全 文 ：表 1 调经促孕丸中有效成分的测定结果( n= 3)
Table 1 Determination of active components
in Tiaojing Cuyun Pills (n= 3)
批号 仙茅苷/
(g g- 1 )
淫羊藿苷/
(g g- 1 )
隐丹参酮/
( g g- 1)
丹参酮A/
(g g- 1 )
9035124 12 5 10 8 3 8 7 2
9035125 10 4 11 2 5 0 6 9
9035126 11 7 12 5 4 6 5 8
中药的流动相, 选择乙腈-水为溶剂系统。考虑到各
峰的峰形较差, 需在水相中加入一定量的磷酸,可使
各峰得到较好分离且峰形尖锐, 因此选用乙腈和
0 1%磷酸的梯度洗脱。
对比 3批样品的检测结果, 各成分之间略有差
别,这可能是由各批产品的生药的来源和炮制、生产
工艺、贮藏条件等诸多因素所引起的,这也表明中成
药活性成分存在一定的差异性。
参考文献:
[ 1] 中国药典[ S] .一部. 2005.
[ 2] 许 勇,夏 晶,王 柯,等.高效液相色谱法测定健骨颗粒中
仙茅苷的含量[ J] 药物分析杂志, 2008, 28( 10) : 1722-1724.
[ 3] 史万忠,朱 兰,孔德云,等. H PLC法测定密骨胶囊中淫羊藿
苷含量[ J] 中草药, 2000, 31( 5) : 341-342.
[ 4] 王旭东, 姚 晨, 鲁方平. 淫羊藿提取物中淫羊藿苷含量的
HPLC测定[ J] 中草药, 2003, 34( 8) : 717-718.
[ 5] 李晓莉,李晓蓉,王丽娟,等. RP-H PLC 测定丹芎方中丹参素、
阿魏酸、隐丹参酮和丹参酮A 的含量 [ J ] 中成药, 2008, 30
( 1) : 77-80.
白茅根炒炭前后 5-羟甲基糠醛的变化研究
曹雨诞, 和颖颖,张 丽,陈佩东,丁安伟*
(南京中医药大学, 江苏 南京 210046)
摘 要:目的 考察白茅根炒炭前后 5-羟甲基糠醛的变化。方法 采用 RP-HPLC 法, L ichro spher5-C18色谱柱
( 150 mm 4 6 mm, 5 m) ; 流动相:甲醇-0 005% 醋酸水溶液; 梯度洗脱; 柱温: 30 ; 体积流量: 1 mL / min。结果
5-羟甲基糠醛在10 84~ 346 8 ng 线性关系良好, r= 0 999 9,平均回收率为 99 39% , RSD为 1 72% ( n= 6)。经炒
炭后,炮制品中 5-羟甲基糠醛增大了32 倍。结论 白茅根经炒炭后, 5-羟甲基糠醛的量显著提高, 为进一步研究茅
根炭的质量控制和止血机制提供了依据。
关键词:白茅根; 炒炭; 5-羟甲基糠醛;炮制品; 高效液相色谱
中图分类号: R286 02 文献标识码: B 文章编号: 0253-2670( 2010) 09-1475-03
白茅根为禾本科植物白茅 Imp er ata cy l indr i-
ca Beauv varmaj or ( Nees) CE Hubb 的干燥
根茎,又名兰根、地筋、白花茅根、茅草根、甜草根等,
广泛分布于全国各地, 为中医传统常用止血药。白
茅根始载于神农本草经, 并列为草部中品, 味甘,
性寒,主劳伤虚嬴,补中益气, 除瘀血,血闭寒热, 利
小便,用于治疗吐血、淋病、小便不利、水肿和黄疸
等[ 1]。目前对白茅根的研究主要集中在生品 [ 2-3]。
本课题组前期的实验结果表明白茅根经炒炭后 5-
羟甲基糠醛变化较大。以前普遍认为 5-羟甲基糠
醛有一定的不良反应,在葡萄糖注射剂的储存、加热
灭菌过程中需严格控制。但近几年来研究表明 5-
羟甲基糠醛还具有抗炎、改善血液流变学等对人体
有利的作用,杜伟锋等[ 4-5]将 5-羟甲基糠醛作为山茱
萸保肝作用的指标活性成分。因此本实验以 5-羟
甲基糠醛为指标,考察了白茅根炒炭前后该指标的
变化,以期为揭示白茅根炮制机制及饮片的质量标
准研究提供依据。
1 仪器与试药
高效 液 相 色 谱 ( Waters515 ) , Waters2996
( PDA)全波长紫外检测器, YXJ- 高速离心机 (江
苏金坛市金城国胜实验仪器厂) , BP211D电子天平
( 0 01 mg,德国赛多利斯) , FA1104N 电子天平( 0 1
mg,上海精密科学仪器有限公司) , M odel8868红外
测温仪(上海壹琦仪器仪表有限公司)。
白茅根饮片购买于南京药业股份有限公司,经
南京中医药大学吴启南教授鉴定为禾本科植物白茅
Imp erata cy l indr ica Beauv var maj or ( Nees )
CEHubb 的干燥根茎(批号 080214)。5-羟甲基
糠醛对照品购自中国药品生物制品检定所(质量分
数99%,批号 111626-200503) ; 甲醇、醋酸为色谱
纯;水为重蒸水。
2 方法与结果
2 1 茅根炭的制备: 茅根炭是取白茅根经 310 炒
1475中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月
* 收稿日期: 2010- 01-25 基金项目:国家 十一五科技攻关项目( 2006BAIO9B006-02)作者简介:曹雨诞( 1977 ) ,女,江苏省无锡人,博士在读, 2002年毕业于南京师范大学化学与环境科学学院,获硕士学位, 研究方向为中药炮制与质量控制。Tel: ( 025) 51997238 E- mail : raind c@ 163 com
* 通讯作者 丁安伟 E- mai l: aw ding105@ 163 com
制 4 min而成。粉碎, 过 60 目筛, 混匀, 50 下干
燥 24 h, 即得,备用。
2 2 色谱条件: Lichrospher 5 C18色谱柱( 150 mm
4 6 mm, 5 m) ;流动相:甲醇-0 005%醋酸水溶液;
梯度洗脱: 0 min, 甲醇 5%, 0~ 15 min, 甲醇 20% ,
15~ 20 min, 甲醇 25%, 20~ 25 min, 甲醇 5% , 25~
30 min, 甲醇 5%; 柱温: 30 ; 体积流量: 1 mL/
min。理论塔板数按 5-羟甲基糠醛峰计算应不低于
5 000。
2 3 对照品溶液的制备:取 5-羟甲基糠醛对照品 8
mg, 精密称定,置 25 mL 量瓶中,加甲醇至刻度, 得
0 346 8 mg/ mL 5-羟甲基糠醛对照品母液。精密量
取该溶液 1 mL, 置 10 mL 量瓶中, 加甲醇至刻度,
得 34 68 g / mL 5-羟甲基糠醛对照品溶液。
2 4 供试品溶液的制备:取白茅根生品粉末约1 g、
炭品粉末约 0 2 g,精密称定, 分别置 50 mL 具塞锥
形瓶中,加 80%甲醇 25 mL,密塞,超声处理(功率:
500 W,频率: 40 kHz) 45 min, 滤过, 滤渣及滤纸再
加80%甲醇 25 mL, 超声处理 45 m in,滤过,用 80%
甲醇洗涤滤渣, 合并滤液及洗涤液置 50 mL 量瓶
中,加 80%甲醇至刻度,摇匀,即得。
2 5 线性关系考察: 精密量取 5-羟甲基糠醛对照
品母液5 mL,置10 mL 量瓶中,得 17 34 g / mL 5-
羟甲基糠醛溶液, 采用逐级稀释法制成 8 670、
4 335、2 168、1 084 g / mL 系列对照品溶液。精
密吸取系列对照品溶液各 10 L,进样测定。以质量
浓度为横坐标, 峰面积为纵坐标绘制标准曲线, 得回
归方程Y= 87 087 364 46 X- 9 5235, r= 0 999 9,结
果表明 5-羟甲基糠醛在 10 84~ 346 8 ng 线性关系
良好。
2 6 精密度试验: 取 17 34 g / mL 5-羟甲基糠醛
对照品溶液 10 L,重复进样 6 次,计算得 5-羟甲基
糠醛峰面积的 RSD为 1 20%。
2 7 重现性试验:取 1号炭品粉末约 0 2 g,精密称
定,共 6份,制备供试品溶液, 依法测定,计算得5-羟
甲基糠醛质量分数的 RSD为 1 22%。
2 8 稳定性试验:取 1号炭品制备供试品溶液, 分
别于 0、2、4、8、12 h进样 10 L 测定,计算得 5-羟甲
基糠醛峰面积的 RSD 为 1 21% , 结果表明供试品
溶液在 12 h内稳定性良好。
2 9 加样回收率试验: 取 1 号炭品共 6份,每份约
0 1 g ,精密称定, 分别加入 0 346 8 mg/ mL 5-羟甲
基糠醛对照品溶液 0 8 mL, 制备供试品溶液,依法
测定,结果平均回收率为 99 39%, RSD为 1 72%。
2 10 样品的测定: 取白茅根生、炭品, 制备供试品
溶液。取供试品溶液和 5-羟甲基糠醛对照品溶液
分别进样,测定, 按外标法计算质量分数, 色谱图见
图 1, 计算结果见表 1。
* 5-羟甲基糠醛
* 5-hydroxymethy-l fu rfu ral
图 1 5-羟甲基糠醛对照品( A)、白茅根生品(B)和茅根炭( C)的 HPLC图
Fig 1 HPLC Chromatograms of 5-hydroxymethy-l furfural reference substance ( A) , Imperata Rhizoma ( B) ,
and prepared Imperata Rhizoma (C)
表 1 白茅根炒炭前后 5-羟甲基糠醛的比较( n= 4)
Table 1 Comparison of 5-hydroxymethy-l furfural in Impera-
ta Rhizoma before and af ter being processed ( n= 4)
样品 5-羟甲基糠醛/
( g g- 1) 样品
5-羟甲基糠醛/
( g g- 1) 炭品/生品
生品 1 82 87 炭品 1 271 2 32 73
生品 2 85 16 炭品 2 271 8 31 92
3 讨论
根据相关文献, 选择了 80%甲醇﹑ 50%甲醇超
声及水提醇沉的方式进行提取[ 6] , 同时又考察了提
取次数,结果表明, 样品用 80% 甲醇超声提取 2次
效果最佳。
由于 5-羟甲基糠醛在 284 nm 处有最大吸收,
故检测波长选择为 284 nm ,使得该成分在其最大吸
收波长下进行测定,从而提高了分析精度,保证了方
法稳定性。
文献报道, 5-羟甲基糠醛主要是由己糖经加热
分解产生,广泛存在于含有糖类物质的植物中, 一般
在炮制或加热后其量会增加。本实验考察了炒炭对
白茅根中 5-羟甲基糠醛的影响,结果发现白茅根炭
1476 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月
品中 5-羟甲基糠醛较生品中明显增加( 32 倍) , 表明
炒炭能大大增加其中 5-羟甲基糠醛的量。
白茅根炒炭后其对小鼠的止血, 凝血时间较生
品有显著缩短, 且炭品的血浆复钙时间也有显著缩
短[ 6] ,同时白茅根炒炭后 5-羟甲基糠醛也有显著地
增加。因此, 5-羟甲基糠醛与白茅根炒炭的止血作
用之间是否具有一定的联系, 其对白茅根炒炭机制
的揭示尚待进一步研究。
参考文献:
[ 1] 王明雷,王素贤,孙启时, 等 白茅根化学成分的研究[ J] 中国药物化学杂志, 1996, 6( 3) : 192-194
[ 2] 路金才,孙启时,王明雷,等 白茅根中芦竹素和白茅素的含量测定[ J] 沈阳药科大学学报, 1996, 13( 4) : 290- 291
[ 3] 宋劲诗,陈 康 白茅根炒炭后的止血作用研究[ J] 中山大
学学报论丛, 2000, 20(5) : 45-48
[ 4] 杜伟锋,丁 霞,蔡宝昌 山茱萸炮制前后 5-羟甲基糠醛的含
量变化研究[ J] 中成药, 2007, 29( 12) : 1801-1803
[ 5] 杜伟锋,蔡 皓,丁 霞, 等 RP-H PLC法测定山茱萸生品和
酒制品中没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷和马钱素 [ J] 中草药, 2008, 39( 12) : 1813-1815
[ 6] 丁安伟,吴丽文 茅根炭炮制工艺及质量标准研究 [ J ] 南京中医药大学学报, 1997, 13( 1) : 21- 23
HPLC法测定余甘子膏中没食子酸
顿 珠1 , 刘 青1* ,索朗其美1 ,尼 珍2 , 德吉措姆2 ,陈志涛1*
( 1 西藏藏医学院,西藏 拉萨 850000; 2 西藏自治区食品药品检验所, 西藏 拉萨 850000)
摘 要:目的 建立藏药余甘子膏中没食子酸的测定方法。方法 采用 30%甲醇提取样品;色谱条件为 Shim-pack
VP-ODS 色谱柱( 250 mm 4 6 mm, 5 m ) ; 流动相 : 甲醇-0 04% 磷酸溶液( 10 90) , 柱温: 35 ; 体积流量: 1 0
mL/ min;检测波长: 274nm。结果 线性范围为 1~ 200 g/ mL ( r = 0 999 9) , 平均回收率为 101 8% , RSD 为
1 6%。结论 该方法简便, 快速,准确, 可用于藏药余甘子膏中没食子酸的测定。
关键词:余甘子膏; 没食子酸;高效液相色谱
中图分类号: R286 02 文献标识码: B 文章编号: 0253-2670( 2010) 09-1477-02
藏药余甘子膏是根据传统藏药炮制方法, 进行
生产加工的一种藏药制剂,其临床应用广泛, 疗效显
著,具有清热凉血,消食健胃, 生津止咳之功效,主要
用于血热血瘀, 消化不良,腹胀,咳嗽,喉痛,口干, 牙
痛,维生素丙缺乏等症 [ 1]。余甘子为大戟科叶下珠
属植物余甘子 Phy l lanthus embl ica L 的果实 [ 2] ,
主要成分为没食子酸,相关质量控制内容已列入中
国药典2005年版一部, 作为鉴别余甘子的主要依
据。本实验参考文献方法 [ 3-5] ,建立余甘子膏中主要
成分没食子酸的测定方法, 通过方法学考察发现该
法简便,稳定,可靠, 可对本品进行质量控制。
1 仪器与材料
梅特勒 AE200电子天平;岛津 LC 20A液相色
谱仪,配 SPD 20A 紫外可见检测器; KQ 250DB超
声清洗器( 250W,昆山超声仪器有限公司)。
甲醇(色谱纯, F isher 公司) ; 磷酸(上海红卫农
药厂) ;蒸馏水(自制) ;没食子酸(中国药品生物制品
检定所,供测定用, 批号 110831-200803) ; 余甘子膏
由西藏藏医学院研究所提供。
2 方法与结果
2 1 色谱条件: Shim-pack V P-ODS 色谱柱 ( 250
mm 4 6 mm , 5 m) ; 流动相: 甲醇-0 04%磷酸溶
液( 10 90) , 柱温: 35 ;体积流量: 1 0 mL/ min;检
测波长: 274 nm。理论塔板数按没食子酸峰计算不
低于 4 000。
2 2 供试品溶液的制备: 取本品粉末约 80 mg, 精
密称定,置 50 mL 量瓶中, 加 30%甲醇 20 mL, 20
超声处理(功率 250 W, 频率 40 kHz) 20 min, 室
温静置,加 30%甲醇稀释至刻度, 摇匀, 精密量取 5
mL,置 25 mL 量瓶中, 加 30%甲醇稀释至刻度, 摇
均,滤过,取续滤液,即得。
2 3 对照品溶液的制备:精密称取没食子酸对照品
适量,加 30%甲醇制成 30 g/ mL 的溶液,即得。
2 4 系统适应性试验:取上述对照品溶液和供试品
溶液,各进样 20 L,测得 HPLC 图谱, 见图 1。
2 5 线性关系的考察:配制系列质量浓度的没食子
酸对照品溶液 1 03、26 18、51 33、82 54、154、
205 3 g/ mL,分别精密进样 20 L, 测定峰面积。
以进样质量浓度对峰面积进行回归, 得回归方程
Y= 160 385 X + 1 088 05, r= 0 999 9。结果表明
没食子酸质量浓度与其峰面积在 1~ 200 g/ mL 存
在良好的线性关系。
2 6 精密度试验:精密量取 30 g/ mL 没食子酸对
照品溶液 20 l,连续进样 5次,测定其峰面积, 计算
1477中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月
* 收稿日期: 2010- 01-16 基金项目:西藏自治区科学技术厅重点科技项目( ZK0600623)
* 通讯作者 刘 青 T el: ( 0891) 6386381 E-m ail: l iu_navy86@ 126 com