全 文 ：书土槿皮乙酸Ｂ通过活性氧和有丝分裂原蛋白激酶诱导
ＭＣＦ－７细胞凋亡的研究
刘春禹１，郑桂彬２，于静华１
（１．吉林省中医院针灸科，吉林长春　１３００００；２．吉林大学白求恩第一医院甲状腺外科，吉林长春　１３００００）
摘要：土槿皮乙酸Ｂ（ＰＡＢ）通过活性氧诱导肿瘤细胞 ＭＣＦ－７凋亡，同时也通过调控有丝分裂原蛋白激酶（ＭＡＰＫ）家族蛋
白来调控凋亡，但活性氧和 ＭＡＰＫ的关系还不清楚，本研究探讨活性氧和 ＭＡＰＫ家族蛋白的关系。４μｍｏｌ／Ｌ　ＰＡＢ在３６ｈ
诱导细胞死亡，活性氧清除剂抑制ＰＡＢ的作用，并降低ＰＡＢ的抑制率；同时，ＰＡＢ促进ＪＮＫ磷酸化，抑制ＥＲＫ的磷酸化，此
作用被活性氧清除剂抑制。
关键词：土槿皮乙酸Ｂ；活性氧；凋亡；ＭＡＰＫ家族蛋白；人乳腺癌 ＭＣＦ－７细胞
中图分类号：Ｑ２５　　　　　文献标识码：Ａ　　　　　文章编号：１６７１－７２３６（２０１３）０３－０１４６－０３
　　土槿皮为松科植物金钱松的干燥根皮或近根树
皮，土槿皮乙酸Ｂ（ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｘ　ａｃｉｄ　Ｂ，ＰＡＢ）是从土
槿皮中分离得到的新型二萜酸化合物。研究结果表
明土槿皮乙酸具有抗真菌（Ｌｉ等，１９９５）、抗肿瘤（Ｙｕ
等，２００８）、抗血管生成（Ｔａｎ等，２００４）、抗微管
（Ｔｏｎｇ等，２００６）等药理作用。Ｙｕ等（２００８）研究发
现ＰＡＢ增加活性氧水平诱导肿瘤细胞凋亡和衰老，
同时ＰＡＢ也调节有丝分裂原蛋白激酶（ＭＡＰＫ）来
调控凋亡，但活性氧和有丝分裂原蛋白激酶的关系，
仍没有相关研究。本试验将在土槿皮乙酸诱导人乳
腺癌细胞（ＭＣＦ－７）细胞凋亡的模型中，研究活性氧
是否调控有丝分裂原蛋白激酶家族蛋白质的活化，
这为进一步探讨土槿皮乙酸抗肿瘤作用机制提供了
依据。
１　材料与方法
１．１　药品与试剂　土槿皮乙酸Ｂ购于中国药品生
物制品检定所，应用时用二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）溶解，
并使ＤＭＳＯ的终浓度低于０．１％；二甲基亚砜和活
性氧清除剂 Ｎ－ａｃｅｔｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ（ＮＡＣ）购于Ｓｉｇｍａ公
司；２，７－二氯荧光黄双乙酸盐（ＤＣＦＨ－ＤＡ）购于Ｃａｌ－
ｂｉｏｃｈｅｍ公司；ＲＰＭＩ　１６４０培养基购于Ｇｉｂｃｏ公司；
收稿日期：２０１２－１２－１９
作者简介：刘春禹（１９７８－），男，吉林人，硕士，主要从事针灸学
和肿瘤分子药理学研究。
通信作者：于静华（１９７８－），女，博士后，从事肿瘤分子药理学研
究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｊｈ－０－２００２＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ；Ｔｅｌ：０４３１－
８８７８２１４４
基金项目：吉林省中医药管理局（２０１０－ｐｔ０６４）；吉林省中医药管
理局（２０１２－０３０）。
胎牛血清购于北京元亨圣马生物试剂公司；Ｐ３８、
ＥＲＫ、ＪＮＫ、β－ａｃｔｉｎ抗体及二抗均购于Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ
公司。
１．２　试验方法
１．２．１　细胞培养　ＭＣＦ－７细胞购自 Ａｍｅｒｉｃａｎ
Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）。细胞单层接种
在含１０％胎牛血清、２０ｇ／Ｌ谷氨酰胺的ＲＰＭＩ　１６４０
培养液中，在３７℃、５％ＣＯ２培养箱中培养。
１．２．２　细胞形态学观察　以每孔１×１０５个细胞接
种于６孔板中，培养１２ｈ后，将试验分为４组：空白
对照组 （添加 ０μｍｏｌ／Ｌ　ＰＡＢ），ＰＡＢ 组 （添 加
４μｍｏｌ／Ｌ　ＰＡＢ），ＮＡＣ组（添加５ｍｍｏｌ／Ｌ　ＮＡＣ），
ＰＡＢ与ＮＡＣ联合组（分别添加４μｍｏｌ／Ｌ　ＰＡＢ和
５ｍｍｏｌ／Ｌ　ＮＡＣ），培养３６ｈ后用光学显微镜观察
拍照。
１．２．３　ＭＴＴ分析抑制率　取处于对数生长期的
ＭＣＦ－７细胞接种于９６孔培养板中（细胞数为每孔
１×１０４个），每孔１００μＬ培养１２ｈ后，按照１．２．２
中的进行分组及处理，每组设平行孔３个，于３７℃、
５％ＣＯ２培养箱中继续培养于３６ｈ，每孔加入５ｇ／Ｌ
ＭＴＴ　２０μＬ，继续培养３ｈ后，加入１５０μＬ　ＤＭＳＯ
溶解，于酶标仪４９２ｎｍ处检测，计算药物的体外生
长抑制率。
１．２．４　细胞内活性氧检测　将 ＤＣＦＨ－ＤＡ 溶于
ＤＭＳＯ配成１ｍｍｏｌ／Ｌ母液，－２０℃保存。试验时
用ＰＢＳ稀释成５μｍｏｌ／Ｌ工作液，与收集的细胞
３７℃孵育３０ｍｉｎ，然后流式细胞仪检测，检测激发
波长为５１３ｎｍ，发射波长为５３０ｎｍ。检测时设 Ｍ１
·６４１· 生理生化 中国畜牧兽医 　２０１３年第４０卷第３期
门，随着活性氧水平的增加，峰形向 Ｍ１门移动。
１．２．５　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析蛋白质表达情况　收集
多于５×１０６个细胞，１０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，ＰＢＳ洗
２次，８０μＬ细胞裂解液（５０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＨＥＰＥＳ，１％
Ｔｒｉｔｏｎ－１００，１００ ｍｍｏｌ／Ｌ　ＮａＦ，１ｍｍｏｌ／Ｌ　ＥＤＴＡ，
２ｍｍｏｌ／Ｌ正钒酸钠，１ｍｍｏｌ／Ｌ　ＰＭＳＦ，１０ｇ／Ｌ　ｐｅｐｓｔａ－
ｔｉｎ　Ａ）于冰上裂解１ｈ，２５０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，收集
上清。加入２０μＬ　５×上样缓冲液（２５０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｔｒｉｓ·ＨＣｌ（ｐＨ　６．８），１００ｇ／Ｌ　ＳＤＳ，５０％甘油，
５ｇ／Ｌ溴酚兰，５％二巯基乙醇），沸水中煮３ｍｉｎ，使
蛋白质变性。每个点样孔加样２０μＬ样品液，１２％
ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶分离蛋白质。凝胶上的蛋白
质条带转移到硝酸纤维素膜上，封闭液封闭膜上的
蛋白质结合位点２ｈ。加入抗Ｐ３８、ＥＲＫ、ＪＮＫ、β－
ａｃｔｉｎ的抗体（一抗）及辣根酶标记的二抗，显色。
１．２．６　统计分析　所有试验数据均得自３次独立
试验数据的平均值，试验结果用平均值±标准差来
分析。
２　结果与分析
２．１　活性氧清除剂ＮＡＣ对ＰＡＢ诱导细胞形态学
变化的影响　在显微镜下观察到正常阴性对照组细
胞形态完整，细胞连接紧密，没有细胞死亡，但
４μｍｏｌ／Ｌ　ＰＡＢ作用３６ｈ后细胞数目降低，且浮起
变圆。加入５ｍｍｏｌ／Ｌ活性氧清除剂ＮＡＣ后，ＰＡＢ
的作用明显被抑制，即细胞死亡数目减少（图１）。
图１　活性氧清除剂ＮＡＣ对ＰＡＢ诱导的细胞形态改变的影响
注：Ａ，对照组；Ｂ，ＰＡＢ组；Ｃ，ＮＡＣ组；Ｄ，ＰＡＢ和ＮＡＣ联合组。
２．２　活性氧清除剂ＮＡＣ对ＰＡＢ的抑制率的影响
　由图２可知，４μｍｏｌ／Ｌ　ＰＡＢ作用３６ｈ后，ＭＴＴ
试验分析结果显示，ＰＡＢ的抑制率为５６．２４％，而加
入活性氧清除剂后抑制率为２０．２１％。试验结果表
图２　活性氧清除剂ＮＡＣ对ＰＡＢ抑制率的影响
明，活性氧清除剂明显降低ＰＡＢ的抑制率，即ＰＡＢ
通过活性氧来抑制细胞增殖。
２．３　ＰＡＢ对细胞内活性氧水平的调节　由图３可
知，４μｍｏｌ／Ｌ　ＰＡＢ作用０ｈ细胞活性氧水平为
２．８５％；而１２、２４、３６、４８ｈ后活性氧水平分别为
８．０９％、１４．３２％、２５．３１％、２９．４１％。试验结果表
明，ＰＡＢ时间依赖性的增加细胞内活性氧水平 。
２．４　活性氧清除剂 ＮＡＣ对细胞内活性氧水平的
调节　由图４可知，４μｍｏｌ／Ｌ　ＰＡＢ作用３６ｈ细胞
活性氧水平为２５．３１％，而加入活性氧清除剂后其
活性氧水平为１０．５４％。结果表明活性氧清除剂
ＮＡＣ明显降低活性氧水平，进一步说明ＰＡＢ通过
活性氧诱导细胞死亡。
２．５　ＰＡＢ调节 ＭＡＰＫ 家族蛋白质的磷酸化　
·７４１·中国畜牧兽医 　２０１３年第４０卷第３期 生理生化
４μｍｏｌ／Ｌ　ＰＡＢ作用３６ｈ上调磷酸化ＪＮＫ表达，下
调磷酸化ＥＲＫ表达，对磷酸化Ｐ３８表达没有明显
影响。但活性氧清除剂ＮＡＣ抑制ＰＡＢ的作用，即下
调磷酸化ＪＮＫ表达，上调磷酸化ＥＲＫ表达（图５）。
图３　ＰＡＢ在不同时间点对细胞内活性氧水平的调节
图４　活性氧清除剂ＮＡＣ对细胞内活性氧水平的调节
图５　活性氧清除剂对 ＭＡＰＫ家族蛋白的调节
３　小结与讨论
土槿皮乙酸Ｂ诱导多种肿瘤细胞凋亡，其作用
机制涉及到死亡受体途径、线粒体途径、有丝分裂原
活化的蛋白激酶途径。有丝分裂原活化的蛋白激酶
主要包括 Ｐ３８、ＪＮＫ 和 ＥＲＫ 蛋白激酶（Ｋｌｅｋｏｔｋａ
等，２００１；Ｓｃｈａｅｆｆｅｒ等，１９９９），一般来说，ＪＮＫ 和
Ｐ３８蛋白主要参与炎症、凋亡和细胞生长及分化；而
ＥＲＫ主要参与细胞生长和分化（Ｘｉａ 等，１９９５；
Ｈａｇｅｍａｎｎ等，２００１；Ｂｒａｄｈａｍ 等，２００６；Ｙｏｏｎ等，
２００６），前面研究结果发现土槿皮乙酸诱导人乳腺癌
细胞凋亡通过活化ＪＮＫ和抑制ＥＲＫ活化实现的
（Ｙｕ等，２００８），说明在ＰＡＢ诱导的人乳腺癌 ＭＣＦ－
７细胞模型中，ＪＮＫ主要促进细胞的死亡，而ＥＲＫ
主要促进细胞存活。ＰＡＢ能增加细胞内活性氧水
平来促进细胞凋亡和衰老（于静华等，２０１１），活性氧
水平的上调可以诱导细胞凋亡，但是否调节ＪＮＫ及
ＥＲＫ的活化目前还不清楚。本试验结果显示，ＰＡＢ
增加活性氧水平，且活性氧清除剂能够降低ＰＡＢ的
细胞毒性，进一步确定ＰＡＢ通过增加活性氧水平诱
导细胞凋亡。同时发现ＰＡＢ上调磷酸化ＪＮＫ的表
达，此作用被活性氧清除剂 ＮＡＣ阻断；ＰＡＢ抑制
ＥＲＫ的磷酸化，而此作用也被活性氧清除剂 ＮＡＣ
阻断。所以，ＰＡＢ通过增加活性氧水平来调节有丝
分裂原活化的蛋白激酶ＪＮＫ和ＥＲＫ活化，但活性
氧如何具体的调控ＪＮＫ和ＥＲＫ的活化还需要进一
步地研究。
参 考 文 献
１　于静华，张亚宏，刘春禹，等．土槿皮乙酸Ｂ增加活性氧水平诱导
人乳腺癌 ＭＣＦ－７细胞凋亡和衰老的研究［Ｊ］．中国畜牧兽医，
２０１１，３８（７）：６３～６７．
２　Ｂｒａｄｈａｍ　Ｃ　Ａ，ＭｃＣｌａｙ　Ｄ　Ｒ．Ｐ３８ＭＡＰＫ　ｉｓ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｆｏｒ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ
ａｘｉｓ　ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐａｔｔｅｒｎｉｎｇ　ｉｎ　ｓｅａ　ｕｒｃｈｉｎ　ｅｍｂｒｙｏｓ［Ｊ］．Ｄｅｖｅｌ－
ｏｐｍｅｎｔ，２００６，１３３（１）：２１～３２．
３　Ｇｏｎｇ　Ｘ　Ｆ，Ｗａｎｇ　Ｍ　Ｗ，Ｔａｓｈｉｒｏ　Ｓ　Ｉ，ｅｔ　ａｌ．ＰＡＢ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ
ｔｈｒｏｕｇｈ　Ｐ５３ａｎｄ　Ｂａｘ／Ｂｃｌ－２ｐａｔｈｗａｙｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｍｅｌａｎｏｍａ　Ａ３７５－
Ｓ２ｃｅｌ［Ｊ］．Ａｒｃｈ　Ｐｈａｍ　Ｒｅｓ，２００５，２８：６８～７２．
４　Ｈａｇｅｍａｎｎ　Ｃ，Ｂｌａｎｋ　Ｊ　Ｌ．Ｔｈｅ　ｕｐｓ　ａｎｄ　ｄｏｗｎｓ　ｏｆ　ＭＥＫ　ｋｉｎａｓｅ　ｉｎ－
ｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｃｅｌ　Ｓｉｇｎａｌ，２００１，１３（１２）：８６３～８７５．
５　Ｋｌｅｋｏｔｋａ　Ｐ　Ａ，Ｓａｎｔｏｒｏ　Ｓ　Ａ，Ｗａｎｇ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｒｅｓｉｄｕｅｓ
ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ａｌｐｈａ　２ｉｎｔｅｇｒｉｎ　ｓｕｂｕｎｉｔ　ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ　ｄｏｍａｉｎ　ｒｅｇｕｌａｔｅ
ｍｉ－ｇｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｅｌ　ｃｙｃｌｅ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｖｉａ　ｄｉｓｔｉｎｃｔ　ＭＡＰＫ　ｐａｔｈｗａｙｓ
［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，２００１，２７６（３４）：３２３５３～３２３６１．
６　Ｌｉ　Ｅ，Ｃｌａｒｋ　Ａ　Ｍ，Ｈｕｆｆｏｒｄ　Ｃ　Ｄ．Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｓｅｕｄ－
ｏｌａｒｉｃ　ａｃｉｄ　Ｂ，ａ　ｍａｊｏｒ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ　ｏｆ　ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｘ　ｋａｅｍｐｆｅｒｉ［Ｊ］．Ｊ
Ｎａｔ　Ｐｒｏｄ，１９９５，５８（１）：５７～６７．
７　Ｓｃｈａｅｆｆｅｒ　Ｈ　Ｊ，Ｗｅｂｅｒ　Ｍ　Ｊ．Ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅｓ：
Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｍｅｓｓａｇｅｓ　ｆｒｏｍ　ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ　ｍｅｓｓｅｎｇｅｒｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｃｅｌ　Ｂｉｏｌ，
１９９９，１９（４）：２４３５～２４４４．
８　Ｔａｎ　Ｗ　Ｆ，Ｚｈａｎｇ　Ｘ　Ｗ，Ｌｉ　Ｍ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｘ　ａｃｉｄ　Ｂ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ
ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｂｙ　ａｎｔａｇｏｎｉｚｉｎｇ　ｔｈｅ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃ－
ｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ　ａｎｔｉ－ａｐｏｐｔｏｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００４，４９９
（３）：２１９～２２８．
９　Ｔｏｎｇ　Ｙ　Ｇ，Ｚｈａｎｇ　Ｘ　Ｗ，Ｇｅｎｇ　Ｍ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｘ　ａｃｉｄ　Ｂ，ａ
ｎｅｗ　ｔｕｂｕｌｉｎ－ｂｉｎｄｉｎｇ　ａｇｅｎｔ，ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｂｙ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ
ｗｉｔｈ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｓｉｔｅ　ｏｎ　ｔｕｂｕｌｉｎ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００６，６９
（４）：１２２６～１２３３．
１０ Ｘｉａ　Ｚ　Ｇ，Ｄｉｋｅｎｓ　Ｍ，Ｒａｉｎｇｅｓｕｄ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｏｐｐｏｓｉｎｇ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＥＲＫ
ａｎｄ　ＪＮＫ－ｐ３８ＭＡＰ　ｋｉｎａｓｅｓ　ｏｎ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９５，２７０
（５２４０）：１３３６～１３４１．
·８４１· 生理生化 中国畜牧兽医 　２０１３年第４０卷第３期
α－半乳糖苷酶的研究进展
郝桂娟，张凯，王学智，张景艳，孟嘉仁，杨志强，李建喜
（中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，甘肃省中兽药工程技术研究中心，
甘肃省新兽药工程重点实验室，甘肃兰州　７３００５０）
摘要：α－半乳糖苷酶催化α－半乳糖苷键的水解，可将饲料及豆制食品中的抗营养因子α－半乳糖苷类转化分解，改善其营养
成分。α－半乳糖苷酶在底物浓度富集的情况下还具有转半乳糖基作用，这一特点可用于低聚糖的合成及环糊精的改造。此
外，该酶在制药、增稠剂处理和造纸工业也有一定应用。现作者对α－半乳糖苷酶的研究和应用现状，以及α－半乳糖苷酶的研
究方向和应用前景进行了总结和评价。
关键词：α－半乳糖苷酶；特点；应用；研究进展
中图分类号：Ｑ５５６＋．２　　　　　文献标识码：Ａ　　　　　文章编号：１６７１－７２３６（２０１３）０３－０１４９－０６
　　α－半乳糖苷酶（α－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ，α－ｇａｌ）是催化α－
半乳糖苷键水解的一种外切糖苷酶，因能分解蜜二
糖，又称蜜二糖酶，它能催化α－半乳糖苷键的水解。
这一特点使得它可用于改善和消除饲料及豆制食品
中的抗营养成分。此外，它在医学领域中能实现Ｂ
→Ｏ血型转变、制备通用型血，以及在法布里病的酶
收稿日期：２０１２－０９－１７
作者简介：郝桂娟（１９８８－），女，山东人，硕士生，研究方向：益生
菌发酵作用机理。
通信作者：李建喜（１９７１－），男，副研究员，硕士生导师。Ｔｅｌ：
０９３１－２１１５２５６；Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｚｊｉａｎｘｉｌ＠１６３．ｃｏｍ
基金项目：国家自然科学基金项目（３１０７２１６２）。
替代治疗中也发挥了重要作用。α－半乳糖苷酶还可
作用于含α－半乳糖苷键的复合多糖、糖蛋白和鞘糖
脂（Ｋａｔｒｏｌｉａ等，２０１２；Ｓｖａｓｔｉｔｓ－Ｄüｃｓ等，２００９）。某
些α－半乳糖苷酶在底物浓度高度富集的情况下还
具有转半乳糖基作用，利用这一特点可用于低聚糖
的合成及制备环糊精衍生物（Ｚｈａｏ等，２００８）。开发
嗜中性或具ｐＨ稳定性的α－半乳糖苷酶，寻找高产
酶量的微生物或植物，成为近几年的研究热点。许
多耐热α－半乳糖苷酶也因其特殊性逐渐引起了科
学家们的广泛兴趣，期望利用其热稳定性在工业方
面发挥更大的利用价值，以及在科技工艺和医药领
域显示出更广阔的应用前景
櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅
。
１１ Ｙｏｏｎ　Ｓ，Ｓｅｇｅｒ　Ｒ．Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　ｓｉｇｎａｌ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｋｉｎａｓｅ：Ｍｕｌ－
ｔｉｐｌｅ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ　ｒｅｇｕｌａｔｅ　ｄｉｖｅｒｓｅ　ｃｅｌｕｌａｒ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｇｒｏｗｔｈ
Ｆａｃｔｏｒｓ，２００６，２４（１）：２１～４４．
１２ Ｙｕ　Ｊ　Ｈ，Ｗａｎｇ　Ｈ　Ｊ，Ｌｉ　Ｘ　Ｒ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｔｙｒｏｓｉｎｅ　ｋｉｎａｓｅ，
ＪＮＫ，ａｎｄ　ＥＲＫ　ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ　ｉｎ　ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｃ　ａｃｉｄ　Ｂ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ａｐｏｐ－
ｔｏｓｉｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ＭＣＦ－７ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｐｈａｒｍａｃｏ－
ｌｏｇｉｃ　Ｓｉｎｉｃａ，２００８，２９（９）：１０６９～１０７６．
Ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　Ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｃ　Ａｃｉｄ　Ｂ　Ｉｎｄｕｃｅｄ　Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ＲＯＳ
Ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ＭＡＰＫ　ｉｎ　ＭＣＦ－７Ｃｅｌｓ
ＬＩＵ　Ｃｈｕｎ－ｙｕ１，ＺＨＥＮＧ　Ｇｕｉ－ｂｉｎ２，ＹＵ　Ｊｉｎｇ－ｈｕａ１
（１．Ａｃｕｐｕｎｔｕｒｅ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｔｈｅ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｔｏ　Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　１３００００，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｔｈｙｒｏｉｄ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　１３００００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ａｓｓａｙ　ｗａｓ　ａｉｍｅｄ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｏｆ　ＲＯＳ　ａｎｄ　ＭＡＰＫ　ｆａｍｉｌｙ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｃ　ａｃｉｄ　Ｂ（ＰＡＢ）－ｉｎ－
ｄｕｃｅｄ　ＭＣＦ－７ｃｅｌ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｃｏｎｔｒａｓｔ　ｐｈａｓｅ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｃｅｌｕｌａｒ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃ　ａｌｔｅｒｎａｔｉｏｎ；ＭＴＴ　ａｎａｌｙｓｉｓ
ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒａｔｉｏ；ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＤＣＦＨ－ＤＡ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ＲＯＳ，ａｎｄ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ
ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｗｅ　ｆｏｕｎｄ　ｔｈａｔ　ＰＡＢ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ＭＣＦ－７ｃｅｌ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ＲＯＳ　ａｎｄ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｔｈｅ
ｐｈｏｓｐｈｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＪＮＫ　ａｎｄ　ｄｅｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ｐｈｏｓｐｈｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＥＲＫ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｃ　ａｃｉｄ　Ｂ；ＲＯＳ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；ＭＡＰＫ；ＭＣＦ－７ｆａｍｉｌｙ　ｐｒｏｔｅｉｎ
·９４１·中国畜牧兽医 　２０１３年第４０卷第３期 生理生化