全 文 ：胞凋亡率明显升高,同时伴有 Caspase3 阳性表达
的增加, 说明 AHV 可通过诱导 RA 滑膜细胞
Caspase3活化,促进滑膜细胞凋亡。但有关蛇毒诱
导的滑膜细胞凋亡的具体机制还有待进一步研究。
参考文献:
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白桂木抗炎镇痛作用有效部位筛选
欧阳胜1 ,申作洁2 ,潘琳娜3 *
( 1 江西中医学院 中药化学教研室, 江西 南昌 330006; 2 兖矿集团总医院 药剂科, 山东 邹城 273500;
3 江西中医学院 药理学教研室,江西 南昌 330006)
摘 要:目的 分离并筛选白桂木抗类风湿性关节炎的有效部位。方法 通过连续 ig 给药白桂木根总提取物、石
油醚部位、醋酸乙酯部位、氯仿部位提取物, 分别采用小鼠二甲苯致耳肿胀、大鼠棉球所致肉芽肿、小鼠醋酸扭体
法、小鼠热板法和小鼠腹腔毛细血管通透性评价活性。结果 白桂木醋酸乙酯部位抗炎镇痛作用较明显。结论
白桂木醋酸乙酯部位可能是其治疗类风湿性关节炎的有效部位。
关键词:白桂木; 类风湿性关节炎; 有效部位; 抗炎; 镇痛
中图分类号: R285 5 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 11185004
白桂木 A r tocar pus hypargy r eus Hance 为桑
科波罗蜜属植物, 其根入药,味甘、淡,性温, 具有祛
风利湿、活血通络等功效,主治风湿痹痛、腰膝酸软、
头痛、胃痛、黄疸、产妇乳汁不足等症。该药在赣南、
粤北地区民间应用较广, 用于治疗类风湿性关节炎、
慢性腰腿疼痛等。白桂木根和根皮的化学成分已进
行研究[ 12] , 但目前对白桂木的基础研究尚不够深
入,其抗类风湿性关节炎的有效成分不清,缺乏以有
效成分为基础的质量标准, 疗效难以保证。本实验
着重对白桂木根治疗类风湿性关节炎有效部位进行
筛选,通过对白桂木根醇浸膏的 3种不同溶媒 (石
油醚、氯仿、醋酸乙酯) 萃取物以及总浸膏分别进行
抗炎、镇痛活性评价,确定其有效部位。
1 材料
1 1 动物:小鼠, SPF 级, 雌雄兼用, 体质量 18~ 22
g ,由江西中医学院实验动物中心提供, 合格证号:
!1850! 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 11 期 2010 年 11月
收稿日期: 20100329 基金项目:江西省自然科学基金资助项目 ( 2007GZY0926)作者简介:欧阳胜( 1968 ∀ ) ,女,江西省南昌市人,江西中医学院中药化学教研室副教授,中药化学专业硕士生导师,长期从事中药化学的教学、科研工作。T el: 13450477365 Em ail : ouyangsh eng2003@ yahoo. com. cn
* 通讯作者 潘琳娜
20090090, 20090038。大鼠, SPF 级,雄性, 体质量
180~ 220 g, 由江西中医学院实验动物中心提供, 合
格证号: 20090111。
1 2 受试药品:白桂木根 20 kg ,于 2008年 4月采
自江西于都县山区,由江西中医学院中药鉴定教研
室刘庆华鉴定。将药材切成碎块后用 95% 乙醇高
压提取罐提取, 得浸膏 600 g, 水溶解后分别用石油
醚、醋酸乙酯、氯仿和水饱和正丁醇萃取, 旋转蒸发
仪浓缩后分别得浸膏 23 85、54 28、83 05、368 68
g。总浸膏和醋酸乙酯部位用蒸馏水溶解,石油醚部
位用 1% 聚山梨酯 80 水溶液溶解, 氯仿部位用
0 5% CMCNa 水溶液溶解。
1 3 试剂: 95% 乙醇、石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正
丁醇、冰醋酸、二甲苯均为分析纯; 伊文思蓝
( F20040213) ; 雷公藤 (上海复旦复华药业有限公
司,批号 081001) ; 泼尼松 (天津天药药业股份有限
公司,批号 0809111)。
1 4 仪器:高压提取罐 (韩国) , 旋转蒸发仪 (上海
亚荣 RE ∀ 52AA) , 722 型分光光度计。
2 方法
2 1 一般炎症模型
2 1 1 耳肿胀模型 [ 3] :将 72 只 18~ 22 g 雄性昆明
种小鼠随机分为 6 组,每组 12 只。分别为白桂木
总提取物、醋酸乙酯、石油醚、氯仿提取物组, 模型组
和雷公藤阳性药组。各组 ig 给药, 连续 7 d, 于末次
给药 1 h 后, 将二甲苯 0 02 mL 涂于小鼠右耳正反
两面, 30 min 后颈椎脱臼处死, 用直径 9 mm 打孔
器在左右两耳廓相同部位打孔取样,及时称质量, 计
算肿胀度 (左右耳片质量差值) 及抑制率。
抑制率= (模型组肿胀度- 给药组肿胀度) /模型组肿胀
度# 100%
2 1 2 棉球肉芽肿模型 [ 3] :将 48 只 180~ 220 g 雄
性大鼠随机分为 6 组,每组 8 只,分别为模型组, 阳
性对照泼尼松组, 白桂木总提取物、醋酸乙酯、石油
醚、氯仿提取物组。分别 ig 给药, 第 2 次给药后乙
醚麻醉,在大鼠两侧腋窝下剪开约 1 cm 的小口, 将
两个灭菌棉球[每个棉球质量( 20 ∃ 1) mg , 高压灭
菌,每个棉球各加入氨苄青霉素 1 mg/ 0. 5 mL,
50 % 烘箱烤干]分别植入皮下,缝合创口。并在创
口局部涂以少量抗生素。第 8次给药后颈椎脱臼处
死,取出棉球, 剥离附着的结缔组织, 在 60 % 烤箱
烘 12 h 后称质量,减去原来棉球质量, 即为肉芽肿
净质量,取两侧肉芽肿质量的均值。计算抑制率。
抑制率= (模型组肉芽净质量- 给药组肉芽净质量) /模
型组肉芽肿净质量# 100%
2 2 镇痛模型
2 2 1 扭体法[ 3] : 分组及给药方法同 2 1 1 项, 于
末次给药 1 h 后, ip 新鲜配制的 0 6% 的醋酸生理
盐水溶液 0 2 mL/只,观察和记录 30 min 内小鼠的
扭体次数, 其扭体表现为腹部内凹、躯干与后腿伸
展、臂部高起。计算抑制率。
抑制率= (模型组扭体次数- 给药组扭体次数) /模型组
扭体次数# 100%
2 2 2 热板法[ 3] : 体质量 18~ 22 g 雌性昆明小鼠,
热板温度保持在 ( 55 ∃ 2) % , 测定每只小鼠的痛阈
值 (即痛反应潜伏期, 指小鼠接触热板至舔后足的
时间)。痛阈值在 5~ 30 s 内为合格小鼠。痛阈合
格小鼠分组及给药方法同 2 1 1 项, 于末次给药 1
h 后,以动物出现舔后爪行为作为痛反应指标, 记录
自投入热板到出现舔后爪的潜伏期, 连续测 3次,取
平均值,为痛阈值。计算抑制率。
抑制率= (给药组痛阈值- 模型组痛阈值) /模型组痛阈
值# 100%
2 3 毛细血管通透性模型[ 3] : 分组及给药方法同
2 1 1项,各组于末次给药 1 h 后,尾 iv 1% 伊文斯
蓝 ( 0 1 mL/ mg) , 同时 ip 0. 6% 冰醋酸 0 2 mL, 30
m in 后颈椎脱臼处死小鼠,并 ip 5 mL 生理盐水,抽
取腹腔液于 4 % 放置 6 h,取其上清液, 用 722分光
光度计 ( 590 nm ) 测定吸光度 ( A ) 值,计算抑制率。
抑制率= (模型组 A 值- 给药组 A 值) /模型组 A 值 #
100%
2 4 统计学方法:实验结果以 x ∃ s 表示, 用 SPSS
16 0 软件包进行统计分析, 采用单因素方差分析
( Oneway AN OVA)。
3 结果
3 1 对一般炎症模型的影响
3 1 1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的作用:白桂木总提
取物和醋酸乙酯提取物对二甲苯致小鼠耳肿胀有明
显的抑制作用,抑制率分别为 58 22%、80 48% ,分
别与模型组比较有显著差异 ( P< 0 05) ; 氯仿提取
物组和石油醚提取物组与模型组的肿胀度无显著差
异 ( P> 0 05)。见表 1。
3 1 2 对大鼠棉球所致肉芽肿的影响:白桂木总提
取物和醋酸乙酯提取物对大鼠棉球所致肉芽肿有明
显的抑制作用,抑制率分别为 19 65%、17 41% ,分
别与模型组比较有显著差异 ( P< 0 05) ; 氯仿提取
物组和石油醚组与模型组的肉芽肿质量无显著差异
( P> 0 05)。见表 2。
!1851!中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 11 期 2010 年 11月
表 1 白桂木不同提取物对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响
(x ∃ s, n= 12)
Table 1 Effect of different extracts from A. hyp argyreus
on ear edema of mice induced by xylene
( x ∃ s, n= 12)
组 别 剂量/ ( mg! kg - 1) 肿胀度/ mg 抑制率/ %
模型 - 5 60∃ 1 53 -
雷公藤 13 636 1 50∃ 0 52* 73 08
总提取物 420 2 40∃ 0 74* 58 22
醋酸乙酯提取物 420 1 10∃ 0 30* 80 48
氯仿提取物 420 5 30∃ 1 20 6 10
石油醚提取物 420 5 40∃ 0 95 4 72
与模型组比较: * P< 005, 下表同
* P< 0 05 v s model group, follow ing tables are same
表 2 白桂木不同提取物对大鼠棉球所致肉芽肿的影响
( x∃ s, n= 8)
Table 2 Effect of different extracts from A. hyp argyreus
on granuloma of rats induced by cotton balls
( x ∃ s, n= 8)
组 别 剂量/ ( mg! kg - 1) 肉芽肿质量/ mg 抑制率/ %
模型 - 58 56 ∃ 4 53 -
雷公藤 6 455 40 51 ∃ 4 46* 30 83
总提取物 200 47 05 ∃ 7 64* 19 65
醋酸乙酯提取物 200 48 36 ∃ 5 29* 17 41
氯仿提取物 200 50 92 ∃ 4 96 13 04
石油醚提取物 200 52 11 ∃ 6 15 11 00
3 2 对镇痛模型的影响
3 2 1 对醋酸所致扭体次数的影响:白桂木总提取
物和醋酸乙酯提取物对小鼠醋酸所致扭体次数有明
显的抑制作用, 抑制率分别为 31 78%、53 37%, 分
别与模型组比较有显著差异 ( P< 0 05) ; 氯仿提取
物组和石油醚提取物组与模型组的扭体次数无显著
差异 ( P> 0 05)。结果见表 3。
表 3 白桂木不同提取物对醋酸所致小鼠扭体次数的影响
(x ∃ s, n= 12)
Table 3 Effect of different extracts from A. hyp argyreus
on bodywrithing of mice induced by acetic acid
( x ∃ s, n= 12)
组 别 剂量/ ( mg! kg - 1) 扭体次数/次 抑制率/ %
模型 - 44 500∃ 3 060 -
雷公藤 13 636 24 750∃ 3 223* 44 38
总提取物 200 30 360∃ 2 976* 31 78
醋酸乙酯提取物 200 20 750∃ 2 768* 53 37
氯仿提取物 200 43 250∃ 2 734 2 81
石油醚提取物 200 42 830∃ 3 614 3 75
3 2 2 对小鼠热板所致舔足时间的影响:白桂木总
提取物和醋酸乙酯提取物对小鼠热板所致舔足时间
有明显的抑制作用, 抑制率分别为 20 35%、
35 11%, 分别与模型组比较有显著差异 ( P <
0 05) ; 氯仿提取物组和石油醚提取物组与模型组的
舔足时间无显著差异 ( P> 0 05)。见表 4。
表 4 白桂木不同提取物对小鼠所致舔足时间的影响
( x ∃ s, n= 12)
Table 4 Effect of dif ferent extracts f rom A. hypargy reus
on licking foot time of mice induced by hot plate
( x∃ s, n= 12)
组 别 剂量/ ( mg ! kg- 1 ) 痛阈值/ min 抑制率/%
模型 - 17 37∃ 2 00 -
雷公藤 13 636 27 19∃ 2 63* 36 24
总提取物 200 21 80∃ 1 99* 20 35
醋酸乙酯提取物 200 24 63∃ 2 79* 35 11
氯仿提取物 200 17 76∃ 1 64 10 01
石油醚提取物 200 17 45∃ 2 23 0 66
3 3 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响:白桂木总
提取物和醋酸乙酯提取物对小鼠腹腔毛细血管通透
性有明显的抑制作用, 抑制率分别为 38 23%、
44 17% , 分别与模型组比较有显著差异 ( P <
0 05) ; 氯仿提取物组和石油醚提取物组与模型组的
腹腔洗液 A 值无显著差异 ( P> 0 05)。见表 5。
表 5 白桂木不同提取物对小鼠腹腔毛细血管通透性的
影响 ( x∃ s, n= 12)
Table 5 Effect of dif ferent extracts f rom A. hypargy reus
on capillary permeability of mice (x ∃ s, n= 12)
组 别 剂量/ ( mg ! kg- 1 ) 腹腔洗液 A 值 抑制率/%
模型 - 0 453∃ 0 130 -
雷公藤 13 636 0 225∃ 0 078* 50 35
总提取物 200 0 279∃ 0 100* 38 23
醋酸乙酯提取物 200 0 253∃ 0 058* 44 17
氯仿提取物 200 0 291∃ 0 096 35 78
石油醚提取物 200 0 342∃ 0 103 24 56
4 讨论
类风湿性关节炎 ( RA ) 是一种以关节慢性、反
复发作性炎症为主的全身性疾病, 它的发生和发展
与患者免疫系统功能失调密切相关, 是一种多发性
常见病, 主要表现为关节肿痛、关节强直、疲劳、抑
郁。近年来,对 RA 的机制进行了广泛的研究, 许
多研究已经表明淋巴细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、
滑膜细胞等多种炎症细胞介导的异常细胞免疫、体
液免疫,导致关节局部和全身的免疫功能紊乱, 在
RA 的病理中起着重要作用,其发病与机体免疫系
统的多种细胞功能及其分泌的细胞因子失调密切相
关。目前临床上治疗 RA 的方法主要为缓解急性
发作症状 (如关节疼痛和肿胀) ,抑制炎症因子的释
放,以及提高机体免疫抑制功能等,但这些药物一般
具有一定副作用, 选用中药治疗具有较高的安全性。
在白桂木已发现的化学成分中,主要以黄酮类
!1852! 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 11 期 2010 年 11月
化合物、茋类( st ilbene, 1, 2二苯乙烯) [ 12]、苯丙酸
类化合物的相关生物活性研究较多。其生物活性表
现在抗炎、抗氧化[ 45] 作用,抑制环氧酶 ( COX) [ 6] 活
性,镇痛, 对癌细胞的毒性作用, 抑制 5还原酶活
性, 抑制苏氨酸酶活性等。其中抗炎、抗氧化, 抑制
环氧酶 ( COX) 活性, 镇痛作用与抗 RA 密切相关。
本实验选取了小鼠醋酸扭体法、小鼠热板法疼
痛试验以及二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸诱导的毛
细血管通透急性炎症模型和大鼠棉球肉芽肿的慢性
炎症模型,观察白桂木不同提取部位的活性, 实验结
果表明白桂木根醋酸乙酯提取物有镇痛作用和对炎
症中出现的变质渗出和增生都有较好的抑制作用,
这表明该部位具有较好的抗炎镇痛活性, 初步揭示
白桂木醋酸乙酯提取物在治疗 RA 中的作用, 但有
关白桂木的镇痛抗炎作用机制有待进一步研究。
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生血丸对骨髓抑制小鼠造血功能的调控作用
严苏纯1 ,王光普1 ,刘 彤2 *
( 1 天津医科大学总医院 中医科, 天津 300052; 2 中新药业达仁堂制药厂, 天津 300052)
摘 要:目的 观察生血丸对60Co 合并环磷酰胺致骨髓抑制小鼠造血功能的影响, 探讨该方促进全血细胞上调的
作用机制。方法 通过全自动血细胞分析仪检测外周血象;流式细胞术检测骨髓细胞细胞周期; EL ISA (酶联免疫
吸附法) 检测骨髓基质中红细胞生成素 ( EPO)、血小板生成素 ( TPO )、粒细胞生长因子 ( GCSF) 的量。结果 生
血丸能明显改善骨髓抑制小鼠外周血中白细胞 ( WBC)、红细胞 ( RBC)、血红蛋白 ( H B)、血小板计数 ( PLT )、骨髓
有核细胞 ( BM C) 的量 ( P< 0 05) ,生血丸组升红细胞疗效更为突出 ( P< 0 05) ; 生血丸组能解除 G0 / G 1期细胞阻
滞,促进 G0 / G1期细胞进入增殖周期; 生血丸能有效平衡微环境中 TPO 的量; 能改善 EPO 的表达; 对骨髓抑制小
鼠骨髓细胞上清中 GCSF 有明显的正调控作用。结论 生血丸能提高骨髓抑制小鼠外周血血细胞和骨髓有核细
胞计数; 可促进骨髓抑制小鼠骨髓细胞从 G 0/ G1期进入增殖周期; 并能有效调节骨髓微环境中 T PO、EPO 和
GCSF 的表达, 从而促进骨髓抑制小鼠的造血功能。
关键词:生血丸; 骨髓抑制; 造血功能; 红细胞生成素 ( EPO)
中图分类号: R286 1 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 11185304
生血丸源于中医研究院广安门医院名老中医谢
海洲教授数十年临床之验方。方中有鹿茸、黄柏、山
药、炒白术、桑枝、白扁豆、稻芽、紫河车,具有补肾健
脾、填精补髓之功效。主药鹿茸温肾壮阳、强筋健
骨、生精益血,是峻补元阳之要药,用于治疗精血两
亏,活血又补血,具有促进造血之功能; 紫河车益气、
养血、补精, 有强壮作用; 白术、山药为健脾开胃之
品,于大补之中防滋腻, 有益气生血之作用: 黄柏为
泻火滋阴、清解清泻之品,取其缓解滋补过峻之作用
而有利于体内吸收,该方组方严谨,临床应用功效确
切。本实验拟从造血干细胞的增殖状况、造血微环
境的变化来探讨生血丸的作用机制。
1 材料
1 1 动物: 雄性 BalB/ C 小鼠, 中国人民解放军军
事医学科学院实验动物中心提供, 体质量 ( 20 ∃ 2)
g , 8~ 12周龄, 许可证号 SCXK(军) 2007004。
1 2 仪器: ST ∀ 360 型酶标仪, 湖北中盛千湖科技
有限公司; EPICS XL 型流式细胞仪, 美国 BECK
!1853!中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 11 期 2010 年 11月
收稿日期: 20100423 作者简介:严苏纯( 1967 ∀ ) ,女,江苏人,副教授,博士,研究方向为中医药对造血的调控。
T el : 13207607682 Email: d2004012@ 163. com