸、乙腈-
水、乙腈-0.02%三氟乙酸等色谱条件进行了考察。
结果表明乙腈-0.02%三氟乙酸系统最佳，各峰分离
度大于 1.5，峰形尖锐，保留时间适中，因此选择其
为色谱条件。
3.2 提取方法的选择
考察了回流提取与超声提取方式，以及乙醇及
100%、70%、50%甲醇提取溶剂，结果表明，超声
处理优于回流，50%甲醇提取的色谱峰最为完全。
提取时间优选的结果表明，30 min 提取较为完全。
参考文献
[1] 中国药典 [S]. 一部. 2010.
[2] 汪朝晖, 杜彦萍, 黄习文, 等. 桂枝茯苓胶囊治疗乳腺
增生病 (瘀血阻络证) 临床研究 [J]. 广州中医药大学
学报, 2009, 26(2): 103.
[3] 王振中, 李 成, 李家春, 等. 桂枝茯苓胶囊化学成分
研究 (I) [J]. 中草药, 2011, 42(5): 856-858.
[4] 朱克近, 王振中, 李 成, 等. 桂枝茯苓胶囊化学成分
研究 (II) [J]. 中草药, 2011, 42(6): 1087-1089.
[5] 王振中, 李家春, 窦 霞, 等. 液相色谱-质谱联用法对
桂枝茯苓胶囊指纹图谱中特征峰的鉴定 [J]. 南京中医
药大学学报, 2009, 25(3): 194-196.
桂枝茯苓胶囊
白芍
牡丹皮
0 10 20 30 40 50 60 70
t / min
1
2 3
4
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7
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