Optimization of reaction conditions and methodological investigation on microtox-based fast testing system for traditional Chinese medicine injection-文献传递-植物通论文库

摘要：基于费氏弧菌CS234的Microtox微毒测试体系优化与方法学考察,为该方法更加可靠地应用于中药注射剂综合急性毒性的测试打下基础。采用Plackett-Burman法优化设计影响费氏弧菌发光的因素,建立以七水硫酸锌为标准毒物和质量控制样品的反应体系,得到最优发光条件为:费氏弧菌冻干粉平衡15 min后加入复苏液1 mL,混匀10 min,取100μL菌液测试初始发光度,随后立即加入1 mL复苏液或待测样品,反应10 min后再次测试相应发光强度,上述操作均在(15±1)℃条件下完成;复苏稀释液、渗透压调节液及七水硫酸锌储备液不干扰费氏弧菌发光强度的测定,该方法特异性良好;质量控制样品、定量下限样品批内精密度<5%,批间精密度<10%,准确度在85.8%~103.2%。七水硫酸锌溶液在3.86~77.27 mg·L^-1,标准曲线方程为y=21.78lnx-15.14,R²=0.998。该方法下ZnSO₄·7H₂O对费氏弧菌的IC₅₀为19.90 mg·L^-1;对七水硫酸锌储备液及其质量控制样品分别连续考察120,8 h,其RSD<2%,提示其在室温及4℃保存条件下稳定性良好;pH 4.5~8.0时,费氏弧菌发光的波动控制在±10%,该pH可满足绝大多数中药注射剂的测试需要。针对费氏弧菌CS234建立的微毒测试体系进行优化后,具有良好的特异性、稳定性、灵敏度、准确度及适应性,提示可应用于中药注射剂综合急性毒性的测试。

Abstract:Vibrio fischeri CS234 was used to establish and optimize microtox assay system, laying a foundation for the application of this method in comprehensive acute toxicity test of traditional Chinese medicine (TCM) injections. Firstly, the Plackett-Burman method was carried out to optimize the factors which would affect Vibrio fischeri CS234 luminescence. Secondly, ZnSO₄·7H₂O was chosen as reference substance to establish its reaction system with quality control samples. The optimal luminescence conditions were achieved as follows:①At a temperature of (15±1)℃, Vibrio fischeri CS234 lyophilized powders were balanced for 15 min, then, 1 mL resuscitation fluid was added and blended for 10 min. 100μL bacteria suspension was taken to measure the initial luminescence intensity, and then 1 mL resuscitation fluid or test sample was immediately added;after reaction for 10 min, corresponding luminescence intensity was measured again. Resuscitation diluent, osmotic pressure regulator and ZnSO₄·7H₂O stock solution showed no interference to the determination of Vibrio fischeri CS234 luminescence intensity, so this method was of good specificity. The within-and between-batch precisions of quality controls and the lower limit of quantification (LLOQ) samples were <5% and <10% respectively, while the accuracy ranged between 85.8% and 103.2%. The standard curve equation of ZnSO₄·7H₂O ranged from 3.86 mg·L^-1 to 77.22 mg·L^-1(final concentrations) was y=21.78lnx-15.14, R²=0.998; meanwhile, IC₅₀ of ZnSO₄·7H₂O to Vibrio fischeri CS234 was 19.90 mg·L^-1. ZnSO₄·7H₂O stock solution and its quality controls were continuously investigated for 120 h and 8 h respectively, and their RSD was lower than 2%, indicating stability at room temperature and 4℃ storage conditions. Between pH 4.5-8.0, luminescence intensity of Vibrio fischeri CS234 was controlled within ±10%, and such pH value range could meet the testing needs of the vast majority of traditional Chinese medicine injections. The Vibrio fischeri strain CS234 assay system was specific, stable, sensitive, accurate and adaptable after optimization, so it was suitable for the comprehensive acute toxicity assessment of TCM injections.

全文：２０１６
y
５
z À
４１
ÁÀ
９
}
Ｖｏｌ４１，Ｎｏ．９Ｍａｙ，２０１６
·
>ZX[>
·
［
gh)(
］　２０１５１２０８
［
ijkR
］　
«_
“
g*Fhij
”
bkg*le
（２０１５ＺＸ０９５０１００４００１００５）；
«_`abtcSef
（８１４７０１８０）；
«_ Â:bmle
（２０１５０７００４）；
óô£bkÀÁef
（２０１３ＳＺ０１８５，２０１６ＳＺ００３１）；
óô£ühãËÛbmef
（２０１４Ｆ０８６）；
óô£bkõcXbm:¡le
（Ａ２０１４Ｎ１８）
［
le?m
］　
+
，
pqrst
，
mno
，
uvåwühhËt
、
ühxyr®j
、
h|VÓhö÷mn%O
，Ｅｍａｉｌ：ｚａｒｍｙ＠
１８９ｃｎ
［
?mno
］　

，
pqmnr
，
uvåwühhË|øËmn
，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｒｙ６６３３３＠ｈｏｔｍａｉｌｃｏｍ
ê
Ｍｉｃｒｏｔｏｘ
() $,ëìíîïðñºò óôõö÷øù_Öúûüý １，２， r ２，２， + ２ （１． Uùüh*t ， óô Uù ６１００７２；２． óô£ühbt «_ühãËÛühxyr©ªgmn ， óô Uù ６１００４１）［ pq ］　 ê7iiÎ ＣＳ２３４Ｍｉｃｒｏｔｏｘ îïºòóôù_Öúûüý ， ÓÚúû»2?`Fö¯ê$ ,ëìíbª*
!ï!ºò]S¶
。
w¯
ＰｌａｃｋｅｔＢｕｒｍａｎ
ûù_ïsØÙ7iiÎm_S
，
yzÂkJD`Óëìï¨#
aõöóô
，
：
7iiÎàÜþE
１５ｍｉｎ
ÿ2ùf+>
１ｍＬ，
Üî
１０ｍｉｎ，
3
１００μＬÎ>º
ò9mm_^
，
Îÿz~2ù
１ｍＬ
f+>î¼ºa
，
õö
１０ｍｉｎ
ÿ_}ºòâöm_a^
，
fuÍÆ¤
（１５±１）℃
÷ø
Sê«
；
f+)½>
、
YÌ»Á>kJD`X>¥M7iiÎm_a^º`
，
ÚúûÈE!/
；

a
、`
SCa©8Õ]^
＜５％，
©nÕ]^
＜１０％，
ì\^¤
８５８％～１０３２％。
kJD`Î>¤
３８６～７７２７ｍｇ·
Ｌ－１，
ëìüúúÓ
ｙ＝２１７８ｌｎｘ－１５１４，Ｒ２＝０９９８。
ÚúûS
ＺｎＳＯ４·７Ｈ２ＯÏ7iiÎＩＣ５０Ó１９９０ｍｇ·Ｌ
－１；
ÏkJ
D`X>a¡^JKüý
１２０，８ｈ，

ＲＳＤ＜２％，
2Ä¤ð
４℃
íµ÷øSÓ`!/
；ｐＨ４５～
８０
O
，
7iiÎm_Ã¤
±１０％，
Ú
ｐＨ
?>?®wZ= $,ëìíºò8_ 。 #Ï7iiÎ ＣＳ２３４ yzîï ºòóônù_ÿ ， ¼B/ÈE! 、 Ó`! 、 -Ò^ 、 ì\^`ö! ， 2Ä?ö¯ê$ ,ëìíbª*!ï!ºò
。
［
rst
］　
$,ëìí ； îïºò ； *!ï! ； 7iiÎ ＣＳ２３４ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｒｅａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｎｄｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｎｍｉｃｒｏｔｏｘｂａｓｅｄｆａｓｔｔｅｓｔｉｎｇｓｙｓｔｅｍｆｏｒｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎＸＩＯＮＧＪｉｎｇｙｕｅ１，２，ＬＩＸｉａｏｒｏｎｇ２，ＹＡＮＬｉａｎｇｃｈｕｎ２，ＺＨＡＯＪｕｎｎｉｎｇ２ （１．ＣｈｅｎｇｄｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００７２，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｉｃｈｕａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＱｕａｌｉｔｙｏｆｔｈｅＳｔａｔｅＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００４１，Ｃｈｉｎａ）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　ＶｉｂｒｉｏｆｉｓｃｈｅｒｉＣＳ２３４ｗａｓｕｓｅｄｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎｄｏｐｔｉｍｉｚｅｍｉｃｒｏｔｏｘａｓｓａｙｓｙｓｔｅｍ，ｌａｙｉｎｇａｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｉｎｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅａｃｕｔｅｔｏｘｉｃｉｔｙｔｅｓｔｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ（ＴＣＭ）ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓＦｉｒｓｔｌｙ，ｔｈｅＰｌａｃｋｅｔＢｕｒｍａｎｍｅｔｈ ｏｄｗａｓｃａｒｉｅｄｏｕｔｔｏｏｐｔｉｍｉｚｅｔｈｅｆａｃｔｏｒｓｗｈｉｃｈｗｏｕｌｄａｆｅｃｔＶｉｂｒｉｏｆｉｓｃｈｅｒｉＣＳ２３４ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅＳｅｃｏｎｄｌｙ，ＺｎＳＯ４·７Ｈ２ＯｗａｓｃｈｏｓｅｎａｓｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓｕｂｓｔａｎｃｅｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｔｓｒｅａｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｗｉｔｈｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｓａｍｐｌｅｓＴｈｅｏｐｔｉｍａｌｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅａｃｈｉｅｖｅｄａｓｆｏｌｏｗｓ：①Ａｔａｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆ（１５±１）℃，ＶｉｂｒｉｏｆｉｓｃｈｅｒｉＣＳ２３４ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄｐｏｗｄｅｒｓｗｅｒｅｂａｌａｎｃｅｄｆｏｒ１５ｍｉｎ，ｔｈｅｎ，１ｍＬｒｅｓｕｓ ·２２６１· j=qÉ ： ê Ｍｉｃｒｏｔｏｘ ()$ ,ëìíîïðñºòóôõö÷øù_Öúûüý
ｃｉｔａｔｉｏｎｆｌｕｉｄｗａｓａｄｄｅｄａｎｄｂｌｅｎｄｅｄｆｏｒ１０ｍｉｎ１００μＬｂａｃｔｅｒｉａｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｗａｓｔａｋｅｎｔｏｍｅａｓｕｒｅｔｈｅｉｎｉｔｉａｌｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｎｔｅｎｓｉｔｙ，
ａｎｄｔｈｅｎ１ｍＬｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｏｎｆｌｕｉｄｏｒｔｅｓｔｓａｍｐｌｅｗａｓｉｍｍｅｄｉａｔｅｌｙａｄｄｅｄ；ａｆｔｅｒｒｅａｃｔｉｏｎｆｏｒ１０ｍｉｎ，ｃｏｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｎｔｅｎｓｉｔｙ
ｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄａｇａｉｎＲｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｏｎｄｉｌｕｅｎｔ，ｏｓｍｏｔｉｃｐｒｅｓｓｕｒｅｒｅｇｕｌａｔｏｒａｎｄＺｎＳＯ４·７Ｈ２Ｏｓｔｏｃｋｓｏｌｕｔｉｏｎｓｈｏｗｅｄｎｏｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｔｏｔｈｅ
ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＶｉｂｒｉｏｆｉｓｃｈｅｒｉＣＳ２３４ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｎｔｅｎｓｉｔｙ，ｓｏｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｗａｓｏｆｇｏｏｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙＴｈｅｗｉｔｈｉｎａｎｄｂｅｔｗｅｅｎｂａｔｃｈ
ｐｒｅｃｉｓｉｏｎｓｏｆｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｓａｎｄｔｈｅｌｏｗｅｒｌｉｍｉｔｏｆｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＬＬＯＱ）ｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅ＜５％ａｎｄ＜１０％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｈｉｌｅｔｈｅａｃ
ｃｕｒａｃｙｒａｎｇｅｄｂｅｔｗｅｅｎ８５８％ａｎｄ１０３２％ＴｈｅｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅｅｑｕａｔｉｏｎｏｆＺｎＳＯ４·７Ｈ２Ｏｒａｎｇｅｄｆｒｏｍ３８６ｍｇ·Ｌ
－１ｔｏ７７２２ｍｇ
·Ｌ－１（ｆｉｎａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ）ｗａｓｙ＝２１７８ｌｎｘ－１５１４，Ｒ２＝０９９８；ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ＩＣ５０ｏｆＺｎＳＯ４·７Ｈ２ＯｔｏＶｉｂｒｉｏｆｉｓｃｈｅｒｉＣＳ２３４ｗａｓ
１９９０ｍｇ·Ｌ－１ＺｎＳＯ４·７Ｈ２Ｏｓｔｏｃｋｓｏｌｕｔｉｏｎａｎｄｉｔｓｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｓｗｅｒｅｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｌｙｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｆｏｒ１２０ｈａｎｄ８ｈｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，
ａｎｄｔｈｅｉｒＲＳＤｗａｓｌｏｗｅｒｔｈａｎ２％，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇｓｔａｂｉｌｉｔｙａｔｒｏｏｍｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄ４℃ ｓｔｏｒａｇｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓＢｅｔｗｅｅｎｐＨ４５８０，ｌｕｍｉ
ｎｅｓｃｅｎｃｅｉｎｔｅｎｓｉｔｙｏｆＶｉｂｒｉｏｆｉｓｃｈｅｒｉＣＳ２３４ｗａｓｃｏｎｔｒｏｌｅｄｗｉｔｈｉｎ±１０％，ａｎｄｓｕｃｈｐＨｖａｌｕｅｒａｎｇｅｃｏｕｌｄｍｅｅｔｔｈｅｔｅｓｔｉｎｇｎｅｅｄｓｏｆｔｈｅ
ｖａｓｔｍａｊｏｒｉｔｙｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓＴｈｅＶｉｂｒｉｏｆｉｓｃｈｅｒｉｓｔｒａｉｎＣＳ２３４ａｓｓａｙｓｙｓｔｅｍｗａｓｓｐｅｃｉｆｉｃ，ｓｔａｂｌｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，
ａｃｃｕｒａｔｅａｎｄａｄａｐｔａｂｌｅａｆｔｅｒｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ，ｓｏｉｔｗａｓｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｔｈｅｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅａｃｕｔｅｔｏｘｉｃｉｔｙａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆＴＣＭｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎ；ｍｉｃｒｏｔｏｘａｓｓａｙ；ａｃｕｔｅｔｏｘｉｃｉｔｙ；ＶｉｂｒｉｏｆｉｓｃｈｅｒｉＣＳ２３４
ｄｏｉ：１０．４２６８／ｃｊｃｍｍ２０１６０９０９
　　
îïºò()û[±Ê¯m_lÎn©¨
·ó¶º()
。２０
¹k
７０
¬
８０
yP9
，
%+&®
¼}WHyó¡v#¸÷ÖÏBó=
、
ÏMÄÒ
Îm_lÎ
，¯
ê,©S
、
Ôl,¨¸÷Jó
©¨ï!¶ºÉ
，
ÝÒ«Ó[±QI
、
ðñ©¨
*!ï!¶ºèé
［１］。
õÑÒ¤%8+¼},î
ï©¨ºò()ñW $,ëìíbª*!ï!¶ ºàá ， òqÝªÝßéÏÒ¾B8«¡º`K ¥>?Ó$ ,ëìíëìÐÑ
［２］。
õ
¤å}g¶f
，
Ïîïºòóôúûn
ù_Öov
，
[:2Úúûö¯LòÖ?`!
。
１　
Ü#
7iiÎ
Ｖｉｂｒｉｏｆｉｓｃｈｅｒｉ（Ｖｆ）ＣＳ２３４
àÜò
íä
，
/<
Ｄ１５Ｇ０４６，Ｄ１５Ｇ０３７，Ｄ１５Ｇ０３８，Ｄ１５Ｇ０３９，
Ｄ１５Ｇ０５６，Ｄ１５Ｇ０３３，
23*#_¶()ô´BCD
E
，－２０℃
b_àµ
。
f+)½>
（３％
._óÎ>
），
©<
２０１５０７１７，
23*#_¶()ô´BCDE
。
YÌ»Á>
（２０％
._óÎ>
），
©<
２０１５０７１７，
23*#_¶
()ô´BCDE
。
kJD`
（ＺｎＳＯ４·７Ｈ２Ｏ），
ＡＲ，
©<
２０１５０３０１０１，
«¢4&_gòíj
。
Ï

（ＨＣｌ），ＡＲ，
©<
２０１３１０２８，
«¢¸¸_òíB
CDE
。
s-_ó
（ＮａＯＨ），ＡＲ，
©<
２０１１０３２８，
«
¢Õ>_gòíBCDE
。
ＬＵＭＩＳｔｏｘ３００
m©¨ï!ºòß
、ＬＵＭＩＳｔｈｅｒｍ
mõm#ºòK
（ＤｒＢｒｕｎｏＬａｎｇｅＧｍｂＨ
DE
）；
ＭＥ２０３／０２
mU¶þ
［
FÈn

gÊZß´
（
fH
）
BCDE
］；ＫＣＬ２０００
m©© $Z （ 53}_´ o(+÷ ）；Ｚ２０００ m^¶²¡__^s （ {z DE ）；` øSð¸p （ 23Bí¸§þ ）；Ｉｎｔｅ ｇｒａｌ５ m¹Jß （ û% ＭｉｌｉＱ DE ）；ＰＢ１０ m^ s （Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ DE ）。２　 úû ２１　 õö÷øù_ w¯ ＰｌａｃｋｅｔＢｕｒｍａｎ û,õö÷ø$ ６ C ¶nwDüý 。 ÷ø １１ ¶ ２ Jþnoïs ，１， Ên １２ }no ， Â Ｂ，Ｄ，Ｆ，Ｈ，Ｋ Óøän sòoÛ ，Ａ，Ｃ，Ｅ，Ｇ，Ｊ，Ｌ ¡^PþEOn 、 f+ >óE 、 f+On 、 Î>óE 、 aóE#õöOn ， |CS3« ２ Jþ ， ÂxºòÒú Ｐ m_ô =Æ¹ Ｄ Ó@1ëì÷ø.ÈÒª 。 ï¯W m_ÎºBÍÆ¤ （１５±１）℃ ÷øSê« 。１　ＰｌａｃｋｅｔＢｕｒｍａｎ ïs¶ÖJþ Ｔａｂｌｅ１　ＰｌａｃｋｅｔＢｕｒｍａｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｆａｃｔｏｒｓａｎｄｌｅｖｅｌｓ Jþ Ａ þEOn ／ｍｉｎＢ øä １Ｃ f+>óE ／ｍＬＤ øä ２Ｅ ÜîOn ／ｍｉｎＦ øä ３Ｇ Î>óE ／μＬＨ øä ４Ｊ aóE ／ｍＬＫ øä ５Ｌ õöOn ／ｍｉｎ－１１０－１－１０－５０－１－１０１１５－２－１５－１００－２－１５ ·３２６１· ２０１６ y ５ z À ４１ ÁÀ ９ } Ｖｏｌ４１，Ｎｏ．９Ｍａｙ，２０１６２２　 ºòúûyzüý ２２１　 ÈE! 　 ¡^3f+)½> 、 YÌ»Á > 、ＺｎＳＯ４·７Ｈ２ＯX>#7iiÎ ＣＳ２３４Î>x ０１ｍＬ ê ４８５ｎｍ ºòm_a^ 。２２２　 ú!Lò 、 -Ò^ 、 Õ]^ì\^ 　 Õ] X3 ＺｎＳＯ４·７Ｈ２Ｏ５００ｍｇÞê５００ｍＬÁ$ ，
¹J~¡ÎÝ
、`

，
~<
１０００ｍｇ·Ｌ－１
X>
。
3X>¯¹J)½
，
<^¡^Ó
５０，
２００，４００，８００ｍｇ·Ｌ－１
ôOÎ>
，
_,x^ë
ìï¨ÖYÌ»Á>Â
１７∶３
Üª
，
Óëìüú
xç
，
é
２１
ºù_÷ønºò
，ＺｎＳＯ４·
７Ｈ２ＯëìüúxçõöÊ^Ó３８６，１５４５，
３０９１，６１８２，７７２７ｍｇ·Ｌ－１。
ÂD(
（１）
stM
ª
Ｈｔ#Æ¹ Ｄ，qÂ ＨｔＺｎＳＯ４·７Ｈ２Ｏ^
q
，
%ªＲ２；
-Ò^¯`S
C~
３８６ｍｇ·Ｌ－１（
Ê^
）
ëìï¨Õ]^#
ì\^Ä
。
_3
ＺｎＳＯ４·７Ｈ２ＯX>¯¹J
Ö
１５０，５００，９００ｍｇ·Ｌ－１
Î>
，
_,x^ë
ìï¨ÖYÌ»Á>Â
１７∶３
Üª
，
Ó
a
，
õöÊ^Ó
１１５９，３８６４，６９５５ｍｇ·Ｌ－１，
¯ÂüýúûÕ]^
（
©n
、
©8
）
#ì\^
，
Õ]^Â
ＲＳＤ
Ä
，
ì\^Âº<Önp
¡Ä
。
ｆｋｔ＝Ｉｋｔ／Ｉ０（１）
Ｄ＝（ｆｋｔ±ｆｋｔ）／ｆｋｔ×１００％（２）
Ｉｃｔ＝Ｉｃ×ｆｋｔ（３）
Ｈｔ＝（Ｉｃｔ－Ｉｔ）／Ｉｃｔ×１００％（４）
Ｉ０ÓÏKm_Î9mm_a^，ＩｋｔÓÏK
m_ÎÖf+)½>ãq[`Onÿm_a^
，
ｆｋｔÓm_ô=。ＤÓm_ô=Æ¹，ｆｋｔÓ ２
CþnK
ｆｋｔþÆ。ＩｃｔÓaKm_Î9mm_
a^M
，ＩｃÓaKm_Î9mm_a^。Ｉｔ
ÓaKm_ÎÖaãq[`Onÿm_a
^
，ＨｔÓaÏm_a^Mª。
２２３　
Ó`!
　
3
ＺｎＳＯ４·７Ｈ２ＯX>１５０，
５００，９００ｍｇ·Ｌ－１
an
Ｚｎ２＋
Ó`!
üý
。
wê^¶²¡__^sº
Ｚｎ２＋
ú!
Lò¤
０２～０９ｍｇ·Ｌ－１，
£,X>)½W
０５３８ｍｇ·Ｌ－１（
Â
Ｚｎ２＋
s
）
ÿüý
０，２，４，６，８，２４，
４８，７２，１２０ｈ
Ó`!
，
a¡^)½W
０１３７，０４５７，０８２２ｍｇ·Ｌ－１
üý
０，２，４，６，８ｈ

Ó`!
，
qÂâö^YÌ»Á>ÓÏ
，
8
èa]µÿÞ¤
４℃
ìZ8íµ
。
２２４　ｐＨ
Ï7iiÎ
ＣＳ２３４
ØÙ
　
ºò¥¦
ｐＨ
f+>
（４０，４５，５０，６０，７０，８０，９０）
Ïm_
a^ØÙ
。
¯
１ｍｏｌ·Ｌ－１ＨＣｌ
Î>î
ＮａＯＨ
Î>
»Á
ｐＨ，
2ùa$óE¥uóE
５％，
|C
ｐＨ
ï
２
CþnK
，
f
２
}
。
wD(
（３），（４）
stｐＨ
Ï7iiÎ
ＣＳ２３４
m_a^M
ªþÆ
。
２３　
=ò¡¢
ＤｅｓｉｇｎＥｘｐｅｒｔ８０５ｂ
røn
ＰｌａｃｋｅｔＢｕｒｍａｎ
noïs=ò¡¢
。ＰＥＭＳ３１
rønëìü
ú%ª
ＩＣ５０st。
３　
á
３１　
õö÷øù_
wêxºòÒ=©sE
，
Øé
ＩＳＯ
１１３４８３：２００７
ëì÷ø
Ｄ＜３％
ÓªJÒª
［３］，

２。
À
３，４
３
}
Ｄ
Æ
＜３％，
KÂå
»ù
，
£÷`m_÷øÓ7iiÎ
ＣＳ２３４
àÜê
©Z $þE １５ｍｉｎ， 2ùf+> １ｍＬ ÿÜî １０ｍｉｎ， 3 １００μＬÎ>ºò9mm_a^ÿz~2ù １ｍＬ f+> （ Ï ） î¼ºa ， õö １０ｍｉｎ ÿ_ }ºòÏKaKm_a^ 。３２　 ÈE! f+)½> 、 YÌ»Á> 、ＺｎＳＯ４·７Ｈ２Ｏ X>m_a^Æ¤ ００１～００２， Í7iiÎ ＣＳ２３４ Î>m_a^¤ １１５２～１１７７， H¡åL ¥M7iiÎm_a^º` ， õúûÈE! a ，３。３３　 ú!Lò 、 -Ò^ 、 Õ]^ì\^ `SCaaÕ]^Æ ＜１０％， ì\^¤ ８５８％～１０３２％，４。ＺｎＳＯ４· ７Ｈ２ＯÎ>¤３８６～７７２７ｍｇ·Ｌ－１， ëìüúú Ó ｙ＝２１７８ｌｎｘ－１５１４，Ｒ２＝０９９８， õúûS ＺｎＳＯ４·７Ｈ２ＯÏ7iiÎ ＣＳ２３４ＩＣ５０Ó １９９０ｍｇ·Ｌ－１。３４　 Ó`! ＺｎＳＯ４·７Ｈ２ＯX>a¡^ JKüý １２０，８ｈ，ＲＳＤ Æ ＜２％， 2Ä¤ð ４ ℃ íµ÷øSÓ`!/ ，５。３５　ｐＨ Ï7iiÎ ＣＳ２３４ ØÙ ｐＨ４５～８０ O ， 7iiÎ ＣＳ２３４ m_Ã ＜１０％，６。 ·４２６１· j=qÉ ： ê Ｍｉｃｒｏｔｏｘ ()$ ,ëìíîïðñºòóôõö÷øù_Öúûüý

２　ＰｌａｃｋｅｔＢｕｒｍａｎ
ïsá
（ｎ＝２）
Ｔａｂｌｅ２　ＰｌａｃｋｅｔＢｕｒｍａｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄｅｓｉｇｎｓａｎｄｒｅｓｕｌｔｓ（ｎ＝２）
Ｎｏ ＡＢＣＤＥＦＧＨＪＫＬＤ１Ｄ２Ｄ３
１－１－１１－１１１－１１１１－１－０４８５７５－８８０
２－１１１－１１１１－１－１－１１１１３５３０２８９
３１－１－１－１１－１１１－１１１－０６７０３４－１３１
４－１１１１－１－１－１１－１１１１２２１１８－０９３
５１１－１－１－１１－１１１－１１－８４２２２０－３３８
６－１－１－１１－１１１－１１１１－５４４０６６－３９１
７１１－１１１１－１－１－１１－１－０３０２０７５３１
８－１－１－１－１－１－１－１－１－１－１－１０５００６７－５２７
９－１１－１１１－１１１１－１－１３１５３４３２３６
１０１－１１１１－１－１－１１－１１１０１４９４－３９１
１１１１１－１－１－１１－１１１－１－２９７４８６１５７
１２１－１１１－１１１１－１－１－１－０２５４１１－４４８

３　
ÈE!üý
（ｎ＝２）
Ｔａｂｌｅ３　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄｅｓｉｇｎｓｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｖａｌｉｄａｔｉｏｎａｎｄｃｏｒ
ｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓ（ｎ＝２）
Ｎｏ
m_a^
f+)½> YÌ»Á>
ＺｎＳＯ４·７Ｈ２ＯX> 7iiÎ
１００１００１００１１１５２
２００１００２００１１１７７
３００１００１００１１１５５
４　
s
7iiÎä>ê γNôÎé Ｇａｍｍａｐｒｏｔｅｏｂａｃ
ｔｅｒｉａ
iÎ§
Ｖｉｂｒｉｏ，
û[±©Õ¤H[ $rð! Î ， ©}ÞÃSmìÖÃÕÓ ４２０～６７０ｎｍ、 µ m ４９０ｎｍ sÛ?ÞðíÅ_ ， ÊËö¯ê°% Ｍｉｃｒｏｔｏｘ Ｍｏｄｅｌ５００# ＤｅｌｔａＴｏｘ Ａｎａｌｙｚｅｒ，Â% ＴｏｘＡｌｅｒｔ#ＬＵＭＩＳｔｏｘêＢｉｏＴｏｘＴＭÉ©¨ï !ºòô© ［４］。 m_P×q １。４　ＺｎＳＯ４·７Ｈ２ＯaÕ]^、ì\^`SC-Ò^üý（ｎ＝２）Ｔａｂｌｅ４　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄｅｓｉｇｎｓｏｆｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅ，ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ，ａｃｃｕｒａｃｙｖａｌｉｄａｔｉｏｎａｎｄｃｏｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｉｎＺｎＳＯ４·７Ｈ２ＯＱＣｓａｍ ｐｌｅｓ（ｎ＝２）ＺｎＳＯ４·７Ｈ２Ｏ Ê^ ／ｍｇ·Ｌ－１Ｈ１０／％ ©8Õ]^ ／％１２３ ©nÕ]^ ／％ ì\^ ／％１２３ `SCa ３８６１４０４２３３３８２１７２７３９２７２９９２６１００６０ a １１１５９３５４１０７１５１２７８５４７１０３１５８７８２８５８１ a ２３８６４６１５１９２０３８１７８１６７９９３４９８００９１９７ a ３６９５５７３０１３７０８０００１４１６９３３２８８２８９６０４５　ＺｎＳＯ４·７Ｈ２ＯX>aÓ`!üýá （ｎ＝３）Ｔａｂｌｅ５　ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄｅｓｉｇｎｓｏｆｓｔａｂｉｌｉｔｙｖａｌｉｄａｔｉｏｎａｎｄｃｏｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｉｎＺｎＳＯ４·７Ｈ２ＯｓｔｏｃｋｓｏｌｕｔｉｏｎａｎｄＱＣｓａｍｐｌｅｓ（ｎ＝３） Ò^ ^ ／ｍｇ·Ｌ－１ _^ ０ｈ１ｈ２ｈ４ｈ６ｈ８ｈ２４ｈ４８ｈ７２ｈ１２０ｈＲＳＤ／％ＺｎＳＯ４·７Ｈ２ＯX> ０．５３８０．０３７０．０３６０．０３６０．０３７０．０３７０．０３６０．０３８０．０３６０．０３７０．０３７１９ＺｎＳＯ４·７Ｈ２Ｏa ０．１３７０．０２４０．０２３０．０２３０．０２３０．０２３０．０２４－－－－１５０．４５７０．０８００．０８１０．０８１０．０８００．０８１０．０８１－－－－０５７０．８２２０．１４３０．１４５０．１４６０．１４５０．１４４０．１４６－－－－０７１６　ｐＨ Ï7iiÎ ＣＳ２３４ m_ØÙ （ｎ＝２）Ｔａｂｌｅ６　ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄｅｓｉｇｎｓｏｆｐＨｅｆｅｃｔｓｏｎＶｉｂｒｉｏｆｉｓｃｈｅｒｉＣＳ２３４ａｎｄｃｏｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓ（ｎ＝２） äå ｐＨ４０ｐＨ４５ｐＨ５０ｐＨ６０ｐＨ７０ｐＨ８０ｐＨ９０１２１２１２１２１２１２１２Ｈ１０１３１１３４－０７７０－６９０６－８４２８－８８７１－８８－０７－１０３１１７Ｄ６８０９０８－０５－２３０５－１３－０１－１４－０３１２－０９０５－７３ ·５２６１· ２０１６ y ５ z À ４１ ÁÀ ９ } Ｖｏｌ４１，Ｎｏ．９Ｍａｙ，２０１６ q １　 7iiÎm_P× Ｆｉｇ１　ＬｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｐｒｏｃｅｓｓｏｆＶｉｂｒｉｏｆｉｓｃｈｅｒｉ åå¯m_Î*!ï!ºòúûÑ_Bï ¯7iiÎ ＮＲＲＬＢ１１１７７ %pëì_Ò¸ ＩＳＯ１１３４８３：２００７《ＷａｔｅｒｑｕａｌｉｔｙＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｅｃｔｏｆｗａｔｅｒｓａｍｐｌｅｓｏｎｔｈｅｌｉｇｈｔｅｍｉｓ ｓｉｏｎｏｆＶｉｂｒｉｏｆｉｓｃｈｅｒｉ（Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔｂａｃｔｅｒｉａｔｅｓｔ）Ｐａｒｔ３：Ｍｅｔｈｏｄｕｓｉｎｇｆｒｅｅｚｅｄｒｉｅｄｂａｃｔｅｒｉａ》 #ï¯¡ôm _ñÎ Ｔ３:±$ %%ë ＧＢ／Ｔ１５４４１１９９５《J
*!ï!º`m_lÎû
》［５］，
wê%8[=7
iiÎ*!ï!ºòúû
，
£ºòÂ
ÿ
。ＧＢ／Ｔ１５４４１１９９５
ÂâÏm_a^þÆ
（％），
D(
（５），（６）
a^
（ｍｇ·Ｌ－１）
%ª~[}ú!úäÄa*!ï!
，
Í
õðå}VÄ7iiÎm_a^ÎOnÏ
ÕæSTèé
［６］，
Ù
，
ú¥6m_ÎMa
m_a^N_º-©Û
，
¥õ¯m_õ
öpS
———
Å_S¸N_ª«
，
£
ＩＳＯ
ëì $@¢ù ｆｋｔ，D(（１），[âÏ©`m _ô=äMÚÛ ， |V<»Óª} ［７］。 Ïê ¤bIJª`õö÷øþEOn 、 ÜîOnÉ ， áªõòíänpOP ， w¯¡Å^ÓⅢJ ＰｌａｃｋｅｔＢｕｒｍａｎ ûïsâno ， qù_Ö.Ó` m_õöóô 。 âÏm_a^ ＝ëìï¨／aKm_a^ øöKm_a^ （５） âÏm_a^þÆ ＝f１＋f２＋f３３（６）ＩＳＯ ëìª` ： ÏKÖaKÆ¹ Ｄ＜３％、 Înëìï¨Ö7iiÎõö ３０ｍｉｎ ÿ Mª W ２０％～８０％ ~XÓÚºò©}ªJ 。 ÌÍ ，Ｄ＜３％ ºòÕ]^Í¥ívº òá ì\! ， KaõöOnFê ３０ｍｉｎ I= û`öÚëì ， Ù ， ¤ ＩＳＯ ëì¶f ， yzâ Â ＺｎＳＯ４·７Ｈ２ＯÓëìï¨ô©，@2 â ＺｎＳＯ４·７Ｈ２Ｏ３C^aÏºò úûrâ[:üý 。ＺｎＳＯ４·７Ｈ２ＯÏB óMÄ¥K:ê._® 、 bñ7¡É Ýnëìï¨ ， K Ｚｎ２＋ Ïm_Î¯çÑ_¤ êØÙÅ_Sô©m_ ［８９］， Óõ Ñ[:ù2ðâñò 。 Ù+ ， æüýâ ｐＨ Ï7iiÎm_ØÙ 。 ëìíö¼BÖt>âÉîâã ｐＨ， [FÓ ｐＨ４～９， tu ， ¡\ÚLòû`ªm_lÎ© }· ， ,6ãª`îï©¨ºòóôö¯Lò 。 á VÄ ，ｐＨ４５～８０ ÏlÎm_Mª ¤ ±１０％ 8 ， ?>?®wZ=$ ,ëìí¶º
8_
。
bf
，
õnoð@Ï7iiÎõö÷øù
_úûüý
，
yzâ`¯ê
ＣＳ２３４
[Î
ºòóô
，
õúû¼B/ÈE!
、
Ó`!
、
-
Ò^
、
ì\^`ö!
，
Ó $,ëìíîï*!ï! ºò]Sâén¶ 。［ uv=w ］［１］　 ú^T ， v ， ²4 ． m_lÎÖMÄï!¶º ［Ｍ］． 2 3 ：$ %gÈÖm÷
，２００９．
［２］　
$YW ， w/æ ． ê Ｍｉｃｒｏｔｏｘ（ îïºò ） $ ,bªï!ð
ñ56
［Ｊ］．
¹l $A, ，２０１３，９（２）：１３７．［３］　ＩＳＯ１１３４８３：ＷａｔｅｒｑｕａｌｉｔｙＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｅｃｔｏｆｗａｔｅｒｓａｍｐｌｅｓｏｎｔｈｅｌｉｇｈｔｅｍｉｓｓｉｏｎｏｆＶｉｂｒｉｏｆｉｓｃｈｅｒｉ（Ｌｕｍｉｎｅｓ ｃｅｎｔｂａｃｔｅｒｉａｔｅｓｔ）Ｐａｒｔ３：Ｍｅｔｈｏｄｕｓｉｎｇｆｒｅｅｚｅｄｒｉｅｄｂａｃｔｅｒｉａ［Ｓ］．２００７．［４］　 ¹¡ ， ëÓÆ ，$
．
m_Î¤JMÄÞß¨¶º $ö¯ ［Ｊ］． MÄÖç/-. ，２００７，２４（１０）：８３７．［５］　ＧＢ／Ｔ１５４４１１９９５， J*!ï!º`m_lÎû ［Ｓ］．１９９５．［６］　 vj ， w/æ ，$ YW
，
É
．
ö¯
Ｍｉｃｒｏｔｏｘ
()¶ºyzLë
ì>bªï!
［Ｊ］．
$,,}Ö®¯
，２０１３，２９（６）：９２．
［７］　
eG
，
(
，
Ý
．
m_lÎ*!ï!ºòúûù_
［Ｊ］．
MÄÞßÖö
，２０１０，３２（１１）：４８．
［８］　
ºýX
，´
5»
，
7
，
É
．
m_lÎï!ºò÷øù_Ö
ï!Â¨ö¯
［Ｊ］．
MÄ&
，２００４，１７（４）：６１．
［９］　ＡｌｉＢＩｓｈａｑｕｅ，ＬｉｎｄａＪｏｈｎｓｏｎ，ＴｏｎｙａＧｅｒａｌｄ，ｅｔａｌ．Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆ
ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌａｎｄｃｏｍｂｉｎｅｄｔｏｘｉｃｉｔｉｅｓｏｆｆｏｕｒｎｏｎｅｓｓｅｎｔｉａｌｍｅｔａｌｓ
（Ａｓ，Ｃｄ，ＨｇａｎｄＰｂ）ｉｎｔｈｅｍｉｃｒｏｔｏｘａｓｓａｙ［Ｊ］．ＩｎｔＪＥｎｖｉｒｏｎ
ＲｅｓＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈ，２００６，３（１）：１１８．
［
xy-0
　
z{{
］
·６２６１·

Optimization of reaction conditions and methodological investigation on microtox-based fast testing system for traditional Chinese medicine injection

基于Microtox技术的中药注射剂微毒快速测试体系反应条件的优化与方法学的考察

相关文献