全 文 :2016
y
4
z ³
41
ų
7
}
Vol41,No.7 April,2016
[
)(
] 20160113
[
R
]
ì(81503238);2015
Ï!#$(åhlj
(2015070022,2015070023)
[
x?
]
Sí
,
,Email:cli@icmmaccn;
Uîï
,
,Email:zhmw123@263net
[
?¢£
]
-ä
,
ö
,Tel:13691537484,Email:yangmin7836@163com
fHghµÞ1i4j«¬
-ä
1,2,
8É
1,
å¯æ
1,3,
çè<
1,
Séé
1,3,
8uê
1,3,
Oëì
2,
Sí
1,3,
Uîï
1,3
(1.
!!#h%q !$
,
}~
100700;2.´
Â#h%
,´
 )Ê
030001;
3.
!$¯*+lì[yz{
,
}~
100700)
[
]
@¸¤fHg$ìíÄì
HepG2
Za±Zah0
,
¬@¸~cd-()ìZahÖn
,
4ÚfH
gchµ±Þ1i
。
Í
MTT
áfHg$ìí
、
VìíÊvÄ
11
U°ì
HepG2
Za±hµ
。
¶Bú
îZah±Ñ
Rd-¦4½
6h
YË)F%o
,
@¸
BCA
áâ%o¤$|}ëß
,
Á,×ááâ¬x-|
1μg|}$¡¼¡1oyq(ALT)、Ë7©¡¼¡1oyq(AST)、γý¡ ¡1oYq(GGT)¬¼üýq(LDH)±îd
,
a¦¤ìF±hµ0
。
Zaæhi
,
B
À¼
、
ÀÛ
、
ÀÛC
8OβD·¸£ê¬
ÀÛ
C
8O(6′O
m 1
)βD·¸£êhi[â±Zah0,ÓIC50`7107,12562,24227,40232μmol·L
-1,
§Óâ
7
_V±hµ:
。
d-æhi
,
À¼
400μmol·L-1{Íád-ALT,AST,LDHîd±h·ÜÝ(P<
001),100μmol·L-1{Íád- LDHîd±h·ÜÝ(P<005);Ð,žø
,d-$|}ëßh·@ä(P<
005),
hiB[â±ßhÅ
。
ÀÛ
400μmol·L-1MÍád-ALT,GGT,LDHîd±h·ÜÝ(P<001)。
ÀÛ
C
8OβD·¸£ê800μmol·L-1{Íád-ALT,AST,LDHîd±h·ÜÝ(P<001pP<005),200μmol·
L-1
{Íád-
LDH
îd±h·ÜÝ
(P<005);
åÐ,ž±ø
d-$
ALT,AST,LDH
îdÛÜÝÞß
,
|}
ëßÛ@äÞß
。
ïð
,
ž
800μmol·L-1±
ÀÛC8OβD·¸£êÁMId- MTTÁr{ñh·@ä(P<
001)。
æ#i
,
À¼
、
ÀÛÊ
ÀÛC
8OβD·¸£êB¿Ýž(≥400μmol·L-1)OzM{ìFãÂ[
â±È0
。
}É
,
>^kÚ
3
±°8qr¢%t
,
/sähµÅ¾
(400μmol·L-1p800μmol·L-1)±q
r¢%
,
o_»*$ê`:/Uºá
4898,339,5581g
±fHg,
,
ÑfHg±
IÃß
(
ÂHg
3~6g,
ËHg
6~12g)
Ô£
,
àï
,“
ìíÄÉfHghµ
”
[éÉé&·>±
。
[
]
fHg
;
ìíÄ
;
Zahµ
;
~cd-()
;
hµÞ1i
Explorationresearchonhepatotoxicconstituentsfrom
Polygonummultiflorumroot
YANGMin1,2,LIUTing1,FENGWeihong1,3,HUILianqiang1,LIRaorao1,3,LIUXiaoqian1,3,
CHENAnjia2,LIChun1,3,WANGZhimin1,3
(1.InstituteofChineseMateriaMedica,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China;
2.ShanxiMedicalUniversity,Taiyuan030001,China;
3.NationalEngineeringLaboratoryforQualityControlTechnologyofChineseHerbalMedicines,Beijing100700,China)
[Abstract] ByobservingthecytotoxicefectsofanthraquinonesonHepG2celandusingtheprecisioncutliverslicestechniqueto
authenticatethecytotoxicconstituents,thepaperaimstoexplorethematerialbasisofPolygonummultiflorumroottocauselivertoxici
tyFirstly,MTTmethodwasusedtodetecttheefectof11anthraquinonederivativesonHepG2celThen,theclearcytotoxicingredi
·9821·
2016
y
4
z ³
41
ų
7
}
Vol41,No.7 April,2016
entswerecoculturedwithratliverslicesfor6hrespectively,andthelivertissuehomogenatewaspreparedBCAmethodwasusedto
determinethecontentofproteininthehomogenateandcontinuousmonitoringmethodwasusedtomonitortheleakageofalanineamin
otransferase(ALT),aspartateaminotransferase(AST),gammaglutamineaminotranspeptidase(GGT)andlactatedehydrogenase
(LDH)ThetoxicefectoftheseingredientsonlivertissuewastestedbycalculatingtheleakagerateofthemonitoredenzymesAsa
result,rhein,emodin,physcion8OβDglucopyranosideandphyscion8O(6′Oacetyl)βDglucopyranosideshowedcytotoxic
efectsonHepG2celandtheirIC50valueswere7107,12562,24227,40232μmol·L
-1respectively,buttheother7compounds
arelesstoxicandtheirIC50valuescannotbecalculatedTheprecisioncutliverslicestestsshowedthatrheingroupof400μmol·L
-1
concentrationsignificantlyincreasedtheleakagerateofALT,ASTandLDH(P<001),andtherheingroupof100μmol·L-1con
centrationonlyincreasedtheleakagerateofLDH(P<005)Withtheincreaseofrheinconcentration,theproteincontentinliver
slicesdecreasedsignificantly(P<005)withacertainrangeofdoesEmodingroupof400μmol·L-1concentrationsignificantlyin
creasedtheleakagerateofALT,GGTandLDH(P<001)Physcion8OβDglucopyranosidegroupof800μmol·L-1concentra
tionalsosignificantlyincreasedtheleakagerateofALT,ASTandLDH(P<001orP<005),butthegroupof200μmol·L-1con
centrationonlysignificantlyincreasedtheLDHleakage(P<005)Alongwiththeincreaseoftheconcentrationofphyscion8OβD
glucopyranoside,theleakagerateofALT,ASTandLDHshowedatrendofincrease,buttheproteincontentinliversliceswasinde
clineFurthermore,MTTreductionabilityofliverslicessignificantlydecreased(P<001)inthephyscion8OβDglucopyranoside
groupof800μmol·L-1concentrationTheresultssuggestedthatrhein,emodinandphyscion8OβDglucopyranosideathighcon
centrations(≥400μmol·L-1)canproducesomedamagetothelivertissueHowever,theexposurelevelsoftheseconstituentsare
verylow,sotoreachthetoxicconcentration(400μmol·L-1or800μmol·L-1)anadultof65kgbodyweightwilneedatleasta
singleoral4898g,339gand5581gofPmultiflorumrootrespectively,whichisfarfromthestatutorydoseofcrudePmultiflorum
root(36g)oritsprocessedproduct(612g)Therefore,theconclusionthatanthraquinonesaretheprimeconstituentsofthehepato
toxicityofPmultiflorumrootarestilnotbeproved
[Keywords] Polygonummultiflorumroot;anthraquinones;hepatoxicity;precisioncutliverslicestechnique;hepatoxicconstituents
doi:10.4268/cjcmm20160721
fHgì|î~¬ýy
(
D~
813
y
)
Dï
《
fHgp
》[1],
ð&fHg
Polygonummulti
florumThunb
±j©
Ø
,
-B7h
、
6ñ
、
/ò
、
g²@&
、
°`
、
±~¢
、
g2m
、
eó×
、
_8ä
%è¥É
[2],
¿A
、
d»ÊêÓÓ
Ô
。
ÎyÏfHgÊËÃÍáhµ±kÚ{
±ø
[37],
Ó8wµÍáDÓÔ±å
。
fH
g]chµ±ràä¿Éð>µàÛÁÉ8>µ
àÛ
,
ôò3r($vá±s
。
¦8>µàÛ½
,
LGëôÉÓ$±_pÓPì
ZaM{B[âhµ
。
^kÚhi
,
fHg¨
#¬¢#uMì
[810],
å¨#±h
捕
[1113]。
fHg$L/ëBmBê
Ä
、
ìíÄÊ5%Äè_
[14]。
Ñ¢#
ñ
,¨
#$±ìíÄò
[1516];
ݧ±§¨
ô
“
ìích
”[1719],
Ö§Kõìí÷
,
ÀÛ
、
À¼0L/Õü
[18];
LCMS
«
¬¾
L02
Zaì
ÀÛ±öÖ¬62Om±
,
ÀÛMÖOZaÞ
,
¬¿Za$62ýYãÂhµ
0
[19];
@¸Zaë/m±
,
ËHgÊ
À¢
Zaë/=Ñ}ìHñòBúhøÅ
,
¦§
[20]。
Ñ÷gs÷ø±É
,
ß=>hi
“
ÂH
ghµ
ËHg
”[2123],
§ËHg$±ì
íëßZ££ÝÂHg
,
ìíêø££tÂ
Hg
[24];
P
“
ìích
”
±V
,
ù0÷ËHg
±hµ
ÂHg
,
Ñ(ç¥ù
;
Wü
,
À
±ìíëߣÝfHg
,
fÓhµòt
,
ç
¦éú
“
ìích
”
[é±·>¥Ð
。
ï
ð
,
àBú^kÚfHg$Vìí
(
ÀÛ
8
OβD·¸£ê[25])ìZa±0,}òb
]hµkÚ
,
àï
“
ìíêÄch
”
[éç¿
ò
Ó
。
ï
,
0üìfHgL/ìíÄÖnZa
hµ:;
,
@¸¤ìíÊÓêì
HepG2
Za
0Ï:;BZah0±
,
¬¦÷
hÅ
ּd
;
W@¸~cd-()ìBîdZa
h±Ön
,
aîô
“
ìích
”
±Xçµ
,
fHg
8w,#G·>
。
·0921·
P
*è
:
fHghµÞ1i4j«¬
1
Ì
À¢
,
À¼
,
ñû
ÀÛ
(
$%ò¤,¤â
«¬>
,
Þ<`
110796201017,110757200206,
110795201007);
À¢
8OβD·¸£ê,
ÀÛ
1OβD·¸£ê,8úÈ8OβD·¸£ê(
µüÂ&(BCDE
,
Þ<`
150114,
141211,150302);
ÀÛC
(
xÊÂ&(
BCDE
,
Þ<
D00414072);
ÀÛ
,
ÀÛ
8Oβ
D
·¸£ê
,
ÀÛC
8OβD·¸£ê,
ÀÛ
C
8O(6′O
m 1
)βD·¸£êÊ9ç
Ë;<
,
@¸
NMR
¬
MS
<âÓ÷
,HPLC
á
Ó¾u
98%。
_÷]q
1。
R1 R2 R3 R4
ÀÛ
OH CH3 OH OH
ñû
ÀÛ
OH CH2OHH OH
À¢
OH CH3 H OH
À¼
OH COOH H OH
ÀÛC
OH CH3 OCH3 OH
ÀÛ
8OβD·¸£ê OH CH3 OH Oglc
ÀÛC
8OβD·¸£ê OH CH3 OCH3 Oglc
ÀÛC
8O(6′O
m
1
)βD·¸£ê
OH CH3 OCH3 Oglc6′OAc
À¢
8OβD·¸£ê OH CH3 H Oglc
ÀÛ
1OβD·¸£ê Oglc CH3 OH OH
q
1 11
U°±_÷
Fig1 Thechemicalstructureoftheelevencompounds
MEM
4 ½ ¤
(
%
Gibco
D E
,LotNo
1707776);
í¢ª
(FBS)(
%
Gibco
DE
,Lot
No1414426);DMEM
4½¤
(
%
Gibco
DE
,
LotNo8115143);025% TrypsinEDTA(
%
Gib
co
DE
,LotNo1638591);PBS(Solarbio
DE
,
LotNo20150408);
1ð
(DMSO)
¬
MTT
Solarbio
DEã¤
。
Ë7©¡¼¡1oyqé
、
¡¼¡1oyqé
、
¼üýqé
、γý
¡ ¡1oYqé
(
23Ô{\
()B
CDE
,
Þ<`
GG5101A,GG5104A,XJ5105B,
GG5103A);
u%£
(
%
OXOIDlimited
DE
,
Þ<
84867402);BCA
Óß|}á©
(
93Â
g¹«¬b
,
Þ<
20151204)。
ThermoVarioskanFlash
¥{qÂ
,HERA
CelCO24½Z (\%),Õ°g0Ã (23^6°
_»)BCX
DE
);BCD286
Õt¶,Z
(
}K
ÆUwBCDE
);StartoriousBT125D
Uï
àË%
(
n&w
);
U«+Çj©Z
(
÷
H[&wBCDE
);
¢
(
%
Milipore
DE
);DSZ5000x
LÂhÓ¯
(
23$h)
w*BCDE
);
töSf
(
÷H )w
j
);1000PlusVibracome
ôd-f
(
%
),Ther
moVarioskanFlash
¥{qÂ
(
%
),
5ý
TBA40FR
w¶Â_à
。
HepG2
Za
(
$Za
)
ß$%A&
>1iA«¬bZa$S
。
SD
R
,
²µ
,
°.
180~200g,
ß23i@
nÆç¶()BCDE
,
íM<
SCXK(
3
)
20120001。
2
21
Zahµ
211
,¤ÙË
`~c¼Ö
ÀÛ
27mg,
ñ
û
ÀÛ
27mg,
À¢
25mg,
ÀÛC
28
mg,
ÀÛC
8OβD·¸£ê45mg,
ÀÛ
C
8O(6′O
m 1
)βD·¸£ê 49mg,
À
Û
1OβD·¸£ê43mg,
À¼28mg,
ÀÛ
8OβD·¸£ê43mg,
À¢8OβD·¸£ê
42mg,
8úÈ
8OβD·¸£ê41mg,xÅO
1ð
(DMSO)100μL7,)。¿rþ、3
ÒJ@¶Ù÷±»¤ë
10% FBS
±
MEM
4½¤
ÇÏb:ž
,
`½OXþY±
EP
3$
,¯
%
。
Ó$
,
ÀÛ
、
ñû
ÀÛ
、
À¢
、
ÀÛC
、
À
ÛC
8OβD·¸£ê、
ÀÛC8O(6′Om
1
)βD·¸£ê、
ÀÛ1OβD·¸£ê7
±»¤ºñÇÏY`ÙËž
400,
100,25,625μmol·L-1±#¤¤Önáâ。
À
¼
、
ÀÛ
8OβD·¸£ê、
À¢8OβD·¸
£ê¬8úÈ
8OβD·¸£ê4±»¤
ºñÇÏY`ÙËž
400,100,25,625,
156,039μmol·L-1±#¤¤Önáâ。a÷#
¤¤$
DMSO
±¸Å¾u
04%。
212
Za4½
HepG2
Zaë
10% FBS
±
MEM
4½¤L
37℃,5% CO2±4½Z$4½,
LhÓ¯@¤ZaÂËÎjV²ßOp6
·1921·
2016
y
4
z ³
41
ų
7
}
Vol41,No.7 April,2016
_WP
。
WPO
,
bþ±4½1
,
W
MEM
1~2
º
,
ÅO
025% TrypsinEDTA1mL,
6_
È
3min,
LhÓ¯@¤
,
6Zaß
,
aÞ
b
,
a° ¾Y
,
¹Å뢪4½1
2~3mL¸
0
6_
,
ÿ)©3©1ítt3ÐIZaØwü
Áº
,
QY¶©3:1LÁ¿[¾÷@3Ð=º
,
_Za4¤
。
W¶Za4¤oyäS3
,500r
·min-1
S
5min,
SØð
,
t÷ª¤
,
WÅOØ
w4½13%
,
¶Za4¤½
2~3
¥4½
Á$
,
L4½Z8.,4½
。
213 MTT
á,ìZa±hµ0
«q
6_ì=}±
HepG2
Za
,¸
06_YS
,
ªÈZa¶ÓË4¤
,
Zax=¯Óž
2×105
/mL,
z
96
&T$
,
|&ÅO
200μL
Za¯4¤
,
L
37℃,5% CO2±4½Z$4½Z
aUû!Ï&¿
。
ÌY¶
96
&T$±4½¤©ô
,
ÅO¥¦Å¾±,
(
|[ž»
4
æ&
,
|&
ÅO,¤
150μL),¦O»L}(Åë 10%
FBS
±
MEM
4½¤
)
ÊìH
(
Åë
04% DMSO
±
10% FBS
±
MEM
4½1
)。
L
37℃,5% CO2±
4½Z$4½
48h
YÖd
96
&T
,
©tá4½
¤
,
|&ÅO
50μLMTT¤,.,4½4hY¶÷
ª¤%b
,
|&ÅO
200μLDMSO,töô10min,
qÂ
570nm
VË@ᩪ¾
(A),
x-ZaÂË
9Ë
。
9Ë
=(A
ìH
-A
ç
)/A
ìH
×100%。
22
p
R~cd-¦¤
3
±°ð
hµ
¶
SD
R).
,
¿rþÒJ@Öd¾
,
©^Ë)d-
[26],
d-¾
200μm。¶
ë
À¼
25,100,400μmol·L-1,
ÀÛ25,100,
400μmol·L-1Ê
ÀÛC8OβD·¸£ê
50,200,800μmol·L-1± DMEM4½¤`Ñ
d-¦4½
24
&T$
,
d-
1
-
/
&
,
¿
37
℃,5% CO24½Z$`4½6h。
221 MTT
Ár{ñ
4½
6h
YÖd4½T
,
t
%÷ª¤
,
|&Å
1g·L-1MTT1mL,37℃
ô·
Ó
1h,
tֻ
,
|-d-WÅ
1mLDMSO,37℃
ô7
1h,
ֻ
570nm
á
A,
d-¼.
,
x
-
A
ad-Þß
(g)。
222
Â_Â
d-ÂS»¢Ë
10%
±
F%o¤
,
ÝHééúr
BCA
áâ|}
ëß
,
w¶Â_àÁ,×ááâ÷ª¤Ê
d-%o¤$
ALT,AST,GGT,LDH
ðµ
,BCA
|
}àáâ÷g%o¤$±|}ëß
,
©^
[26]
x-|
1μg|}$ ALT,AST,GGT,LDH
±îd
。
23
ÆxS
bBç=> 珋x±s*i,p SPSS180[
Jö
t
,IC50pProbitaV。P<005
Bh·µÔÕ
,P<001
Bh·µÔÕ
。
3
æ
31
Zahµ
fHg$
11
U°ì
HepG2
Za±Za
hçæ]*
1,2。
æhi
,
B
À¼
、
À
Û
、
ÀÛC
8OβD·¸£ê、
ÀÛC8
O(6′O
m 1
)βD·¸£êìHepG2Za-B
[â±Zah0
,
§Óâ_V±Zah0{
:
,
rx-d
IC50;§åB±_V
ÀÛ1
OβD·¸£ê{ì HepG2Za±øáÖ0
;
ïð
,
À¼
、
ÀÛ
、
À¢
、
ñû
ÀÛ
、
À
Û
8OβD·¸£ê¬
À¢8OβD·¸£ê
ÝžOì
HepG2
Za*±9Ë0
,
§tž
O{ìZaÂËBÖ0
,
[ëÑ^kÚ
æV
[1718,27]。
32
~cd-
À¼
25,100,400μmol·L-1Ñd-4½
6h
Y
,400μmol·L-1{Íád- ALT,AST,
LDH
îd±h·ÜÝ
(P<001),100μmol·L-1
{Íád-
LDH
îd±h·ÜÝ
(P<005);
Ð,žø
,
|}ëßh·@ä
(P<005),
å
hi[â±ßhÅ
。
ÀÛ
25,100,400μmol·
L-1
Ñd-4½
6h
Y
,400μmol·L-1MÍ
ád-
ALT,GGT,LDH
îd±h·ÜÝ
(P<
001)。
À¼¬
ÀÛìd-
MTT
Ár{ñu
rúhòó
。
ÀÛC
8OβD·¸£ê 50,
200,800μmol·L-1Ñd-4½ 6hY,800
μmol·L-1{Íád- ALT,AST,LDHîd±
h·ÜÝ
(P<001
p
P<005);200μmol·L-1{
Íád-
LDH
îd±h·ÜÝ
(P<005),
å
Ð,ž±ø
d-
ALT,AST,LDH
îdÛ
ÜÝÞß
,
|}ëßÛ@äÞß
。
ž
800
μmol·L-1±
ÀÛC8OβD·¸£êÑd
- 4 ½
6h
Y
MTT
Á r { ñ h · @ ä
(P<001),
]*
3。
·2921·
P
*è
:
fHghµÞ1i4j«¬
*
1
¥¦~,fHg$
11
U°ì
HepG2
Za±0
Table1 Thecytotoxicefectof11compoundsonHepG2cel
`
Ãß
/μmol·L-1
ÀÛ
ÀÛC
8
OβD·¸£ê
ÀÛC
8O(6′O
m 1
)βD·¸£ê
ÀÛC
À¢ ñû
ÀÛ
A
9Ë
/%
A
9Ë
/%
A
9Ë
/%
A
9Ë
/%
A
9Ë
/%
A
9Ë
/%
}
- 106±005 0 087±005 0 087±005 0 092±004 0 117±005 0 093±005 0
ìH
- 104±005 0 088±003 0 088±003 0 090±003 0 117±005 0 092±005 0
~,
400 021±0032) 8037 038±0052) 5635 043±0032) 5077 051±0052) 4384 066±0042) 4365 073±0052) 2019
100 060±0032) 4215 054±0032) 391 062±0042) 2996 066±0022) 2646 084±0052) 282 078±005 1485
25 091±0052) 1285 070±0042) 1991 072±0042) 1825 076±0042) 1534 092±0052) 2113 095±003 -391
625 136±0042)-3041 080±0032) 931 081±0041) 767 084±0031) 686 117±004 -024 101±0032)-1046
156
039
`
Ãß
/μmol·L-1
À¼
ÀÛ
8OβD·¸£ê
À¢8OβD·¸£ê 8úÈ8OβD·¸£ê
ÀÛ1OβD·¸£ê
A
9Ë
/% A
9Ë
/% A
9Ë
/% A
9Ë
/% A
9Ë
/%
}
- 109±004 0 097±004 0 092±003 0 093±005 0 089±005 0
ìH
- 105±005 0 096±004 0 092±003 0 092±005 0 088±004 0
~,
400 007±0042) 9345 065±0032) 3195 073±0032) 2101 086±005 63 105±0052) -1857
100 042±0042) 6007 072±0042) 2489 080±0032) 1359 086±005 631 107±0012) -2139
25 085±0042) 1933 080±0012) 1647 080±0032) 1284 078±0022) 1492 110±0032) -2512
625 131±0022) -2436 082±0032) 1441 085±0042) 788 073±0042) 2002 115±0052) -2999
156 138±0032) -3066 091±005 5 091±002 148 076±0022) 1715
039 154±0032) -4651 118±0032) -2313 106±0042) -1542 092±005 013
å
:
ÑìHñò
1)P<005,2)P<001(
*
3
¦
)。
*
2
fHg$ìíÄì
HepG2
Za±
IC50
Table2 TheIC50valuesof11compoundsonHepG2cel
μmol·L-1
_V
IC50
À¼
7107
ÀÛ
12562
ÀÛC
8OβD·¸£ê 24227
ÀÛC
8O(6′O
m 1
)βD·¸£ê 40232
ÀÛC
-
À¢
-
ÀÛ
8OβD·¸£ê -
À¢
8OβD·¸£ê -
ñû
ÀÛ
-
8úÈ
8OβD·¸£ê -
ÀÛ
1OβD·¸£ê -
å
:-
x-¥d
IC50。
4
Ús
ÎyÏ
,
fHg±hµîÍáDx
%ÓÔ±å
,
§4¬ÓhµÞ1iD)
å±õë
。
9«¬Ã[õëÖnD4Ú
。
fHg$L/ëBmBêĬìí`Â
Ä
。
9çb«¬±
11
_VB¦f
Hg$<ä±^kÚ
[14],
¬åÓ$±
10
ì
íU°GôÉfHg$±L/ìíÄ
[28]。
HepG2
ZaÏ>$¢Za/
,
Óbë±Â
o_PqÑ$?wçÞZa-B¦>µ
,
Ó
_¹¾òÝ
,
¬ådÒDòدåðµKâ±Â
o_Pq
,
É«¬,hµw±ZaPQ
ý[
[2930]。
ÑìíÄ_Vñò
,
8úÈ
8OβD
·¸£êì
HepG2
Za19rh
,
>ï[á-Bì
íÄ»±_VtãÂZahµ
。
ìíêYZah0ä¿Éø
ÁÉ
&ê¥{[¯§s
,
Á:/-°_V-°à
。
Ñ
ÀÛñ
,
ÀÛ
8OβD·¸£ê¬
ÀÛ
1OβD·¸£ê±Zahµúhät,§å
êíL¥¦
,
ÓìZa±òó祦
:
ÀÛ
R4í
OH
êY
,
ZahµBbät
;
}
R1íê
O
,
Óì
HepG2
Za¥OB9Ë0
,
Ö§Ma
ÖZa±ø
。
Ñ
À¢ñ
,
¦èž@
À
¢
8OβD·¸£ê±ZahµçBbät。}
É
,
Ñ
ÀÛCñ
,
ÀÛC
8OβD·¸£
ê¬
ÀÛC
8O(6′O
m 1
)βD·¸£ê
ì
HepG2
Za±hµ{uBbøÅ
。
·3921·
2016
y
4
z ³
41
ų
7
}
Vol41,No.7 April,2016
*
3
À¼
、
ÀÛ
、
ÀÛC
8OβD·¸£êì
R~cd-ALT,AST,GGT,LDHîd、|}ëßÊ MTTÁr
{ñ±òó
(珋x±s,n=3)
Table3 Theinfluenceofrhein,emodinandphyscion8OβDglucopyranosideonALT,AST,GGTandLDHleakagerate,protein
content,MTTreductionabilityofratliverslices(珋x±s,n=3)
`
Ãß
/μmol·L-1
ALT AST GGT LDH
|}
/mg·L-1
MTTA/g
d-Þß
ìH
- 145±039 008±003 181±027 415±055 206163±48004 8186±245
ÀÛ
25 161±045 008±003 219±034 415±035 213848±22407 7884±788
100 166±026 007±003 186±011 391±029 245744±18203 8627±457
400 234±0102) 011±002 255±0242) 561±0712) 166717±22637 8009±649
ÀÛC
8OβD·¸£ê 50 130±042 009±003 154±035 389±062 228618±45628 8581±373
200 184±026 011±004 205±063 501±0341) 186451±21438 7632±559
800 226±0022) 012±0021) 168±033 604±0802) 141866±27940 5830±7772)
å
:ALT,AST,GGT,LDH
îd|
1μg|}$±îd。
11
_V$
,
À¼±hµìQe
,
§
11
_V$B
À¼
R2í÷B#1,àï[á
#1±¿M
øeìí»±Zahµ
。
ÀÛ
、
ÀÛC¬
À¢Lü±÷B
R3ÖP1BÔ`,§ì HepG2Za±hµ
ÀÛ
>
ÀÛC≈
À¢,ÊïéúÃìZa
hµ§ê
,
ÖP1ììíÄ_V±ZahµÕ
Ê
ä:·º
OH>H≈OCH3。ïð,
À¼、
ˢ斞
ÀÛ÷÷B
R2ÖP1¥¦,Ó
ì
HepG2
Za±hµÊ
ä:·º
À¼
>
À¢
>
ñû
ÀÛ
,
Êï[áìí_V$ÖP1
ì
HepG2
Za±Zah0òóÊ
ä:
COOH>CH3>CH2OH。^@¸ñò
À¼¬ñ
û
ÀÛ±ðµ
,
e
,
ì$Za9Ë0âe±s
[31]。
9ç
æ*ú©Uïx{ÇììíÄ_V±hµB
[âòó
,
}¬¥ØwùV|
。
ïð
,
Zahçæhi
:
À¼¬
ÀÛì
HepG2
Za±hµQe
,
Óº
ÀÛC
8Oβ
D
·¸£ê¬
ÀÛC
8O(6′O
m 1
)βD
·¸£ê
,
4
_Vì
HepG2
Za±9Ë0
uО±øݧø
,
å¿Ýž0@Búh
±Zah0
。
§
ÀÛ
、
À¼
、
ÀÛC
8
OβD·¸£ê±hµìòe,àï,0üp~
cd-()ì
3
±hµÖnDÇO
«¬
。
~cd-()É×wxÑZa¢%ýþ±
°ðç ¨
,
ÓdD[â±F÷
,
dÒDb
BÄQ±Za
、
ZaþUÅÊx,q±ðµ
。
ìZa¢%
,
-µÑ¯°µ
,
{ò÷FP
a°8±M²
,
MÖ,¿°8±çpP¸
¹
,
-BÁU
、
Dö
、
Ý@ßè½ë
[32]。ALT
¬
AST
ÉÀíQw±Ö¥{ÈQ*æ±
Â
,ALT
L/¿Zao8
,
§
AST
L/¿
Za(°$
。
Za#@´µø
O
,ALT
îdøÅ
;
§ZaÔ.O k.O
,
(°8
AST
&Ï;dÏ
。GGT
¿8ÊZa(°ã
Â
,
ÓL/¿Za#Ê[Z3÷A
,LDH
É°8{ßP¸¹$±[./±q
;
Za
pk.O
,
Za#ãä
,GGT
¬
LDH
±î
dÃ+ÜÝ
[3334]。
÷¤fHg]c¥
{ȱûüÓÂ_Âë
ALT
¬
AST
u
h·ÜÝ
,
¦OçuB
GGT
Ê
LDH
±ÜÝ
[3537]。
ïð
,
¶°8çæ*ú
RÆù¥¦Ãß
±fHgY
,

ALT
¬
AST
uB¥¦¹¾±Ü
Ý
;
Ãßâ
、
~,OþâËÓÜݹ¾âú
h
[8,3839]。
~cd-çæhi
,
¥¦Å¾±
À¼Ñd-4½
6h
Y
,400μmol·L-1M
I
ALT,AST,LDH
îdøÅ
,100μmol·L-1MI
LDH
îdÜÝ
;
åÐ,ž±ø
|}ëßh
·@ä
,
åhi[â±hÉÅ
。
ž
400
μmol·L-1±
ÀÛMÍá ALT,GGT,LDH±îd
øÅ
。
Êïéú
Ãß±
À¼
、
ÀÛ¿°ð
ìFuM*±d[â±hµ
。
ÀÛC
8
OβD·¸£êž200μmol·L-1O{Íá
d-
LDH
îd±h·ÜÝ
;
žø
800
μmol·L-1Od- ALT,AST,LDH±îdh·
ÜÝ
;
¦O
,
Ð,ž±ø
3
q±îdÛ
·4921·
P
*è
:
fHghµÞ1i4j«¬
ÜÝÞßå|}ëßÛ@äÞß
。
@¸d-
MTT
çÁm±
,
d-Ñž
800μmol·L-1
±
ÀÛC
8OβD·¸£ê4½ 6hYÓ
MTT
Ár{ñh·@ä
。
ZahµçÊ~cd-çuú
À
¼
、
ÀÛÊ
ÀÛC
8OβD·¸£ê¿
Ã
ßO¿[â±hµ
,
|æ*ú1ìíì°
ðZaÊFîçMãÂ[â±È0
。
}
É
,
@¸ìfHg$
À¼
、
ÀÛÊ
ÀÛC
8OβD·¸£ê±ëßÖnu<:fHg$
À¼±Þß=C
0~00232%;
ÀÛÞ
ß=C
00007% ~0319%;
ÀÛC
8
OβD·¸£ê±Þß=C 0014% ~
0064%[29,4046]。
§åB^kÚ.Iü©
50mg·
kg-1(
ÀÂ,
035g·kg-1)
Uºá
À
¢#
,HPLC
áâ|µ¢#$
À¼Þß=
12308%,
áYm±
À¼¿$°8±Q
¢,ž
1428μmol·L-1[47]。ÊïM65kg
±.IüUºá
À¼±ß
141μmol,Ö§[
-d$°±*ê2È
10L。
ûüáf
Hg±Ãß
1wÃß
[6,48],
,âÂH
g±ß
3~6g,
ËHg±ß
6~12g[2],
P
©Q
Ãß
12g
áfHg
(
À¼©Q
Þß
=
00232%
x-
,
ÀÛ©Q
Þß=
0319%
x-
,
ÀÛC
8OβD·¸£ê©Q
Þß
=
0064%
x-
),
{
À¼
、
ÀÛ¬
ÀÛC
8OβD·¸£êqr°8±Q
ž`
098,1416,172μmol·L-1,P/sä°ðç$
ãÂhµ±Å¾
(
À¼¬
ÀÛ
400
μmol·L-1,
ÀÛC8OβD·¸£ê 800
μmol·L-1),{:/`Uºá4898,339,5581
g
fHg,
,
§hÌÉ¥VS¬¥M{ç±±
。
àï
,“
ìíÄÉfHghµ
”
±éÉ
é&>?+±
。
[
q=
]
[1]
IÕ:
.
ìfHg1r¬¤±Wôõ
[J].
$%$,-.
,
2013,38(22):3988.
[2]
$%,
.
[1
[S].2015:175.
[3] KyoungAJ,HyunJM,SeungSY,etal.Druginducedliverin
jury:twentyfivecasesofacutehepatitisfolowingingestionofPo
lygonummultiflorumThunb[J].GutAndLiver,2011,5(4):
493.
[4] LeiX,ChenJ,RenJT,etal.LiverdamageassociatedwithPo
lygonummultiflorumThunb.:asystematicreviewofcasereports
andcaseseries[J].EvidBasedComplAlt,2015,doi:101155/
2015/459749.
[5]
N¿f
,
!ñ
.
fHgÊÓËÃÈ%8^Ñ
à
[J].
,¥ÕÖ-.
,2010,12(1):26.
[6]
!|
,
y¼
,
b$
.
fHgc,µ
36
¨
à
[J].
H9A
,2013,24(2):235.
[7]
:
,
s%s
,
fË|
,
è
.
áfHgcÈ
40¨
à
[J].
59%2A,
,2009,11(3):209.
[8]
ÀO
,
!ð&
,
Nz
.
fHg¥¦Uº~,ì:Rhµ
“
ß
O
h
”
Å«¬
[J].
$%,<=
,2011,8(4):193.
[9] ChoiYJ,YoonY,ChoiHS,etal.Efectsofmedicinalherbex
tractsandtheircomponentsonsteatogenichepatotoxicityinSk
hep1cels[J].ToxicolRes,2011,27(4):211
[10]
Fà
,
Fø}
,
Dùá
,
è
.
ËfHg¥¦ÃßÑ
R
¹¾±ç«¬
[J].
tK$A
,2007,28(10):1420.
[11]
Dè
,
{«¦
,
{|g
,
è
.
ÃßfHg¨#c
R¾
w«¬
[J].
MÒ$A,
,2013,6(1):1.
[12]
í(
,
IJ
,
)¨
,
è
.
#ÖÃìfHgZahµ±ò
ó
[J].
$%çÃ-.
,2013,19(20):268.
[13]
ÀO
,
!ð&
,
Nz
.
fHg¥¦ì:Rïµhµñ
ò«¬
[J].
$%,<=
,2010,7(12):705.
[14] LinLF,NiB,LinHM,etal.Traditionalusages,botany,phyto
chemistry,pharmacologyandtoxicologyofPolygonummultiflorum
Thunb.:areview[J].JEthnopharmacol,2014,159(22):158.
[15]
æÎ?
,
Jg
,
æçä
,
è
.
fHg,$ìíı#
Ög«¬
[J].
Ë^$A,
k
,2012,28(1):150.
[16]
y:
,
e
,
y:Í
.
¥¦ÃbËfHgfw$bë
ìí±ëßñò
[J].
H9A
,2003,14(12):119.
[17]
!
*
,
MÛ
,
N¿f
,
è
.
fHg#Öì$?wZa
L02
,}8YÊë/±òó
[J].
$KAVk
,2010,8
(6):554.
[18]
Nl
,
Nvi
,
D
,
è
.
fHgL/
ÀÛ
、
À¼¬
mBêìZa
、
Za±òó
[J].
±P$KA
V-.
,2010,19(11):1315.
[19] LiCL,JiangM,LiZ,etal.DeterminationofemodininL02
celsandcelculturemediawithliquidchromatographymass
spectrometry:applicationtoacelulartoxicokineticstudy[J].J
PharmaceutBiomed,2012,71(12):71.
[20]
&4
,
+|K
,
õ*ü
,
è
.
fHg¥¦ÑZaë/
±µ«¬
[J].
tK$A
,2009,30(2):238.
[21] WuX,ChenX,HuangQ,etal.Toxicityofrawandprocessed
rootsofPolygonummultiflorum[J].Fitoterapia,2011,83(3):
469.
[22]
D,
,
,
MP&
,
è
.
Â
、
ËHg¨#ì:R¾±òó
[J].
H9A>k
,2011,17(4):452.
[23]
¤¥
,
¦,§
,
{|g
,
è
.
fHgÆËíYì
R¾±
ñòÊ*æÂ:;
[J].
$%$,-.
,2015,40(4):
654.
[24] LiangZ,ChenH,YuZ,etal.Comparisonofrawandprocessed
·5921·
2016
y
4
z ³
41
ų
7
}
Vol41,No.7 April,2016
RadixPolygoniMultiflori(Heshouwu)byhighperformanceliq
uidchromatographyandmassspectrometry[J].ChinMed,2010,
5(5):29.
[25]
D´&
,
Dd
,
cd-
,
è
.
fHg$
ÀÛ
8OβD·¸
£ê±_Ñ°ðô𵫬
[J].
·
.
·
6
,2014,26(6):401.
[26]
Áe
,
Ýüs
,
M/
,
è
.
1~cd-()±úV¾
°ðhµÌÍ«¬
[J].
$%$,-.
,2011,36(5):628.
[27]
IöE
.
ÀÊÓL/l±hµhS«¬
[D].
23
:
$
%$:7;<<(A&>
,2007.
[28] TaoY,LeungKSY,LuGH,etal.Identificationanddetermina
tionofthemajorconstituentsintraditionalChinesemedicinal
plantPolygonummultiflorumthunbbyHPLCcoupledwithPAD
andESI/MS[J].PhytochemAnal,1990,18(3):181.
[29] O′BrienPJ,IrwinW,DiazD,etal.Highconcordanceofdrug
inducedhumanhepatotoxicitywithinvitrocytotoxicitymeasured
inanovelcelbasedmodelusinghighcontentscreening[J].
ArchToxicol,2006,80(9):580.
[30] NoorF,NiklasJVU.Anintegratedapproachtoimprovedtoxici
typredictionforthesafetyassessmentduringpreclinicaldrugde
velopmentusingHepG2cels[J].ToxicolApplPharm,2009,
237(2):221.
[31]
B<<
,
Ô
,
EvÆ
,
è
.
Àìí`Âì$Za¬
:Rý¢Za±Á0
[J].
23A&
k
,
1993,25(
øl
5):76.
[32]
,Ý
,
Å:0
,
ÎP*
.
~cd-()¿,«¬$±
[J].
$,
,2013,35(6):1292.
[33]
no
.
Â_¿O$±y
[J].
$%A,
&
,2014,4(3):120.
[34]
Iü
,
Df1
.
w¢Â_Âá¿xO$±
[J].
ç¾O-.
,2007,10(1):43.
[35]
P(
,
ì9
,
ø
.
fHgcÈ
13¨
à
[J].
A A
,2008,29(12):1619.
[36]
y2(
,
y3
,
ì<
,
è
.
fHgc,µO
12
¨à
[J].
$%Ä-.
,2010,10(19):4759.
[37]
tÕv
.
fHgbc,µ0±à
[J].
K1A
,
2011,23(7):1300.
[38]
¤¥
,
¦,§
,
{|g
,
è
.
fHgÆËíYì
R¾±
ñòÊ*æÂ:;
[J].
$%$,-.
,2015,40(4):
654.
[39]
D&Q
,
!Þ
,
I%£
,
è
.
fHg¥¦Æˤcȱ«
¬
[J].
@9$A-.
,2012,27(5):129.
[40]
±£
,
MâE
,
M5
,
è
.
`oU¶[Z3Uº¦Oáâ
fHg$
7
Âëß±«¬
[J].
$%,-.
,
2015,50(9):802.
[41]
G4±
,
{ÜO
,
{sÆ
.
Ýɤ(çáâ
12
44F
fHg$Bɱëß
[J].
$Æ$A,-.
,2014,29
(11):3605.
[42]
Qö
,
h:
.
Ýɤ(çáâfHgÊÓÆˤ$ìí
ıëß
[J].
,à-.
,2000,20(5):326.
[43]
GäÆ
,
IÕÆ
.
¥¦ãFfHg±Þßà
[J].
$,
,
1999,21(1):36.
[44]
J&Æ
.HPLC
áâfHgÆ˸¹$L/_ëß
[J].
ðêWÆA,
,2013,9(7):50.
[45]
zT¢
,
,3ú
,
P£Ý
,
è
.
Ýɤ(ç¦OáâfHg
$
À¼
、
ÀÛ¬
À¢±ëß
[J].
A
k
:
Ì
&P
,2014,51(2):349.
[46]
ya¤
,
5K
,
^
,
è
.
fHgÆ˸¹$
5
_
±ëß _
[J].
$%çÃ-.
,2012,18(5):66.
[47]
GO
,
6¥:
,
yM
.
µ`ÔÕì
À¼¿$°8,¶¸
¹±òó
[J].
$%
,SÑ$
,2006,11(2):223.
[48]
_vª
.
+,:ÃßáfHgcÈ[¨
[J].
7;<
A,-.
,2011,23(5):41.
[
-0
]
·6921·