全 文 ：［收稿日期］ 20130619(014)
［基金项目］ 山东省高等学校科技计划(J09LF30) ;山东省科技攻关项目(2010GSF10282)
［第一作者］ 赵静，学士，主管药师，从事中药制剂分析工作，Tel:0538-6232355，E-mail:zhaojingtl@ 163． com
［通讯作者］ * 李玉琴，博士，副教授，从事药物分析研究工作，Tel:0538-6229751，E-mail:liyuqin@ tsmc． edu． cn
高效液相色谱法测定白花丹参 3 种炮制品中
5 种酚酸类成分的含量
赵静1，李玉琴2* ，段瑞2，吴娜娜2，唐瑜菁2
( 1. 山东省泰山疗养院，山东 泰安 271000; 2. 泰山医学院，山东 泰安 271016)
［摘要］ 目的:建立同时测定白花丹参生品、酒制品和炒炭 3 种炮制品中 5 种酚酸类成分丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、
迷迭香酸和丹酚酸 B含量的高效液相色谱法，并探讨不同炮制方法对白花丹参中主要酚酸类成分的影响。方法:大连依利特
C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)柱;流动相甲醇-5%冰醋酸，梯度洗脱;流速 1. 0 mL·min
－1，检测波长 286 nm，进样量 20 μL。结
果:丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、迷迭香酸和丹酚酸 B的线性范围分别是 7. 31 ～234 (Ｒ2 = 0. 999 5) ，6. 75 ～ 216 (Ｒ2 = 0. 999 9) ，
52. 8 ～ 1. 65 (Ｒ2 = 0. 999 0) ，4. 67 ～ 149. 50 (Ｒ2 = 0. 999 8) ，42. 25 ～ 1 352 mg·L －1(Ｒ2 = 0. 999 9) ;样品中 5 种酚酸类成分的平
均加样回收率均 ＞ 98%，ＲSD均 ＜ 1. 6%。结论:该方法简便快速，重复性好，灵敏度高，可作为白花丹参类药材的酚酸类成分
含量的定量方法。测定结果显示，3 种炮制品种均不含原儿茶酸，其余 4 种成分的含量均表现为生品 ＜酒制品 ＜炒炭。
［关键词］ 高效液相色谱;白花丹参生品;酒制品;炒炭;酚酸类化合物
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)22-0154-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2013220154
Simultaneous Determination the Five Phenolic Acids in the Three Processed
Products of Salvia miltiorrhiza Bunge f． alba by HPLC
ZHAO Jing1，LI Yu-qin2* ，DUAN Ｒui2，WU Na-na2，TANG Yu-jing2
(1. Taishan Sanatorium of Shandong Province，Taian 271000，China;
2. Taishan Medical University，Taian 271016，China)
［Abstract］ Objective:To develop a HPLC method for simultaneous determination of danshensu，
protocatechuic aicd，protocatechuic aldehyde，ferulic aicd and salvianolic aicd B in Salvia miltiorrhiza Bunge f．
alba，the wine fried and the carbonizing，and explore the effects for their five phenolic acids with different
processing methods S． miltiorrhiza Bunge f． alba． Method:The column was C18 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)．
The mobile phase was methanol and 5% acetic acid glacial with gradient elution and the flow rate was 1. 0 mL·
min －1，the detection wavelength was 286 nm． Ｒesult:The linearities were obtained over the range of 7. 31-234
(Ｒ2 =0. 999 5)for danshensu，6. 75-216 (Ｒ2 = 0. 999 9)for protocatechuic acid，52. 8-1. 65 (Ｒ2 = 0. 999 0)for
protocatechuic aldehyde，4. 67-149. 50 (Ｒ2 = 0. 999 8)for rosmarinic acid，42. 25-1 352 mg·L －1 (Ｒ2 = 0. 999 9)
for salvianolic aicd B，respectively． All of the average recoveries were ＞ 98% with ＲSD ＜ 1. 6% ． Conclusion:
The validated method has the advantages of simplicity，precision and reliability，and could be used to simultaneous
determination of the five phenolic acids in S． miltiorrhiza Bunge var alba． The results indicated that protocatechuic
aicd wasnt detected in the three processed products，and the rest four contents presented the fresh ＜ the wine fried
＜ the carbonizing，and provided the theory foundation for pharmacy and clinic．
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第 19 卷第 22 期
2013 年 11 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 22
Nov．，2013
［Key words］ HPLC;The fresh S． miltiorrhiza Bungevar． alba; the wine fried， the carbonizing;
danshensu;protocatechuic aicd;protocatechuic aldehyde;ferulic aicd;and salvianolic aicd B
白花丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge f． alba)为
丹参的白花变型，作为山东特有的道地药材，主产于
山东章丘、莱芜等丘陵地区［1］。近代医学临床证
明，白花丹参在心脑血管疾病、癌症、抗衰老等方面
具有很好的疗效。在治疗慢性肝炎、早期肝硬变等
症，也有良好的效果［2-7］。
白花丹参有效成分通常被归为两大类:脂溶性
成分(丹参酮类)和水溶性成分(酚酸类)［8-9］。白花
丹参的水溶性酚酸类化合物是丹参的主要有效成
分，具有增加血流量和扩张冠状动脉的作用，对心
肌梗塞、心肌损害、心绞痛和冠心病具有一定疗效，
因此丹参药材中丹酚酸含量的测定对药材质量评价
具有一定意义［10］。
本文采用高效液相色谱法对白花丹参生品，酒
制品，炭炒 3 种不同炮制品中丹参素、原儿茶酸、原
儿茶醛、迷迭香酸和丹酚酸 B 含量进行测定、比较，
并探讨不同炮制方法对白花丹参中水溶性成分的影
响，为临床合理用药提供依据。
1 材料
1. 1 仪 器 岛 津 高 效 液 相 色 谱 仪 (LC-
10ATvpPlus) ，SPD-10A VP 检测器;KQ600DB 型超
声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司) ;电子分析
天平(上海恒平科学设备有限公司)。
1. 2 试药 丹参素(批号 110855-200809)、原儿茶
酸(批号 110809-200503)和原儿茶醛(批号 110810-
200506)购于中国药品生物制品检定所，迷迭香酸
(批号 1231-050419)购自中国固体制剂制造技术国
家工程研究中心，丹酚酸 B(批号 SAB-E060720)购
自上海泸云医药开发有限公司;甲醇(天津市彪仕
奇科技发展有限公司)为色谱纯，冰乙酸(天津市富
宇精细化工有限公司)为分析纯，实验用水为纯化
水;白花丹参采自泰山医学院药材种植基地，并经高
红莉副教授鉴定。生品、酒制品和炒炭由泰山医学
院生药学教研室段瑞老师按《中国药典》一部(2010
年版)规定的方法［11］炮制。
1. 3 溶液配制
1. 3. 1 标准溶液的配制 分别精密称取丹参素
11. 7 mg、原儿茶酸 10. 3 mg、原儿茶醛 16. 2 mg、迷
迭香酸 14. 95 mg，用纯化水分别配置成 10 mL 的储
备液。在分别精密量取上述对照品储备液适量，置
于 10 mL量瓶中，再加入精密称定的丹酚酸 B 对照
品 13. 52 mg，用纯化水定容至 10 mL，配制成混合对
照品贮备液，其浓度分别为 234，216，52. 8，149. 50，
1 352 mg·L －1，密闭置于 4 ℃下避光保存。
1. 3. 2 样品溶液的配制 分别精密称取炮制品粉末
2. 0 g，加 20 mL蒸馏水，60 ℃恒温振荡1 h后于 100 ℃
下煮沸约 30 min。4 000 r·min －1离心 5 min，收集上
清液。将药渣再加 20 mL蒸馏水，煮沸约30 min，离
心后取上清液，合并两次上清液，定容至 50 mL。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 C-18 色谱柱(大连依利特) (4. 6
mm ×250 mm，5 μm) ;流动相 5%冰醋酸(A)-甲醇
(B) ，进行梯度洗脱(0 ～ 6 min，30% B，6 ～ 10 min，
30% ～ 35% B，10 ～ 30 min，40% B，后运行10 min) ，
流速为 1. 0 mL·min －1，检测波长 286 nm，柱温为室
温(约 27 ℃) ，进样量为 20 μL。此条件下，5 种分
析物的混合对照品色谱见图 1。
1. 丹参素;2. 原儿茶酸;3. 原儿茶醛;4. 迷迭香酸;5. 丹酚酸 B
图 1 对照品色谱
2. 2 线性关系考察 分别精密量取丹参素、原儿茶
酸、原儿茶醛、迷迭香酸和丹酚酸 B 对照品贮备液，
用 20%甲醇稀释相应的倍数，得到 6 个浓度梯度的
标准混合溶液。在选定的测定条件下进样 20 μL，
重复测定 3 次，根据测得的峰面积平均值 Y 对应的
质量浓度 X 进行线性回归，得到回归方程和相关系
数，见表 1。
2. 3 检测限的测定 将一定浓度的标准混合溶液
逐级稀释，依次进样，计算当信噪比 S /N = 3 时所对
应的标准混合溶液的浓度以确定检测限，见表 1。
·551·
赵静，等:高效液相色谱法测定白花丹参 3 种炮制品中 5 种酚酸类成分的含量
表 1 分析物的回归方程、相关系数及检测限
分析物 回归方程 线性范围 C /mg·L －1 相关系数 /Ｒ2 检测限 C /mg·L －1
丹参素 Y = 15 230X15 282 7． 31 ～ 234 0． 999 5 0． 028
原儿茶酸 Y = 44 550X + 19 830 6． 75 ～ 216 0． 999 9 0． 026
原儿茶醛 Y = 93 413X + 54845 52． 8 ～ 1． 65 0． 999 0 0． 006 3
迷迭香酸 Y = 37 141X22 448 4． 67 ～ 149． 5 0． 999 8 0． 018
丹酚酸 B Y = 19 435X + 39 893 42． 25 ～ 1 352 0． 999 9 0． 16
2. 4 精密度试验 为了考察体系的精密度，取含丹
参素、原儿茶酸、原儿茶醛、迷迭香酸和丹酚酸 B 分
别为 58. 5，54. 0，13. 2，37. 375 和 338 mg·L －1的混合
标准，在上述条件下重复进样 5 次。结果丹参素、原
儿茶酸、原儿茶醛、迷迭香酸和丹酚酸 B 用峰面积
的 ＲSD 分别为 1. 57%，1. 61%，0. 26%，0. 65% 和
0. 50%，显示 5 种分析物的精密度良好。
2. 5 加样回收率试验 取已知含量的白花丹参样
品，按高、中、低 3 个量准确加入标准品适量，按
1. 3. 2 的方法制备的供试品溶液，通过标准加入法
测定方法的回收率。结果见表 2 ～ 4。
表 2 生品加样回收率试验(n = 6)
分析物
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
平均回
收率 /%
回收率
ＲSD /%
丹参素 26. 51 29. 25 56. 43 102. 3 0. 74
原儿茶醛 3. 711 3. 522 7. 300 101. 9 1. 12
迷迭香酸 17. 92 18. 69 36. 50 99. 42 1. 41
丹酚酸 B 302. 2 302. 8 609. 3 102. 1 1. 53
表 3 酒制品加样回收率试验(n = 6)
分析物
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
平均
回收率 /%
回收率
ＲSD /%
丹参素 42. 10 39. 08 81. 53 100. 9 1. 83
原儿茶醛 5. 464 6. 651 12. 15 101. 3 1. 18
迷迭香酸 17. 28 18. 69 35. 77 98. 93 1. 36
丹酚酸 B 343. 2 338. 0 684. 6 100. 1 0. 98
表 4 炭炒品加样回收率试验(n = 6)
分析物
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
平均
回收率 /%
回收率
ＲSD /%
丹参素 84. 31 87. 17 172. 4 101. 1 0. 69
原儿茶醛 3. 485 4. 262 7. 815 101. 6 0. 61
迷迭香酸 11. 32 12. 69 23. 83 98. 62 1. 37
丹酚酸 B 150. 2 169. 0 320. 0 100. 5 0. 80
2. 6 样品测定结果 将 2. 3. 2 制备的样品溶液，生
品稀释 3 倍，酒制品稀释 3 倍，炒碳稀释 10 倍，在相
同的测定条件下，测定白花丹参炮制品中丹参素，原
儿茶酸，原儿茶醛，迷迭香酸，丹酚酸 B 5 种成分的
含量，3 种样品的图谱见图 3。样品中各分析物的测
定结果见表 5。
表 5 白花丹参样品中 4 种成分测定(n = 3) %
样品 分析物 含量 ＲSD
生品 丹参素 0. 55 1. 30
原儿茶醛 0. 07 0. 85
迷迭香酸 0. 36 1. 49
丹酚酸 B 6. 02 1. 59
酒制品 丹参素 0. 85 0. 70
原儿茶醛 0. 11 1. 54
迷迭香酸 0. 34 1. 25
丹酚酸 B 6. 94 1. 78
炒炭品 丹参素 4. 55 0. 93
原儿茶醛 0. 18 1. 51
迷迭香酸 0. 63 1. 52
丹酚酸 B 7. 95 0. 42
3 结论与讨论
本文建立的同时测定白花丹参中丹参素、原儿
茶醛、迷迭香酸和丹酚酸 B 含量的高效液相色谱
法，检测灵敏度高，方法简便、准确，可作为白花丹参
类药材中水溶性成分含量的定量方法。测定结果显
示，3 种炮制品中均未检测出原儿茶酸，其余 4 种成
分的含量均表现为生品 ＜酒制品 ＜炒炭，为药物制
剂和临床应用提供了理论依据。
本实验对测定丹参素，原儿茶酸，原儿茶醛，迷
迭香酸和丹酚酸 B 的流动相梯度进行了筛选，当
6 ～ 10 min，流动相(B)甲醇改变至 40%时，迷迭香
酸和丹酚酸 B不能分离，当 6 ～ 10 min，流动相(B)
甲醇改变至 35%时，迷迭香酸和丹酚酸能够实现基
线分离，因此最后确定梯度为 0 ～ 6 min，30% B，
6 ～ 10 min，B线性改变至 35%，10 ～ 30 min，B 线性
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第 19 卷第 22 期
2013 年 11 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 22
Nov．，2013
1. 丹参素;3. 原儿茶醛;4. 迷迭香酸;5. 丹酚酸 B
A．白花丹参生品;B．白花丹参酒制品;C．白花丹参炒碳品
图 3 白花丹参样品色谱
改变为 40%。
据文献报道，丹参素和原儿茶醛的最大吸收波
长为 281 nm，原儿茶酸的最大吸收波长为 260 nm，
迷迭香酸的最大吸收波长为 330 nm，丹酚酸 B 的最
大吸收波长为 286 nm。因此，5 种化合物的吸收光
谱和最大吸收波长存在明显差异，5 种化合物在
286 nm处信号强，且基线稳定，因此采用 286 nm 为
检测波长。
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［责任编辑 顾雪竹］
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赵静，等:高效液相色谱法测定白花丹参 3 种炮制品中 5 种酚酸类成分的含量