全 文 ：RP2HPLC2ELSD 法同时测定白英中蜀羊泉次碱、
薯蓣皂苷元和氢化勒帕茄次碱
杨红英1 ,孙长山1 ,马 　龄2 ,顾广才3 ,齐 　伟1 ,孙立新1 3 ①
(11 沈阳药科大学 药学院 ,辽宁 　沈阳 　110016 ; 21 沈阳市第七人民医院 , 辽宁 沈阳 　110003 ;
31 江苏飞马药业有限公司 ,江苏 南通 　226009)
摘 　要 :目的 　建立 RP2HPLC2EL SD 法同时测定白英中蜀羊泉次碱 ( soladulcidine) 、薯蓣皂苷元 (diosgenin) 和氢
化勒帕茄次碱 (5α,62dihydroleptinidine) 。方法 　色谱柱为 Elite C18 (200 mm ×416 mm , 5μm) ,流动相为乙腈2四
氢呋喃20106 %三乙胺水溶液 (93 ∶4 ∶3) ,漂移管温度 80 ℃,载气流速 119 L/ min。结果 　蜀羊泉次碱、薯蓣皂苷
元和氢化勒帕茄次碱分别在 20～100、80～400、10～50μg/ mL 线性关系良好。3 种成分的平均回收率分别为
9614 %、10215 %、9913 % ,RSD 分别为 310 %、314 %、310 %。结论 　该方法适用于白英药材的质量控制。
关键词 :白英 ;RP2HPLC2EL SD ;蜀羊泉次碱 ;薯蓣皂苷元 ;氢化勒帕茄次碱
中图分类号 :R28216 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0320481203
　　白英 S ol anum l y rat um Thunb1 为茄属植物 ,
临床用于多种癌症的治疗[1 ] 。主要成分为甾体皂苷
类、甾体生物碱及其苷类等。研究报道薯蓣皂苷元
对人宫颈癌 HeLa 细胞有抑制作用[2 ] 。本实验首次
从白英中分得氢化勒帕茄次碱[ 3 ,4 ] ,并发现其对多
种肿瘤细胞有抑制作用。白英质量控制方法文献报
道有 GC2MS、H PL C、UV 法等[5～9 ] 。甾体皂苷和甾
体生物碱类化合物无紫外吸收或紫外响应弱 ,采用
RP2H PL C2EL SD 法测定白英中蜀羊泉次碱、薯蓣
皂苷元和氢化勒帕茄次碱 ,为白英的质量控制提供
一种重复性较好、准确度较高的方法。
1 　仪器与试药
Elite 高效液相色谱仪 (大连依利特分析仪器有
限公司) ,All2tech 2000 蒸发光散射检测器 (美国奥
泰公司) ,N3000 色谱工作站 , T G332A 型十万分之
一分析天平 (湘仪天平仪器厂) ,88B 型高速粉碎机
(浙江省瑞安市春海药材器械厂) 。
蜀羊泉次碱 ,氢化勒帕茄次碱对照品为本实验
室自行制得 (经 TL C 及 HPL C 测定质量分数达
99 %以上 ) 。薯蓣皂苷元对照品 ( 批号 15392
200001)由中国药品生物制品检定所提供。乙腈为
色谱纯 ,水为纯净水 ,其他试剂均为分析纯。
不同产地白英药材由沈阳药科大学孙启时教授
鉴定为茄科植物白英 S ol anum l y rat um Thunb1 。
2 　方法与结果
211 　色谱条件与系统适用性实验 :色谱柱为 Elite
C18 (200 mm ×416 mm , 5μm) ,柱温 25 ℃,流动相
为乙腈2四氢呋喃20106 %三乙胺水溶液 (93 ∶4 ∶
3) ,体积流量 1 mL/ min ,漂移管温度 80 ℃,雾化气
流速 119 L/ min ,不分流模式。
蜀羊泉次碱、薯蓣皂苷元和氢化勒帕茄次碱在
此色谱条件下的保留时间分别是 1219、1610、2016
min ,且其与相邻杂质峰的分离度大于 115 ,理论塔
板数均大于 5 000 ,色谱图见图 1。
12蜀羊泉次碱　22薯蓣皂苷元　32氢化勒帕茄次碱
12soladulcidine 　22diosgenin 　325α,62dihydroleptinidine
图 1 　对照品( A)和样品( B)色谱图
Fig11 　Chromatograms of reference substance ( A)
and sample ( B)
212 　对照品溶液的配制 :精密称定干燥至恒定质量
的蜀羊泉次碱、薯蓣皂苷元、氢化勒帕茄次碱对照品
·184·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009208212　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :辽宁省科技厅资助项目 (2007226011) ;沈阳市科技局攻关项目 (107116429200)
作者简介 :杨红英 (1984 —) ,女 ,山东省沂水人 ,在读硕士 ,主要从事中药质量标准及药动学研究。3 通讯作者　孙立新　Tel : (024) 24986365 　E2mail : slx04 @1631com
510、2010、215 mg ,置 50 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并
稀释至刻度 ,摇匀 ,得对照品储备液 (100μg/ mL 蜀
羊泉次碱 ,400μg/ mL 薯蓣皂苷元 ,50μg/ mL 氢化
勒帕茄次碱) 。
213 　供试品溶液的制备
21311 　白英中总苷的提取[10 ] :干燥白英药材粉碎
过筛 ,取药材粉末约 018 g ,精密称定 ,置 100 mL 圆
底烧瓶中 ,加入 90 %乙醇 25 mL 。水浴热回流提取
3 次 ,每次 1 h ,滤过 ,合并提取液。旋转蒸发至干后
20 mL 水分散 ,以石油醚等量萃取 3 次 ,弃去石油醚
层。再以水饱和正丁醇等量萃取 3 次 ,合并萃取液 ,
旋转蒸发至干 ,得总苷粗品 ,备用。
21312 　白英总苷的水解[11 ] :总苷粗品以 2 mol/ L
HCl 溶液 5 mL 混悬 ,100 ℃水浴水解 3 h ,再用氯
仿等量回流萃取 3 次 ,每次 20 min ,蒸干氯仿萃取
液 ,残渣定量转移置 10 mL 量瓶中 ,用甲醇稀释至
刻度 ,0145μm 微孔滤膜滤过 ,即得供试品溶液。
214 　线性关系考察 :分别精密吸取对照品储备液
1、2、3、4、5 mL 置 5 mL 量瓶中 ,加甲醇稀释至刻
度 ,得 3 种成分的系列对照品溶液。吸取各系列对
照品溶液 20μL ,在上述色谱条件下进入液相色谱
仪分析 ,测定峰面积 ,以对照品峰面积 ( Y ) 对浓度
( X)进行线性回归分析 ,得蜀羊泉次碱回归方程为
Y = 31420 ×103 X - 41186 ×104 ( r = 01999 4) ,线性
范围 20～100μg/ mL ;薯蓣皂苷元回归方程为 Y =
11378 ×104 X - 71500 ×105 ( r = 01999 3) ,线性范围
80～400μg/ mL ;氢化勒帕茄次碱回归方程为 Y =
31500 ×103 X - 11680 ×104 ( r = 01999 3) ,线性范围
10～50μg/ mL 。
215 　精密度试验 :取对照品溶液 (蜀羊泉次碱、薯蓣
皂苷元、氢化勒帕茄次碱的质量浓度分别为 60、
240、30μg/ mL)进样 20μL ,连续进样 6 次 ,测定峰
面积。结果蜀羊泉次碱、薯蓣皂苷元、氢化勒帕茄次
碱的 RSD 分别为 119 %、119 %、117 % ,结果表明精
密度良好。
216 　重现性试验 :取白英干燥药材粉末 ( No11 ,产
地西安) ,按“供试品溶液制备”项下操作平行制备 6
份供试溶液 ,进样 20μL ,测定峰面积。标准曲线法
计算质量分数 ,结果蜀羊泉次碱、薯蓣皂苷元、氢化
勒帕茄次碱的 RSD 分别为 118 %、210 %、119 % ,结
果表明重现性良好。
217 　稳定性试验 :取供试品溶液 ,避光放置 ,按上述色
谱条件 ,分别于 0、2、4、8、12 h 进样分析 ,蜀羊泉次碱、
薯蓣皂苷元、氢化勒帕茄次碱的 RSD 分别为 118 %、
119 %、119 % ,结果表明 3 种苷元均在 12 h 内稳定。
218 　回收率试验 :采用加样回收实验法 ,取已测定
的白英 (No11 ,产地西安)干燥药材粉末约 014 g (蜀
羊泉次碱、薯蓣皂苷元、氢化勒帕茄次碱的量分别为
01887 0、21313、01416 0 mg/ g) 共 9 份 ,精密称定 ,
分别加入相当于原药材中各成分量 50 %、100 %、
150 %的对照品溶液 ,每个质量浓度 3 份。按“供试
品溶液的制备”项下方法操作 ,按上述色谱条件测
定 ,计算加样回收率 ,得蜀羊泉次碱平均回收率为
9614 % ,RSD 为 310 % ;薯蓣皂苷元平均回收率为
10215 % ,RSD 为 314 % ;氢化勒帕茄次碱平均回收
率为 9913 % ,RSD 为 310 %( n = 9) 。结果表明回收
率符合要求 ,该方法准确度良好。
219 　样品测定 :取 10 个产地的白英干燥药材粉末 ,
按“供试品溶液的制备”项下操作 ,在上述色谱条件
下进样分析 ,计算质量分数 ,结果见表 1。
表 1 　各产地白英中蜀羊泉次碱、薯蓣皂苷元、
氢化勒帕茄次碱测定结果( n = 3)
Table 1 　Determination of soladulcidine , diosgenin , and 5α,
62dihydroleptinidine in S1 l yratum ( n = 3)
编号 产地 质量分数/
(mg ·g - 1)
蜀羊泉次碱 薯蓣皂苷元 氢化勒帕茄次碱
1 西安　 01 77 1199 01 26
2 柳州　 01 53 2102 01 45
3 武汉　 01 92 2184 01 33
4 广西　 01 97 2143 01 58
5 亳州　 11 15 2189 01 61
6 内蒙古 01 65 1115 01 17
7 江西　 01 47 1136 01 40
8 上海　 11 10 1127 01 67
9 三明　 11 27 2127 01 67
10 河南　 01 51 2112 01 21
3 　讨论
不经水解测定苷元量时 ,氢化勒帕茄次碱量较
少 ,无法准确定量 ,故采用水解的方法测定。采用
1、2、3 mol/ L 的盐酸进行水解 ,以 2 mol/ L 盐酸水
解各成分量高。因此采用 2 mol/ L 盐酸进行水解。
水解后以氯仿回流萃取 ,各苷元量较高并且杂质较
少 ,回流萃取不易乳化 ,保证了该方法的准确度。
在甲醇2水 ,乙腈2水 ,乙腈2四氢呋喃2水等系统下
对色谱条件进行优化。发现在乙腈2四氢呋喃2水系
统条件时 ,各峰与相邻杂质峰完全分离 ,四氢呋喃使
出峰时间变短且峰形更加对称。试用了醋酸、甲酸、
三乙胺等改性剂 ,三乙胺可很好地减少峰拖尾 ,故最
终选用乙腈2四氢呋喃20106 %三乙胺水溶液系统。
蒸发光散射检测器对没有紫外吸收及紫外吸收
弱的皂苷类、萜类及甾体类化合物来说是一种可靠
·284· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
的检测器。它克服了示差检测器 ( RID) 灵敏度低的
问题 ,且相对质谱 ( MS) 检测器来说运行成本更低 ,
是中药分离分析、质量控制的重要方法之一。
由实验结果发现白英中 3 种苷元的量由大到小
依次为薯蓣皂苷元、蜀羊泉次碱、氢化勒帕茄次碱。
不同产地的白英药材中 3 种苷元量的差异较大。其
中安徽亳州和福建三明的白英中 3 种苷元量均较
高 ,但内蒙古的白英中 3 种苷元量均相对较低。这
可能与气候差异有关 ,南部地区年均温度较高生长
期长而使有效成分量增加。
参考文献 :
[ 1 ] 　张民庆1 抗肿瘤中药的临床应用 [ M ]1 北京 :人民卫生出版
社 , 19981
[ 2 ] 　韩　重 , 黄　霁 , 何　珉 , 等1 白英抗肿瘤成分提取工艺的
研究 [J ]1 中草药 , 2006 , 37 (10) :1500215021
[ 3 ] 　Helmut R , Andrea P1 ( 23R)2232Hydroxysoladulcidine and
related compounds f rom S olanum panduraef orme [J ]1 Phy2 tochemist ry , 1993 , 32 (6) : 1607216091[ 4 ] 　Richard F K , Dale C B , William G1 Spirosolane2containingS olanum species and induction of congenital craniofacial mal2formations [J ]1 Tox icon , 1990 , 28 (8) : 87328841[ 5 ] 　徐　顺 , 王林江 , 李瑞玲 , 等1 白英全草中挥发油化学成分的分析 [J ]1 时珍国医国药 , 2006 , 17 (8) : 1390213911[ 6 ] 　孙立新 , 李凤荣 , 孟　楠 , 等1 HPLC 法测定中药白英中 162妊娠双烯酮的含量 [J ]1 沈阳药科大学学报 , 2008 , 25 (4) :29422961[ 7 ] 　孙立新 , 孟　楠 , 何 　珉 , 等1 HPLC 法测定中药白英中薯蓣皂苷元的含量 [J ]1 沈阳药科大学学报 , 2007 , 24 (1) : 292311[ 8 ] 　甄会贤 , 李 　平 , 张 　虹 , 等 1 白英中总黄酮的含量测定[J ]1 中华中医药学刊 , 2008 , 26 (10) : 2231222331[ 9 ] 　甄会贤 , 齐 　烨 , 陈 　扬 , 等 1 白英中总皂苷的含量测定[J ]1 时珍国医国药 , 2008 , 19 (6) : 1402214031[ 10 ] 　方幼兰1 芦笋皂苷的提取纯化及其糖基组成 [J ]1 生物工程学报 , 2005 , 21 (3) : 44624501[ 11 ] 　季宇彬 , 岳　磊 , 汲晨锋1 RP2HPL C2EL SD 测定芦笋皂苷中菝葜皂苷元的含量 [J ]1 中国中药杂志 , 2006 , 32 ( 12) :1236212381
RP2HPLC同时测定不同产地独一味药材中 4 种环烯醚萜苷
樊鹏程1 ,2 ,李茂星1 ,2 ,贾正平1 ,2 3 ① ,张汝学1 ,2 ,邱建国1 ,2 ,张泉龙1 ,2
(11 兰州军区兰州总医院 药剂科 ,甘肃 兰州 　730050 ;21 国家中医药管理局 临床药学重点学科 ,甘肃 兰州 　730050)
摘　要 :目的 　建立 RP2HPLC 同时测定不同产地独一味药材中 4 种环烯醚萜苷单体量的方法。方法 　采用 Sym2
metry C18色谱柱 (150 mm ×416 mm ,5μm) ,流动相 :0～11 min 乙腈2水 (11 ∶89) ,11～35 min 乙腈2水 (11 ∶89～
15 ∶85) 。体积流量 :110 mL/ min ,检测波长 :235 nm。结果 　山栀苷甲酯在 510～100μg/ mL 线性关系良好 ,加样
回收率为 10311 % ,RSD 为 210 %。螃蟹甲苷 Ⅱ(phloyoside Ⅱ) 在 110～50μg/ mL 线性关系良好 ,加样回收率为
9712 % ,RSD 为 113 %。番木鳖苷甲酯在 110～50μg/ mL 线性关系良好 ,加样回收率为 10113 % ,RSD 为 115 %。82
O2乙酰山栀苷甲酯在 510～100μg/ mL 线性关系良好 ,加样回收率为 10218 % ,RSD 为 112 %。10 批不同产地独一
味药材中山栀苷甲酯量为 013 %～1141 % ,螃蟹甲苷 Ⅱ量为 010 %～0145 % ,番木鳖苷甲酯量为 0102 %～213 % ,82
O2乙酰山栀子苷甲酯量为 1105 %～2195 %。结论 　实验建立的环烯醚萜苷测定方法准确可靠 ,适于独一味药材中
环烯醚萜苷类量的测定。不同产地独一味药材中环烯醚萜苷量存在较大差异。
关键词 :RP2HPL C ;独一味 ;环烯醚萜苷
中图分类号 :R28216 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0320483203
　　独一味来源于唇形科独一味属植物独一味
L amiop hlomis rot at a (Bent h1 ) Kudo 的全草或根
及根茎 ,主产于甘肃、西藏、青海、云南、四川等省区 ,
为传统藏药 ,藏语称“大巴”、“打巴布”“尕果拉”等。
其根及根茎或全草入药 ,药材表面枯黄色或黄褐色 ,
质坚硬、干枯、气腥臭 ,是我国藏、蒙、纳西等民族民
间常用药之一 ,具有止血、镇痛消肿、活血化瘀、补
髓、行气、续筋骨等功效[ 1～3 ] 。2005 年版《中国药
典》中该药材仅对其中的木樨草素作定量测定[ 4 ] ,未
对环烯醚萜苷类成分进行测定。近年来研究越来越
集中于其环烯醚萜苷类成分 ,并有报道其主要活性
成分为环烯醚萜苷类成分[ 5 ,6 ] ,故单纯控制木樨草
素的量不能有效控制独一味药材内在质量 ,以致影
响生产相关产品的质量及药材临床应用的安全有
效。有报道应用分光光度法测定独一味药材中总环
烯醚萜苷的量[7 ] ,钱大玮等[8 ] 用 H PL C 法测定了独
·384·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009206208　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :兰州军区医药卫生科研基金资助项目 (L XH2200409) ;甘肃省科技攻关项目 (2 GS0542A432014214)
作者简介 :樊鹏程 (1980 —) ,男 ,主管药师 ,硕士 ,主要从事中药分析研究。E2mail :fpch2001 @yeah1 net3 通讯作者　贾正平　Tel : (0931) 8994652 　E2mail :jiazp166 @sina1com