全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 13 期 2013 年 7 月

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异长春花碱抑制人乳腺癌细胞转移侵袭的作用及其机制
马一平
天津环湖医院，天津 300060
摘 要：目的 探讨异长春花碱抑制人乳腺癌细胞转移侵袭的作用及其机制。方法 人乳腺癌 MCF-7 和 MDA-MB-435 细胞
分别用异长春花碱 1、10 μmol/L 处理后，MTS 法检测细胞黏附能力，Transwell 法检测细胞侵袭能力，ELISA 法检测细胞转
移生长因子-β（TGF-β）分泌的变化，明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶（MMP）-2 和 MMP-9 活性，Western blotting 法检测
肿瘤细胞 E-钙黏素、N-钙黏素、MMP-2、MMP-9、p-JNK 及 p-Akt 蛋白的表达，RT-PCR 法检测肿瘤细胞 E-钙黏素、N-钙
黏素及 MMP-2、MMP-9 基因的表达，双荧光素酶报告基因实验考察 AP-1 和核因子-κB（NF-κB）活性的变化。结果 异长
春花碱 1、10 μmol/L 给药后，细胞黏附能力：MCF-7 细胞分别下降 34.8%、66.8%，MDA-MB-435 细胞分别下降 42.6%、72.3%；
侵袭能力：MCF-7 细胞分别下降 44.4%、72.2%，MDA-MB-435 细胞分别下降 47.7%、86.4%；TGF-β 分泌：MCF-7 细胞分
别下降 28.2%、52.1%，MDA-MB-435 细胞分别下降 39.0%、55.1%；E-钙黏素基因表达：MCF-7 细胞分别上调 86.5%、181.6%，
MDA-MB-435 细胞分别上调 116.6%、160.7%；N-钙黏素基因表达：MCF-7 细胞分别下降 33.7%、74.1%，MDA-MB-435 细
胞分别下降 57.6%、76.9%；MMP-2 基因表达：MCF-7 细胞分别下降 71.6%、88.4%，MDA-MB-435 细胞分别下降 57.4%、
69.4%；MMP-9 基因表达：MCF-7 细胞分别下降 15.0%、84.0%，MDA-MB-435 细胞分别下调 22.1%、73.0%；E-钙黏素蛋
白表达显著上调，N-钙黏素蛋白表达明显下调，MMP-2 和 MMP-9 及 p-JNK、p-Akt 蛋白表达显著下降；AP-1 活性：MCF-7
细胞分别下降 27.7%、68.2%，MDA-MB-435 细胞分别下降 34.8%、71.4%；NF-κB 活性：MCF-7 细胞分别下降 18.4%、44.8%，
MDA-MB-435 细胞分别下降 24.4%、51.9%。结论 异长春花碱可抑制人乳腺癌 MCF-7 和 MDA-MB-435 细胞体外侵袭能力，
其机制可能与下调肿瘤转移相关信号通路及上皮间质转化表达有关。
关键词：异长春花碱；人乳腺癌 MCF-7 细胞；人乳腺癌 MDA-MB-435 细胞；肿瘤转移；信号通路；上皮间质转化表达
中图分类号：R282.710.5；R979.1 文献标志码：A 文章编号：0253-2670(2013)13 - 1786 - 07
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2013.13.016
Inhibition of vinorelbine on invasion and metastasis of breast cancer cell
and its mechanism
MA Yi-ping
Tianjin Huanhu Hospital, Tianjin 300060, China
Abstract: Objective To investigate the inhibition of vinorelbine (VRB) on the invasion and metastasis of breast cancer cell and its
mechanism. Methods The MCF-7 and MDA-MB-435 cells were treated with 1 and 10 μmol/L VRB. The cell adhesion was tested by
MTS, the invasion was detected by Transwell, secretion of TGF-β was detected using ELISA, the activities of MMP-2 and MMP-9
were detected by zymography, the expression of proteins, including E-cadherin (E-CAD), N-cadherin (N-CAD), MMP-2, and
MMP-9, p-JNK and, p-Akt was evaluated by Western blotting, RT-PCR was used to detect E-CAD, N-CAD, MMP-2, and MMP-9
genes, and dual-luciferase reporter assay was used to validate the activities of AP-1 and NF-κB. Results After being treated with 1
and 10 μmol/L VRB, for MCF-7 and MDA-MB-435, the adhesion ability was decreased by 34.8% and 66.8%, 42.6% and 72.3%; The
metastatic ability was decreased by 44.4% and 72.2%, 47.7% and 86.4%; The secretion of TGF-β was reduced by 28.2% and 52.1%,
39.0% and 55.1%, significantly; The mRNA expression levels of E-CAD were increased by 86.5% and 181.6%, 116.6% and 160.7%;
while the levels of N-CAD were decreased by 33.7% and 74.1%, 57.6% and 76.9%; The gene expression of MMP-2 was decreased by
71.6% and 88.4%, 57.4% and 69.4%; The gene expression of MMP-9 was decreased by 15.0% and 84.0%, 22.1% and 73.0%,
respectively. The protein expression of E-CAD was up-regulated while the protein expression of N-CAD, MMP-2, MMP-9, p-JNK,
and p-Akt were down-regulated significantly; And dual-luciferase reporter assay validated VRB could inhibit the transcriptional

收稿日期：2013-01-13
作者简介：马一平（1971—），硕士，副主任药师，研究方向为临床药物研究。
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 13 期 2013 年 7 月

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activity of AP-1 and NF-κB by 27.7% and 68.2%, 34.8% and 71.4%, 18.4% and 44.8%, 24.4% and 51.9%, respectively.
Conclusion VRB could inhibit the metastasis of breast cancer MCF-7 and MDA-MB-435 cells via down-regulation of inhibition
and blocking of signaling pathway correlated with metastasis and epithelial-mesenchymal transition.
Key words: vinorelbine; human breast cancer MCF-7 cells; human breast cancer MDA-MB-435 cells; tumor metastasis; signaling
pathway; epithelial-mesenchymal transition expression

长春碱类化合物是一类具有抗癌活性的生物
碱，其以细胞微管蛋白为作用靶点，通过与微管
蛋白相结合，从而抑制微管聚合、使微管解聚，
使分裂的细胞不能形成纺缍体而使细胞分裂终
止，起到抑制细胞增殖的作用 [1]。异长春花碱
（vinorelbine, VRB）是以长春碱为原料、通过结构
修饰半合成得到的衍生物，在保持原料药抗癌活
性的基础上降低了毒性，在临床上主要用于非小
细胞肺癌、急性淋巴细胞白血病、转移性乳腺癌
等多种肿瘤的治疗[2-3]。本实验研究异长春花碱对
乳腺癌细胞转移能力的影响，为明确其抗癌作用
及其机制提供实验依据。
1 材料
1.1 药品与试剂
异长春花碱，质量分数为 99.9%，Sigma 公司；
胎牛血清、RPMI-1640 培养基，Gibco 公司；Trizol
RNA 提取试剂，Invitrigen 公司；逆转录试剂盒、
Sybgree 实时定量 PCR（RT-PCR）试剂盒，Ambion
公司；转移生长因子-β（TGF-β）ELISA 试剂盒，
达科为公司；Matrigel Invasion Chamber 试剂盒，BD
公司；Bradford 蛋白测定试剂盒，碧云天生物技术
研究所；E-钙黏素、N-钙黏素、基质金属蛋白酶-2/9
（MMP-2/9）、p-JNK、p-Akt 抗体，Abcam 公司；ECL
化学发光试剂，GE 公司；双荧光素酶报告试剂盒，
Promega 公司；荧光报告质粒 3xAP-1-pGL3、3x
NF-κB-pGL3，Addgene 公司；3-(4, 5-二甲基噻唑-2-
基)-5-(3-羧基甲基苯基)-2-(4-磺酸苯基)-2H-四氮唑
（MTS），Promega 公司。
1.2 细胞系
人乳腺癌细胞系 MDA-MB-435、MCF-7，美国
标准生物品收藏中心提供，均保存于本实验室。
1.3 仪器
ABI7500 型荧光定量 PCR（RT-PCR）仪，ABI
公司；PowerPac Basic 电泳仪、PowerPac HC 转膜
电泳仪、ChemiDocXRS 凝胶成像系统，Bio Rad 公
司；PTC—200 PCR 仪，MJ 公司；CO2 培养箱，Forma
公司；生物化学发光测量仪，Promega 公司；显微
镜，尼康公司。
2 方法
2.1 细胞培养与给药
MDA-MB-435 和 MCF-7 细胞均用含 10%胎牛
血清的 RPMI 1640 培养基在 37 ℃、饱和湿度、5%
CO2 培养箱中常规传代培养。
2.2 MTS 法检测细胞增殖
将乳腺癌细胞按 5×103/孔密度接种于 96 孔板
中，每组 5 个复孔，37 ℃、5% CO2孵育 24 h 后，
分别加入异长春花碱 0、0.5、1、5、10、50、100
μmol/L，继续孵育 24 h，吸出上清液，磷酸盐缓冲
液（PBS）洗 3 次，加入 MTS 孵育 4 h，490 nm 波
长下测定 A 值，计算细胞增殖抑制率。
细胞增殖抑制率＝1－(A 给药组 / A 对照组)
2.3 MTS 法检测细胞黏附力
实验分成 3 组：对照组（给予 RPMI 培养液），
异长春花碱 1、10 μmol/L 组。培养细胞密度至 80%
时加入异长春花碱。给药后将 3 组乳腺癌细胞按
1×105/孔密度接种于铺有 Matrigel 胶的 96 孔板中，
每组 5 个复孔，37 ℃、5% CO2 孵育 1 h，吸出上清
液，PBS 洗 3 次，加入 MTS 孵育 4 h，490 nm 波长
下测定 A 值，计算细胞黏附率。
细胞黏附率＝1－(A 未贴壁细胞数 / A 接种细胞总数)
2.4 Transwell 法检测细胞侵袭能力
细胞分组、给药同“2.3”项。将−20 ℃保存的
Matrigel Invasion Chamber 小室在室温下放置 30
min，在上室、下室中各加入无血清培养基 500 μL，
37 ℃孵箱水化 2 h，弃去无血清培养基。下室每孔
加入 750 μL 含 20%胎牛血清的培养基，上室每孔加
入500 μL含2.5×104个细胞的无血清培养基重悬的
各组细胞悬液，置于孵箱培养 12 h 后用棉签拭去上
层未穿过的细胞，固定、染色，自来水漂洗 3 次，
室温风干，中性树胶固定，镜下观察（×40）穿孔
细胞数目，随机选取 5 个视野计数并取其平均值。
2.5 ELISA 法检测 TGF-β 分泌量
细胞分组、给药同“2.3”项。将各组乳腺癌细
胞按 3×105/孔密度接种于 6 孔板中，每组 5 个复孔，
37 ℃、5% CO2孵育 24 h，收集上清，按 ELISA 试
剂盒说明书检测 TGF-β分泌量。
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2.6 RT-PCR 检测乳腺癌细胞转移相关基因表达
细胞分组、给药同“2.3”项。将各组处于对数
生长期细胞用 PBS 清洗 3 次，加入适量 Trizol 试剂，
按说明书提取总 RNA、进行逆转录。25 μL 反应体
系中包括 1 μL cDNA、2.5 μL 10×PCR 缓冲液（Mg2+
游离）、2.8 μL MgCl2（25 mmol/L）、2 μL dNTP（2.5
mmol/L）、0.5 μL 上下游引物（10 mmol/L）、0.25 μL
Taq DNA 聚合酶、2.5 μL 10×Sybgreen I。PCR 反应
条件：50 ℃温育 2 min，95 ℃预变性 2 min，95 ℃变
性 30 s，58～64 ℃退火延伸 1 min，40 个循环。计
算各样本待测基因的 Ct 值（荧光信号达到设定阈值
所经过的循环数）与 GAPDH 的 Ct 值的差，即△Ct，
2−△Ct 为该样本中待测基因相对于 GAPDH 基因的表
达量。引物由大连宝生物工程有限公司合成并纯化，
引物序列见表 1。
2.7 Western blotting 法检测相关蛋白表达
细胞分组及给药同“2.3”项。将各组对数生长
期细胞用 PBS 清洗 3 次，加入适量预冷的细胞裂解
表 1 基因引物序列及片段长度
Table 1 Gene primer sequence and fragment length
基因 引物序列 片段长度 / bp
上游：5’-CGAGAGCTACACGTTCACGG-3’ E-钙黏素
下游：5’-GGGTGTCGAGGGAAAAATAGG-3’
593
上游：5’-GCCACCATATGACTCCCTCTTAGT-3’ N-钙黏素
下游：5’-CAGAAAACTAATTCCAATCTGAAA-3’
454
上游：5’-CCCACTGCGGTTTTCTCGAAT-3’ MMP-2
下游：5’-CAAAGGGGTATCCATCGCCAT-3’
447
上游：5’-AGACCTGGGCAGATTCCAAAC-3’ MMP-9
下游：5’-CGGCAAGTCTTCCGAGTAGT-3’
754
上游：5’-ACAACTTTGGTATCGTGGAAGG-3’ GAPDH
下游：5’-GCCATCACGCCACAGTTTC-3’
231

液冰浴裂解 30 min，移至 1.5 mL EP 管中，4 ℃下
12 000 r/min 离心 20 min，吸取上清至新的 EP 管中，
Bradford 法测定蛋白的量。取 40 μg 总蛋白，在 80 V
下聚丙烯酰胺凝胶（PAGE，4%浓缩胶、10%分离胶）
电泳 3 h，电转印至 PVDF 膜上。5%脱脂奶粉室温封
闭 1 h，加入相应一抗，4 ℃孵育过夜。Tris-
HCl/Tween20 缓冲液（TBST）洗膜 6 次，加入辣根
过氧化物酶（HRP）标记的二抗（1∶5 000），室温孵
育 30～45 min，TBST 洗膜 6 次后用 ECL 化学发光试
剂显色 1～2 min，曝光 X 胶片。检测 MMP-2/9、E-
钙黏素、N-钙黏素、p-JNK、p-Akt 蛋白表达。
2.8 双荧光素酶报告基因实验检测 AP-1 和 NF-κB
的活性
细胞分组及给药同“2.3”项。将各组细胞按 3×
105/孔密度接种于 6 孔板中，37 ℃、5% CO2 孵育
24 h，将 1 μg AP-1 和核因子-κB（NF-κB）荧光报
告质粒、0.02 μg 对照质粒转染进入对照组和给药组
细胞，24 h 后应用荧光酶标仪检测荧光强度。
2.9 统计学方法
统计学分析采用 SPSS 13.0 软件，数据用 ±x s
表示，根据数据处理的不同方法及统计学处理的不
同要求，选用方差分析或 t 检验进行组间差异分析。
每个实验均重复 3 次。
3 结果
3.1 对乳腺癌细胞增殖的影响
异长春花碱 1、10 μmol/L 对 MDA-MB-435 和
MCF-7 细胞的抑制率均低于 5%（无毒）、15%（低
毒）。结果见图 1。故采用这 2 个浓度进行后续实验。


图 1 异长春花碱对乳腺癌细胞增殖的影响 (n = 3)
Fig. 1 Effect of VRB on proliferation
of breast cancer cells (n = 3)

120
100
80
60
40
20
0
0 0.5 1 5 10 50 100
异长春花碱 / (μmol·L−1)
细
胞
增
殖
抑
制
率
/
%

MCF-7 细胞
MDA-MB-435 细胞
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3.2 对乳腺癌细胞黏附能力的影响
与对照组相比，1、10 μmol/L 异长春花碱组
MCF-7 细胞黏附能力分别下降 34.8%、66.8%（P＜
0.05），MDA-MB-435 细胞黏附能力分别下降
42.6%、72.3%（P＜0.05）。结果见图 2。
3.3 对乳腺癌细胞侵袭能力的影响
与对照组相比，1、10 μmol/L 异长春花碱组
MCF-7 细胞侵袭能力分别下降 44.4%、72.2%（P＜
0.05），MDA-MB-435 细胞侵袭能力分别下降
47.7%、86.4%（P＜0.05）。结果见图 3。
3.4 对乳腺癌细胞 TGF-β 分泌的影响
与对照组相比，1、10 μmol/L 异长春花碱组
MCF-7 细胞 TGF-β 分泌量分别下降 28.2%、52.1%
（P＜0.05），MDA-MB-435 细胞 TGF-β 分泌分别下
降 39.0%、55.1%（P＜0.05）。结果见图 4。

与对照组比较：*P＜0.05，下同
*P < 0.05 vs control group, same as below
图 2 异长春花碱对乳腺癌细胞黏附能力的影响 (n = 3)
Fig. 2 Effect of VRB on adhesion of breast cancer cells (n = 3)

图 3 异长春花碱对乳腺癌 MCF-7 细胞 (A) 和 MDA-MB-435 细胞 (B) 侵袭能力的影响 (n = 3)
Fig. 3 Effect of VRB on invasion of breast cancer cells MCF-7 (A) and MDA-MB-435 (B) (n = 3)
3.5 对乳腺癌细胞转移相关基因和蛋白表达的影响
与对照组相比，MCF-7 细胞经 1、10 μmol/L 异
长春花碱处理后，MMP-2 基因表达下调 71.6%、
88.4%，MMP-9 基因表达下调 15.0%、84.0%；N-
钙黏素基因表达下调 33.7%、74.1%，E-钙黏素基因
表达上调 86.5%、181.6%。MDA-MB-435 细胞经 1、
10 μmol/L 异长春花碱处理后，MMP-2 基因表达下
调 57.4%、69.4%，MMP-9 基因表达下调 22.1%、
73.0%；N-钙黏素基因表达下调 57.6%、76.9%，E-
钙黏素基因表达上调 116.6%、160.7%。结果见图 5。
与对照组相比，MCF-7 和 MDA-MB-435 细胞经 1、
10 μmol/L 异长春花碱处理后，E-钙黏素蛋白表达均
显著上调，N-钙黏素、MMP-2、MMP-9 蛋白表达
均显著下调。结果见图 6。
3.6 对乳腺癌细胞转移相关信号通路的影响
Western blotting 检测结果显示，与对照组相比，
经 1、10 μmol/L 异长春花碱处理后，MCF-7 和
MDA-MB-435 细胞 p-JNK、p-Akt 蛋白表达均显著

120
100
80
60
40
20
0
对照 1 10
异长春花碱 / (μmol·L−1)
细
胞
黏
附
率
/
%

MCF-7
MDA-MB-43
*
*
* *





对照 异长春花碱 1 μmol·L−1 异长春花碱 10 μmol·L−1 对照 异长春花碱 1 μmol·L−1 异长春花碱 10 μmol·L−1
120
100
80
60
40
20
0
120
100
80
60
40
20
0
细
胞
侵
袭
率
/
%

细
胞
侵
袭
率
/
%

对照 1 10 对照 1 10
异长春花碱 / (μmol·L−1) 异长春花碱 / (μmol·L−1)
*
*
*
*
A B
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下降；异长春花碱 1.10 μmol/L 组 MCF-7 细胞 AP-1
报告质粒活性下降 27.7%、68.2%，NF-κB 报告质粒
活性下降 18.4%、44.8%；与对照组相比，异长春花
碱 1、10 μmol/L 组 MDA-MB-435 细胞 AP-1 报告质
粒活性下降 34.8%、71.4%，NF-κB 报告质粒活性下

图 4 异长春花碱对乳腺癌细胞 TGF-β 分泌的影响 (n = 3)
Fig. 4 Effect of VRB on TGF-β secretion
of breast cancer cells (n = 3)
降 24.4%、51.9%；表明异长春花碱能抑制转录因子
JNK 和 Akt 的磷酸化，以及 AP-1 和 NF-κB 转录因
子的活化。结果见图 7。
4 讨论
乳腺癌是女性最常罹患的恶性肿瘤，其转移是
乳腺癌患者的首要致死原因。异长春花碱是临床治
疗转移性乳腺癌的主要药物之一，其通过作用于肿
瘤细胞微管蛋白而干扰肿瘤细胞分裂、增殖，从而
发挥抑癌作用。本研究结果表明，异长春花碱使乳
腺癌细胞异质黏附能力、转移侵袭能力明显下降，
使 E-钙黏素表达上调、N-钙黏素表达下调，MMP-2
和 MMP-9 表达下调，并促进肿瘤细胞转移的信号
通路如 TGF-β分泌减少、AP-1 和 NF-κB 活性下降、
JNK 和 Akt 磷酸化程度降低，表明异长春花碱抑制
乳腺癌细胞转移可能与通过下调肿瘤细胞转移及上
皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）
相关信号通路有关。
EMT 是胚胎形态发展中的一个重要进程。EMT
时，上皮细胞极性丢失，与周围细胞和基质的接触


图 5 异长春花碱对乳腺癌 MCF-7 细胞 (A) 和 MDA-MB-435 细胞 (B) 转移相关基因表达的影响 (n = 3)
Fig. 5 Effect of VRB on mRNA expression of metastasis-related genes in breast cancer cells MCF-7 (A)
and MDA-MB-435 (B) (n = 3)

图 6 异长春花碱对乳腺癌 MCF-7 细胞 (A) 和 MDA-MB-435 细胞 (B) 转移相关蛋白表达的影响 (n =3)
Fig. 6 Effect of VRB on metastasis-related protein expression in breast cancer cells MCF-7 (A) and MDA-MB-435 (B) (n =3)

350
300
250
200
150
100
50
0
300
250
200
150
100
50
0
基
因
相
对
表
达
量
/
%

基
因
相
对
表
达
量
/
%

MMP-2
MMP-9
N-钙黏素
E-钙黏素
A B
*
*
*
*
* *
*
*
*
*
*
*
* * *
*
对照 1 10 对照 1 10
异长春花碱 / (μmol·L−1) 异长春花碱 / (μmol·L−1)
160
140
120
100
80
60
40
20
0 对照 1 10
异长春花碱 / (μmol·L−1)
MCF-7
MDA-MB-43
TG
F-
β
/ (
pg
·m
L−
1 )

* *
*
*

MMP-2
MMP-9
N-钙黏素
E-钙黏素
β-actin
MMP-2
MMP-9
N-钙黏素
E-钙黏素
β-actin
7.2×104
9.2×104
1.4×105
1.35×105
4.2×104
7.2×104
9.2×104
1.4×105
1.35×105
4.2×104
A B
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图 7 异长春花碱对乳腺癌乳腺癌 MCF-7 细胞 (A) 和 MDA-MB-435 (B) 转移相关信号通路的影响 (n = 3)
Fig. 7 Effect of VRB on metastasis-related signal pathway in breast cancer cells MCF-7 (A) and MDA-MB-435 (B) (n = 3)
减少，细胞黏附力下降，迁移和运动能力增加，上
皮细胞表现出间质细胞表型[4-5]。同时上皮标记物，
如 E-钙黏素、角蛋白等表达降低，间质标记物，如
NCAD、VIM 等表达增加及 MMP-2 和 MMP-9 的表
达增加[6]。因此 EMT 在肿瘤转移中也起着重要作
用，是肿瘤细胞转移的重要机制之一[7-9]。EMT 过
程受多条信号通路的调控，如 TGF-β不仅参与胚胎
发育过程中的 EMT，也诱导肿瘤发展过程中的
EMT[10]。过度表达 TGF-β 信号通路的效应分子
Smad 2 和 Smad 3，可以促进在乳腺上皮细胞模型
中 EMT 的发生[11]。Smad 2 和 Smad 3 功能的下调则
与乳腺癌细胞的转移潜力下降相关[12]。此外，参与
TGF-β信号通路中众多激酶中，如 RAS、JNK/AP-1、
p38MAP 可协同促进 EMT[10,13-14]。NF-κB 是 EMT
的另一个关键调节信号通路[5,15]，在 EMT 诱导和维
持方面必不可少，激活NF-κB信号通路，在无TGF-β
存在的情况下也可诱导上皮细胞发生 EMT，而抑制
NF-κB 活性，则可以阻止上皮细胞 EMT 的发生。
PI3K-Akt 信号通路与肿瘤细胞的侵袭转移及 EMT
也密切相关，其激活可增加细胞的侵袭和转移[16]；
Akt 的持续性表达能诱导 EMT，赋予细胞侵袭和转
移所需的运动性[17-18]。本研究结果显示异长春花碱
使乳腺癌细胞 TGF-β 分泌减少、AP-1 和 NF-κB 活
性下降、JNK 和 Akt 磷酸化程度下降，表明其可能
通过抑制相关信号通路，从而抑制 EMT 的发生，抑
制肿瘤细胞转移。
综上所述，异长春花碱对乳腺癌转移具有一定
的抑制作用，作用机制可能与其抑制转移相关信号
通路以及 EMT 有关。确切机制和更深层次的抗乳
腺癌细胞转移机制还需进行更深入和多途径研究。
参考文献
[1] 崔 萍, 霍长虹, 李力更, 等. 作用于微管的天然产物
[J]. 中草药, 2010, 41(1): 139-147.
[2] Capasso A. Vinorelbine in cancer therapy [J]. Curr Drug
Targets, 2012, 13(8): 1065-1071.
[3] Galano G, Caputo M, Tecce M F, et al. Efficacy and
tolerability of vinorelbine in the cancer therapy [J]. Curr
Drug Saf, 2011, 6(3): 185-193.
[4] Thiery J P. Epithelial-mesenchymal transitions in
development and pathologies [J]. Curr Opin Cell Biol,
2003, 15(6): 740-746.
[5] Huber M A, Kraut N, Beug H. Molecular requirements




p-JNK
total-JNK
p-Akt
total-Akt
p-JNK
total-JNK
p-Akt
total-Akt
120
100
80
60
40
20
0
120
100
80
60
40
20
0
A
P-
1
相
对
活
性
/

%

N
F-
κB
相
对
活
性
/

%

MCF-7
MDA-MB-435
A B
*
*
* *
*
*
*
*
对照 1 10 对照 1 10
异长春花碱 / (μmol·L−1) 异长春花碱 / (μmol·L−1)
对照 1 10 对照 1 10
异长春花碱 / (μmol·L−1) 异长春花碱 / (μmol·L−1)
4.6×104
4.6×104
6.0×104
6.0×104
4.6×104
4.6×104
6.0×104
6.0×104
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 13 期 2013 年 7 月

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for epithelial-mesenchymal transition during tumor
progression [J]. Curr Opin Cell Biol, 2005, 17(5):
548-558.
[6] Zeisberg M, Neilson E G. Biomarkers for epithelial-
mesenchymal transitions [J]. J Clin Invest, 2009, 119(6):
1429-1437.
[7] Thiery J P. Epithelial-mesen chymal transitions in cancer
onset and progression [J]. Bull Acad Natl Med, 2009,
193(9): 1969-1978.
[8] Trimboli A J, Fukino K, de Bruin A, et al. Direct evidence
for epithelial-mesenchymal transitions in breast cancer
[J]. Cancer Res, 2008, 68(3): 937-945.
[9] Lim J, Thiery J P. Epithelial-mesenchymal transitions:
Insights from development [J]. Development, 2012, 139
(19): 3471-3486.
[10] Zavadil J, Bottinger E P. Tgf-beta and epithelial-to-
mesenchymal transitions [J]. Oncogene, 2005, 24(37):
5764-5774.
[11] Valcourt U, Kowanetz M, Niimi H, et al. Tgf-beta and the
smad signaling pathway support transcriptomic
reprogramming during epithelial-mesenchymal cell
transition [J]. Mol Biol cell, 2005, 16(4): 1987-2002.
[12] Zavadil J, Cermak L, Soto-Nieves N, et al. Integration of
tgf-beta/smad and jagged1/notch signalling in epithelial-
to-mesenchymal transition [J]. EMBO J, 2004, 23(5):
1155-1165.
[13] Buijs J T, Henriquez N V, van Overveld P G, et al.
Tgf-beta and bmp7 interactions in tumour progression
and bone metastasis [J]. Clin Exp Metastasis, 2007, 24(8):
609-617.
[14] Lv Z M, Wang Q, Wan Q, et al. The role of the p38
mapk signaling pathway in high glucose-induced
epithelial-mesenchymal transition of cultured human
renal tubular epithelial cells [J]. PLoS ONE, 2011, 6(7):
e22806.
[15] Huber M A, Azoitei N, Baumann B, et al. Nf-kappab is
essential for epithelial-mesenchymal transition and
metastasis in a model of breast cancer progression [J]. J
Clin Invest, 2004, 114(4): 569-581.
[16] Wallin J J, Guan J, Edgar K A, et al. Active pi3k pathway
causes an invasive phenotype which can be reversed or
promoted by blocking the pathway at divergent nodes [J].
PLoS ONE, 2012, 7(5): e36402.
[17] Grille S J, Bellacosa A, Upson J, et al. The protein kinase
akt induces epithelial mesenchymal transition and
promotes enhanced motility and invasiveness of
squamous cell carcinoma lines [J]. Cancer Res, 2003,
63(9): 2172-2178.
[18] Li J, Zhou B P. Activation of beta-catenin and akt
pathways by twist are critical for the maintenance of emt
associated cancer stem cell-like characters [J]. BMC
Cancer, 2011, 11(2): 49-60.