全 文 ：a
合煎液
b
缺当归阴性
a
mix ed decoct ion
b
n egative sam ple
w ithout A ng el ic ae Sinensi s R adix
图 4
缺当归阴性对照 HPLC图( 316 nm)
Fig. 4
HPLCChromatograms of negative sample
without Angelicae Sinensis Radix ( 316 nm)
在煎煮过程中更有利于 3种有效成分的溶出,实验
结果从主要成分变化的角度支持了养精种玉汤配伍
合煎的合理性,并为其物质基础的阐明提供了一定
的实验依据。
参考文献:
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知母皂苷 B对照品的快速制备研究
冀
旭1, 2 , 吴智宇1 , 陈千良1 * ,孙文基1
( 1 西北大学生命科学学院 西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室,陕西 西安
710069;
2.西北大学 国家微检测工程技术中心, 陕西 西安
710069)
摘
要:目的
从知母药材中快速分离制备知母皂苷 B对照品。方法
知母药材粗粉用 80%乙醇提取, 经大孔
树脂 D
101 柱吸附 ,以 30%乙醇洗脱, 得到知母总皂苷。用制备 RP
H PLC 对总皂苷进行分离纯化, 采用柱后分
流, ELSD 同时检测,收集含高质量分数知母皂苷 B的组分。结果
制备产品经化学方法和13 C
NMR 鉴定;
HPLC
ELSD检测,质量分数大于 99%。结论
该制备方法简单,重复性好, 效率较高, 所得化合物质量分数高, 可
用于知母皂苷 B对照品的制备。
关键词:知母皂苷 B ;分离; 纯化;制备高效液相色谱
中图分类号: R284. 2; R286 02


文献标识码: A


文章编号: 0253
2670( 2010) 11
1803
04
Rapid preparation of timosaponin B reference substance
JI Xu
1, 2
, WU Zhi
yu1 , CHEN Qian
liang1 , SU N Wen
ji1
( 1 Key Labo rato ry o f Resource Biolog y and Biotechno lo gy in Western China, College o f L ife Sciences, Nor thwest Univer sity ,
Xi!an 710069, China; 2 National Eng ineering Resea rch Center fo r M iniatur ize Detect ion System,
Nor thw est Univer sity, Xi!an 710069, China)
Abstract: Objective
T o establish a method to isolate and prepare timosaponin B reference substance
from A nemar rhenae R hiz oma Methods
Raw mater ial of A nemarr henae R hiz oma was ex tr acted with 80%
ethano l T he concentrated cr ude ext ract w as separ ated on a D
101 macroporous r esin column, by elut ing
the macroporous resin co lumn w ith 30% ethanol, total saponins w ere collected The t imosaponin B  was
separated by prepar at ive rev er sed
phase high per formance liquid chromatogr aphy ( RP
HPLC) coupled w ith
ELSD and co llected according to the chr omatogr aphy Results
T he prepar ed product w as ident ified by
nuclear magnet ic resonance and chem ical method T he purity of t imosaponin B  was > 99% assayed by
analyt ical HPLC
ELSD Conclusion
T he preparation method is simple and rapid, and it can be used fo r
prepar at ion of timo saponin B  reference substance
Key words: t imosaponin B; separat ion; purif icat ion; preparative HPLC
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Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 11 期 2010 年 11月
收稿日期: 2010
03
07





















基金项目:国家药典委员会 2010版一部标准研究项目( YZ
196~ 198) ;西北大学科研启动基金资助项目( OKYQDF159)作者简介:冀
旭( 1987 # ) ,男,硕士研究生,中药学专业。
* 通讯作者
陈千良
T el: ( 029) 88304569
E
mail: cql999@ hotmail com


知母为百合科知母属多年生草本植物知母
Anemarr hena asp hodeloides Bunge的干燥根茎 [ 1] ,
其味苦、甘, 性寒, 归肺、胃、肾经,具有清热泻火、生
津润燥功能,用于外感热病、高热烦渴、肺热燥咳、骨
蒸潮热、内热消渴、肠燥便秘等症[ 2]。知母中的甾体
皂苷类具有多种生理活性, 是其最重要的一类有效
成分[ 3
6] 。知母是常用大宗药材, 主要分布于我国北
方地区,产地众多, 市场上药材来源广泛, 质量差异
较大,质量控制和评价非常重要。历版∃中国药典%
均以菝葜皂苷元作为知母药材测定的指标, 但该方
法是间接反映知母总皂苷的方法,并且操作过程相
对繁琐。知母中皂苷类成分是以苷的形式存在, 所
以直接测定药材中主要皂苷能更真实地评价药材质
量。知母皂苷种类较多, 其中以知母皂苷 B的量最
高[ 7] ,∃中国药典%2010年版已将其作为反映知母皂苷
的指标。制备质量控制用的高质量分数知母皂苷 B
是质量评价的基础,因此本实验室对快速制备高质量
分数知母皂苷B对照品的方法进行了研究。
1
仪器与材料
制备高效液相色谱仪: Alltech 627 HPLC
Pump, Alltech ELSD 800蒸发光散射检测器;分析
型高效液相色谱仪: H itachi 7100 型 HPLC, A lltech
ELSD2000ES 蒸发光散射检测器, N # 2000 色谱工
作站; Bruker
Avance DRX # 500 型核磁共振仪;
Millipor 超纯水仪( Millipor)。
D
101型大孔吸附树脂 (西安蓝晓公司) ; 色谱
纯乙腈( T EDIA) ;分析纯乙腈和其他试剂均为西安
化学试剂厂产品。
知母药材购自河北易县坡仓乡种植基地, 经西
北大学生命科学学院魏朔南教授鉴定为百合科植物
知母 A nemarhena asphodeloids Bunge 的干燥根
茎,凭证药材存放于西北大学陕西省生物医药重点
实验室。知母皂苷 B 对照品为军事医学科学院马
百平研究员惠赠。
2
方法与结果
2 1
知母皂苷粗品的制备:干燥知母根茎 1 kg, 粉
碎成粉末, 80%乙醇回流提取 3次, 前两次 2 h, 第 3
次 1 h。合并提取液, 减压回收乙醇液,水浴蒸至无
醇味。浸膏依次用石油醚( 60~ 90 & )、二氯甲烷、
醋酸乙酯、正丁醇萃取分为 4个部分。将正丁醇部
分用水溶解,滤过后上预处理好的 D
101型大孔树
脂柱,水洗,弃去水洗液。再用 30%乙醇洗脱, 洗脱
液以正丁醇
乙酸
水( 4∋1 ∋ 5)为展开剂,薄层色谱
法检查,至目标皂苷不再流出, 收集 30%乙醇洗脱
液,减压蒸干,即得知母皂苷粗品。经检测知母皂苷
B 质量分数为 30%。
2 2
制备 RP
HPLC 分离纯化
2 2 1
制备色谱条件: GRA CE Adsor bo sphere C8
色谱柱( 250 mm ( 22 mm, 10
m) ; 流动相为乙腈

水( 22∋ 78) ;体积流量 15 mL/ m in。制备柱柱后分
流,分流比 1∋ 5;蒸发光散射检测器检测, 蒸发温度
40 & ,雾化气体体积流量 3 0 L/ min。
2 2 2
对照品的分离纯化: 取知母皂苷粗品 100
mg,溶于 2 mL 超纯水中, 过 0 45
m 滤膜, 作为制
备色谱进样溶液。部分收集器参数设置为每 0 5
m in 收集一管。制备色谱图见图 1。通过部分收集
器参数的设置以及对制备图谱的分析, 决定对虚线
之间流出部分 (保留时间在 25 0 ~ 26 5 min 的组
分)进行收集并对收集部分进行减压干燥。
图 1
制备 HPLC图谱
Fig. 1
Preparative HPLC chromatogram
2 3
知母皂苷 B产品的分析和鉴定
2 3 1
质量分数分析: 汉邦 C8 色谱柱( 250 mm (
4 6 mm, 5
m) ; 流动相为乙腈
水( 1∋3) ;体积流量
0 8 mL/ min; 蒸发光散射检测器检测, 蒸发温度
105 & ; 气体体积流量: 2 8 L/ min。取收集得到的
知母皂苷 B粉末 10 mg, 溶解于 10 mL 30%丙酮
中,经高效液相色谱法检测,以面积归一化法测得其
质量分数为 99 3%。见图 2。
图 2
知母皂苷 B产品分析
Fig. 2
HPLC Chromatogram of timosaponin B product
2 3 2
回收率的计算:经称量, 收集得到知母皂苷
B 粉末为 19 5 mg, 故该方法一次分离制备的回收
率为: 19 5 mg / ( 100 mg ( 30%) = 65%。
∀1804∀ 中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 11 期 2010 年 11月
2 3 3
产品的结构确证:纯化后得到的物质为白色
粉末, 熔点为 246 ~ 248 & , Mo lish 反应呈阳性,
Liebermann
Bur chard反应呈阳性, Ehr lish 反应显
红色。13C
NMR( C5D5N) : 30 9( C
1)、27 0( C
2)、
75 2( C
3)、30 9( C
4)、37 0( C
5)、27 0( C
6)、26 8
( C
7)、35 5( C
8)、40 2( C
9)、35 0( C
10)、21 2( C

11)、40 4( C
12)、41 2( C
13)、56 4( C
14)、32 5( C

15)、81 3( C
16)、64 0( C
17)、16 7( C
18)、24 0( C

19)、40 6( C
20)、16 5( C
21)、110 7( C
22)、37 2
( C
23)、28 3( C
24)、34 5( C
25)、75 6( C
26)、17 5
( C
27)、102 6( Gal C
1)、81 9( Gal C
2)、77 0( Gal
C
3)、69 9( Gal C
4)、76 6( Gal C
5)、62 1( Gal C

6)、106 2 ( Glc C
1)、75 5( Glc C
2)、78 0( Glc C

3)、71 6( Glc C
4)、78 5( Glc C
5)、62 8( Glc C
6)、
105 2( Glc
1!)、75 3 ( Glc
2!)、78 6 ( Glc
3!)、71 6
( Glc
4!)、78 6( Glc
5!)、62 8( Glc
6!)。数据与文献
报道[ 3] 基本一致。产品与马百平研究员惠赠的知母
皂苷 B 对照品共薄层色谱,显示为同一斑点。
3
讨论
知母皂苷 B 属于呋甾皂苷, 呋甾皂苷在无水
甲醇中加热回流时, 其 22位碳相连的羟基会发生甲
醚化使得原结构发生转变 [ 8] , 与甲醇接触也可导致
样品衍生化 [ 9]。故流动相不能选择甲醇
水。实验
首先采用乙醇
水为洗脱剂, 但分离效果不好, 而且
乙醇黏度较高, 导致柱压偏高。而采用乙腈
水作为
流动相,分离的效果较好, 且柱压合适, 可使用较大
的体积流量,提高了效率。
制备色谱条件优化中, 先参照分析 HPLC 条
件, 流动相为乙腈
水( 1 ∋ 3) , 放大体积流量为 15
mL/ min。但在该条件下, 皂苷 B 出峰时间偏早,
无法充分分离, 不能得到高质量分数的知母皂苷
B。故将乙腈
水比例减小为 1 ∋ 4, 使出峰时间延
后以达到增进分离效果。在该比例下, 虽分离和峰
形均良好, 但是出峰时间在 60 min之后,时间过长。
经调整,最终确定洗脱条件为:乙腈
水( 22∋ 78) , 体
积流量为 15 mL/ min。在此条件下分离较好, 保留
时间合适,在较短的时间内通过分部收集,可以获得
比较多的高质量分数知母皂苷 B 。
为了充分利用固定相, 对制备液相色谱的进样
量进行了优化, 以便在较短的时间内得到尽可能多
的高质量分数对照品。最初以 50 mg 粗品溶解进
样开始,逐步提高进样量。结果表明, 进样量为 50
mg 皂苷粗品时, 分离效果很好, 但制备量偏小。当
进样量超过 100 mg 时,分离变得较差, 分部收集也
达不到获得较多高纯产品的目的。因此, 最终确定
其进样量为 100 mg。
本实验室以前使用常压开管反相色谱柱分离知
母皂苷 B ,采用乙醇
水作为洗脱剂, 周期较长,整
个分离过程须一周,而且分离效果较差,一次制备得
到高质量分数的对照品比例相对较小。与之相比,
通过制备液相分离, 则可以在短时间内得到较大量
的高质量分数知母皂苷 B 对照品,显示出本方法
的高效。
与大部分皂苷类成分一样,知母皂苷 B 没有
紫外吸收,蒸发光散射检测器是目前最灵敏的检测
知母皂苷 B 的方式[ 10]。但蒸发光散射检测器对
样品进行的检测是破坏性的检测。在本实验中, 通
过制备柱后用分流阀分流, 使少部分经检测器检测,
大部分由部分收集器分部收集, 可以使得在制备过
程中可在线即时获得制备分离的色谱图, 通过色谱
图收集高纯部分。这样比离线检测后再决定收集的
部分,大大提高了效率。
本方法检测和收集同时进行, 所以分流进入检
测器的这部分知母皂苷 B 被破坏, 无法回收。并
且,为了保证质量分数, 实验中通过部分收集器, 只
收集中间高质量分数部分,对于质量分数不高的部
分(即主峰前部分以及后部分)并未收集, 没有计算
在回收率中。因此,回收率显得相对略低。但是,质
量分数不高的部分样品可作为下次分离时的粗品继
续使用。
本方法分离得到的知母皂苷 B 质量分数高,
完全满足定量测定用对照品的要求。另外,本方法
简单省时,是快速制备高纯度的知母皂苷 B 对照
品较好的方法。
致谢: 感谢西北大学科研启动基金和药典委员
会项目的经费支持; 军事医学科学院马百平研究员
惠赠对照品和对一些相关问题指导; 西北大学化学
系代测核磁共振。
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龙胆泻肝丸物质组释放动力学特征研究
郭
桢1, 2 ,凌
昳1, 2 ,张继稳2 ,葛卫红1 ,石森林1 *
( 1 浙江中医药大学药学院, 浙江 杭州
310053; 2 中国科学院上海药物研究所 药物释放系统研究中心,上海
201203)
摘
要:目的
研究龙胆泻肝丸的物质组释放动力学特征。方法
按∃中国药典%桨法 100 r / min 测定龙胆泻肝丸
的释放度,运用紫外吸收光谱法结合 Kalman 滤波法对龙胆泻肝丸物质组进行定量, 并绘制释放曲线,获得龙胆泻
肝丸的物质组释放动力学特征和多维释放特征。结果
龙胆泻肝丸的缓释特征明显, 动力学特征符合Weibull和
Higuchi释放模型。结论
龙胆泻肝丸的释放机制可能属于骨架溶蚀型, 提示传统丸剂具有明显的缓释特征。
关键词:龙胆泻肝丸; 中药物质组;释放动力学; 紫外吸收光谱法
中图分类号: R286 02


文献标识码: A


文章编号: 0253
2670( 2010) 11
1806
03
Materiomic release kinetics of Longdan Xiegan Pill
GUO Zhen
1, 2
, L ING Die
1, 2
, ZHANG Ji
wen2 , GE Wei
hong1 , SH I Sen
lin1
( 1 Colleg e o f Pharmaceutical Sciences, Zhejiang University o f T raditional Chinese Medicine, H angzhou 310053, China;
2 Center for D rug Deliver y Sy st em, Shanghai Institut e o f Mater ia Medica, Chinese Academy
of Sciences, Shanghai 201203, China)
Abstract: Objective
T o study materiomic release kinet ics of Longdan Xiegan Pill Methods
The ma

teriom ics release kinetics, the r elease prof iles, and the multidimensional release characterist ic of Longdan
Xiegan Pill w ere determ ined by the paddle method w ith a rotate speed at 100 r/ m in in Chinese P harma

cop ia, and the mater iome w as quant if ied by U V
vis combined Kalman filter method Results
Longdan
Xiegan Pil l behaved typical sustained release pro file w hich w as consistent w ith Weibul l and H iguchi release
models Conclusion
T he sustained release prof ile of Longdan Xiegan Pill is depicted quant itat ively by ma

teriom ic release dynam ics in this paper, w hich demonst rates the obvious sustained r elease characterist ic of
the t radit ional pills
Key words: Longdan Xiegan Pill; mater iome of Chinese materia medica; release dynamics; U V
vis


龙胆泻肝丸系由龙胆草、黄芩、栀子、泽泻、木
通、车前子、生地、当归、柴胡、甘草等制成的水泛丸,
泻肝而不伤肝, 利湿而不伤阴,除用于治疗高血压、
急性胆囊炎、尿路感染等症外,现在常用于乙型病毒
性肝炎等一些慢性病的治疗。龙胆泻肝丸针对的病
症多需长期服药,因此深入研究龙胆泻肝丸多组分
缓释机制具有较大的实用意义。对于龙胆泻肝丸全
组分或多组分释放/溶出度研究更未见报道, 仅针对
某个或少数组分进行定量分析, 如以龙胆苦苷作为
指标成分研究龙胆泻肝丸的溶出度[ 1] ; 亦或以龙胆
苦苷、黄芩苷、栀子苷作为指标性成分研究龙胆泻肝
丸的溶出度[ 2] ,这几乎忽略了剂型因素、辅料及其他
环境因素可能给制剂释放特征带来的影响,难以对
龙胆泻肝丸中多组分释放/溶出动力学进行全面监
控[ 3
5] 。中药物质组释放动力学及其同步性评价方
法的基础是设定多组分中药的物质组成特征、各组
分的量之间的相互关系为中药作用整体性的量化指
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基金项目:国家高技术研究发展计划( 863计划)资助项目( 2006AA02Z336 ) ;国家科技支撑计划项目( 2006BA1098B08
08) ; 中国科学院上海药物研究所新药团队基础研究项目( 07G603F015)作者简介:郭
桢,男,硕士, 2007年毕业于中国药科大学,研究方向:中药新剂型、制剂新技术研究与新药开发。
E
mail: guozh en10012002@ yahuo. com. cn
* 通讯作者
石森林
E
mail: pjstone@ 163 com cn