全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 11 期 2012 年 11 月

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基于谱效-构效关系筛选大黄中酪氨酸酶活性抑制成分的方法研究
刘艳杰 1，王 倩 2，姜 民 3*，李红艳 4，邹敏杰 4，白 钢 3
1. 天津中医药大学，天津 300193
2. 河南广播电视大学，河南 郑州 450008
3. 南开大学药学院，天津 300071
4. 天津嘉氏堂科技有限公司，天津 300457
摘 要：目的 建立一种基于谱效-构效结合的高效天然化合物活性筛选体系，并采用该体系筛选大黄中酪氨酸酶抑制剂。
方法 根据酪氨酸酶催化底物发生反应的原理，以大黄为例依次经过不同极性溶剂提取，分别检测各极性提取物对酪氨酸酶
活性的抑制作用；针对活性组分通过 UPLC-Q/TOF 鉴定活性成分，采用计算机辅助药物设计评价构效关系，进一步筛选抑
制剂分子，并结合酶学检测验证药效成分。结果 通过建立的谱效-构效结合筛选体系获得大黄中大黄素、藜芦酚-4′-O-β-D-
葡萄糖苷等 9 种具有间二羟基苯酚、邻三羟基苯酚结构的化合物可能具有酪氨酸酶活性抑制作用。结论 大黄中大黄素和藜
芦酚衍生物对酪氨酸酶活性具有明显的抑制作用；谱效-构效相结合的筛选模式为天然化合物活性筛选提供了便捷方法。
关键词：谱效关系；构效关系；UPLC-Q/TOF；大黄；酪氨酸酶抑制剂
中图分类号：R284.1；R285.51 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)11 - 2120 - 07
Screening of effective components for inhibition of tyrosinase activity in rhubarb
based on spectrum-efficiency-structure-activity relationship
LIU Yan-jie1, WANG Qian2, JIANG Min3, LI Hong-yan4, ZOU Min-jie4, BAI Gang3
1. Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China
2. Henan Radio & Television University, Zhengzhou 450008, China
3. College of Pharmacy, Nankai University, Tianjin 300071, China
4. Tianjin Jiashitang Technology Co., Ltd., Tianjin 300457, China
Abstract: Objective To establish a new efficient screening system based on spectrum-efficiency-structure-activity relationship of
natural compounds and to screen tyrosinase inhibitor from Rheum officinale (rhubarb). Methods Based on the catalyzing reaction of
tyrosinase to its substrate, Soxhlet extraction system was used and R. officinale was extracted by solvents of different polars. The
inhibitory activities on tyrosinase in different polar extract fractions were detected. UPLC-Q/TOF and computer-aided drug design
were used to analyze and identify their active ingredients. Enzymological method was used to validate the active constituents. Results
Through spectrum-efficiency-structure-activity relationship, nine kinds of compounds including emodin and veraphenol-4′-O-β-D-
glycoside were confirmed. The structures contained functional groups of both resorcin and adjacent trihydroxyphenol which might
have the inhibitory activity on tyrosinase. Conclusion The emodin and veraphenol derivatives extracted from rhubarb show the
obvious inhibitory activity against tyrosinase. The spectrum-efficiency-structure-activity relationship provides a new convenient
method for the researches on natural compounds.
Key words: spectrum-efficiency relationship; structure-activity relationship; UPLC-Q/TOF; Rheum officinale Baill.; tyrosinase inhibitor

在新药开发研究中，基于对中药活性成分的研
究一直是先导化合物的主要来源之一[1]，建立一种
高效快速的中药活性成分的筛选及鉴定体系是当前
亟待解决的关键问题。中药谱效关系研究是近年来
兴起的将中药指纹图谱与药效综合研究的一种研究
方法，常用于中药活性成分靶向性筛选[2-3]。生物色

收稿日期：2012-10-11
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81173638，81102835）
作者简介：刘艳杰（1985—），女，硕士，研究方向为中药现代化及相关研究。Tel: (022)23504933 E-mail: mynameisyanjie@163.com
*通讯作者 姜 民 Tel: (022)23506930 E-mail: minjiang@nankai.edu.cn
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谱技术是研究谱效关系的常用方法之一，但一般的
生物色谱法对于分离困难、量较少的化合物则难以
评价其活性；且多数生物色谱的固定相目前还未实
现商品化，需要自行制备，寿命通常也比较短，这
些因素严重限制了生物色谱技术的推广与应用[4-5]。
构效关系分析可以通过分析化合物结构预测其与特
定靶蛋白的作用能力[6-7]。建立一种结合谱效-构效
关系分析的筛选方法则有望解决上述问题。
酪氨酸酶是生物体内参与黑色素合成的关键
酶，是广泛存在于自然界中的含铜多亚基氧化还原
酶[8]，与黄褐斑、黑色素异常增多、白癜风等色素
沉着性疾病密切相关[9-11]。大黄是临床常用中药之
一，有研究报道大黄对人酪氨酸酶活性具有双向调
节作用[12]。本实验采用谱效-构效相结合的筛选模
式，根据酪氨酸酶催化底物发生反应的原理，以大
黄为研究对象，首先评价不同极性部位提取物的抑
制活性，进一步引入谱效关系分析手段采用 HPLC
分段评价抑制活性与 UPLC-Q/TOF 分子鉴定相结
合的分析方法鉴定其可能具有酪氨酸酶抑制活性的
组分，并结合计算机辅助药物评价分析其构效关系，
选择阳性成分进行验证，探寻谱效与构效关系相结
合的筛选分析方法。
1 仪器与材料
酶标仪（Bio-Rad，美国）；岛津 20A 高效液相
色谱仪（岛津，日本）；UPLC-Q/TOF 串联质谱仪、
Masslynx 工作站（Waters，美国）；JFSD100 粉碎机
（上海嘉定粮油仪器有限公司）；R201D II 旋转蒸发
仪（上海申顺生物科技有限公司）；Mettler Toled 十
万分之一电子分析天平（Mettler Toledo，瑞士）。
大黄（Rheum officinale Baill.，广州致信中药饮
片有限公司）经南开大学谢春峰老师鉴定为蓼科植
物大黄；L-多巴（上海斯高勒生物技术有限公司）；
酪氨酸酶（Sigma，美国）；曲酸（Sigma，美国）。
2 方法
2.1 试剂配制
2.1.1 磷酸盐缓冲溶液（PBS）的配制 将磷酸氢
二钠与磷酸二氢钠分别配成 0.1 mol/L 的溶液，取磷
酸氢二钠溶液 231.5 mL，加入磷酸二氢钠溶液 268.5
mL，用水稀释至 750 mL，摇匀，即得。
2.1.2 酪氨酸酶的配制 取活力单位为 1 881 U/
mg 的酪氨酸酶，用上述 PBS（pH 6.8）配成 0.8
mg/mL 的溶液，即得。
2.1.3 L-多巴溶液的配制 用上述 PBS（pH 6.8）
配制成 0.8 mg/mL 的溶液，待用。
2.2 供试品溶液的制备
大黄晒干后，粉碎，过 20 目筛。准确称取大黄
粗粉 50 g 置索氏提取器中，依次分别用 300 mL 石
油醚、三氯甲烷、醋酸乙酯、水饱和正丁醇和水 5
种溶剂 70 ℃回流提取 3 h，分别收集各层提取液，
浓缩后真空干燥，得石油醚部位 0.61 g、三氯甲烷
部位 0.86 g、醋酸乙酯部位 2.41 g、正丁醇部位 1.20
g 以及水提取部位 1.95 g。将各部位提取物分别溶解
于 5% DMSO 助溶的 PBS（pH 6.8）中，配制成 10
μg/mL 的样品溶液，于 4 ℃冰箱中保存，备用。
2.3 大黄提取物对酪氨酸酶抑制活性的测定
测定前，用微量移液器准确配制 C1测试样：100
μL PBS加入 50 μL酪氨酸酶溶液；C2测试样：150 μL
PBS；T1测试样：100 μL 样品溶液加入 50 μL 酪氨
酸酶溶液；T2测试样：50 μL PBS 加入 100 μL 样品
溶液，分别加入 96 孔板中，25 ℃水浴恒温反应 10
min 后，加入 50 μL L-多巴溶液，在 25 ℃水浴继续
恒温反应 1 h，反应结束后立即于 490 nm 处分别测
定 C1、C2、T1、T2的吸光度（AC1、AC2、AT1、AT2）
值，选用曲酸作为阳性对照检测对酪氨酸酶的抑制
作用。以酪氨酸酶的抑制率表示对酪氨酸酶的抑制
作用[13-14]。
抑制率＝1－(AT1－AT2) / (AC1－AC2)
2.4 大黄醋酸乙酯部位谱效关系分析
取大黄醋酸乙酯提取物溶于甲醇配制成 3
mg/mL 待测溶液，采用 HPLC 分离活性成分。HPLC
条件：Aglient Zorbax SB-C18色谱柱（250 mm×4.6
mm，5 μm）；流动相为水（A）-甲醇（B）；二元梯
度洗脱：0～10 min，40%～50% B；10～20 min，
50%～75% B；20～30 min，75%～100% B；30～35
min，100% B；35～36 min，100%～40% B；体积
流量为 1 mL/min，检测波长为 254 nm；柱温 35 ℃；
进样量为 100 μL。分别以每分钟为一个时间段按段
收集分离样品，减压真空干燥后，将样品溶解于 1
mL PBS 中，按照“2.3”项方法检测 HPLC 分离的
各时间段样品对酪氨酸酶的抑制活性。收集合并检
测结果中与空白实验组比较具有统计学差异的组分
进行 UPLC-Q/TOF 成分鉴定。UPLC 液相色谱条件：
Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱（100 mm×2.1
mm，1.7 μm）；流动相为乙腈（A）-0.2%乙酸水溶
液（B）；梯度洗脱程序：0～4 min，1.5%～20% A；
4～8 min，20%～75% A；8～10 min，75%～100% A；
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10～12 min 维持 100% A；12～14 min，100%～1.5%
A；14～15 min 维持 1.5% A；进样量 6 μL；体积流
量为 0.4 mL/min；柱温 35 ℃；DAD 扫描波长范围
190～400 nm；分析时间 15 min。质谱条件：ESI
源，负离子检测模式，扫描范围为 m/z 50～2 000，
毛细管电压为 3 kV（负模式），锥孔电压为 30 V，脱
溶剂气为氮气，350 ℃，600 L/h，源温 100 ℃；二级
质谱能量为 30 V。数据采集工作站为 MassLynx 4.0。
2.5 计算机辅助药物分子模拟筛选
采用分子对接软件 Autodock 4.2 对“2.4”项鉴
定的化合物分别与酪氨酸酶进行分子对接，以评估
其结合能力。分子对接所使用的蛋白晶体结构为双
孢菇酪氨酸酶 2y9x（Agaricus bisporus Mushroom
Tyrosinase 的晶体结构）[8]。格点计算参数如下：grid
center＝−9.96，−28.676，−43.432；grid spacing＝
0.375；npts＝50，50，50。对接参数如下：ga_run＝
200；qstep＝30；dstep＝30。
2.6 数据统计
采用 SPSS 13.0 软件进行数据统计，组间比较
采用单因素方差分析（One-way ANOVA）。
3 结果
3.1 大黄各提取部位对酪氨酸酶抑制作用
不同极性溶剂大黄提取物对酪氨酸酶抑制作用
的结果显示，大黄醋酸乙酯部位提取物对酪氨酸酶
具有显著抑制作用，其他各部位抑制作用不显著，
无统计学差异（图 1）。
3.2 具酪氨酸酶抑制活性大黄部位的谱效关系分析
取大黄醋酸乙酯部位提取物经 HPLC 分离后进
行谱效关系分析，结果见图 2。14～25 min 收集的样
品对酪氨酸酶活性具有显著的抑制作用（P＜0.01）。

与空白组比较：**P＜0.01
**P < 0.01 vs blank
图 1 大黄各提取部位对酪氨酸酶抑制率 ( 6=± n , sx )
Fig. 1 Inhibitory rates against tyrosinase in various
extracted fractions of rhubarb ( 6=± n , sx )
收集具有活性部分的样品进行 UPLC-Q/TOF 成分
鉴定，依据精确相对分子质量、离子碎片信息以及
文献报道[15]，共鉴定了 15 个主要成分，其分别属
于蒽醌、蒽酮、双苯吡酮、色烯、苯丙素以及茋等
类化合物，结果见图 3 和表 1。
3.3 酪氨酸酶抑制剂的分子对接与评价
采用计算机辅助药物分子评价，根据化合物与
酪氨酸酶的计算机分子模拟对接所得的结合能大小
将其分为 3 类，结果见表 1。分析结果可以看出，
其中褐色为 Cu2+离子，浅绿色的为 2 个疏水性残基
Phe264和Val283，大黄素 6位羟基与Cu2+反应中心
产生络合，8位羟基与Met280主链上的羰基形成氢
键。藜芦酚-4′-O-β-D-葡萄糖苷，同样含有间二羟基
结构，同样可以形成氢键和络合两种相互作用加之
与间二羟基相连的长链使得其的分子构象更易于进
入酶结合腔因此显示出具有更强的结合效果；2-O-
桂皮酰基-没食子酰葡萄糖具有邻三羟基结构，同时
可以形成氢键与络合的双重结合作用，但由于其间
位具有羟基结构，可能产生空间位阻，使得其进入
结合腔的几率相对变小，因而作用次之；1, 2, 6-三
羟基-5-甲氧基-7-(3-甲基丁-2-烯基) 呫吨酮的对接
显示，邻二羟基的结构结合能力不如间二羟基，无
法与 Met-280 形成氢键（氢键合理长度 2.8～3.3），
作用最弱；大黄素甲醚，相对大黄素虽羟基被甲氧
基取代，但可能使疏水性发生改变，影响进入结合
腔，仍有可能形成抑制作用；1, 4, 5, 6-四羟基-7, 8-
二 (3-甲基丁-2-烯基) 呫吨酮，具有对二羟基结构，
可能与间二羟基结构同样能形成络合与氢键的双重
作用而起到抑制作用；ω-羟基芦荟大黄素同样有间
二羟基结构，可具活性；1, 6-二没食子酰基-2-桂皮
酰基葡萄糖具有邻三羟基的结构，可具一定活性，
但其体积较大，因空间位阻带来不利影响；而芦荟
苷由于其糖取代基的位置，形成空间位阻，使得络
合相互作用无法形成，没有产生合理的对接构象，
无抑制作用；大黄酸和大黄酸-8-O-β-D-(6′-乙二酰
基) 吡喃葡萄糖苷，由于羧基的影响，不利于进入
结合腔内，因此活性较差；大黄酚-8-O-β-D-吡喃葡
萄糖苷、芦荟大黄素-ω-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和大黄
酚均无合理对接构象；7-羟基-2-(2-羟基) 丙基-5-甲
基-苯并吡喃-γ-酮只有 1 个羟基与 Cu2+形成络合作
用，活性较低。此处列出阳性药曲酸、以及具有代
表性的藜芦酚-4′-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素分子对接
图（图 4）。

空白 曲酸 石油醚 氯仿 醋酸乙酯 正丁醇 水
80
60
40
20
0
抑
制
率
/
%

**
**
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A-大黄醋酸乙酯部位液相展开图 B-酪氨酸酶活性抑制率结果 与空白组比较**P＜0.01 C-大黄具有酪氨酸酶抑制活性部位负离子模式离子流图
A-LC of ethyl acetate fraction of rhubarb B-inhibitory capability against tyrosinase activity **P < 0.01 vs blank group C-total negative ion current
of active parts with tyrosinase inhibitory activity
图 2 大黄醋酸乙酯部位谱效关系分析结果
Fig. 2 Spectrum-activity relationship in EtOAc fraction of rhubarb
O
OOH
HO
O
OH
1 1, 2, 6-三羟基-5-甲氧基-7-
(3-甲基丁-2-烯基)呫吨酮
OO
OH
OH
OH
HO
OH
OH
2 藜芦酚-4-O-β-D-葡萄糖苷
OOH
OH
O
4 7-羟基-2-(2-羟基)丙基-
5-甲基- 苯并吡喃-γ-酮
O
OO
O
OH
O
OH
OH
HO
HO
OH
5 2-O-桂皮酰基-没食子酰葡萄糖
OH O OH
OH
O
HO
6 ω-羟基芦荟大黄素
O
O
O
O O
O
OH
HO
HO OH
OHO
HO
HO
HO
7 1, 6-二没食子酰基-2-桂皮酰
基葡萄糖
OH O
O
OH
OH
12 大黄素
OH
O
O
O
OH
13 大黄素甲醚
O
O OH
OHOH
HO
15 1, 4, 5, 6-四羟基-7, 8-
二(3-甲基丁-2-烯基)
呫吨酮
图 3 具有抑制酪氨酸酶活性的大黄成分结构
Fig. 3 Structures of components in rhubarb with inhibitory activity on tyrosinase

0 5 10 15 20 25 30 35
t / min
**
0 5 10 15 20 25 30 35
t / min
0 4 8 12
t / min
1 2
34
5
6
7 8
9
10
1112
13
14
15
A
B
C
40
30
20
10
0
抑
制
率
/
%

曲酸 空白
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表 1 大黄醋酸乙酯部位中主要成分的 UPLC/MS/MS 数据分析及分子对接预测活性结果
Table 1 UPLC/MS/MS data of main constituents in EtOAc fraction of rhubarb and activity prediction
using molecular docking
峰 号 t / min λmax / nm 相对分子质量 质谱信息 化合物名称 活性预测
1 0.766 192 342.103 5 341 [M－H]−, 323 [M－H－H2O]−, 292
[M－H－H2O－OCH3]−
1, 2, 6-三羟基-5-甲氧基-7-
(3-甲基丁-2-烯基)呫吨酮
+
2 1.336 195 390.125 5 389 [M－H]−, 225 [M－H－Glu], 208
[M－H－Glu－OH]−
藜芦酚-4′-O-β-D-葡萄糖苷 ++
3 5.111 270 418.117 5 417 [M－H]−, 253 [M－H－Glu], 236
[M－H－Glu－OH]−
芦荟苷 −
4 5.301 250, 284 234.082 4 233 [M－H]−, 205 [M－H－CO]−, 188
[M－H－CO－OH]−
7-羟基-2-(2-羟基)丙基-5-
甲基-苯并吡喃-γ-酮
+
5 6.296 282 462.109 9 461 [M－H]−, 313 [M－H－C9H8O2]−,
161 [M－H－C9H8O2－C8H8O3]−
2-O-桂皮酰基-没食子酰葡
萄糖
++
6 6.977 260, 286 286.038 6 285 [M－H]−, 267 [M－H－H2O]−, 254
[M－H－CH2OH]−
ω-羟基芦荟大黄素 ++
7 7.217 278 614.120 9 613 [M－H]−, 461 [M－H－C8H8O3]−,
313 [M－H－C9H8O2]−
l, 6-二没食子酰基-2-桂皮
酰基葡萄糖
+
8 7.493 260 416.103 1 415 [M－H]−, 253 [M－H－Glu]−, 225
[M－H－Glu－CO]−
大黄酚-8-O-β-D-吡喃葡萄
糖苷
−
9 7.567 258 432.095 9 431 [M－H]−, 285 [M－H－C6H10O4]−,
270 [M－H－C6H10O4－CH3]−
芦荟大黄素-ω-O-β-D-吡喃
葡萄糖苷
−
10 7.784 260 254.048 9 253 [M－H]−, 225 [M－H－CO]−,
210 [M－H－CO－CH3]−
大黄酚 −
11 8.224 282 518.059 8 517 [M－H]−, 473[M－H－COOH]−,
283[M－H－Glu－CH2－2CO]−
大黄酸 -8-O-β-D-(6′- 乙二
酰基) 吡喃葡萄糖苷
−
12 9.249 279 270.043 9 269 [M－H]−, 241 [M－H－CO]−, 225
[M－H－CO2]−
大黄素 ++
13 9.805 279 284.061 8 283 [M－H]−, 269 [M－H－CH2]−, 257
[M－H－2CH2]−
大黄素甲醚 +
14 10.758 232, 258 284.024 7 283 [M－H]−, 239 [M－H－CO2]−, 211
[M－H－CO2－CO]−
大黄酸 −
15 12.604 254 396.147 8 395 [M－H]−, 377 [M－H－H2O]−, 341
[M－H－3H2O]−
1, 4, 5, 6-四羟基-7, 8-二(3-
甲基丁-2-烯基) 呫吨酮
+
++ <−10 kJ/moL; −10 kJ/moL < + < −5 kJ/moL; −5 kJ/moL < −

3.4 大黄中酪氨酸酶抑制剂的验证
根据计算机辅助评价结果，选取代表性的大黄
素、大黄酸、与藜芦酚-4′-O-β-D-葡萄糖苷母核一致
的白藜芦醇单体分子，以及阳性药物曲酸 4 种单体，
采用“2.3 项”方法分别检测其对酪氨酸酶的抑制作
用。结果显示白藜芦醇、大黄素对酪氨酸酶具有明
显的抑制效果，且白藜芦醇的抑制效果强于阳性药
曲酸，大黄酸无抑制作用。曲酸、白藜芦醇、大黄
素的 IC50分别为 106、38、300 μg/mL。图 5 所示酪
氨酸酶抑制活性的分析结果与药物分子对接预测结
果一致，提示该方法有较好的可信性。
4 讨论
以往研究结果表明苯环上有单羟基取代的化合
物对蘑菇酪氨酸酶均表现为竞争性抑制类型，且对
位取代的化合物抑制强度明显高于邻位或间位的取
代化合物[16-17]，而茋类结构中的间苯二酚发挥着重
要作用[18-20]。同时构效分析显示酪氨酸酶结合腔的
His244 是潜在的氢键结合位点，因此推测若在大黄
素的 4 位引入羟基可以使该分子与酪氨酸酶的结合
更加牢固，可能会进一步提高对酪氨酸酶活性的抑
制活性。
本实验建立了谱效-构效结合的酪氨酸酶活性
抑制剂的筛选模式可以较好地解决以往中药活性成
分筛选中需要药材量大、操作繁琐的问题。对于难
以分离和量较少的化合物实现高效筛选和鉴定。通
过构效关系还可以更有目的性地筛选中药有效成
分，节省时间与人力，为新型酪氨酸酶活性抑制剂
的研发提供理论依据。同时在本研究中开发的基于
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A-曲酸 B-藜芦酚-4′-O-β-D-葡萄糖苷 C-大黄素 D-预测潜在
结合位点示意图
A-kojic acid B-veraphenol-4′-O-β-D-glycoside C-emodin
D-predicting underlying binding sites
图 4 大黄成分与酪氨酸酶结合模拟图
Fig. 4 Mimic diagram of combination of rhubarb
components and tyrosinase

图 5 大黄成分的酪氨酸酶抑制率
Fig. 5 Inhibitory rates of rhubarb components
aginst tyrosinase
谱效-构效结合的酪氨酸酶活性抑制剂的筛选模式，
也可推广应用到其他中药有效成分的筛选中，通过
对化合物谱效-构效关系结合的分析手段，可以迅速
确定活性目标天然产物，从而更有效地进行先导化
合物的筛选。
参考文献
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1 000 100 10 1
曲酸
白藜芦醇
大黄素
大黄酸
100
50
0
抑
制
率
/
%

ρ / (μg·mL−1)
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中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 11 期 2012 年 11 月

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《中草药》杂志最新佳绩
《中草药》杂志 2011 年荣获第二届中国出版政府奖，中国出版政府奖是国家新闻出版行业的最高奖，
第二届中国出版政府奖首次设立期刊奖，《中草药》等 10 种科技期刊获此殊荣。2011 年 3 月 18 日于北京
举行了盛大的颁奖典礼。
《中国科技期刊引证报告》2011 年 12 月 2 日发布：《中草药》杂志 2010 年总被引频次 6 178，名列我
国科技期刊第 14 名，中医学与中药类期刊第 1 名；影响因子 0.904，基金论文比 0.680，权威因子 2 269.200；
综合评价总分 76.6，位列中医学与中药学类期刊第 1 名。连续 7 年（2005—2011 年）荣获“百种中国杰出
学术期刊”，再次荣获“中国精品科技期刊”（2008 年首次设立，每 3 年一届），荣获天津市第十届优秀
期刊评选特别奖。
中国知网（CNKI）《中国学术期刊影响因子年报》2011 年 12 月 22 日发布：《中草药》杂志总被引
频次 16 359，影响因子 1.453，位列中医学与中药学期刊第 1 名，基金论文比 0.74，WEB 下载量 39.1 万次。
注册商标“中草药”2011 年被评为天津市著名商标。