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ZHANGXiaoli1,LIUYuling1,FANLijiao1,WANGYueliang1,2,CHENKai1,2,LIHui1
(1InstituteofChineseMateriaMedica,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China;
2SchoolofChineseMateriaMedica,JilinAgriculturalUniversity,Changchun130118,China)
[Abstract] BasedonDPPHmethod,theantioxidantactivitiesofShenqiTongmaiYizhiparticleswithdiferentextractionprocesses
werecomparedThecontributiontotheantioxidantcapacityinvitrowasexploredbymeansofgreyrelationalanalysisondiferent
chemicalcompositionsinthefingerprintTheresultsshowedthattheIC50concentrationvaluesofwaterextract,waterextractfromalco
holprecipitation,alcoholextract,andalcoholandwaterextractwere08014,08591,07961,09180g·L-1;andthealcohol
extractisthebestmethodtoextractantioxidativecomponents,withthehighestantioxidantactivityandlowestIC50Whenthemass
concentrationoftheherbsreachedacertaindegree,itsfreeradicalclearanceratewassimilartothatofvitaminCcontrolgroupThe
orderofdiferentchemicalcontributionsofconstituentstotheantioxidantactivityinthefingerprintwas4>3>33>53>9>10>11>
34>15>59>8>61>52>20>42>18>29Thepreliminaryexplorationforthespectrumeficiencyrelationsprovidesreferencefor
studyingtraditionalChinesemedicinecompoundprocessingmethodandthepharmacodyamicmaterialbasis
[Keywords] antioxidant;DPPH;fingerprint;greyrelationalanalysis;spectrumeficiencyrelations
doi:104268/cjcmm20160911
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[
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]
[1]
Çj8
.
MyNOq1û
[J].
¿9$A
,2008,28(10):
89.
[2]
!:
.
MyNOqB®Âª}õöíç
[J].
ªU
-.
,1998,13(5):19.
[3] LópezOL,BeckerJT.Factorsthatmodifythenaturalcourseof
Alzheimer′sdisease[J].RevNeurol,2003,37(2):149.
[4] YuHT,ZhenJ,PangB,etal.GinsenosideRg1amelioratesoxida
tivestressandmyocardialapoptosisinstreptozotocininduceddia
beticrats[J].JZhejiangUnivSciB(Biomed&Biotechnol),
2015,16(5):344.
[5]
²òû
,
!#Ã
,
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,
É
.
¡J°I23(.Zc
}_!
#,-_·!
[J],
$%$,-.
,2015,40
(11):2112.
[6] NisarAhmad,HinaFazal,BilalHaiderAbbasi,etal.DPPHfree
radicalscavengingactivityandphenotypicdiferenceinhepatopro
tectiveplant(SilybummarianumL.)[J].ToxicolIndHealth,
2013,29(5):460.
[7] IkramIlahi,SaminaSamar,ImranKhan,etal.Invitroantioxidant
activitiesoffourmedicinalplantsonthebasisofDPPHfreeradical
scavenging[J].PakJPharm,2013,26(5):949.
[8]
ËY
,
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.
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~ÛÐú~y
[M].
23
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,2015.
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