全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 7 期 2011 年 7 月 ·1334·
HPLC-小粒径色谱柱法测定红景天提取物中红景天苷、酪醇和络赛维
邹 亮 1，王战国 2*，胡慧玲 3，阳明福 4，包希福 5，王安齐 3
1. 成都大学生物产业学院，四川 成都 610106
2. 四川大学生命科学学院，四川 成都 610065
3. 成都中医药大学药学院，四川 成都 610075
4. 成都华高药业有限公司，四川 成都 610041
5. 茂县羌医药研究所，四川 茂县 623200
摘 要：目的 建立应用小粒径色谱柱快速测定红景天（蔷薇红景天）提取物中红景天苷、酪醇和络赛维的 HPLC 方法。
方法 色谱柱为 HALO C18（150 mm×4.6 mm，2.7 μm）；流动相为乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脱：0～5 min，
7%～15% A；5～8 min，15%～18% A；8～20 min，18%～30% A；20～25 min，30%～40% A；25～30 min，40%～55% A；
体积流量 0.6 mL/min；柱温 30 ℃；检测波长 280 nm；进样量 5 μL。结果 红景天苷、酪醇、络赛维 15 min 内达到分离，
峰形尖锐对称，线性范围分别为 0.41～106.00、0.42～108.00、0.38～98.00 μg/mL，平均加样回收率分别为 99.29%、98.82%、
98.33%。采用所建立的方法测定不同来源红景天提取物的多种成分，结果表明单一采用红景天苷作为质量控制指标，9 批样
品的差异度较小（RSD＝7.95%），如果将酪醇或络赛维引入质量评价体系，则红景天提取物各批次间就存在较大的差异（酪
醇，RSD＝24.42%；络赛维，RSD＝50.55%）；但是，同一单位提供的样品间的差异度较小。结论 建立的 HPLC-小粒径色
谱柱法高效、准确，经济，精密度好，灵敏度高，可用于红景天提取物中的红景天苷、酪醇和络赛维的同时快速测定；引入
多成分的测定方法，可以评价不同厂家提取物质量的差异，并筛选出导致质量差异的成分，为提取物的工艺优化提供参考。
关键词：小粒径色谱柱；HPLC；红景天提取物；红景天苷；酪醇；络赛维
中图分类号：R286.02 文献标志码：B 文章编号：0253 - 2670(2011)07 - 1334 - 04
Rapid determination of salidroside, tyrosol, and rosavin in Rhodiola rosea extract
by HPLC using a fused-core column
ZOU Liang1, WANG Zhan-guo2, HU Hui-ling3, YANG Ming-fu4, BAO Xi-fu5, WANG An-qi3
1. College of Biological Industry, Chengdu University, Chengdu 610106, China
2. College of Life Sciences, Sichuan University, Chengdu 610065, China
3. College of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, China
4. Chengdu Wagott Pharmaceutical Co., Ltd., Chengdu 610041, China
5. Maoxian Qiang Medicine Insititute, Maoxian 623200, China
Key words: fused-core column; HPLC; Rhodiola rosea L. extract; salidroside; tyrosol; rosavin

红景天（蔷薇红景天）Rhodiola rosea L.是我国
重要的常用中药之一，主要有效成分为红景天苷、
酪醇、络赛维、洛塞琳、洛缌等成分，其中络赛维
为红景天中的特有成分[1]。近年来，随着国际市场
的需要，红景天提取物得到广泛应用，而其质量控
制是实现其药效的基本保证。但目前，对于红景天
提取物质量评价报道较少，此外由于红景天及其提
取物中成分复杂，特别是成分间极性相差较大，现
有 HPLC 法所采用的常规色谱柱对其进行定量测
定，需较长时间才可达到较好的分离效果[2-5]。文献
报道 HPLC 法测定红景天或红景天提取物中有效成
分，常采用色谱柱粒径为 4.5 μm。由于红景天提取

收稿日期：2010-10-11
基金项目：国家教育部博士点基金新教师项目（200806101089）
作者简介：邹 亮（1979—），男，四川省万源市人，博士，副教授，从事中药药剂学与中药质量标准化研究。
Tel: (028)84616526 E-mail: zouliang@cdu.edu.cn
*通讯作者 王战国 Tel: (028)85416957 E-mail: wangzhanguo@scu.edu.cn wzg103@126.com
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物中成分复杂，普通色谱柱无法在相对较短时间内
将其有效分离，故本课题组所建立的 HPLC 法中选
用粒径更小（2.7 μm）的高效能色谱柱，以更小的
样品用量（进样量 5 μL）、更少的流动相（体积流
量 0.6 mL/min）实现在常规高效液相色谱仪上的测
定分析，达到高效、准确、快速、经济的效果。本
实验首次采用新型小粒径（2.7 μm）高效色谱柱，建
立了在相对较短时间内同时快速测定红景天提取物
中红景天苷、酪醇、络赛维的方法，为红景天提取
物的质量控制提供高效、准确、便捷的参考方法。
1 仪器与试药
Agilent 1200 高效液相色谱仪，包括四元梯度泵
单元、自动脱气单元、自动控温进样单元、DAD 检
测器单元和 Agilent 1200 色谱工作站等（Agilent
Techologies，美国）；CP225D 和 BS 210S 电子天平
（Sartorius，德国）；KH—300DB 型数控超声仪（昆
山禾创超声仪器有限公司）；HALO C18 色谱柱
（150 mm×4.6 mm，2.7 μm）（Advanced Materials
Technology，美国）。TGL—16C 台式高速离心机（上
海市安亭科技仪器厂）；WSD—UP—III—10 精密型
纯水机（成都威思达智能科技有限公司）。
红景天提取物（成都华高药业有限公司提供 5
批样品，茂县羌医药研究所提供 4 批样品）；红景天
苷对照品（批号 A0076，质量分数 99%）、酪醇对
照品（批号 A0312，质量分数 98%、）、络赛维对照
品（批号 A0078，质量分数 98%）均为成都曼斯特
生物科技有限公司产品。
乙腈、甲酸为色谱纯，水为超纯水，其余试剂
均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 HALO C18（150 mm×4.6 mm，2.7
μm）。流动相为乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B），
梯度洗脱程序：0～5 min，7%～15% A；5～8 min，
15%～18% A；8～20 min，18%～30% A；20～25
min，30%～40% A；25～30 min，40%～55% A；
柱温 30 ℃；体积流量 0.6 mL/min；检测波长 280
nm；进样量 5 μL。
2.2 混合对照品储备液的制备
分别称取红景天苷、酪醇、络赛维对照品约 5.00
mg，精密称定，置 50 mL 棕色量瓶中，加入甲醇-
水（30∶70）约 45 mL，超声处理 15 min（100 Hz），
冷却后，用甲醇-水（30∶70）定容至刻度，得红景
天苷 106.00 μg/mL、酪醇 108.00 μg/mL、络赛维
98.00 μg/mL 的混合对照品储备溶液。
2.3 供试品溶液的制备
称取红景天提取物样品约 10.00 mg，精密称定，
置 10 mL 棕色量瓶中，加入甲醇-水（30∶70）约 8
mL，超声处理 15 min，冷却后，用甲醇-水（30∶
70）定容至刻度，得红景天提取物供试品溶液，进
样前，过 0.2 μm 微孔滤膜。
2.4 线性关系考察
将混合对照品储备液作为 1 号混合对照品溶液
（S1）。采用倍数稀释法，精密量取 S1 5 mL，置 10
mL 棕色量瓶中，加入甲醇-水（30∶70）约 4 mL，
超声处理 5 min，混匀，冷却后，用甲醇-水（30∶
70）定容至刻度，得 2 号混合对照品溶液（S2）；
按上法，依次获得 S3～S9。分别过 0.2 μm 微孔滤
膜后，按上述色谱条件进样测定，记录色谱峰。以
色谱峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标进行线
性回归，得回归方程：红景天苷 Y＝1.921 2 X＋
0.640 2，r＝0.999 95；酪醇 Y＝5.029 5 X＋1.382 7，
r＝0.999 95；络赛维 Y＝1.522 1 X＋0.332 6，r＝
0.999 95；表明红景天苷在 0.41～106.00 μg/mL，酪
醇在 0.42～108.00 μg/mL，络赛维在 0.38～98.00
μg/mL 与峰面积呈良好线性关系。
2.5 系统适应性考察
选择 4 号混合对照品溶液（S4）和红景天提取
物供试品溶液（样品 1），按上述色谱条件进样分析，
记录色谱图。红景天苷、酪醇、络赛维峰形尖锐对
称，保留时间分别为 7.4、8.8、14.8 min，分离度均
大于 1.5，理论塔板数均大于 5 000，拖尾因子符合
分析要求，供试品溶液中其他物质不干扰红景天苷、
酪醇、络赛维的测定。色谱图见图 1。
2.6 精密度试验
选择高、中、低 3 份混合对照品溶液（S2、S4、
S6），按上述色谱条件进样分析，S2、S4、S6 分别
连续进样 5 次，记录色谱图，计算各成分峰面积的
RSD，结果见表 1。
2.7 稳定性试验
取样品 1 制备供试品溶液，在室温（25 ℃）条
件下分别于 0、4、8、16、24 h 按上述色谱条件进
样测定，记录色谱图，计算得红景天苷、酪醇、络
赛维峰面积的 RSD 分别为 1.91%、2.83%、1.27%，
表明供试品溶液在 24 h 内稳定性良好。
2.8 重现性试验
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1-红景天苷 2-酪醇 3-络赛维
1-salidroside 2-tyrosol 3-rosavin

图 1 混合对照品（A）和红景天提取物（B）的
HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of mixed reference
substance (A) and R. rosea extract (B)

表 1 混合对照品溶液的精密度
Table 1 Precision tests of mixed reference substance solution
成 分 质量浓度/(μg·mL−1) RSD/%
红景天苷 3.31 0.81
13.25 0.99
53.00 0.17
酪醇 3.38 0.50
13.50 1.04
54.00 0.14
络赛维 3.06 1.13
12.25 0.90
49.00 0.22

取样品 1 平行制备供试品溶液 5 份，按上述色
谱条件进样测定，记录色谱图，计算得红景天苷、
酪醇、络赛维质量分数的RSD分别为1.88%、3.45%、
1.79%。
2.9 加样回收率试验
取样品 1 共 5 份，每份约 5.00 mg，精密称定，
置 10 mL 棕色量瓶中，分别精密加入红景天苷、酪
醇、络赛维混合对照品溶液 1.00 mL（红景天 160.00
μg/mL、酪醇 15.00 μg/mL、络赛维 140.00 μg/mL），
再分别加入甲醇-水（30∶70）溶液约 7 mL，制备
供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，计算得红
景天苷、酪醇、络赛维的平均回收率分别为 99.29%、
98.82%、98.33%，RSD 分别为 0.33%、1.44%、0.81%。
2.10 样品测定
分别制备 9 批红景天提取物供试品溶液，按上
述色谱条件进样测定，记录色谱图，外标法计算红
景天苷、酪醇、络赛维的质量分数，结果见表 2。

表 2 红景天提取物样品的测定（n＝3）
Table 2 Determination of R. rosea extract samples (n = 3)
样品号 厂家
红景天苷/
%
酪醇/
%
络赛维/
%
1 成都华高药业有限公司 3.20 0.29 2.80
2 成都华高药业有限公司 2.86 0.25 2.21
3 成都华高药业有限公司 3.00 0.27 2.32
4 成都华高药业有限公司 3.12 0.24 2.44
5 茂县羌医药研究所 2.71 0.33 0.83
6 茂县羌医药研究所 3.43 0.42 1.08
7 成都华高药业有限公司 3.02 0.34 2.91
8 茂县羌医药研究所 2.75 0.39 0.48
9 茂县羌医药研究所 2.87 0.49 0.86

3 讨论
3.1 多成分的选择依据
红景天提取物中含有红景天苷、酪醇、络赛维、
洛塞琳、洛缌等成分，其中后 3 种为红景天特有成
分。本实验选取有效成分中具有代表性的且对照品
相对较易得的苷（红景天苷、络赛维）及苷元（酪
醇）进行定量测定方法学探索，为后期开展红景天
提取物的综合质量控制评价提供基础数据和参考。
采用所建立的方法对不同来源的红景天提取物
中的多种成分进行测定，结果表明单一采用红景天
苷作为质量控制指标，9 批样品的差异度非常小，如
果将酪醇或络赛维引入质量评价体系，则红景天提
取物各批次间就存在较大的差异；但是，同一来源
的样品间的差异度较小。因此引入多成分的测定方
法，可以评价不同来源提取物质量的差异，并筛选
出导致质量差异的成分，为提取物的工艺优化提供
参考。
3.2 HPLC-小粒径色谱柱法的优势
常规色谱柱很难实现极性差别较大的物质的快
速分离测定[2-4]，而 HPLC-小粒径色谱柱法则可以实
现。常规色谱柱分离效能较差，而小粒径色谱柱分
离效能高，且灵敏度高，可实现小量进样分析要求。
常规色谱柱分离所需的流动相用量大，而小粒径色
谱柱可实现较小用量达到实验分析的要求。
HPLC-小粒径色谱柱法需要对对照品溶液、供
1
2
3
1
2
3
A
B
0 10 20 30
t / min
0 10 20 30
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试品溶液以及流动相进行小粒径滤膜（0.2 μm）滤
过的前处理，还需要克服柱压过高的问题，这需要
选择合适的小粒径色谱柱。本实验选择 2.7 μm 粒径
色谱柱，而没有选择 1.8 μm 或 2.2 μm 粒径色谱柱
就是考虑到实验需符合普通高效液相色谱仪柱压要
求，而不超过其柱压承受范围。
参考文献
[1] 朱 薇. 反相高效液相色谱法测定蔷薇红景天片中
Rosavin 的含量 [J]. 中成药, 2007, 29(4): 附 1-附 2.
[2] 杨晓艳, 芦启琴, 娄灯吉, 等. HPLC 法同时测定红景
天中红景天苷、酪醇和没食子酸 [J]. 分析实验室 ,
2009, 28(增刊): 57-60.
[3] 卢义德, 姚 欣, 张 囡, 等. HPLC 法测定玫瑰红景
天中 3 种有效成分的含量 [J]. 西北药学杂志, 2009,
24(6): 452-453.
[4] 易智彪, 赖小平, 许冬瑾. HPLC 法同时测定红景天中
红景天苷和酪醇 [J]. 中草药, 2009, 40(11): 1827-1830.
[5] Shao Y D, Su Y F, Yu H J, et al. Determination of marker
compounds in plants of Rhodiola L. from different
habitats by RP-HPLC [J]. 中草药, 2004, 35(5): 505-508.



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